Summary
Her præsenterer vi en protokol til at etablere en reproducering ledende høretab induktion via kirurgisk tympaniske membran punktering og verifikation af Otoskop visualisering og adfærdsmæssige vurdering af Clap startle.
Abstract
Konduktivt høretab (CHL) er en udbredt nedsat hørelse hos mennesker. Målet med protokollen er at beskrive en simpel kirurgisk procedure for inducerende CHL i gnavere. Protokollen demonstrerer CHL ved tympaniske membran punktering. Verifikation af CHL kirurgi var ved Otoskop undersøgelse og adfærdsmæssige vurdering af Clap chok Response, både replikkable og pålidelige, og er enkle metoder til at demonstrere høretab har fundet sted. Den enkle CHL-procedure er fordelagtig på grund af dens reproducerbarhed og fleksibilitet til forskellige gøreformål i høretab forskning. Begrænsningerne af inducerende CHL ved en kirurgisk tilgang er forbundet med indlæringskurven til at udføre den kirurgiske procedure og tillid til audiologisk undersøgelse. Inducerende en hørenedsættelse af CHL giver en til let at studere neurale manifestationer og adfærdsmæssige udfald af høretab.
Introduction
Forekomsten af høretab hos børn og voksne er henholdsvis ca. 19,5%1 og 15,2%2 . Imidlertid modtager ca. 39,3% af alle nyfødte med en unormal Hørescreening ikke afhjælpende behandling som rapporteret af centre for Disease Control3. Høretab er en almindeligt undersøgt tilstand, og gnaver er en robust model til at studere normal hørelse og høre relaterede lidelser4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Hørelidelser såsom konduktivt høretab (CHL) fører til en stigning i den kortsigtede synaptiske depression i auditiv cortex4, hvilket resulterer i lavvandede Psykometriske skråninger forbundet med frekvens modulerings detekterings tærskler 5. konduktivt høretab modeller ved kirurgisk fjernelse/forskydning af Malleus, trommehinden membran (TM) punktering eller øreprop er let anvendes og tillade hurtig induktion af høretab model5,14 ,15,16,17,18. Formålet med denne protokol og metode er at demonstrere en simpel og reproducerbar CHL-model i gnavere.
Denne protokol er billig (≈ USD 300 med alle værktøjer) og kan let ændres til forskellige forskningsaktiviteter. Rotten har haft detaljerede vurderinger af mellemøret anatomi19,20,21,22,23, kirurgiske tilgange24, modeller i otitis media25, 26,27 og TM punktering regenerering16,17,18,28,29,30, hvilket gør det til en ideel model til at studere Høretab. Her er en simpel CHL-induktions procedure beskrevet med verifikation af Otoskop og adfærdsmæssig vurdering med Clap-chok-respons i rotte, som derefter kan bruges til at udforske yderligere sequelae af høretab. CHL-proceduren induceres ved kirurgisk punktering af TM. Verifikation af CHL-proceduren udføres af Otoskop visualisering for at fastslå fravær af TM. Adfærdsmæssige vurderinger udføres af et højt decibel (dB) lydtryksniveau (SPL) hånd-Clap. Denne metode er blevet anvendt tidligere i en række gnavere. Det er let at replikere, producerer robuste Psykometriske forskelle og ændringer i neurale fysiologiske responser4,5,16,17,18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den nuværende undersøgelse og procedurer blev godkendt af dyre forskningen etiske komitéer på City University of Hong Kong, University of Hong Kong, og Department of Health i Hong Kong særlige administrative region.
1. dyr
- Brug Sprague-Dawley (SD) rotter på to måneder (N = 90, 200-250 g).
Bemærk: gnavere blev leveret af den akkrediterede laboratorie dyreenhed ved University of Hong Kong. - Opretholde rotterne under en konstant 25 °C temperatur og 60-70% fugtighed på laboratoriet dyre forskningsenhed.
- Hus gnavere i 12/12-h lys/mørke cyklusser med adgang til mad og drikkevand, ad libitum.
- Akklime gnavere i boligmiljøet i mindst én dag før operation af CHL.
- Afhente gnaver ved Scruff og bedøve gnaver med en cocktail af ketamin og xylazin (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg, henholdsvis) via intraperitoneal injektion (Kombiner 1,0 ml ketamin med 0,5 ml xylazin som en endelig koncentration).
Bemærk: Brug en 1 mL sprøjte med en nål på 23-25G. Injicer ca 0,2 mL pr 100 g legemsvægt af rotter for 30 min anæstesi. - Udfør tåen knivspids for at verificere smerte fornemmelse og for at underbygge ordentlig anæstesi. En reaktion på dybe tå knivspids (ved tilbagetrækning af bagben) indikerer utilstrækkelig anæstesi.
2. kirurgisk opsætning
- Steriliser alt udstyr i en autoklave eller varm glasperle sterilisator før påbegyndelse kirurgi. Rengør operationsområdet med 70% ethanol.
- Brug latex handsker og lab coat før du starter proceduren.
- Anbring et sterilt kirurgisk drapere på den rene bænk (figur 1a).
- Steriliser mikro-saks og Otoskop før operationen for at minimere øreinfektion (figur 1b).
- Placer mikro-saks og Otoskop i det sterile område.
- Placer gnaver i operationsområdet og i overensstemmelse med kirurgen.
- Fortsæt med kirurgisk induktion af CHL.
3. kirurgisk induktion af konduktivt høretab
- Placer halen og lederen af gnaver justeret i en udsat position, hovedet tættest på kirurgen.
- Visualiser venstre og højre øre af gnaver under Otoskop for at sikre en sund tympanistisk membran (figur 2a). Evaluer både højre og venstre øre for hver gnaver for at kontrollere den sunde tilstand før CHL-induktion.
- Grib øret Helix og Udvid den udvendige øregang (dvs. øregang, ekstern auditiv meatus, heri auditive Canal) for at få indersiden til at blive tilsløret og sort af dybde. Her er auditive kanalen lavet vinkelret på overfladen af TM.
Bemærk: Sørg for, at den auditive Cannel er direkte parallel nu og TM danner en ret vinkel med aksen af indsættelse af mikro-saks. Det vil blive visualiseret som en sort rør uden lys. Nogle gange skal øregangen vippes i en lille vinkel, ca. 15 ° til kraniets planære overflade. Dette sikrer kirurgens hånd er vinkelret på overfladen af TM. - Introducere mikro-saks i midten af den auditive kanal at være opmærksom på ikke at skimme eller Nick vævet af den auditive kanal og gå lidt, ca ≈ 5 mm fra centrum af dunkelhed, stak fremad forsigtigt gennem midten af TM.
Bemærk: TM punktering kan bekræftes af en pop-lyd, når mikro-Scissor spidser punktere TM. Den popping lyd kan høres på ca ≈ 2 min 52 s i videoen. Dette er ikke en saks lyd; Dette er en TM punktur lyd. Som målt efter analyse er "pop" ca. ≈ 20 dB SPL større end baggrundslyd som optaget af en højfrekvent mikrofon. Der er ingen grund til at kontrollere "pop" lyd i dette omfang, Otoskop visualisering er tilstrækkelig. Investigator kan være nødt til at øve sig i at sikre en "pop" høres under hver CHL-procedure. - Åbn straks den fjederbelastede mikro-saks og Roter tre gange efter punktering af TM for at sikre forskydning af lederen af Malleus væk fra TM (kun hvis Malleus forskydning ønskes).
- Fjern mikro-saks og Placer gnaver under Otoskop for visualisering.
Bemærk: det er vigtigt at bemærke, at der ikke bør forekomme signifikant blødning efter den kirurgiske procedure. Euthanize gnaver og ikke gå videre til adfærdsmæssige vurdering, hvis blødning opstår. - Fremkald bilateral CHL ved at fortsætte som ovenfor i det modsatte øre.
4. otoscope visualisering
- Bekræft en vellykket CHL kirurgi med en otoskop ved hjælp af en lille diameter speculum at visualisere gnaver mellemøret.
- Evaluer hver gnaver før og efter den kirurgiske procedure i CHL under otoskopet. Sørg for at bekræfte normal TM (figur 2a) og beskadiget TM efter CHL-induktion (figur 2b).
-
Post operativ pleje af gnaver
- Placer gnaver i hjem bur under en varm lampe.
- Vær opmærksom på den gnavere post-CHL-induktion, indtil selve gnaver rettighederne.
- Injicer gnaver med glucose (dextrose/saltvand) serum til at genvinde bevidstheden og placere gnaver i hjemkomst til nyttiggørelse.
Bemærk: Brug en 23G nål med en 10 mL sprøjte til at injicere 5 mL saltvand efter CHL kirurgi. - Injicere gnaver via intramuskulær med anti-bakteriel enrofloxacin 0,05 mg/kg to gange i løbet af 24 timers restitutionsperioden.
- Overhold gnaver regelmæssigt for smerte adfærd eller symptomer efter operationen.
5. adfærds vurdering (validering af CHL-induktion)-Clap-chok-respons
- Bekræfte CHL (efter Otoskop bekræftelse) 24 h efter operationen med den adfærdsmæssige vurdering bestående af Clap-startle-test.
- Placer CHL induceret rotte ved siden af en normal rotte i to separate tilstødende bure.
- Placer gnavere i et stille rum.
- Stå ca 0,5 m væk fra gnavere og Fortsæt med at klappe i lige forskellige varigheder et antal gange (5 klapper blev valgt og fordelt over 1 sekund).
Bemærk: Clap-chok produceret af hånd klapen målte ≈ 40 dB SPL større end baggrundslyd som optaget af en højfrekvent mikrofon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den enkle CHL-procedure blev udført på 90 rotter og ud af denne gruppe 2 havde signifikant blødning og 2 havde ikke høretab den næste dag som vurderet af adfærdsmæssige Clap startle. Disse fire rotter blev kasseret. Rotter bør kasseres som beskrevet af årsagerne i diskussionen på grund af komplikationer. Inducerende TM punktering og/eller Malleus forskydning/fjernelse (figur 2b) fremkalder CHL, hvilket resulterer i adfærdsmæssige manifestationer (dvs. CHL-ingen reaktion på højt dB SPL startle). Rotter bør kontrolleres af Otoskop før operationen for at sikre normal tympaniske membran og efter operationen for at sikre tympaniske membran punktering (figur 2; Supplerende figur 1). Bemærk, at der ikke forekommer blødning eller signifikant inflammation (supplerende figur 2). Den CHL induceret-gnaver vil ikke reagere på en høj dB SPL Clap lyd mens en kontrol høre bur Mate vil hoppe til den høje klappe. CHL rat er ikke døv til at lyde, men har en CHL og derfor subtile adfærdsmæssige manifestationer forekomme5. En kontrol høre gnaver reagerer kraftigt med spring til en høj dB SPL-lyd, såsom klapning. Jump/startle-responsen er tydeligt synlig i videoen fra høre buret, mens den CHL-inducerede rotte ikke reagerer. Adfærden for en CHL rat kan være subtler. Vi demonstrerer den generelle Clap chok Reflex for en repræsentativ CHL rat og kontrol høre rotte. Over tid post-CHL kirurgi nogle rotter kan genvinde Clap chok respons.
Ved hjælp af CHL-proceduren har tidligere undersøgelser undersøgt de neurale manifestationer af høretab. For eksempel er graden af høretab efter proceduren blevet kvantificeret ved at måle auditive fremkaldte potentialer15,16,17, runde vindues optagelser4,18og adfærdsmæssige høre tærskler5. Neurale aktivitet efter CHL er blevet undersøgt med 2-deoxyglucose-metoden og helcelle optagelser4,16,17. Auditiv nerve aktivitet er også blevet undersøgt med runde vindues optagelser18. Frekvens-modulation detekterings tærskler er blevet undersøgt adfærds mundtlig5. Denne CHL-procedure er klart kompatibel med en bred vifte af eksperimentelle metoder til detaljerede undersøgelser af høretab.
Figur 1: kirurgisk opsætning. A) Placer gnaver i et godt belyst område med en kirurgisk lampe. Anæstetisere gnaver. Gør klar et sortiment af mikro-saks, hvis den mindste ikke virker, et større par kan sikre TM punktering. Sørg for, at Otoskop er klar. B) fjederbelastet mikro-saks. Tweezers vil være tilstrækkeligt, hvis eksperimentatoren kan styre åbningen og lukningen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: repræsentativ tympanistisk membran. A) tympaniske MEMBRAN (TM) før punktering. B) TM efter punktering. Når du udfører CHL og TM punktering bekræftelse med otoscope, er det bydende nødvendigt først at notere lederen af Malleus og efter CHL induktion, en vellykket fjernelse og punktering af TM. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende oplysninger figur 1: før og efter CHL kirurgi som visualiseret af en otoscope. Otoscope visualisering før og efter CHL kirurgi (umiddelbar) i identisk rotte. Venstre kolonne af tal er repræsentative rotte auditive kanaler visualiseret før CHL procedure af Otoskop med normale TM og mellemøre ossicles. Højre kolonne af tal er repræsentative rotte auditive kanaler visualiseret efter CHL procedure af Otoskop med punkteret TM og forskudt mellemøret ossicles. Signifikant blødning består af blod ophobning i ørerne. Undersøgelse mellemøret anatomi af gnavere før udførelse af proceduren19,20,21,22,23,24,25, 26,27,28,29. Otoscope visualisering blev udført 24 timer efter operationen. Venligst klik her for at downloade dette tal.
Supplerende oplysninger figur 2: kontrol og efter CHL kirurgi rotte auditive kanal som vurderet af histologi. Histologisk visning af mellemøret i kontrol og efter CHL kirurgi (bar = 500 μm). Auditive kanaler blev behandlet af hematoxylinlegemer og eosin (H & E) og Masson er Trikrom (MT) farvning i kontrol og 24 timer efter CHL kirurgi. Venstre kolonne af tal er repræsentative histologiske sektioner af auditive kanalen i kontrol rotter. Højre kolonne af tal er repræsentative histologiske sektioner af auditive kanalen efter CHL procedure. Bemærk, at der ikke forekommer nogen signifikant inflammation efter CHL kirurgi. Ingen forskel blev bemærket op til en uge. Venligst klik her for at downloade dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi beskriver en simpel kirurgisk induktion af CHL med verifikation ved hjælp af Otoskop visualisering og adfærdsmæssige Clap chok respons i rotte. Her viser vi metoden på rotte og tidligere denne metode er blevet anvendt til gerbils og mus. Metoden kan nemt vedtages til andre gnavere. Induktion af CHL gør det muligt at studere en diskret form for høretab, som manifesterer sig i auditive kortikale forandringer og psykofysiske adfærdsmæssige fund4,5,16,17,18 .
Undladelse af at inducere CHL kan skyldes flere årsager som anført nedenfor. I hvert tilfælde anbefaler vi at kassere rotten. Euthanize rotten, hvis en af ørerne bløder. Blødning indikerer, at saksen fik kontakt med auditive kanalen og kirurgisk tilgang var ikke ren. Ellers kan det betyde, at punktering var dybere end foretrukket, forårsager indre skader, muligvis hjerneskade. Indre skader kan betyde en dyb indsættelse eller nicking den auditive kanal. Proceduren er en minimalt invasiv tympanistisk membran og/eller Malleus fjernelse/forskydning; der bør derfor ikke forekomme signifikant blødning (supplerende figur 1). Hvis der opstår signifikant blødning, aflive rotten. Hvis der ikke høres en "pop"-lyd under den tympaniske membran punktering, kan dette indikere en stakkels CHL, hvilket betyder, at saksen ikke har direkte kontakt med den tympaniske membran. Kassér gnaver fra gruppen og euthanize. Ved hjælp af otoscope, hvis visualisering bekræfter mellemøret svarer til kontrol ører, dette indikerer den tympaniske membran er ikke blevet punkteret. Der blev ikke induceret CHL, og gnaver bør derfor kasseres. Hvis gnaver reagerer på Clap-Sound-testen, skal den kasseres. Hvis en CHL induceret gnaver spring eller hopper efter Clap lyde, svarende til sin bur mate, dette indikerer den kirurgiske procedure ikke lykkedes. Et svar på en Clap-lyd indikerer, at der ikke er forekommet en CHL, og at rotten skal kasseres eller euthanized. Begrænsningerne af inducerende CHL ved en kirurgisk tilgang er forbundet med indlæringskurven til at udføre den kirurgiske procedure og tillid til audiologisk undersøgelse19,20,22,23, 27,28,29. Desuden har denne protokol ikke anvendt ABR eller DPOAE til vurdering af høretab15 med henblik på at etablere en enkel protokol for videnskabsfolk, der ikke kender til audiologiske procedurer. De audiologiske procedurer ABR og DPOAE kan anvendes til videnskabsmænd, der ønsker yderligere vurdering af CHL15.
En modifikation af teknikken bruger TM punktering med Malleus forskydning. For en nybegynder kan det være svært at fastslå, men Malleus er tydeligt visualiseret med et Otoskop i næsten alle gnaver ører. TM er en fibrøs membran med et pellucid udseende, der transmitterer lys. Øv Otoskop verifikation til at etablere konsekvent visualisering baseret på tidligere litteratur19,20,22,23,27,28,29 . Efter en er sikker på Malleus visualisering, dens forskydning under operationen er let bekræftes af en høj ' pop ' som kan høres på ≈ 2 min 52 s. Denne pop er en høj dB SPL ændring i lydfilen på ca. 20 dB SPL før vridning af fjederbelastet mikro-saks. Den høje pop bekræfter TM punktering og succes uden at beskadige auditive kanalen. To aspekter af den kirurgiske procedure skal udføres med omhu: 1) Sørg for, at mikro-saks er placeret i midten af den auditive kanal, og 2) sikre vinklen på mikro-saks er parallel med auditive kanalen under den nedadgående punktering. Sørg for at punkterings bevægelsen er hurtig og ca. 5 mm nedad fra åbningen af øregangen. Roter og Åbn mikro-saks for Malleus forskydning, hvis det er ønskeligt.
De vigtigste trin i CHL-protokollen er at sikre TM punktering og verifikation adfærdsmæssige Clap startle. Sikring af verifikation af Malleus fjernelse/punktering af TM bekræfter CHL er blevet udført. Verifikation sker gennem otoskopisk undersøgelse. De kritiske trin for den adfærdsmæssige vurdering er at sikre en høj nok klappe, at gnaver er forsket. Der er konstateret forskelle, når en CHL-rotte anbringes i et lignende bur som hørerat; Her er en rotte forsket af den anden, selv om rotten ikke kan høre lyden. En forsket rotte/gnaver vil ofte hoppe eller hoppe, men dette er ikke et kriterium. Som det kan iagttages, bevæger CHL rat sig ikke til Clap. Da TM punktering er et CHL, kan forskellige niveauer af dB SPL lyde høres af gnaver5.
Den primære betydning af denne simple CHL metode er, at det kan udføres af en bred vifte af forskere, selv med blot beskedne ressourcer. Verifikation af høretab udføres af Otoskop visualisering og adfærdsmæssige Clap chok respons i rotte. Her viser vi metoden på rotte og tidligere denne metode er blevet anvendt til gerbils og mus. Metoden kan nemt vedtages til andre gnavere. Induktion af CHL gør det muligt at studere en diskret form for høretab, som manifesterer sig i auditive kortikale forandringer og psykofysiske adfærdsmæssige fund4,5,16,17,18 Den nuværende teknik kan kombineres med Elektrofysiologi og adfærdsmæssige teknikker til at bestemme de kortikale konsekvenser af høretab, som er af stor interesse for høretab forskning31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen finansielle eller ikke-finansielle interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbejde blev delvist støttet af Hongkongs Forskningstilskuds råd, Early Career Scheme, Project #21201217 til C. L., til projektet Brain mapping guidet Elektrofysiologi med applikationer i hørelse og støjforurening forskning. Vi takker Posgrado en Ciencias Biomédicas, Instituto de Neurobiología på Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México for Graduate Fellowship 578458 til FAM Manno.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Latex, polyvinyl or nitrile gloves | AMMEX | Use unpowdered gloves 8-mil | |
| Micro spring scissors (see Fig. 1b) | RWD Life Science | S11035-08 | 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice |
| Otoscope mini 3000 | HEINE | D-008.70.120M | Standard LED otoscope will suffice |
| Rat or mouse | JAX labs | Any small rodent | |
| Small rodent cage | Tecniplast | 1284L | Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2 |
References
- Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. Change in prevalence of hearing loss in US adolescents. The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).
- Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001. National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).
- Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services? Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).
- Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex. The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).
- Buran, B. N., et al. A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception. The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).
- Finck, A., Sofouglu, M. Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil. The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).
- Finck, A. Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus). The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579 (1967).
- Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr Development of auditory function in the Mongolian gerbil. The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107 (1969).
- Ryan, A. Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis. The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).
- Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears. The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).
- Kelly, J. B., Potash, M. Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus. Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).
- Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression. Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).
- Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch. Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).
- Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear. Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).
- Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration. PLoS One. 10 (11), e0142341 (2015).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil. Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence. Hearing Research. 155, 124-132 (2001).
- Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil. Hearing Research. 164, 127-137 (2002).
- Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).
- Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. Characteristic anatomical structures of rat temporal bone. Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).
- Judkins, R. F., Li, H. Surgical anatomy of the rat middle ear. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope. Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).
- Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. The vascular supply of the rat tympanic membrane. The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).
- Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. Standardized surgical approaches to ear surgery in rats. Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).
- Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).
- Magnuson, K., Hellström, S. Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity. Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).
- Shen, Y., et al. Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats. Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).
- Wang, A. Y., et al. Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone. International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).
- Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection. Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).
- Zhao, H., et al. Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood. Brain and Behavior. 8, e01004 (2018).
