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Neuroscience

चूहा में Otoscope दृश्य और व्यवहार ताली स्टार्टल प्रतिक्रिया का उपयोग कर सत्यापन के साथ चालक सुनवाई हानि के सरल सर्जिकल प्रेरण

Published: October 26, 2019 doi: 10.3791/57993
Automatic Translation
*1, *2,3,4, 5, 1, 5, 2,3,6, 4
1Instituto de Neurobiología, Universidad Nacional Autónoma de México, México, 2State Key Laboratory of Marine Pollution (SKLMP), City University of Hong Kong, Hong Kong, 3Department of Biomedical Sciences, College of Veterinary Medicine and Life Sciences, City University of Hong Kong, Hong Kong, 4Department of Physics, City University of Hong Kong, Hong Kong, 5Department of Clinical Oncology, Queen Elizabeth Hospital, Hong Kong, 6Department of Materials Science and Engineering, City University of Hong Kong, Hong Kong
* These authors contributed equally

Summary

यहाँ, हम शल्य कर्णपटह झिल्ली पंचर और otoscope दृश्य और ताली चौंका द्वारा व्यवहार मूल्यांकन द्वारा सत्यापन के माध्यम से एक प्रतिकृति प्रवाहकीय सुनवाई हानि प्रेरण स्थापित करने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं।

Abstract

चालकीय सुनवाई हानि (CHL) मनुष्य में एक प्रचलित सुनवाई हानि है. प्रोटोकॉल का लक्ष्य कृन्तकों में CHL को प्रेरित करने के लिए एक सरल शल्य प्रक्रिया का वर्णन करना है। प्रोटोकॉल कर्णपटह झिल्ली पंचर द्वारा CHL को दर्शाता है। CHL सर्जरी का सत्यापन otoscope परीक्षा और व्यवहार मूल्यांकन द्वारा ताली चौंका प्रतिक्रिया द्वारा किया गया था, दोनों प्रतिकृति और विश्वसनीय, और सुनवाई हानि का प्रदर्शन करने के लिए सरल तरीके हैं हुई है. सरल CHL प्रक्रिया सुनवाई हानि अनुसंधान में विभिन्न गतिविधियों के लिए अपनी प्रजननक्षमता और लचीलापन के कारण लाभप्रद है. एक शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण द्वारा CHL inducing की सीमाओं ऑडियोलॉजिकल परीक्षा में शल्य प्रक्रिया और विश्वास प्रदर्शन करने के लिए सीखने की अवस्था के साथ जुड़े रहे हैं. CHL द्वारा एक सुनवाई हानि inducing एक आसानी से तंत्रिका अभिव्यक्तियों और सुनवाई हानि के व्यवहार परिणामों का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है.

Introduction

बच्चों और वयस्कों में सुनवाई हानि की व्याप्तता क्रमशः लगभग 19.5%1 और 15.2%2 है। तथापि, एक असामान्य सुनवाई स्क्रीनिंग के साथ सभी नवजात शिशुओं के लगभग 39.3% उपचारात्मक उपचार प्राप्त नहीं है के रूप में रोग नियंत्रण3के लिए केंद्र द्वारा रिपोर्ट . श्रवण हानि एक व्यापक रूप से अध्ययन की स्थिति है , और कृंतक सामान्य सुनवाई और सुनवाई से संबंधित विकारों का अध्ययन करने के लिए एक मजबूत मॉडल है4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. प्रवाहकीय सुनवाई हानि (सीएचएल) जैसे हियरिंग विकार श्रवण प्रांतस्था4में अल्पकालिक synaptic अवसाद में वृद्धि करने के लिए नेतृत्व , जो आवृत्ति मॉडुलन का पता लगाने सीमा के साथ जुड़े उथले मनोमितीय ढलानों में परिणाम 5. मॉलियस, कर्णपटह झिल्ली (टीएम) पंचर या ईयरप्लग को शल्य चिकित्सा द्वारा चालकसुनवाई हानि मॉडल आसानी से नियोजित किया जाता है और श्रवण हानि मॉडल5,14 को तेजी से शामिल करने की अनुमति दी जाती है ,15,16,17,18. वर्तमान प्रोटोकॉल और विधि का लक्ष्य कृन्तकों में एक सरल और पुन: उत्पादन योग्य CHL मॉडल प्रदर्शित करना है।

वर्तमान प्रोटोकॉल सस्ती है (सभी उपकरणों के साथ $ USD $ 300), और आसानी से विभिन्न अनुसंधान गतिविधियों के लिए संशोधन. चूहे ने मध्य कान की शरीर रचना का विस्तृत आकलनकिया है 19,20,21,22,23, शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण24, ओटिस मीडिया25में मॉडल, 26,27 और टीएम पंचर पुनर्जनन16,17,18, 28,29,30,यह अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल बनाने सुनवाई हानि. यहाँ, एक साधारण CHL प्रेरण प्रक्रिया चूहे में ताली चौंका प्रतिक्रिया के साथ otoscope और व्यवहार मूल्यांकन द्वारा सत्यापन के साथ वर्णित है, जो तब सुनवाई हानि के अतिरिक्त अगली कड़ी का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. सीएचएल प्रक्रिया टीएम के सर्जिकल पंचर द्वारा प्रेरित होती है। टीएम की अनुपस्थिति निर्धारित करने के लिए CHL प्रक्रिया का सत्यापन ओटोस्कोप दृश्यावलोकन द्वारा किया जाता है। व्यवहार मूल्यांकन एक उच्च डेसीबल (डीबी) ध्वनि दबाव स्तर (एसपीएल) हाथ से ताली द्वारा किया जाता है। इस विधि पहले कृन्तकों की एक किस्म में लागू किया गया है. इसे दोहराना आसान है , मजबूत साइकोमेट्रिक अंतर पैदा करता है और तंत्रिका शारीरिक प्रतिक्रियाओं में परिवर्तन4,5,16,17,18.

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Protocol

वर्तमान अध्ययन और प्रक्रियाओं हांगकांग के सिटी विश्वविद्यालय, हांगकांग विश्वविद्यालय, और हांगकांग विशेष प्रशासनिक क्षेत्र के स्वास्थ्य विभाग के पशु अनुसंधान नैतिकता समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया.

1. पशु

  1. दो महीने के Sprague-Dawley (एसडी) चूहों का प्रयोग करें (एन $ 90, 200-250 ग्राम).
    नोट: Rodents हांगकांग विश्वविद्यालय के मान्यता प्राप्त प्रयोगशाला पशु इकाई द्वारा प्रदान की गई.
  2. प्रयोगशाला पशु अनुसंधान इकाई में एक निरंतर 25 डिग्री सेल्सियस तापमान और 60-70% आर्द्रता के तहत चूहों को बनाए रखें।
  3. 12/12-h प्रकाश/अंधेरे चक्र में भोजन और पीने के पानी के उपयोग के साथ घर कृन्तकों, ad libitum.
  4. सीएचएल सर्जरी से पहले कम से कम एक दिन के लिए आवास वातावरण के लिए Acclimate कृन्तकों.
  5. स्क्रफ द्वारा कृंतक उठाओ और केटामाइन और xylazine के कॉकटेल के साथ कृंतक को चुनें (80-100 मिलीग्राम/किलोग्राम: क्रमशः) इंट्रापेरिटोनल इंजेक्शन के माध्यम से (एक अंतिम एकाग्रता के रूप में 0.5 एमएल xylazine के साथ केटामाइन के 1.0 एमएल को जोड़ती है)।
    नोट: एक 23-25G सुई के साथ सिरिंज के एक 1 एमएल का उपयोग करें. एनेस्थेसिया के 30 मिनट के लिए चूहे के 100 ग्राम शरीर के वजन के प्रति लगभग 0.2 एमएल इंजेक्शन।
  6. दर्द की अनुभूति को सत्यापित करने और उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करने के लिए टो चुटकी प्रदर्शन करें। गहरी अंगुली चुटकी के लिए एक प्रतिक्रिया (पिछले अंग की वापसी से) अपर्याप्त संज्ञाहरण इंगित करता है.

2. सर्जिकल सेटअप

  1. सर्जरी शुरू करने से पहले एक ऑटोक्लेव या गर्म ग्लास मनका स्टरलाइज़र में सभी उपकरणों को स्टरलाइज़ करें। 70% इथेनॉल के साथ सर्जिकल क्षेत्र को साफ करें।
  2. प्रक्रिया शुरू करने से पहले लेटेक्स दस्ताने और प्रयोगशाला कोट का प्रयोग करें।
  3. साफ बेंच पर एक बाँझ शल्य चिकित्सा पर्दे रखें (चित्र 1A) .
  4. कान के संक्रमण को कम करने के लिए सर्जरी से पहले सूक्ष्म-कैंची और एक ओटोस्कोप का बंध्याकरण करें (चित्र 1बी)।
  5. बाँझ क्षेत्र में माइक्रो-स्किस और ओटोस्कोप रखें।
  6. शल्य चिकित्सा क्षेत्र में और सर्जन के साथ संरेखण में कृन्तक रखें.
  7. CHL के सर्जिकल प्रेरण के साथ आगे बढ़ें।

3. प्रवाहकीय सुनवाई हानि के सर्जिकल प्रेरण

  1. पूंछ और कृंतक के सिर एक प्रवण स्थिति में गठबंधन प्लेस, सर्जन के करीब सिर.
  2. स्वस्थ कर्णपटह झिल्ली (चित्र 2क) को सुनिश्चित करने के लिए ओटोस्कोप के नीचे कृन्तक के बाएँ और दाएँ कान को विरूपित करें । CHL प्रेरण करने से पहले स्वस्थ स्थिति को सत्यापित करने के लिए हर कृंतक के दोनों दाएँ और बाएं कान का मूल्यांकन करें।
  3. कान कुंडलिनी ले लो और बाहरी श्रवण नहर का विस्तार (यानी, कान नहर, बाहरी श्रवण meatus, इसके साथ श्रवण नहर) के कारण अंदर अस्पष्ट और गहराई से काला हो गया. यहाँ श्रवण नहर टीएम की सतह के लंबवत बनाई जाती है।
    नोट: सुनिश्चित करें कि श्रवण कैनेल अब सीधे समानांतर है और TM माइक्रो-sciss के सम्मिलन की धुरी के साथ एक सही कोण रूपों. यह प्रकाश के बिना एक काले ट्यूब के रूप में कल्पना की जाएगी. कभी-कभी श्रवण नहर को एक मामूली कोण पर झुकाने की आवश्यकता होती है, खोपड़ी की समतल सतह पर लगभग 15 डिग्री की आवश्यकता होती है। यह सुनिश्चित करता है कि सर्जन हाथ टीएम की सतह के लंबवत है।
  4. श्रवण नहर के केंद्र में माइक्रो-स्किस्टर्स का परिचय दें जो ध्यान देने के लिए नहीं है, श्रवण नहर के ऊतक को स्किम या निक करने के लिए और थोड़ा आगे बढ़ना, अंधकार के केंद्र से लगभग $ 5 मिमी, टीएम के केंद्र के माध्यम से धीरे से आगे जोर देते हुए।
    नोट: टीएम पंचर एक पॉप ध्वनि द्वारा पुष्टि की जा सकती है जब माइक्रो-scisor युक्तियाँ TM पंचर. वीडियो में पॉपिंग ध्वनि को लगभग $ 2 मिनट 52 s पर सुना जा सकता है। यह कैंची ध्वनि नहीं है; यह एक TM पंचर ध्वनि है. के रूप में मापा पोस्ट विश्लेषण, "पॉप" लगभग है $ 20 डीबी SPL पृष्ठभूमि ध्वनि से अधिक के रूप में एक उच्च आवृत्ति माइक्रोफोन द्वारा दर्ज की गई. इस हद तक "पॉप" ध्वनि को सत्यापित करने की कोई आवश्यकता नहीं है, otoscope दृश्य पर्याप्त है. अन्वेषक को प्रत्येक CHL प्रक्रिया के दौरान एक 'पॉप' सुना है सुनिश्चित करने का अभ्यास करने की आवश्यकता हो सकती है।
  5. तुरंत वसंत से भरी हुई माइक्रो-स्किस्टर खोलें और टीएम को puncturing के बाद तीन बार बारी बारी से टीएम से दूर malleus के सिर के विस्थापन सुनिश्चित करने के लिए (केवल अगर malleus विस्थापन वांछित है).
  6. माइक्रो-स्केस को निकालें और कृन्तक को दृश्य के लिए ओटोस्कोप के नीचे रखें।
    नोट: यह ध्यान दें कि कोई महत्वपूर्ण रक्तस्राव शल्य प्रक्रिया के बाद होना चाहिए महत्वपूर्ण है। कृन्तक यूथेनाइज करें और रक्तस्राव होने पर व्यवहार मूल्यांकन के लिए आगे न बढ़ें।
  7. विपरीत कान में ऊपर के रूप में आगे बढ़ने से द्विपक्षीय CHL प्रेरित.

4. ओटोस्कोप दृश्य

  1. कृंतक मध्य कान कल्पना करने के लिए एक छोटे व्यास speculum का उपयोग कर एक otoscope के साथ एक सफल CHL सर्जरी की पुष्टि करें।
  2. से पहले और otoscope के नीचे CHL शल्य प्रक्रिया के बाद हर कृंतक का मूल्यांकन. सामान्य टीएम की पुष्टि सुनिश्चित करना (चित्र 2क) और सीएचएल प्रेरण के बाद क्षतिग्रस्त टीएम (चित्र 2ब) .
  3. कृंतक के लिए पोस्ट-ऑपरेटिव देखभाल
    1. एक गर्म दीपक के तहत घर पिंजरे में कृन्तक प्लेस.
    2. कृंतक पोस्ट-सीएचएल प्रेरण का तब तक प्रेक्षण करें जब तक कृंतक अधिकार ही न हों।
    3. चेतना को ठीक करने और वसूली के लिए घर में कृंतक जगह करने के लिए ग्लूकोज (डेक्सट्रोज/लवण) सीरम के साथ कृंतक इंजेक्शन।
      नोट: CHL सर्जरी के बाद नमकीन के 5 एमएल इंजेक्ट करने के लिए एक 10 एमएल सिरिंज के साथ एक 23G सुई का प्रयोग करें।
    4. 24 एच वसूली अवधि के दौरान एंटी-बैक्टीरियल एनरोफ्लोक्सासिन 0.05 मिलीग्राम/किलोग्राम के साथ इंट्रामस्क्युलर के माध्यम से कृंतक को इंजेक्ट करें।
    5. सर्जरी के बाद दर्द व्यवहार या लक्षणों के लिए नियमित रूप से कृंतक का निरीक्षण करें।

5. व्यवहार मूल्यांकन (CHL प्रेरण की मान्यता) - ताली चौंका प्रतिक्रिया

  1. Corroborate CHL (ऑटोस्कोप पुष्टि के बाद) 24 एच पोस्ट-सर्जरी के साथ व्यवहार मूल्यांकन ताली-स्टार्टल-परीक्षण से मिलकर।
  2. दो अलग-अलग पिंजरों में एक सामान्य चूहे के बगल में CHL प्रेरित चूहे रखें।
  3. कृन्तकों को एक शांत कमरे में रखें।
  4. कृन्तकों से लगभग 0.5 मीटर दूर खड़े हो जाओ और समान रूप से स्थान अवधि में ताली के लिए आगे बढ़ने के लिए कई बार (5 claps चुना गया और 1 सेकंड से अधिक स्थान) थे.
    नोट: ताली एक उच्च आवृत्ति माइक्रोफोन द्वारा दर्ज के रूप में पृष्ठभूमि ध्वनि से अधिक 40 डीबी SPL मापा हाथ ताली द्वारा उत्पादित चौंका.

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Representative Results

सरल CHL प्रक्रिया 90 चूहों पर किया गया था और इस समूह से बाहर 2 महत्वपूर्ण खून बह रहा था और 2 सुनवाई हानि अगले दिन के रूप में व्यवहार ताली चौंका द्वारा मूल्यांकन नहीं किया था. इन चार चूहों को छोड़ दिया गया था। चूहों को जटिलताओं के कारण चर्चा में कारणों द्वारा वर्णित के रूप में खारिज कर दिया जाना चाहिए। टी एम पंचर और/या मैलेस विस्थापन/हटाने को प्रेरित करना (चित्र 2 बी) सीएचएल को उजागर करता है, जिसके परिणामस्वरूप व्यवहार अभिव्यक्तियां (यानी सीएचएल - जोर डीबी एसपीएल चौंका देने के लिए कोई प्रतिक्रिया नहीं होती है)। चूहों को सामान्य कर्णपटह झिल्ली सुनिश्चित करने के लिए सर्जरी से पहले और कर्णपटह झिल्ली पंचर सुनिश्चित करने के लिए कर्णदर्शी द्वारा जांच की जानी चाहिए (चित्र 2; अनुपूरक चित्र 1). ध्यान दें, कोई खून बह रहा है या महत्वपूर्ण सूजन हो जाना चाहिए(पूरक चित्र 2). एक नियंत्रण सुनवाई पिंजरे दोस्त जोर से ताली के लिए कूद जाएगा, जबकि CHL प्रेरित-कृंतक एक जोर डीबी SPL ताली ध्वनि का जवाब नहीं होगा. CHL चूहा ध्वनि करने के लिए बहरा नहीं है, लेकिन एक CHL है और इसलिए सूक्ष्म व्यवहार अभिव्यक्तियों5होते हैं. एक नियंत्रण सुनवाई कृंतक इस तरह के ताली चौंका के रूप में एक जोर डीबी एसपीएल ध्वनि करने के लिए छलांग के साथ जोरदार प्रतिक्रिया करता है। सुनवाई पिंजरे दोस्त से वीडियो में कूद / startle प्रतिक्रिया स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है, जबकि CHL प्रेरित चूहा जवाब नहीं है. एक CHL चूहे के लिए व्यवहार सूक्ष्म हो सकता है. हम एक प्रतिनिधि CHL चूहे और नियंत्रण सुनवाई चूहे के लिए सामान्य ताली चौंका पलटा प्रदर्शन. समय के बाद CHL सर्जरी के साथ कुछ चूहों ताली चौंका प्रतिक्रिया हासिल कर सकते हैं.

CHL प्रक्रिया का उपयोग करना, पहले के अध्ययनों में सुनवाई हानि के तंत्रिका अभिव्यक्तियों की जांच की है. उदाहरण के लिए, प्रक्रिया के बाद सुनवाई हानि की डिग्री श्रवण क्षमता को मापने के द्वारा निर्धारित किया गया है15,16,17, गोल खिड़की रिकॉर्डिंग4,18, और व्यवहार सुनवाई दहलीज5| सीएचएल के बाद तंत्रिका गतिविधि का अध्ययन 2-डिऑक्सीग्लूकोस विधि और पूरे सेल रिकॉर्डिंग4,16,17के साथ किया गया है। श्रवण तंत्रिका क्रिया की भी जांच की गई है जिसमें गोल खिड़की रिकॉर्डिंग18की गई है . आवृत्ति-मॉडुलन का पता लगाने थ्रेशोल्ड व्यवहार5का अध्ययन किया गया है। इस CHL प्रक्रिया स्पष्ट रूप से सुनवाई हानि के विस्तृत अध्ययन के लिए प्रयोगात्मक तरीकों की एक विस्तृत रेंज के साथ संगत है.

Figure 1
चित्रा 1: सर्जिकल सेटअप. A) एक शल्य दीपक के साथ एक अच्छी तरह से रोशन क्षेत्र में कृंतक रखें। कृंतक को एनेस्थेटाइज करें। माइक्रो-स्किस्टर्स का एक वर्गीकरण तैयार करें, अगर छोटी से छोटी काम नहीं करती है, तो एक बड़ी जोड़ी टीएम पंचर सुनिश्चित कर सकती है। सुनिश्चित करें कि ओटोस्कोप तैयार है। बी) स्प्रिंग लोडेड माइक्रो-स्किस्टर्स। अगर प्रयोगकर्ता खोलने और बंद करने को नियंत्रित कर सकता है तो चित्ज पर्याप्त होगा। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें. 

Figure 2
चित्र 2: प्रतिनिधि कर्णपटह झिल्ली. A) पंचर से पहले Tympanic झिल्ली (टीएम)। बी) पंचर के बाद TM. ओटोस्कोप के साथ सीएचएल और टीएम पंचर पुष्टि करते समय, पहले मॉलियस के सिर को नोट करना और सीएचएल प्रेरण के बाद, टीएम के एक सफल हटाने और पंचर करना अनिवार्य है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें. 

अनुपूरक सूचना चित्र 1: सीएचएल सर्जरी से पहले और बाद में जो एक ओटोस्कोप द्वारा विवाचित किया गया है। समान चूहे में सीएचएल सर्जरी (तुरंत) से पहले और बाद में ओटोस्कोप दृश्य। आंकड़ों के बाएँ स्तंभ प्रतिनिधि चूहे श्रवण नहरों सामान्य TM और मध्य कान osicles के साथ otoscope द्वारा CHL प्रक्रिया से पहले कल्पना कर रहे हैं. आंकड़ों का दायाँ कॉलम प्रतिनिधि चूहा श्रवण नहरों पंचर टीएम और विस्थापित मध्य कान osicles के साथ otoscope द्वारा CHL प्रक्रिया के बाद कल्पना कर रहे हैं. महत्वपूर्ण रक्तस्राव कान में रक्त संचय के होते हैं। प्रक्रिया19, 20 ,21,22,23,24,25, करने से पहले कृन्तकों के मध्य कान शरीर रचना का अध्ययन करें, 26,27,28,29. ओटोस्कोप दृश्य सर्जरी के 24 घंटे बाद आयोजित किया गया था। कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए.

अनुपूरक सूचना चित्र 2: नियंत्रण और सी एच एल सर्जरी के बाद चूहा श्रवण नहर के रूप में ऊतक विज्ञान द्वारा मूल्यांकन. नियंत्रण में और CHL सर्जरी के बाद मध्य कान के हिस्टोलॉजिकल दृश्य (बार $ 500 $m). ऑडिटरी नहरों हेमेटोक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) और मैसन के ट्राइक्रोम (एमटी) नियंत्रण में धुंधला और 24 घंटे के बाद CHL सर्जरी द्वारा संसाधित किया गया। आंकड़ों के बाएँ स्तंभ नियंत्रण चूहों में श्रवण नहर के प्रतिनिधि हिस्टोलॉजिकल वर्गों रहे हैं. आंकड़ों का दायाँ कॉलम सीएचएल प्रक्रिया के बाद श्रवण नहर के प्रतिनिधि हिस्टोलॉजिकल अनुभाग हैं। ध्यान दें कि सीएचएल सर्जरी के बाद कोई महत्वपूर्ण सूजन नहीं होती है। एक सप्ताह तक कोई अंतर नहीं देखा गया था। कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए.

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Discussion

हम चूहे में otoscope दृश्य और व्यवहार ताली चौंका प्रतिक्रिया का उपयोग कर सत्यापन के साथ CHL के एक सरल शल्य चिकित्सा प्रेरण का वर्णन. यहाँ हम चूहे पर विधि का प्रदर्शन और पहले इस विधि gerbils और चूहों के लिए लागू किया गया है. विधि आसानी से अन्य कृन्तकों को अपनाया जा सकता है. सीएचएल का प्रेरण श्रवण हानि के सूक्ष्म रूप के अध्ययन की अनुमति देता है जो श्रवण-संक्षारक परिवर्तन और मनोभौतिक व्यवहारनिष्कर्षों 4,5,16,17,18 में प्रकट होता है .

CHL प्रेरित करने के लिए विफलता नीचे सूचीबद्ध के रूप में कई कारणों के कारण हो सकता है. प्रत्येक मामले में, हम चूहे discarding सलाह देते हैं. अगर कान में से एक खून बह रहा है तो चूहे को यूथेनाइज करें। खून बह रहा इंगित करता है कि कैंची श्रवण नहर के साथ संपर्क किया और शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण साफ नहीं था. अन्यथा, यह दर्शाता है कि पंचर पसंदीदा की तुलना में गहरा था, आंतरिक क्षति के कारण, संभवतः मस्तिष्क क्षति. आंतरिक क्षति एक गहरी प्रविष्टि या श्रवण नहर nicking मतलब हो सकता है. प्रक्रिया एक न्यूनतम इनवेसिव कर्णपटह झिल्ली और / इसलिए, कोई महत्वपूर्ण रक्तस्राव नहीं होना चाहिए(पूरक चित्र 1)। यदि महत्वपूर्ण रक्तस्राव होता है, तो चूहे को इच्छामृत्यु दें। यदि कर्णपटह झिल्ली पंचर के दौरान कोई "पॉप" ध्वनि नहीं सुनी जाती है, तो यह एक गरीब सीएचएल का संकेत दे सकता है, जिसका अर्थ है कि कैंची ने कर्णपटह झिल्ली के साथ सीधा संपर्क नहीं किया। समूह से कृन्तक को त्यागें और इच्छामृत्यु करें। ओटोस्कोप का उपयोग करना, यदि दृश्य पुष्टि करता है कि मध्य कान कान को नियंत्रित करने के समान है, तो यह इंगित करता है कि कर्णपटह झिल्ली को पंचर नहीं किया गया है। कोई CHL प्रेरित किया गया था और इसलिए कृन्तक छोड़ दिया जाना चाहिए. कृन्तक ताली ध्वनि परीक्षण करने के लिए प्रतिक्रिया करता है, तो इसे खारिज कर दिया जाना चाहिए। यदि एक CHL प्रेरित कृंतक छलांग या ताली लगता है के बाद कूदता है, अपने पिंजरे दोस्त के समान, यह इंगित करता है शल्य प्रक्रिया सफल नहीं था. एक ताली ध्वनि के लिए एक प्रतिक्रिया इंगित करता है कोई CHL हुआ है और चूहे को खारिज कर दिया जाना चाहिए या ethanized. शल्य प्रर्गम द्वारा सी एच एल को प्रेरित करने की सीमाएं श्रवण क्रियावक्र19,20,22,23, 27,28,29. इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल श्रवण हानि का आकलन करने के लिए ABR या DPOAE का उपयोग नहीं किया15 आदेश audiological प्रक्रियाओं के साथ अपरिचित वैज्ञानिकों के लिए एक सरल प्रोटोकॉल स्थापित करने के लिए. ऑडियोलॉजिकल प्रक्रियाओं एबीआर और डीपीओई का उपयोग उन वैज्ञानिकों के लिए किया जा सकता है जो सी एच एल15का और मूल्यांकन करना चाहते हैं .

तकनीक का एक संशोधन मैलियस विस्थापन के साथ TM पंचर का उपयोग कर रहा है। एक नौसिखिया के लिए यह स्थापित करने के लिए मुश्किल हो सकता है, लेकिन malleus स्पष्ट रूप से लगभग सभी कृंतक कान में एक otoscope के साथ कल्पना की है. टीएम एक रेशेदार झिल्ली है जिसमें एक पेल्युसिड उपस्थिति होती है जो प्रकाश संचारित करती है। पिछलेसाहित्य19, 20 ,22,23,27,28,29पर आधारित संगत दृश्य स्थापित करने के लिए अभ्यास otoscope सत्यापन . एक के बाद एक malleus दृश्य में विश्वास है, सर्जरी के दौरान अपने विस्थापन आसानी से एक जोर से 'पॉप' द्वारा की पुष्टि की है के रूप में $ 2 मिनट 52 s पर सुना जा सकता है. इस पॉप वसंत लोड माइक्रो-scissors के घुमा से पहले लगभग 20 डीबी SPL की ऑडियो फाइल में एक जोर डीबी SPL परिवर्तन है. जोर से पॉप श्रवण नहर को नुकसान पहुँचाए बिना TM पंचर और सफलता की पुष्टि करता है। शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के दो पहलुओं को देखभाल के साथ किया जाना चाहिए: 1) यह सुनिश्चित करें कि माइक्रो-कैंची श्रवण नहर के केंद्र में रखा जाता है, और 2) यह सुनिश्चित करना कि माइक्रो-कैंची का कोण नीचे पंचर के दौरान श्रवण नहर के समानांतर है। सुनिश्चित करें कि पंचर गति त्वरित है और श्रवण नहर के उद्घाटन से लगभग 5 मिमी नीचे की ओर जोर है। यदि वांछित हो तो मॉलियस विस्थापन के लिए माइक्रो-स्किसर्स को घुमाएं और खोलें।

CHL प्रोटोकॉल के प्रमुख कदम TM पंचर सुनिश्चित कर रहे हैं और व्यवहार ताली चौंका की पुष्टि. टीएम के मॉलियस हटाने/पंचर का सत्यापन सुनिश्चित करना सीएचएल की पुष्टि करता है। ऑटोस्कोपिक परीक्षा के माध्यम से सत्यापन किया जाता है। व्यवहार मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण कदम एक जोर से पर्याप्त ताली सुनिश्चित करने के लिए कर रहे हैं कि कृन्तक चौंका दिया है. मतभेद नोट किया गया है जब एक CHL चूहे एक सुनवाई चूहे के रूप में एक समान पिंजरे में रखा गया है; यहाँ, एक चूहा दूसरे से चौंका दिया है, भले ही चूहे ध्वनि नहीं सुन सकते हैं. एक चौंका चूहा / जैसा कि देखा जा सकता है, CHL चूहा ताली के लिए कदम नहीं है. चूंकि टीएम पंचर एक CHL है, डीबी SPL ध्वनियों के विभिन्न स्तरों कृंतक5द्वारा सुना जा सकता है।

इस सरल CHL विधि का प्राथमिक महत्व यह है कि यह शोधकर्ताओं की एक विस्तृत श्रृंखला द्वारा किया जा सकता है, यहां तक कि सिर्फ मामूली संसाधनों के साथ. सुनवाई हानि का सत्यापन चूहे में otoscope दृश्य और व्यवहार ताली चौंका प्रतिक्रिया द्वारा किया जाता है. यहाँ हम चूहे पर विधि का प्रदर्शन और पहले इस विधि gerbils और चूहों के लिए लागू किया गया है. विधि आसानी से अन्य कृन्तकों को अपनाया जा सकता है. सीएचएल का प्रेरण श्रवण हानि के सूक्ष्म रूप के अध्ययन की अनुमति देता है जो श्रवण-संक्षारक परिवर्तन और मनोभौतिक व्यवहारनिष्कर्षों 4,5,16,17,18 में प्रकट होता है वर्तमान तकनीक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी और व्यवहार तकनीकों के साथ जोड़ा जा सकता है सुनवाई हानि के cortical परिणाम ों का निर्धारण करने के लिए, जो सुनवाई हानि अनुसंधान31के लिए बहुत रुचि का है.

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Disclosures

लेखक हितों के कोई वित्तीय या गैर वित्तीय संघर्ष की घोषणा.

Acknowledgments

इस काम को हांगकांग अनुसंधान अनुदान परिषद, अर्ली कैरियर योजना, परियोजना #21201217 सी.एल. द्वारा भाग में सहायता प्रदान की गई थी, परियोजना मस्तिष्क मानचित्रण सुनवाई और शोर प्रदूषण अनुसंधान में अनुप्रयोगों के साथ निर्देशित इलेक्ट्रोफिजियोलॉजीके लिए। हम Posgrado en Ciencias Biom$dicas, Universidad Nacional Aut$noma de Mxico (UNAM) के Instituto de Neurobiologa, कोन्सेजो Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) मक्सीको को ग्रेजुएट फेलोशिप 578458 से FAM के लिए धन्यवाद.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Latex, polyvinyl or nitrile gloves AMMEX Use unpowdered gloves 8-mil
Micro spring scissors (see Fig. 1b) RWD Life Science S11035-08 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice
Otoscope mini 3000 HEINE  D-008.70.120M Standard LED otoscope will suffice
Rat or mouse JAX labs Any small rodent 
Small rodent cage Tecniplast 1284L Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2

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References

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तंत्रिका विज्ञान अंक 152 चालक सुनवाई हानि Otoscope व्यवहार ताली चौंका प्रतिक्रिया रोडेंट Tympanic झिल्ली पंचर मैलियस हटाने /
चूहा में Otoscope दृश्य और व्यवहार ताली स्टार्टल प्रतिक्रिया का उपयोग कर सत्यापन के साथ चालक सुनवाई हानि के सरल सर्जिकल प्रेरण
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