Summary
Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung einer reproduzierbaren leitfähigen Hörverlustinduktion mittels chirurgischer tympanischer Membranpunktion und Verifikation durch Tooskopvisualisierung und Verhaltensbeurteilung durch Klatscher-Erde vor.
Abstract
Leitfähiger Hörverlust (CHL) ist eine vorherrschende Hörbehinderung beim Menschen. Das Ziel des Protokolls ist es, ein einfaches chirurgisches Verfahren zur Induktion von CHL bei Nagetieren zu beschreiben. Das Protokoll demonstriert CHL durch tympanische Membranpunktion. Die Überprüfung der CHL-Chirurgie erfolgte durch Otoscope-Untersuchung und Verhaltensbeurteilung durch Klatsch-Erlaufreaktion, sowohl reproduzierbar als auch zuverlässig, und es sind einfache Methoden zum Nachweis von Hörverlust aufgetreten. Das einfache CHL-Verfahren ist aufgrund seiner Reproduzierbarkeit und Flexibilität gegenüber unterschiedlichen Tätigkeiten in der Hörverlustforschung von Vorteil. Die Grenzen der Induktion von CHL durch einen chirurgischen Ansatz sind mit der Lernkurve verbunden, um den chirurgischen Eingriff durchzuführen und das Vertrauen in die audiologische Untersuchung. Die Induzieren einer Hörbehinderung durch CHL ermöglicht es, die neuronalen Manifestationen und Verhaltensergebnisse von Hörverlust leicht zu studieren.
Introduction
Die Prävalenz des Hörverlusts bei Kindern und Erwachsenen beträgt etwa 19,5%1 bzw. 15,2%2. Allerdings erhalten etwa 39,3 % aller Neugeborenen mit einem abnormalen Hörscreening keine Abhilfe, wie von den Centers for Disease Control3gemeldet. Hörverlust ist ein weithin untersuchter Zustand, und das Nagetier ist ein robustes Modell, um normale Hör- und Hörstörungen zu studieren4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Hörstörungen wie leitfähiger Hörverlust (CHL) führen zu einer Zunahme der kurzfristigen synaptischen Depression im auditiven Kortex4, was zu flacheren psychometrischen Hängen führt, die mit Frequenzmodulationserkennungsschwellen verbunden sind. 5. Leitfähige Hörverlustmodelle durch chirurgische Entfernung/Verschiebung der Malleus-, Tympanopinmembranpunktion (TM) oder Ohrstöpsel sind einfach zu verwenden und ermöglichen eine schnelle Induktion des Hörverlustmodells5,14 ,15,16,17,18. Ziel des vorliegenden Protokolls und verfahrens ist es, ein einfaches und reproduzierbares CHL-Modell bei Nagetieren zu demonstrieren.
Das vorliegende Protokoll ist kostengünstig (mit allen Werkzeugen 300 USD) und leicht für verschiedene Forschungszwecke darsen. Die Ratte hatte detaillierte Bewertungen der Mittelohranatomie19,20,21,22,23, chirurgische Ansätze24, Modelle in Otitis media25, 26,27 und TM Punktionsregeneration16,17,18,28,29,30, so dass es ein ideales Modell zum Studieren Hörverlust. Hier wird ein einfaches CHL-Induktionsverfahren mit Überprüfung durch Otoscope und Verhaltensbeurteilung mit Klatsch-Erlaufreaktion bei Ratten beschrieben, die dann verwendet werden können, um zusätzliche Folgevon Hörverlust zu untersuchen. Das CHL-Verfahren wird durch chirurgische Punktion des TM induziert. Die Überprüfung des CHL-Verfahrens erfolgt durch Totoskopvisualisierung, um das Fehlen des TM zu bestimmen. Die Verhaltensbeurteilung erfolgt durch einen hohen Dezibel (dB) Schalldruckpegel (SPL) Handklatschen. Diese Methode wurde bereits bei einer Vielzahl von Nagetieren angewendet. Es ist einfach zu replizieren, produziert robuste psychometrische Unterschiede und Veränderungen in neuronalen physiologischen Reaktionen4,5,16,17,18.
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Protocol
Die vorliegende Studie und die Verfahren wurden von den Ethikkommissionen der Stadtuniversität Hongkong, der Universität Hongkong und des Gesundheitsministeriums der Sonderverwaltungsregion Hongkong genehmigt.
1. Tiere
- Verwenden Sie Sprague-Dawley (SD) Ratten von zwei Monaten (N = 90, 200-250 g).
HINWEIS: Nagetiere wurden von der akkreditierten Labortiereinheit der Universität Hongkong zur Verfügung gestellt. - Halten Sie die Ratten in der Labortierforschungseinheit unter einer konstanten Temperatur von 25 °C und einer Luftfeuchtigkeit von 60-70 % auf.
- Haus Nagetiere in 12/12-h Licht/Dunkel-Zyklen mit Zugang zu Nahrung und Trinkwasser, ad libitum.
- Akklimatisieren Sie Nagetiere mindestens einen Tag vor der CHL-Operation an die Wohnumgebung.
- Das Nagetier an der Scruff abholen und das Nagetier mit einem Cocktail aus Ketamin und Xylazin (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg) mittels intraperitonealer Injektion anbemaßen (1,0 ml Ketamin als Endkonzentration mit 0,5 ml Xylazin kombinieren).
HINWEIS: Verwenden Sie eine Spritze mit einer 23-25G-Nadel von 1 ml. Injizieren Sie ca. 0,2 ml pro 100 g Körpergewicht der Ratte für 30 min Anästhesie. - Führen Sie die Zehenprise aus, um das Schmerzempfinden zu überprüfen und die richtige Anästhesie zu bestätigen. Eine Reaktion auf tiefe Zehenkneifung (durch Entzug der Hinterbeine) deutet auf eine unzureichende Anästhesie hin.
2. Chirurgische Einrichtung
- Sterilisieren Sie alle Geräte in einem Autoklaven oder heißglasperlensterilisierer vor Beginn der Operation. Reinigen Sie den Operationsbereich mit 70% Ethanol.
- Verwenden Sie Latexhandschuhe und Labormantel, bevor Sie mit dem Eingriff beginnen.
- Legen Sie einen sterilen chirurgischen Vorhang auf die saubere Bank (Abbildung 1A).
- Sterilisieren Sie Mikroscheren und ein Tooskop vor der Operation, um Ohrinfektionen zu minimieren (Abbildung 1B).
- Die Mikroschere und das Otoscope in den sterilen Bereich legen.
- Platzieren Sie das Nagetier im chirurgischen Bereich und in Ausrichtung mit dem Chirurgen.
- Fahren Sie mit der chirurgischen Induktion von CHL fort.
3. Chirurgische Induktion von leitfähigem Hörverlust
- Legen Sie den Schwanz und den Kopf des Nagers in einer anfälligen Position ausgerichtet, Kopf am nächsten an den Chirurgen.
- Visualisieren Sie das linke und rechte Ohr des Nagetiers unter dem Tooskop, um eine gesunde tympanische Membran zu gewährleisten (Abbildung 2a). Bewerten Sie sowohl das rechte als auch das linke Ohr jedes Nagetiers, um den gesunden Zustand vor der CHL-Induktion zu überprüfen.
- Schnappen Sie sich die Ohrhelix und verlängern Sie den äußeren Gehörgang (d.h. Gehörgang, externer Auditfleisch, hierin auditiver Kanal), um das Innere durch Tiefe verdunkelt und geschwärzt zu machen. Hier wird der Gehörgang senkrecht zur Oberfläche des TM hergestellt.
HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Gehörwinkel jetzt direkt parallel ist und das TM einen rechten Winkel mit der Einschubachse der Mikroschere bildet. Es wird als schwarze Röhre ohne Licht visualisiert werden. Manchmal muss der Gehörgang in einem leichten Winkel, etwa 15° zur planaren Oberfläche des Schädels geneigt werden. Dadurch wird sichergestellt, dass die Hand des Chirurgen senkrecht zur Oberfläche des TM ist. - Führen Sie die Mikroschere in der Mitte des Gehörgangs ein, wobei Sie darauf achten, das Gewebe des Gehörgangs nicht zu überspringen oder zu nicken, und leicht vorgehen, etwa 5 mm vom Zentrum der Dunkelheit entfernt, wobei sie sanft durch die Mitte des TM nach vorne geschoben wird.
HINWEIS: Die TM-Punktion kann durch einen Pop-Sound bestätigt werden, wenn die Mikroscherenspitzen das TM punktieren. Der Knaller ton ist im Video bei ca. 2 min 52 s zu hören. Dies ist kein Scherenklang; dies ist ein TM Punktionssound. Wie nach der Analyse gemessen, ist der "Pop" etwa 20 dB SPL größer als Hintergrundton, wie von einem Hochfrequenzmikrofon aufgezeichnet. Es besteht keine Notwendigkeit, den "Pop"-Sound in diesem Ausmaß zu überprüfen, die Otoscope-Visualisierung ist ausreichend. Der Prüfer muss möglicherweise üben, dass bei jedem CHL-Verfahren ein "Pop" gehört wird. - Öffnen Sie sofort die federbelastete Mikroschere und drehen Sie dreimal nach dem Punktieren des TM, um eine Verschiebung des Kopfes des Malleus weg vom TM zu gewährleisten (nur wenn eine Malleusverschiebung gewünscht ist).
- Entfernen Sie die Mikroschere und legen Sie das Nagetier zur Visualisierung unter das Otoscope.
HINWEIS: Es ist wichtig zu beachten, dass nach dem chirurgischen Eingriff keine signifikanten Blutungen auftreten sollten. Euthanisieren Sie das Nagetier und gehen Sie nicht zur Verhaltensbeurteilung, wenn Blutungen auftreten. - Induzieren Bilateral CHL durch verfahren wie oben in das gegenüberliegende Ohr.
4. Tooskop-Visualisierung
- Bestätigen Sie eine erfolgreiche CHL-Operation mit einem Otoscope mit einem kleinen Durchmesser Spekulum, um das Nagetier-Mittelohr zu visualisieren.
- Bewerten Sie jedes Nagetier vor und nach dem CHL-Opastungsverfahren unter dem Otoscope. Sicherstellen der Bestätigung des normalen TM (Abbildung 2a) und beschädigten TM nach CHL-Induktion (Abbildung 2b).
-
Postoperative Pflege des Nagers
- Legen Sie das Nagetier in den heimischen Käfig unter eine warme Lampe.
- Beobachten Sie die Nagetier-Induktion nach der CHL, bis das Nagetier selbst rechte.
- Injizieren Sie das Nagetier mit Glucose (Dextrose/Saline) Serum, um das Bewusstsein wiederzuerlangen und das Nagetier zur Genesung in den Hauskäfig zu legen.
HINWEIS: Verwenden Sie eine 23G-Nadel mit einer 10 ml Spritze, um 5 ml Kochchen nach einer CHL-Operation zu injizieren. - Injizieren Sie das Nagetier über intramuskuläre mit antibakteriellem Enrofloxacin 0,05 mg/kg zweimal während der 24 h Erholungsphase.
- Beobachten Sie das Nagetier regelmäßig auf Schmerzverhalten oder Symptome nach der Operation.
5. Verhaltensbeurteilung (Validierung der CHL-Induktion) - Klatsch-Erlaufreaktion
- Corroborate CHL (nach Otoscope-Bestätigung) 24 h nach der Operation mit der Verhaltensbeurteilung bestehend aus dem Klatsch-Start-Test.
- Legen Sie die CHL-induzierte Ratte neben eine normale Ratte in zwei separate angrenzende Käfige.
- Legen Sie die Nagetiere in einen stillen Raum.
- Stehen Sie ca. 0,5 m von den Nagetieren entfernt und klatschen Sie mehrmals in gleichmäßigen Abstandsdauern (5 Klatschen wurden ausgewählt und über 1 Sekunde verteilt).
ANMERKUNG: Die Klatsch-Erprob, die durch das Handklatschen erzeugt wird, gemessen bei 40 dB SPL größer als Hintergrundton, wie von einem Hochfrequenzmikrofon aufgezeichnet.
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Representative Results
Das einfache CHL-Verfahren wurde an 90 Ratten durchgeführt und aus dieser Gruppe 2 hatte signifikante Blutungen und 2 hatten keinen Hörverlust am nächsten Tag, wie durch Verhaltensklatsch-Erlauf beurteilt. Diese vier Ratten wurden verworfen. Ratten sollten aufgrund von Komplikationen verworfen werden, wie es in den Gründen in der Diskussion beschrieben wird. Die Induzieren von TM Punktion und/oder Malleusverschiebung/-entfernung (Abbildung 2B) löst CHL aus, was zu Verhaltensmanifestationen führt (d.h. CHL - keine Reaktion auf laute dB SPL-Erschrecken). Ratten sollten vor der Operation mit Otoscope überprüft werden, um eine normale tympanische Membran und nach der Operation zu gewährleisten, um eine tympanische Membranpunktion zu gewährleisten(Abbildung 2; Ergänzende Abbildung 1). Beachten Sie, dass keine Blutungen oder signifikante Entzündungen auftreten sollten (Zusatzabbildung 2). Das CHL-induzierte Nagetier reagiert nicht auf einen lauten dB SPL-Klatschton, während ein Kontroll-Hörkäfig-Mate zum lauten Klatschen springt. Die CHL-Ratte ist nicht taub ton, sondern hat eine CHL und daher treten subtile Verhaltenserscheinungen auf5auf. Ein Kontrollhörnchen reagiert kräftig mit Sprüngen auf einen lauten dB SPL-Sound, wie z.B. die Klatsch-Erheiterung. Die Sprung-/Startreaktion ist im Video vom Hörkäfig-Mate deutlich sichtbar, während die CHL-induzierte Ratte nicht reagiert. Das Verhalten einer CHL-Ratte kann subtiler sein. Wir zeigen den allgemeinen Klatsch-Erlaufreflex für eine repräsentative CHL-Ratte und Kontroll-Hörratte. Im Laufe der Zeit nach der CHL-Operation können einige Ratten die klappende Reaktion wiedererlangen.
Mit dem CHL-Verfahren haben frühere Studien die neuronalen Manifestationen von Hörverlust untersucht. Beispielsweise wurde der Grad des Hörverlusts nach dem Verfahren quantifiziert, indem die evozischen Potentiale15,16,17, Runde Fensteraufzeichnungen4,18und Verhaltens-Hörschwellen5. Die neuronale Aktivität nach CHL wurde mit der 2-Deoxyglucose-Methode und den Vollzellaufzeichnungen4,16,17untersucht. Auditorische Nervenaktivität wurde auch mit runden Fensteraufzeichnungen18untersucht. Frequenzmodulations-Erkennungsschwellen wurden verhaltensauffällig5untersucht. Dieses CHL-Verfahren ist eindeutig mit einer Vielzahl von experimentellen Methoden für detaillierte Untersuchungen von Hörverlust vereinbar.
Abbildung 1:Chirurgische Einrichtung. A) Nagetier in einem gut beleuchteten Bereich mit einer CHIRURGISCHEn Lampe platzieren. Anästhesisieren Sie das Nagetier. Machen Sie eine Auswahl an Mikroscheren bereit, wenn die kleinste nicht funktioniert, kann ein größeres Paar TM Punktion gewährleisten. Stellen Sie sicher, dass das Otoscope bereit ist. B) Federbelastete Mikroschere. Pinzetten genügen, wenn experimentierfreudige Könnener das Öffnen und Schließen steuern können. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Repräsentative tympanische Membran. A) Tympanische Membran (TM) vor der Punktion. B) TM nach Punktion. Bei der Chl- und TM-Punktionsbestätigung mit dem Otoscope ist es zwingend erforderlich, zuerst den Kopf des Malleus und nach der CHL-Induktion eine erfolgreiche Entfernung und Punktion von TM zu beachten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Ergänzende Informationen Abbildung 1: Vor und nach der CHL-Operation, wie durch ein Otoscope visualisiert. Otoscope-Visualisierung vor und nach CHL-Operation (sofort) bei identischer Ratte. Linke Ziffernspalte sind repräsentative Raten-Hörkanäle, die vor dem CHL-Verfahren durch Otoscope mit normalen TM- und Mittelohr-Ossikeln visualisiert werden. Rechte Ziffernspalte sind repräsentative Raten-Hörkanäle, die nach dem CHL-Verfahren durch Otoscope mit punktiertem TM und verschobenen Mittelohr-Ossikeln visualisiert werden. Signifikante Blutungen bestehen aus Blutansammlung in den Ohren. Studieren Sie Mittelohr anatomie von Nagetieren vor der Durchführung des Verfahrens19,20,21,22,23,24,25, 26,27,28,29. Die Otoscope-Visualisierung wurde 24 Stunden nach der Operation durchgeführt. Bitte klicken Sie hier, um diese Abbildung herunterzuladen.
Ergänzende Informationen Abbildung 2: Kontrolle und nach CHL-Operation Ratte auditiver Kanal nach der Histologie bewertet. Histologische Ansicht des Mittelohrs unter Kontrolle und nach chl-Operation (Bar = 500 m). Auditorische Kanäle wurden von Hämatoxylin und Eosin (H&E) und Massons Trichrom (MT) Färbung in der Kontrolle und 24 Stunden nach der CHL-Operation verarbeitet. Linke Figurenspalte sind repräsentative histologische Abschnitte des Gehörgangs in Kontrollratten. Rechte Abbildungsspalte sind repräsentative histologische Abschnitte des Gehörgangs nach dem CHL-Verfahren. Beachten Sie, dass nach einer CHL-Operation keine signifikante Entzündung auftritt. Bis zu einer Woche wurde kein Unterschied bemerkt. Bitte klicken Sie hier, um diese Abbildung herunterzuladen.
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Discussion
Wir beschreiben eine einfache chirurgische Induktion von CHL mit Verifikation mit Tooskop-Visualisierung und Verhaltens-Klatsch-Erlauf-Reaktion bei Ratten. Hier zeigen wir die Methode auf Ratte und zuvor wurde diese Methode auf Gerbils und Mäuse angewendet. Die Methode kann leicht auf andere Nagetiere übernommen werden. Die Induktion von CHL ermöglicht die Untersuchung einer subtilen Form von Hörverlust, die sich in auditiven kortikalen Veränderungen und psychophysischen Verhaltensbefunden manifestiert4,5,16,17,18 .
Das Versäumnis, CHL zu induzieren, könnte auf mehrere Gründe zurückzuführen sein, wie unten aufgeführt. In jedem Fall empfehlen wir, die Ratte zu entsorgen. Euthanisieren Sie die Ratte, wenn eines der Ohren blutet. Blutungen weisen darauf hin, dass die Schere Kontakt mit dem Gehörgang hatte und der chirurgische Ansatz nicht sauber war. Andernfalls kann es bedeuten, dass die Punktion tiefer als bevorzugt war, wodurch innere Schäden, möglicherweise Hirnschäden verursacht wurden. Interne Schäden können ein tiefes Einsetzen oder Nicken des Gehörgangs bedeuten. Das Verfahren ist eine minimalinvasive tympanische Membran und/oder Malleus-Entfernung/Verschiebung; Daher sollte keine signifikante Blutung auftreten (Zusatzabbildung 1). Wenn signifikante Blutungen auftreten, einschläfern Sie die Ratte. Wenn während der tympanischen Membranpunktion kein "Pop"-Sound zu hören ist, könnte dies auf eine schlechte CHL hinweisen, was bedeutet, dass die Schere keinen direkten Kontakt mit der tympanischen Membran hatte. Entsorgen Sie das Nagetier aus der Gruppe und euthanisieren Sie. Wenn die Visualisierung mit dem Otoscope bestätigt, dass das Mittelohr den Kontrollohren ähnlich ist, deutet dies darauf hin, dass die tympanische Membran nicht durchlöchert wurde. Es wurde kein CHL induziert und daher sollte das Nagetier entsorgt werden. Wenn das Nagetier auf den Klatsch-Sound-Test antwortet, sollte er verworfen werden. Wenn ein CHL induziertes Nagetier nach Klatschgeräuschen springt oder springt, ähnlich wie sein Käfigpartner, deutet dies darauf hin, dass der chirurgische Eingriff nicht erfolgreich war. Eine Antwort auf einen Klatschton zeigt an, dass keine CHL aufgetreten ist und die Ratte entsorgt oder eingeschläfert werden sollte. Die Grenzen der Induktion von CHL durch einen chirurgischen Ansatz sind mit der Lernkurve verbunden, um den chirurgischen Eingriff und das Vertrauen in die audiologische Untersuchung19,20,22,23, 27,28,29. Darüber hinaus verwendete dieses Protokoll keine ABR oder DPOAE zur Beurteilung von Hörverlust15, um ein einfaches Protokoll für Wissenschaftler zu erstellen, die mit audiologischen Verfahren nicht vertraut sind. Die audiologischen Verfahren ABR und DPOAE können für Wissenschaftler verwendet werden, die eine weitere Bewertung von CHL15wünschen.
Eine Modifikation der Technik ist die Verwendung von TM Punktion mit Malleusverschiebung. Für einen Anfänger mag dies schwierig zu etablieren sein, aber der Malleus ist in fast allen Nagetierohren klar mit einem Otoscope visualisiert. Die TM ist eine faserige Membran mit einem pellucid Aussehen, die Licht überträgt. Praxis-Otoskop-Verifizierung, um konsistente Visualisierung auf der Grundlage der vorherigen Literatur zu etablieren19,20,22,23,27,28,29 . Nachdem man sich in der Malleus-Visualisierung sicher ist, wird seine Verschiebung während der Operation leicht durch einen lauten "Pop" bestätigt, wie bei 2 min 52 s zu hören ist. Dieser Pop ist eine laute dB SPL-Änderung in der Audiodatei von ca. 20 dB SPL vor dem Drehen der federbelasteten Mikroschere. Der laute Knall bestätigt DIE Punktion und den Erfolg von TM, ohne den Gehörgang zu beschädigen. Zwei Aspekte des chirurgischen Eingriffs müssen mit Vorsicht durchgeführt werden: 1) sicherstellen, dass die Mikroschere in der Mitte des Gehörgangs platziert wird, und 2) sicherstellen, dass der Winkel der Mikroschere parallel zum Gehörgang während der Abwärtspunktion ist. Stellen Sie sicher, dass die Punktionsbewegung schnell und ca. 5 mm nach unten von der Öffnung des Gehörgangs gestoßen ist. Drehen und öffnen Sie die Mikroschere für Malleusverschiebung, wenn gewünscht.
Die wichtigsten Schritte des CHL-Protokolls sind die Sicherstellung der TA-Punktion und die Überprüfung der Verhaltensklatsche. Die Überprüfung der Malleusentfernung/-punktion des TM bestätigt, dass CHL durchgeführt wurde. Die Überprüfung erfolgt durch otoskopische Untersuchung. Die entscheidenden Schritte für die Verhaltensbeurteilung sind, ein lautes Klatschen zu gewährleisten, dass das Nagetier erschreckt wird. Es wurden Unterschiede festgestellt, wenn eine CHL-Ratte in einen ähnlichen Käfig wie eine Hörratte gelegt wird; hier wird eine Ratte von der anderen erschreckt, auch wenn die Ratte den Ton nicht hören kann. Eine erschrockene Ratte/Nagetier springt oder hüpft oft, aber das ist kein Kriterium. Wie man beobachten kann, bewegt sich die CHL-Ratte nicht zum Klatschen. Da es sich bei der TM-Punktion um eine CHL handelt, kann das Nagetier5verschiedene Niveaus von db SPL-Sounds hören.
Die primäre Bedeutung dieser einfachen CHL-Methode ist, dass sie von einer Vielzahl von Forschern durchgeführt werden kann, selbst mit nur bescheidenen Ressourcen. Die Überprüfung des Hörverlusts erfolgt durch Otoskop-Visualisierung und Verhaltensklatsch-Erlaufreaktion bei Ratten. Hier zeigen wir die Methode auf Ratte und zuvor wurde diese Methode auf Gerbils und Mäuse angewendet. Die Methode kann leicht auf andere Nagetiere übernommen werden. Die Induktion von CHL ermöglicht die Untersuchung einer subtilen Form von Hörverlust, die sich in auditiven kortikalen Veränderungen und psychophysischen Verhaltensbefunden manifestiert4,5,16,17,18 Die vorliegende Technik kann mit Elektrophysiologie und Verhaltenstechniken kombiniert werden, um die kortikalen Folgen von Hörverlust zu bestimmen, was für die Hörverlustforschung von großem Interesse ist31.
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Disclosures
Die Autoren erklären keine finanziellen oder nichtfinanziellen Interessenkonflikte.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde teilweise vom Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 to C. L., für das Projekt Brain mapping guided electrophysiology mit Anwendungen in der Hör- und Lärmbelästigungsforschungunterstützt. Wir danken dem Posgrado en Ciencias Biomédicas, dem Instituto de Neurobiologa der Universidad Nacional Auténoma de México (UNAM), dem Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) México für das Graduate Fellowship 578458 an FAM Manno.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Latex, polyvinyl or nitrile gloves | AMMEX | Use unpowdered gloves 8-mil | |
| Micro spring scissors (see Fig. 1b) | RWD Life Science | S11035-08 | 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice |
| Otoscope mini 3000 | HEINE | D-008.70.120M | Standard LED otoscope will suffice |
| Rat or mouse | JAX labs | Any small rodent | |
| Small rodent cage | Tecniplast | 1284L | Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2 |
References
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