Summary
نحن تقييم أثر كتلة العقدة متعاطفة مع سرطان عنق الرحم في إصلاح الأعصاب باستخدام قنوات العصبية الاصطناعية. الكلاب بيغل الذكور كانت بعضها مزروع مع العصبية اصطناعية عبر فجوة 10 ملم في العصب السنخية السفلي الأيسر؛ العقدة متعاطفة مع عنق الرحم الأيسر تم حظره بواسطة الحقن الإيثانول 99.5% عن طريق ثوراكوتومي الأفقي.
Abstract
Polyglycolic حمض الكولاجين (الشبكة-ج) أنابيب هي العصب الحيوي الامتصاص أنابيب مليئة بالكولاجين لهيكل الدائرة المتعددة، التي تتألف من الأفلام الكولاجين رقيقة. وتحققت النتائج السريرية الملائمة عند استخدام هذه الأنابيب لعلاج تلف الأعصاب السنخية أدنى (إيان). عامل حاسم لتجديد العصب الناجحة باستخدام أنابيب الشبكة-ج إمدادات الدم إلى الأنسجة المحيطة. كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم (كسجب) يخلق حصار متعاطفة في منطقة الرأس والرقبة، وبالتالي زيادة تدفق الدم في المنطقة. لضمان تأثير كاف، أن الحصار يجب أن تدار مع المخدرات الموضعية واحد لمرتين في يوم لعدة أسابيع متتالية؛ وهذا يشكل تحديا عند إنشاء نماذج حيوانية للتحقيق في هذا الأسلوب. لمعالجة هذا القيد، وضعنا كسجب التي يسببها الإيثانول في نموذج الكلاب البوليسية للزيادة في تدفق الدم في منطقة كفاءة على المدى الطويل. قمنا بفحص سواء إيان التجديد عن طريق غرس أنبوب الشبكة-C يمكن أن تتعزز بهذا النموذج. البيجل أربعة عشر كانت كل مزروع مع أنبوب ج الشبكة عبر فجوة 10 ملم في إيان الأيسر. إيان يقع داخل القناة محاطة بعظم الفك السفلي، ولذا اخترنا جراحة كهرضغطية، يتألف من الموجات فوق الصوتية، لمعالجة العظام، من أجل التقليل إلى أدنى حد من خطر الإصابة العصبية والسفينة. تم الحصول على نتيجة العمليات جراحية جيدة مع هذا النهج. أسبوع بعد الجراحة، سبعة من هذه الكلاب تعرضوا لليسار كسجب بحقن الإيثانول. المستحثة الإيثانول كسجب أسفر تجدد العصب محسنة، مما يوحي بأن زيادة تدفق الدم يعزز فعالية التجدد العصب في عيوب إيان. هذا النموذج الكلاب يمكن أن تساهم في إجراء المزيد من البحوث عن الآثار الطويلة الأمد كسجب.
Introduction
في كثير من الحالات، الإصابات الرضية للعصب السنخية أدنى (إيان) علاجية المنشأ، كثيرا ما الناجم عن استخراج المولى الثالثة أو موضع زراعة الأسنان1،،من23. إصابة إيان يمكن أن يؤدي إلى العجز في الحرارية وتلمس الأحاسيس، فضلا عن تنمل وديسيسثيسيا وهيبوسثيسيا واللودينيا. يتم التعامل مع إصابة العصب ليس فقط بالعلاج المحافظ ولكن أيضا غيرها من الأساليب، بما في ذلك خياطة وموضع أوتوجرافت. ومع ذلك، هذه الأساليب والعيوب، التي غالباً ما تتضمن عدم تحسن الأعراض وعيوب الجهاز العصبي في الجهات المانحة الموقع4،،من56.
العصبية الاصطناعية-أنبوب polyglycolic حمض-الكولاجين (الشبكة-ج) وضعت أصلاً في اليابان. وأنبوب امتصاص الحيوي مع التجويف الداخلية مليئة الكولاجين الاسفنجي7. في التجارب على الحيوانات، هذا الأنبوب كان يستخدم لتعزيز تجديد الأعصاب في الكلاب بيغل مع خلل العصب الشظوي، وتبين للنهوض بمستوى أعلى من الانتعاش من زرع الأعصاب الذاتي8. التطبيق السريري الأنبوب ج المنظمة بدأت في عام 2002 في المرضى الذين يعانون من إصابات الأعصاب المحيطية. وعلاوة على ذلك، تحققت نتائج سريرية إيجابية في علاج الاعتلال العصبي تريجمينل (إيان والعصبية اللغات)9،،من1011. عامل حاسم لتجديد العصب الناجحة باستخدام أنابيب الشبكة-ج إمدادات الدم إلى الأنسجة المحيطة بها8. كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم (كسجب) يخلق حصار متعاطفة في منطقة الرأس والرقبة، ويزيد من تدفق الدم إلى منطقة معصب كل منهما12؛ وهكذا، قد استخدمت في علاج متلازمة الإقليمية المعقدة الألم وعدم كفاية الدورة الدموية13،،من1415. ومع ذلك، كانت هناك فقط بضعة تحقيقات تجريبية على الفعالية من كسجب في تدفق الدم زيادة16،17. لضمان كفاءة كسجب كافية، الحصار يجب تطبيق جنبا إلى جنب مع المخدرات الموضعية مرة أو مرتين يوميا لعدة أسابيع، مما يشكل تحديا عند توليد نماذج حيوانية للتحقيق في هذا الأسلوب. لمعالجة هذا القيد، في دراسة سابقة، قمنا بتطوير نموذج الكلاب البوليسية للمدى الطويل زيادة تدفق الدم في المنطقة كفاءة18. النموذج تم إنشاؤها بواسطة أداء كسجب عن طريق حقن الإيثانول 99.5%. نحن تقييم تدفق الدم المخاطية الفموية ودرجة حرارة الجلد الآنف بالليزر دوبلر flowmetry والحراري والأشعة تحت الحمراء مرة واحدة في الأسبوع لمدة 12 أسبوعا. ووجدنا أن زاد تدفق الدم لمنطقة كفاءة لمدة 7 – 10 أسابيع في هذا النموذج.
في هذه الدراسة، ونحن تقييم آثار كسجب التي يسببها الإيثانول على تجديد الأعصاب.
تم زرع الأنبوب ج الشبكة في الكلاب بيغل عبر فجوة 10 ملم في إيان الأيسر. وبعد أسبوع، أجرى كسجب عن طريق حقن الإيثانول. ثلاثة أشهر بعد الجراحة، وأجرينا مجموعة متنوعة من الدراسات الكهربية وغذائها والمورفولوجية لتقييم آثار كسجب على تجديد الأعصاب. نحن نقدم بروتوكول مفصل للتعمير إيان باستخدام أنابيب الشبكة-ج والمستحثه الإيثانول كسجب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
هذه الدراسة أجريت وفقا "المبادئ التوجيهية" لرعاية واستخدام الحيوانات ووافقت عليها اللجنة "بحوث الحيوانات التابع لجامعة كيوتو" (كيوتو، اليابان؛ ورقم الترخيص: R-16-16). بذل كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات، وجميع أجزاء هذا التقرير تلتزم سيصلون (بحوث الحيوان: الإبلاغ عن التجارب في فيفو ) المبادئ التوجيهية.
1-تصنيع أنابيب الشبكة-ج
- لاختلاق القناة العصبية الاصطناعية عن طريق أنبوب (PGA) حمض بوليجليكوليك قابلة لامتصاص، استخدام آلة جدل أنبوبي مجهزة بمغزل 48 وخمسة ألياف الشبكة، تتألف من حزم من خيوط 26 (الشكل 1)18.
- لتجعل سطح الشبكة أنبوب ماء، تعرض لتفريغ البلازما.
- استخدم 1% v/w أتيلوكولاجين في الحل هيدروكلوريد7.
ملاحظة: أتيلوكولاجين هو المستخرج من جلد الخنزير عن طريق العلاج الإنزيم وإخضاعها لفحص فيروسات. أنه أساسا يتكون من نوع أنا (70-80 في المائة) واكتب الكولاجين الثالث، نسبة الذي وصف بالتفصيل في مكان آخر7. إعداد الحل الكولاجين بتذويب الكولاجين ز 1 في 100 مل محلول هيدروكلوريد (الرقم الهيدروجيني = 3.0). نظراً لكثافة الحل هيدروكلوريد حوالي 1.0، هو تركيز الكولاجين ث/ث تقريبا 1%. - معطف الأنبوب مع طبقات الكولاجين التي تستنزف مرارا وتكرارا أن الحل هيدروكلوريد الكولاجين 1% 5 s في كل مرة.
- بعد الغمس، جاف الأنبوب على مقاعد البدلاء نظيف في درجة حرارة الغرفة. أداء غمس القادمة بعد التأكد من الأنبوب يجف تماما (حوالي 6 ح للتجفيف).
- كرر عملية طلاء 10 مرات.
- موضوع الأنبوب ج الشبكة إلى 140 درجة مئوية ح 24 تحت الفراغ (العلاج ديهيدروثيرمال)، بغية مراقبة بيو-الاستيعاب وكروسلينكينج من جزيئات الكولاجين. إجراء العملية بأكملها تحت ظروف معقمة.
ملاحظة: هذا الإجراء بإنشاء أنبوب طول النهائي 14-مم وقطرها الداخلي 3 مم وسمك الجدار 50 ميكرومتر.
2-الجراحة الإعداد
- استخدام البيجل الذكور البالغين وزنها كيلوغرام 9.0 إلى 13.0.
- بيت الحيوانات في أقفاص منفصلة، تحت ظروف تربية الكلاب الخاضعة للرقابة (12-ح دورة الضوء والظلام).
- تقديم الأغذية الصلبة والمياه libitum الإعلانية.
- تزن البيجل.
- اﻷوتوكﻻف جميع الأدوات الجراحية.
- ارتداء قفازات معقمة وتطهير جميع الأسطح من الإعداد التشغيل مع حلاً إيثانول 80%. تجاهل القفازات المستخدمة.
- القيام بغسل اليدين الجراحي.
- وضع قناع جديد، ثوب، والقفازات المعقمة.
3-التخدير وإعداد الجلد
- تخدير مع خليط من هيدروكلوريد الكيتامين 5 مغ/كغ و 1 مغ/كغ إكسيلازيني الكلب بحقنه عضليا.
- التنبيب بأنبوب الرغامى من طول 25 سم وقطرها 7.5 مم.
- ضع الكلب على موقف الحق الأفقي. المحافظة على التخدير العام مع سيفوفلوراني 3.2% مع الأكسجين (1.0 لتر في الدقيقة).
- استخدم وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية.
- تنطبق جل العيون على السطح الأمامي للعيون لتجنب كشط القرنية.
- يحلق الحقل الجراحي (منطقة الصدر الجانب الأيسر) باستخدام مقص جراحي بعناية. رش كمية كبيرة من الحل الكحولية عبر الموقع من المنطوق. انتظر على الأقل 15 ثانية تكرار التطبيق 3 مرات.
- تسجيل معدل ضربات القلب وتشبع الأكسجين أثناء الجراحة.
4-أدنى السنخية العصب التعمير باستخدام الشبكة-ج أنبوب: تطوير نموذج إعادة البناء فقط
- حقن 3 مل يدوكائين 1% باستخدام إبرة ز 27 إلى لثة الفك السفلي الأيسر كمخدر موضعي ومسكن.
- تنفيذ شق عرضية 5 سم مع شفرة المبضع رقم 15 في لثة الفك السفلي الأيسر، للكشف عن مانديبليس للحيوان.
- استخدام الاهتزازات فوق الصوتية كهرضغطية لطحن الجانب الدانية للفك السفلي في مستطيل 8 مم × 3 سم من خلال الثقبة العقلي اللاحق.
ملاحظة: قد تواتر الاهتزاز 28 \u2012 32 كيلو هرتز. - إزالة جزء أمامي لصفيحة عظم الفك السفلي (الأبعاد، 3 سم × 8 مم) لفضح إيان (الشكل 2A) غادر18.
ملاحظة: الموقع التعمير يتوافق مع ذروة الجذر المولى الأولى - قطاع إيان مع مشرط لإزالة قطعة 10 ملم.
- إدراج جذوعها الدانية والبعيدة للعصب مقطوعة في الأنبوبة العصبية إلى عمق 2 مم.
- استخدام خيوط النايلون 8-0 وينتهي مجهر جراحي في 8 X التكبير خياطة أنبوب للعصب الدانية والبعيدة (الشكل 2)18.
- العودة لوحة العظام إلى موقعها الأصلي الفك السفلي.
- إغلاق الجرح بخيوط النايلون 4-0.
- يوم واحد بعد الجراحة، والتأكد من أن لوحة عظم الفك السفلي في موضعه الصحيح.
- 4.10.1 إجراء التصوير المقطعي (CT) في عظم الوجه تحت التخدير. تعيين معلمات CT كما يلي: 120 كفب، ماس 200، 0.5 mm/s، وسمك 0.5 ملم شريحة.
- إدارة التخدير باستخدام خليط من 5 مغ/كغ الكيتامين هيدروكلوريد و 1 مغ/كغ إكسيلازيني (الشكل 3).
- 4.10.1 إجراء التصوير المقطعي (CT) في عظم الوجه تحت التخدير. تعيين معلمات CT كما يلي: 120 كفب، ماس 200، 0.5 mm/s، وسمك 0.5 ملم شريحة.
- إدارة الأمبيسلّين (100 ملغ/يوم) كالمضادات الحيوية واسيتامينوفين (100 ملغ/يوم) كمسكن لمدة أسبوع بعد الجراحة.
5-الإيثانول الناجم عن كسجب: التنمية من التعمير + نموذج كسجب
- أداء إيان التعمير كما هو موضح في القسم 4، والسماح لمدة أسبوع للانتعاش.
- تخدير الحيوان مع سيفوفلوراني 1.5% في الأكسجين (4 لتر في الدقيقة) والهواء (6 لتر/دقيقة). الحلاقة وتنظيف الحقل الجراحي المقصود، كما هو موضح في القسم 3.
- وضع علامة على الخط شق مع علامة جلد جراحية من رسم خط في منطقة الصدر في الجانب الأيسر (الشكل 4، السطر شق 20 سم في الطول).
- ضخ 5 مل يدوكائين 1% باستخدام إبرة ز 21 إلى منطقة الصدر الجانب الأيسر كمخدر موضعي ومسكن.
- جداً الجلد الصدر الجانب الأيسر بشفرة المبضع رقم 10.
- جداً في طبقة الدهون مع دون مشرط كهربائي لفضح اللفافة العضلية.
- كشف سيراتوس فينتراليس العضلات والعضلات ساليناس.
- رفع سيراتوس فينتراليس العضلات والعضلات ساليناس من البطني إلى الظهرية لفضح الأضلاع الثانية والثالثة (الشكل 5).
- نفذ thoracotomy جانبي الأيسر في الفضاء ربية الثانية والثالثة لفضح العقدة متعاطفة مع عنق الرحم الأيسر (الشكل 6).
- حقن 0.2 مل من 99.5 ٪ إيثانول في العقدة متعاطفة مع عنق الرحم باستخدام إبرة ز 30 إطار التصور مباشرة (الشكل 7).
- إغلاق الفضاء ربية مع توقف 1-0 غرز قابلة للامتصاص.
- إغلاق الجلد بغرز النايلون توقف 3-0.
- إدارة الأمبيسلّين (100 ملغ/يوم) كالمضادات الحيوية واسيتامينوفين (100 ملغ/يوم) كمسكن لمدة أسبوع بعد الجراحة.
- في أسبوع واحد بعد كسجب، قياس درجة حرارة جلد الوجه مع الحراري والأشعة تحت الحمراء للتأكد من كسجب.
6-الكهربية التسجيلات
- لقياس إمكانات العمل العصبية الحسية (الإضافية) وسرعة التوصيل العصبية الحسية (SCV) لايان ثلاثة أشهر بعد إعادة الإعمار، تخدير الحيوانات كما هو موضح في القسم 3.
ملاحظة: وينبغي قياس المفاجئة و SCV على الجانبين التحكم التجريبية والعادي لكل الكلب في كلتا المجموعتين في المعاملة. - إجراء شق في لثة الفك السفلي الأيسر بشفرة المبضع رقم 10.
- بعناية إزالة لوحة عظم الفك السفلي لتجنب إتلاف العصب المجددة جسديا.
- حفز إيان استخدام زوج من أقطاب الإبرة، لتسجيل الأداة الإضافية و SCV.
- إدراج أقطاب بروكسيمالي لقناة العصب.
- تطبيق التحفيز الكهربائية 10 كيلوهرتز 20 مرة.
- تحليل النتائج.
- تحدد الأداة عن طريق حساب السعة متوسط الاستجابة للتحفيز الكهربائي.
- قياس زمن الذروة والسعة القصوى من تسجيلات المخطط.
- حساب مؤشر الاسترداد بالمعادلة التالية: السعة الذروة لايان الأيسر لإعادة الإعمار فقط أو التعمير + كسجب السعة المجموعة/الذروة لعنصر التحكم العادي (الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار فقط)19 ،20.
7-نسيجية تحليل
-
إعداد قسم
- إعادة الإعمار، بعد ثلاثة أشهر من الحصاد إيان الأيسر، بما في ذلك 1 سم للعصب على جانبي الموقع أعيد بناؤها.
- حصاد إيان الصحيح على الصعيد المقابل لموقع الحصاد على الجانب الأيسر.
- بادئة الأعصاب المقطوع بالانغماس في 2.5 ٪ glutaraldehyde في حل المخزن مؤقت كاكوديلاتي 0.1 M (درجة الحموضة 7.4، 48 درجة مئوية، ح 24).
- Postfix مع محلول أكسيد الاوزميوم 2% (48 درجة مئوية، ح 4) وفيروسيانيد البوتاسيوم في م 0.1 الفوسفات المخزن المؤقت الحل (درجة الحموضة 7.4، ح 2).
- يذوي الأعصاب مع سلسلة من حلول الإيثانول متدرج.
- تضمين في راتنج الإيبوكسي (البارافين).
- قسم العينات في سمك 0.5 \u2012 1.0 ميكرومتر.
-
أزرق تولويدين المصبوغة والمورفولوجية التحليل
- وصمة عار الأقسام مع الحل تولويدين الأزرق.
- الحصول على صور مجهرية باستخدام مجهر ضوئي، في 400 X التكبير في المناطق التالية على طول العينات: ترك إيان، وسط الجزء المجددة ومم 2 ديستالي للسيجارة؛ إيان الحق، مركز إيان الجزء المقابل لموقع الحصاد على الجانب الأيسر.
- حدد الصور من جميع مناطق مع المجددة من الألياف العصبية.
- مجدد مختارة عشوائياً من مناطق \u2012 10 8 ميكرومتر 100 × 100 ميكرومتر التي تحتوي على الألياف العصبية.
- إجراء تحليل المورفولوجية لاستخدام برامج مناسبة لقياس البارامترات التالية: الألياف العصبية ميليناتيد القطر (ميكرومتر) والكثافة (العد/المنطقة)، الأعصاب نسبة الأنسجة، ونسبة-ز (إكسون myelinated قطر الألياف العصبية القطر/ميليناتيد ).
-
إيمونوستينينج
- اتبع البروتوكولات القياسية لتلطيخ الباب البارافين.
- احتضان مع الأجسام المضادة الأساسي لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية.
- يغسل مع الفوسفات مخزنة المالحة 3 مرات عند 25 درجة مئوية.
- احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية المسمى مع الفجل-البيروكسيديز لمدة 30 دقيقة عند 25 درجة مئوية.
- الحصول على الصور باستخدام مجهر ضوء.
-
مجهر إلكتروني (TEM)
- تعد الأعصاب كما هو موضح في الخطوة 7، 1.
- قسم الأعصاب في سمك 70 ميكرومتر 90 \u2012 باستخدام أولتراميكروتومي.
- وصمة عار الأقسام مع سترات الرصاص في رينولد واليورانيل.
- بحث وصورة مجهر إلكتروني.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
لاحظنا زيادة في درجة حرارة جلد الوجه من الجانب المحظور 1 أسبوع بعد كسجب اليسرى (الشكل 8).
في إعادة إعمار ما بعد 3 أشهر، تم استيعاب الأنبوب ج المنظمة في مجال التعمير والتجديد للعصب السنخية أقل شأنا وقد لوحظ في إعادة الإعمار فقط ومجموعات الإعمار + كسجب (الشكل 9 ألف، باء)18.
وكان المفاجئة قابلة للقياس في كلا الجانبين التعمير التعمير + كسجب ومجموعات الإعمار فقط. ويرد في الجدول 118نتائج التقييم الكهربية. مؤشر الاسترداد و SCV كانت أعلى بكثير في إعادة الإعمار + كسجب من فريق إعادة الإعمار فقط.
لاحظنا myelinated الألياف العصبية في أجزاء وسط والقاصي إيان المجددة في إعادة الإعمار فقط، ومجموعات الإعمار + كسجب (الرقم 10 ألف، باء)18. إعادة الإعمار فقط وإعادة إنشائها بالتعمير + كسجب المجموعات أظهرت أصغر أقطار العصب ميليناتيد بالمقارنة مع مجموعة المراقبة العادية (الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار، الشكل 10). ولوحظت أيضا الألياف العصبية ميليناتيد غير ناضجة.
النظر في إعادة الإعمار فقط، التعمير + مجموعات كسجب باستخدام ال أظهرت الألياف العصبية myelinated المجددة وشوان الخلايا (الشكل 10، هاء). ويبين الشكل 10F هذه النتائج لمجموعة المراقبة العادية (الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار).
وأكد وجود محاور عصبية المجددة وخلايا شوان في الأجزاء الوسطى والبعيدة لإعادة الإعمار فقط ومجموعات الإعمار + كسجب، تلطيخ مع نيوروفيلامينت المضادة (NF) والأجسام المضادة-S100، على التوالي (الرقم 11 )18.
ويرد في الجدول 218نتائج التقييم المورفولوجية. قطر الألياف العصبية ميليناتيد في وسط الجزء الأيسر إيان المجددة كان 4.27 ± 1.5 ميكرومتر في فريق إعادة الإعمار وميكرومتر 5.11 ± 1.98 في المجموعة كسجب، بينما في الجزء القاصي من المجددة إيان غادر القطر 3.47 مليميكرون ± 1.21 ريكونستروك فريق نشوئها و 4.53 ± 1.36 ميكرومتر في مجموعة كسجب. وفي كلتا الحالتين، كان القطر أكبر بكثير في مجموعة كسجب، التي أظهرت أيضا أعلى بكثير myelinated العصب ألياف العصبية وكثافة أنسجة نسبة في الوسط والجزء الأعلى من إيان الأيسر المجددة. ز-النسبة في مركز إيان الأيسر المجددة كان 0.75 ± 0.04 في فريق إعادة الإعمار و 0.68 ± 0.05 في المجموعة كسجب، بينما في الجزء القاصي كان 0.74 ± 0.04 في فريق إعادة الإعمار و 0.69 ± 0.04 في مجموعة كسجب. وهكذا، وفي كلتا الحالتين، كانت ز-النسبة أصغر بكثير في مجموعة كسجب.
أحجام العينة لإعادة الإعمار فقط، والتعمير + مجموعات كسجب n = 7. أجريت التحليلات الإحصائية لقطر الألياف العصبية ميليناتيد والكثافة ونسبة-ز، و SCV باستخدام الاختبار في دونيت. تم إجراء تحليل مؤشر الاسترداد باستخدام الطالب مزاوج تي-اختبار. تم تعيين مستوى دلالة إحصائية 5% (ف < 0.05).
رقم 1: أنبوب Polyglycolic حمض مليئة الأسفنج الكولاجين. A) الصورة الإجمالية للأنبوب. وكانت الأبعاد النهائية لقناة العصب طول 14 مم وقطرها الداخلي 3 مم وسمك الجدار ميكرومتر 50. ب) مسح صورة مجهرية إلكترون من الأنبوب. وهذا الرقم سابقا نشرته شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: ترك العصبية السنخية أدنى (إيان) السابقة وإعادة الإعمار بعد انتهاء. A) قبل إعادة الإعمار صورة إيان الأيسر بعد التعرض بإزالة العظام. ب) إعادة الإعمار ما بعد الصورة لايان الأيسر أعيد بناؤها باستخدام أنبوب polyglycolic حمض-الكولاجين. وهذا الرقم سابقا نشرته شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: حسبت التصوير بالتصوير المقطعي لعظم الوجه بعد أن غادر التعمير الأعصاب السنخية أدنى. وتبين الصورة لوحة عظم الفك السفلي في الموضع الصحيح. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: علامات الجلد قبل العملية في منطقة الصدر الجانب الأيسر قبل الجراحة. صورة تظهر علامات الجلد قبل تنفيذ كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم. خط شق 20 سم في الطول. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: تشغيل عرض كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم: قبل ثوراكوتومي. تظهر الصورة الأضلاع الثانية والثالثة بعد رفع العضلات سيراتوس فينتراليس وسكالينوس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 6: تشغيل عرض كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم: thoracotomy بعد. صورة تظهر العقدة متعاطفة مع عنق الرحم الأيسر بعد thoracotomy الأفقي في الفضاء ربية الثانية والثالثة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 7: حقن ما قبل وما بعد الإيثانول العقدة متعاطفة مع عنق الرحم باستخدام إبرة 30 غ. A) حقن الإيثانول قبل صورة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم الأيسر. ب) صورة حقن الإيثانول بعد انتهاء العقدة متعاطفة مع عنق الرحم الأيسر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 8: الشخصية بعد كتلة اليسار العقدة متعاطفة مع عنق الرحم (كسجب)- الشخصية اشترتها أسبوع واحد بعد كسجب حقن الإيثانول. علما بأن درجة حرارة جلد الوجه على الجانب الأيسر أعلى من الجانب كونترالاتيرال. ويشير شريط اللون إلى درجات الحرارة في درجة مئوية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 9: إعادة أحياء العصبية السنخية أدنى (إيان). ) صورة إيان في فريق إعادة الإعمار فقط. ب) صورة إيان في التعمير + مجموعة كسجب (كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم). ويلاحظ العصب التجدد (المنطقة بين رؤوس الأسهم البيضاء) في كلا الفريقين. وهذا الرقم سابقا نشرته شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 10: تحليل المجهر الإلكتروني الأزرق وانتقال تولويدين العصب السنخية أدنى المجددة (إيان). - ج) شبه رقيقة مقاطع عرضية لايان في إعادة الإعمار ما بعد 3 أشهر ملطخة تولويدين الأزرق. صور تظهر أجزاء القاصي إيان الأيسر المجددة في كل مجموعة، كما هو مبين. د - و) صور المجهر الإلكتروني انتقال من مقاطع شبه رقيقة تظهر الألياف العصبية ميليناتيد وغير ميليناتيد (أسود وأبيض رؤوس الأسهم، على التوالي). تمثل أشرطة مقياس 50 ميكرومتر في (أ)-(ج) و 5 ميكرومتر (د)-(و). المراقبة العادية: الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار فقط. وهذا الرقم سابقا نشرته شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 11: التحليل المناعي لشرائح القاصي المجددة اليسرى السفلي التهاب العصب (إيان). ، ب) الأقسام من إيان المجددة في إعادة الإعمار ما بعد 3 أشهر ملطخة بجسم نيوروفيلامينت المضادة (NF) لفريق إعادة الإعمار فقط (A) والتعمير + كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم (كسجب؛ ب) مجموعات. تشير رؤوس الأسهم السوداء إلى محاور عصبية المجددة. ج، د) الأقسام من إيان المجددة في إعادة الإعمار ما بعد 3 أشهر ملطخة بجسم المضادة-S-100 لفريق إعادة الإعمار فقط (ج) والتعمير + كسجب (د) مجموعات. وتشير رؤوس الأسهم البيضاء إلى خلايا شوان. تغيير حجم أشرطة، 50 ميكرومتر. وهذا الرقم سابقا نشرته شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| التوصيل العصبية الحسية (m/s) | مؤشر الاسترداد | |
| المراقبة العادية | 48.5 ± 2.8 | - |
| فريق إعادة الإعمار فقط | 2.9* 36.8 ± | 0.22 ± 0.04 |
| فريق إعادة الإعمار + كسجب | 2.4* 42.0 ±# | 0.35 ± 0.06# |
الجدول 1: نتائج الكهربية في الأعصاب السنخية أدنى (إيان) في 3 أشهر بعد الجراحة- يتم عرض البيانات كما يعني ± انحراف معياري (n = 7). أجريت مقارنات باستخدام الطالب مزاوج تي-اختبار. إيان، الأعصاب السنخية أدنى؛ كسجب، كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم. *، ف < 0.05 بالمقارنة مع مجموعة المراقبة العادية؛ #، ف < 0.05 بالمقارنة مع فريق إعادة الإعمار فقط. المراقبة العادية: الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار فقط؛ مؤشر الاسترداد: نسبة السعة القصوى لايان الأيسر لإعادة الإعمار فقط أو التعمير + مجموعة كسجب إلى السعة القصوى لعنصر التحكم العادي. ونشر هذا الجدول السابق شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن.
| الألياف العصبية ميليناتيد القطر (ميكرومتر) | الألياف العصبية myelinated الكثافة (عدد/100 ميكرومتر2) | نسبة أنسجة العصبية (%) | نسبة ز | ||
| المراقبة العادية | مركز | 8.83 ± 3.11 | 103 ± 8 | 41.3 ± 3.9 | 0.62 ± 0.03 |
| فريق إعادة الإعمار فقط | مركز | 1.5* 4.27 ± | 126 ± 20 * | 2.1* 11.6 ± | 0.04* 0.75 ± |
| القاصي | 1.21* 3.47 ± | 109 ± 17 * | 7.3 ± 2، 0 * | 0.04* 0.74 ± | |
| فريق إعادة الإعمار + كسجب | مركز | 1.98* 5.11 ±# | 140 ± 22 *# | 3.0* 15.9 ±# | 0.05* 0.68 ±# |
| القاصي | 1.36* 4.53 ±دولار | 123 ± 15 *$ | 2.1* 12.5 ±دولار | 0.04* 0.69 ±$ | |
الجدول 2: النتائج المورفولوجية في العصب السنخية أدنى (إيان) في 3 أشهر بعد الجراحة- يتم عرض البيانات كما يعني ± انحراف معياري (n = 7). أجريت مقارنات باستخدام الاختبار في دونيت. إيان، الأعصاب السنخية أدنى؛ كسجب، كتلة العقدة متعاطفة مع عنق الرحم. *، ف < 0.05 بالمقارنة مع مجموعة المراقبة العادية؛ * #، ف < 0.05 بالمقارنة مع الجزء المركزي من إيان الأيسر في فريق إعادة الإعمار فقط؛ * $p < 0.05 بالمقارنة مع نهاية القاصي إيان الأيسر في فريق إعادة الإعمار فقط. المراقبة العادية: الجزء المركزي من إيان الحق في فريق إعادة الإعمار فقط؛ ز نسبة هي نسبة قطر إكسون myelinated إلى القطر إجمالي الألياف ميليناتيد. ونشر هذا الجدول السابق شيونويا et al. 18 وهو طبع بإذن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نحن نقدم طريقة فعالة لتجديد إيان باستخدام أنبوب الأعصاب بيوابسوربابل في تركيبة مع كسجب التي يسببها الإيثانول. لهذه الدراسة استخدمنا الكلاب، منذ نماذج حيوانية أخرى، مثل الفئران والجرذان والأرانب، قصيرة العمر المتوقع وهيئة صغيرة الحجم، و وبالتالي لا يمكن استخدامها للقيام العمليات الجراحية الدقيقة. كما إيان يقع داخل القناة الفك السفلي محاط بالعظام، تقنية جراحية ضروري لتجنب تلف الأعصاب والأوعية الدموية عند تنفيذ إعادة الإعمار العصب. نصيحة تقنية هامة لهذا الإجراء إزالة لوحة عظم الفك السفلي بعناية من أجل التقليل إلى أدنى حد من خطر الإصابة العصبية والسفينة. الأزيز التقليدية ومناشير الصغير لا يميز بين21من الأنسجة الصلبة واللينة. بالإضافة إلى ذلك، تميل هذه الأدوات الانزلاق مما تسبب في إتلاف النسيج المجاور، لا سيما إيان، عن طريق الاتصال العرضي22. ولذلك استخدمنا كهرضغطية الأدوات الجراحية للعظام خطوات معالجة. هذا هو أسلوب جراحة العظام الجديدة والمبتكرة التي تستخدم الموجات فوق الصوتية microvibrations من المشارط المتخصصة. ولذلك، لم تكن معطوبة الأنسجة اللينة حتى عند الاتصال العرضي مع قطع نصائح23،24. Microvibrations من 60-200 ميكرون/s في 24-29 كيلو هرتز الأمثل لقطع الأنسجة متمعدنة مطاطا بينما تدخر الأنسجة اللينة المرنة؛ هذا غير ممكن في ترددات أعلى من 50 كيلوهرتز25. وعلاوة على ذلك، تتطلب الأزيز التناوب أو مناشير تتأرجح قوة للتصدي للتناوب أو الاهتزاز للصك. بالمقارنة مع هذه الصكوك، لا تحتاج الأدوات الجراحية كهرضغطية تطبيق القوة الإضافية وتجهيز العظام حتى آمنة ودقيقة ممكن26. وهذا مهم بشكل خاص في يد المستخدم الرواية.
جانب مهم آخر في أسلوبنا هو أن لوحة العظام لم يحدد استخدام لوحات معدنية ولكن وضع في موضعه الأصلي في الفك السفلي بعد وضع أنبوب الشبكة-ج. وكان السبب في ذلك تجنب خطر التعرض اللوحة نخر الأغشية المخاطية الشفوية، التي تنشأ عند استخدام لوحات معدنية للتثبيت. ومع ذلك، في بعض الحالات انحرفت لوحة العظام من الموقع الأصلي. ولذلك، من الأهمية بمكان إجراء فحص الأشعة المقطعية لعظم الوجه للتأكد من أن لوحة عظم الفك السفلي في الموضع الصحيح بعد الجراحة. عند استخدام لوحة معدنية للتثبيت، خياطة ضيق وينبغي تجنب فقد يسبب نخر الأغشية المخاطية الفموية بسبب اضطرابات تدفق الدم.
كسجب علاج فعال لأمراض الأوعية الدموية المحيطية ومتلازمات الألم في الوجه والرقبة14،،من1315. ومع ذلك، لا تزال الآليات الكامنة وراء إثارة العلاجية غير واضحة. أحد الأسباب لعدم وجود بحوث في الآثار العلاجية من كسجب هو صعوبة الحصول على تأثير سيمباثوليتيك متسقة وموحدة. على سبيل المثال، انتشار متعاطفة مع الحصار بعد كسجب عن طريق الجلد ليست موحدة27،28. مولينهيم et al. 29 مزروع الكلاب مع قسطرة البولي إثيلين، بعد thoracotomy، تحت اللفافة وجنبا إلى جنب مع سلسلة متعاطفة مع العلوي، ويقوم كسجب بالحقن ليدوكائين عبر القسطرة. على الرغم من أن هذا النهج يمكن أن تنتشر متعاطفة مع الحصار في المناطق المستهدفة، فإنه ينطوي على مخاطر انسداد القسطرة أو التفكك، فضلا عن العدوى، خاصة في تجارب طويلة الأمد. في نموذجنا الكلاب من كسجب، أنتجت الحقن المباشر من الإيثانول 99.5% الزيادات طويلة الأجل في تدفق الدم إلى المنطقة عن كفاءة. في نهجنا، تدار حقن كتلة تحت التصور مباشرة، حيث يمكن أن يقوم كسجب بدقة. ولذلك، يقلل من خطر التوزيع غير المتساوي لتأثير سيمباثوليتيك والحصار متعاطفة مع نهجنا. ويعتبر هذا يكون مفيداً خاصة في تجارب طويلة الأمد. وعلاوة على ذلك، استخدمنا الحراري لتأكيد نجاح كسجب، حيث يزيد من درجة حرارة جلد الوجه على الجانب كتلة عند كسجب ناجحة. وفي هذه الحالة، الحراري ومفيدة، لأنها بسيطة وموسع. الأهم من ذلك، الآنف ودرجة حرارة جلد الوجه لا ينبغي قياس، نظراً لأنها لا تتأثر بالشعر الكلب. لدينا نموذج يمكن أن تسهم في المزيد من البحوث حول الآثار العلاجية من كسجب. في دراستنا السابقة، ازداد تدفق الدم في مجال كفاءة لأسابيع 6-11 بعد جانجليونيكتومي متعاطفة مع عنق الرحم. يمكن اختيار الباحثين هذا الأسلوب البديل30 إذا رغبت في ذلك.
الحد من هذه الدراسة أن كسجب التي يسببها الإيثانول يشكل خطر الإصابة الدائمة هورنر متلازمة (تدلي وانقباض)31. وقد استخدمت الأساليب الأخرى، بما في ذلك التذرية الترددات الراديوية والفينول ومتعاطفة مع جانجليونيكتومي لأداء سيمباثيكتوميس؛ ومع ذلك، قد استخدمت خصيصا للاوردة للعقدة متعاطفة مع عنق الرحم، فقط الترددات الراديوية الاجتثاث في الممارسة السريرية32،33،،من3435. ولذلك، يمكن اعتبار الاجتثاث الترددات الراديوية والمخدرات الموضعية كأسلوب بديل لفعل الإيثانول كسجب. الدراسات المستقبلية ستكون ضرورية للتحقق من صحة الطريقة التي يمكن بها تعزيز التجدد العصب توسط أنبوب عصب بيوابسوربابل من كسجب مع مخدر موضعي أو الاجتثاث الترددات الراديوية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل بإدارة "الأجهزة بيوارتيفيسيال" في كيوتو المعهد الجامعي "العلوم الطبية الحدودية". نود أن نشكر موظفي الطب البيطري من معهد "العلوم الطبية الحدودية".
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NMP Collagen PS | Nippon Meatpackers | 301-84621 | Atelocollagen extracted from young porcine skin by enzyme treatment |
| Surgical clippers | Roboz Surgical Instrument Company | RC-5903 | |
| Disposable scalpel (No.15) | Kai medical | 219ABBZX00073000 | |
| VarioSurg3 | Nakanishi | VS3-LED-HPSC, E1133 | Piezoelectric surgery for bone processing |
| 4-0 nylon sutures | Ethicon | 8881H | |
| 8-0 nylon sutures | Ethicon | 2775G | |
| Isepamicin sulfate | Nichi-Iko | 620005641 | |
| Disposable scalpel (No.10) | Kai medical | 219ABBZX00073000 | |
| 30-gauge needle | Nipro | 1134 | |
| 1-0 absorbable stitches | Ethicon | J347H | |
| 3-0 Nylon stitches | Ethicon | 8872H | |
| Neo Thermo | NEC Avio | TVS-700 | Infrared thermography |
| Neuropack Σ | NIHON KOHDEN | MEB-5504 | Orthodromic recorder for electrophysiological recording |
| Toluidine Blue | Sigma-Aldrich | T3260-5G | |
| Light microscope | Keyence | BZ-9000 | |
| Mouse anti-human neurofilament protein monoclonal antibody | DAKO | N1591 | |
| Polyclonal rabbit anti-S100 antibody | DAKO | Z0311 | |
| Transmission electron microscopy | Hitachi High Technologies | Hitachi H-7000 | |
| Dynamic cell count | Keyence | BZ-H1C | Software for morphological evaluation |
References
- Al-Sabbagh, M., Okeson, J. P., Bertoli, E., Medynski, D. C., Khalaf, M. W. Persistent pain and neurosensory disturbance after dental implant surgery: prevention and treatment. Dental Clinics of North America. 59 (1), 143-156 (2015).
- Chaushu, G., Taicher, S., Halamish-Shani, T., Givol, N. Medicolegal aspects of altered sensation following implant placement in the mandible. International Journal of Oral and Maxillofacial Implants. 17 (3), 413-415 (2002).
- Robinson, P. P., Loescher, A. R., Yates, J. M., Smith, K. G. Current management of damage to the inferior alveolar and lingual nerves as a result of removal of third molars. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 42 (4), 285-292 (2004).
- Gregg, J. M. Studies of traumatic neuralgia in the maxillofacial region: symptom complexes and response to microsurgery. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 135-140 (1990).
- Pogre, M. A. The results of microneurosurgery of the inferior alveolar and lingual nerve. Journal of Oral and Maxillofacial Sureryg. 60 (5), 485-489 (2002).
- Strauss, E. R., Ziccardi, V. B., Janal, M. N. Outcome assessment of inferior alveolar nerve microsurgery: a retrospective review. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 64 (12), 1767-1770 (2006).
- Nakamura, T., et al. Experimental study on the regeneration of peripheral nerve gaps through a polyglycolic acid-collagen (PGA-collagen) tube. Brain Research. 1027 (1-2), 18-29 (2004).
- Yoshitani, M., et al. Experimental repair of phrenic nerve using a polyglycolic acid and collagen tube. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 133 (3), 726-732 (2007).
- Seo, K., et al. One-year outcome of damaged lingual nerve repair using a PGA-collagen tube: a case report. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 66 (7), 1481-1484 (2008).
- Seo, K., et al. Protracted delay in taste sensation recovery after surgical lingual nerve repair: a case report. Journal of Medical Case Reports. 7, 77 (2013).
- Seo, K., Terumitsu, M., Inada, Y., Nakamura, T., Shigeno, K., Tanaka, Y. Prognosis after surgical treatment of trigeminal neuropathy with a PGA-c tube: report of 10 Cases. Pain Medicine. 17 (12), 2360-2368 (2016).
- Okuda, Y., Kitajima, T. Comparison of stellate ganglion block with intravascular infusion of prostaglandin e1 on brachial artery blood flow in dogs. Anesthesia and Analgesia. 84 (6), 1329-1332 (1997).
- Kohjitani, A., Miyawaki, T., Kasuya, K., Shimada, M. Sympathetic activity-mediated neuropathic facial pain following simple tooth extraction: a case report. Cranio. 20 (2), 135-138 (2002).
- Melis, M., Zawawi, K., al-Badawi, E., Lobo Lobo, S., Mehta, N. Complex regional pain syndrome in the head and neck: a review of the literature. Journal of Orofacial Pain. 16 (2), 93-104 (2002).
- Salvaggio, I., Adducci, E., Dell'Aquila, L., Rinaldi, S., Marini, M., Zappia, L., Mascaro, A. Facial pain: a possible therapy with stellate ganglion block. Pain Medicine. 9 (7), 958-962 (2008).
- Atsumi, M., Sunada, K. The effect of superior cervical ganglion resection on peripheral facial palsy in rats. Journal of Anesthesia. 30 (4), 677-683 (2016).
- Hanamatsu, N., Yamashiro, M., Sumitomo, M., Furuya, H. Effectiveness of cervical sympathetic ganglia block on regeneration of the trigeminal nerve following transection in rats. Regional Anesthesia and Pain Medicine. 27 (3), 268-276 (2002).
- Shionoya, Y., Sunada, K., Shigeno, K., Nakada, A., Honda, M., Nakamuram, T. Can nerve regeneration on an artificial nerve conduit be enhanced by ethanol-induced cervical sympathetic ganglion block? PLoS One. 12 (12), e0189297 (2017).
- Suzuki, Y., Tanihara, M., Ohnishi, K., Suzuki, K., Endo, K., Nishimura, Y. Cat peripheral nerve regeneration across 50 mm gap repaired with a novel nerve guide composed of freeze-dried alginate gel. Neuroscience Letters. 259 (2), 75-78 (1999).
- Ichihara, S., et al. Development of new nerve guide tube for repair of long nerve defects. Tissue Engineering, Part C, Methods. 15 (3), 387-402 (2009).
- Grenga, V., Bovi, M. Piezoelectric surgery for exposure of palatally impacted canines. Journal of Clinical Orthodontics. 38, 446-448 (2004).
- Degerliyurt, K., Akar, V., Denizci, S., Yucel, E. Bone lid technique with piezosurgery to preserve inferior alveolar nerve. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology, and Endodontology. 108 (6), e1-e5 (2009).
- Kotrikova, B., et al. Piezosurgery--a new safe technique in cranial osteoplasty? International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 35 (5), 461-465 (2006).
- Vercellotti, T. Piezoelectric surgery in implantology: a case report-a new piezoelectric ridge expansion technique. International Journal of Periodontics and Restorative Dentistry. 20 (4), 358-365 (2000).
- Stübinger, S., Kuttenberger, J., Filippi, A., Sader, R., Zeilhofer, H. F. Intraoral piezosurgery: Preliminary results of a new technique. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 63 (9), 1283-1287 (2005).
- Eggers, G., Klein, J., Blank, J., Hassfeld, S. Piezosurgery: an ultrasound device for cutting bone and its use and limitations in maxillofacial surgery. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 42 (5), 451-453 (2004).
- Hardy, P. A., Wells, J. C. Extent of sympathetic blockade after stellate ganglion block with bupivacaine. Pain. 36 (2), 193-196 (1989).
- Hogan, Q. H., Erickson, S. J., Haddox, J. D., Abram, S. E. The spread of solutions during stellate ganglion block. Regional Anesthesia. 17 (2), 78-83 (1992).
- Mullenheim, J., et al. Left stellate ganglion block has only small effects on left ventricular function in awake dogs before and after induction of heart failure. Anesthesia and Analgesia. 91 (4), 787-792 (2000).
- Tsujimoto, G., Sunada, K., Nakamura, T. Effect of cervical sympathetic ganglionectomy on facial nerve reconstruction using polyglycolic acid-collagen tubes. Brain Research. 1669, 79-88 (2017).
- Ghai, A., Kaushik, T., Kumar, R., Wadhera, S. Chemical ablation of stellate ganglion for head and neck cancer pain. Acta Anaesthesiologica Belgica. 67 (1), 6-8 (2016).
- Forouzanfar, T., van Kleef, M., Weber, W. E. Radiofrequency lesions of the stellate ganglion in chronic pain syndromes: retrospective analysis of clinical efficacy in 86 patients. Clinical Journal of Pain. 16 (2), 164-168 (2000).
- Ohno, K., Oshita, S. Transdiscal lumbar sympathetic block: a new technique for a chemical sympathectomy. Anesthesia and Analgesia. 85 (6), 1312-1316 (1997).
- Slappendel, R., Thijssen, H. O., Crul, B. J., Merx, J. L. The stellate ganglion in magnetic resonance imaging: a quantification of the anatomic variability. Anesthesiology. 83 (2), 424-426 (1995).
- Wang, Y. C., Wei, S. H., Sun, M. H., Lin, C. W. A new mode of percutaneous upper thoracic phenol sympathicolysis: report of 50 cases. Neurosurgery. 49 (3), 628-634 (2001).
