Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

אתנול-Induced את צוואר הרחם גנגליון סימפטי לחסום יישומים לקידום התחדשות הכלבי עצב מכתשי נחות באמצעות עצב מלאכותי

Published: November 30, 2018 doi: 10.3791/58039
Automatic Translation
1, 2, 2, 3, 3
1Department of Dental Anesthesia, Nippon Dental University Hospital at Tokyo, 2Department of Dental Anesthesiology, Nippon Dental University School of Life Dentistry at Tokyo, 3Department of Bioartificial Organs, Institute for Frontier Medical Science, Kyoto University

Summary

הערכנו את ההשפעה של צוואר הרחם גנגליון סימפטי בלוק על תיקון עצב באמצעות תעלות העצבים מלאכותי. כלבי ביגל זכר אחד השתילו עם עצב מלאכותי מעבר לפער 10 מ מ העצב מכתשי נחות השמאלי; גנגליון אוהדים שמאל צוואר הרחם היה חסום על ידי הזרקת אתנול 99.5% באמצעות ניקור חזה לרוחב.

Abstract

Polyglycolic חומצה קולגן (PGA-C) הצינורות צינורות ביו-שנספג עצב מלא עם קולגן של מבנה לשכת רב, אשר מורכב של קולגן דקה סרטים. התוצאות הקליניות חיובית הושגו בעת שימוש הצינורות האלה לטיפול של נזק עצבי מכתשי נחות (איאן). גורם קריטי עבור התחדשות העצבים מוצלח באמצעות צינורות PGA-C הוא אספקת הדם אל הרקמה שמסביב. בלוק גנגליון סימפטי צוואר הרחם (CSGB) יוצר מצור סימפטי באזור הראש והצוואר ובכך הגברת זרימת הדם באזור. כדי להבטיח אפקט נאותה, המצור חייב להיות מנוהל עם הרדמה מקומית אחד עד שני פעמים ביום במשך מספר שבועות רצופים; זה מציב אתגר בעת יצירת מודלים בבעלי חיים עבור חוקרים בטכניקה זו. כדי לטפל מגבלה זו, פיתחנו CSGB אתנול-induced במודל של הכלבים של עלייה זרימת הדם באזור orofacial לטווח ארוך. בדקנו אם איאן התחדשות באמצעות PGA-C צינור השרשה יכול להיות מוגברת על ידי מודל זה. ביגל 14 אחד השתילו עם צינור PGA-C על פני פער 10 מ מ איאן השמאלי. איאן הינו ממוקם בתוך התעלה mandibular מוקף העצם, ולכן בחרנו פיזואלקטריים הניתוח המורכב של גלי אולטראסאונד, לעיבוד העצם, כדי למזער את הסיכון של פגיעה העצב ואת כלי. תוצאה כירורגית טובה הושג עם גישה זו. שבוע לאחר הניתוח, שבעה כלבים אלה היו נענשים CSGB שמאל על ידי הזרקה של אתנול. אתנול-induced CSGB הביא התחדשות העצבים משופרת, רומז כי זרימת דם מוגברת ביעילות מקדמת התחדשות העצבים באיאן פגמים. מודל הכלבים זה יכול לתרום מחקר נוסף על ההשפעות ארוכות הטווח של CSGB.

Introduction

במקרים רבים, פציעה טראומטית של עצב מכתשי נחות (איאן) הוא iatrogenic, נגרמת לעתים קרובות על ידי החילוץ של השן הטוחנת השלישית או את המיקום של שתלים דנטליים-1,-2,-3. פציעתו של איאן יכול להוביל לגירעונות תרמי ולגעת תחושות כמו גם נימול, dysesthesia, hypoesthesia ו- allodynia. עצב פציעה תטופל לא רק על ידי טיפול שמרני, אלא גם על ידי אחרים שיטות, כולל תפירה והמיקום בשתל. עם זאת, שיטות אלה יש חסרונות, אשר לעיתים קרובות כוללות העדר שיפור סימפטום, ליקויים נוירולוגיים5,64,האתר התורם.

העצב מלאכותית — polyglycolic חומצה-קולגן (PGA-C) שפופרת פותחה במקור ביפן. . זה צינור ביו-שנספג עם לומן הפנימי שלה מלא עם קולגן spongiform7. בניסויים על בעלי חיים, הצינור הזה שימש כדי לשפר את התחדשות העצבים ביגל כלבים עם שיתוק פגם, הוצגה לקדם רמה גבוהה יותר של התאוששות העצב עצמיים השתלת8. היישום הקליני של הצינור PGA-C החלו בשנת 2002 אצל חולים עם פגיעות במערכת העצבים ההיקפית. יתר על כן, הושגו תוצאות קליניות חיוביות בטיפול של טריגמינל נוירופתיה (איאן ועצבי לשוני)9,10,11. גורם קריטי עבור התחדשות העצבים מוצלח באמצעות צינורות PGA-C הוא אספקת הדם לרקמות שמסביב8. בלוק גנגליון סימפטי צוואר הרחם (CSGB) יוצר מצור סימפטי באזור הראש והצוואר ומגביר את זרימת הדם לאזור innervated12; לכן, זה נעשה שימוש בטיפול של תסמונת כאב אזורי מורכב ואי ספיקה הדם13,14,15. עם זאת, היו רק כמה ניסיוני חקירות על היעילות של CSGB16,זרימת הדם הגובר17. כדי להבטיח יעילות CSGB נאותה, המצור יש להחיל יחד עם הרדמה מקומית פעם או פעמיים ביום למשך מספר שבועות, ובכך פוזות אתגר בעת יצירת מודלים בעלי חיים כדי לחקור בטכניקה זו. כדי לטפל מגבלה זו, במחקר הקודם, פיתחנו מודל הכלבים של זרימת דם מוגברת ארוכת טווח אזור orofacial18. המודל נוצר על ידי ביצוע של CSGB על ידי הזרקת אתנול 99.5%. הערכנו את זרימת הדם דרך הפה הרירית ואת טמפרטורת עור האף על ידי לייזר flowmetry דופלר ו הדמאה תרמית אינפרא אדום פעם בשבוע, למשך 12 שבועות. . מצאנו זרימת הדם של האזור orofacial הוגדל במשך 7-10 שבועות במודל זה.

במחקר הנוכחי, הערכנו את ההשפעות של אתנול-induced CSGB על התחדשות עצבים.
הצינור PGA-C היה מושתל לתוך כלבי ביגל על פני פער 10 מ מ איאן השמאלי. שבוע לאחר מכן, CSGB בוצע על ידי הזרקת אתנול. שלושה חודשים לאחר הניתוח, לנו לבצע מגוון רחב של מחקרים אלקטרופיזיולוגיות, היסטולוגית, מורפולוגי כדי להעריך את ההשפעות של CSGB על התחדשות עצבים. אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור שחזור איאן באמצעות צינור PGA-C CSGB הנוצרות על-ידי אתנול.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

מחקר זה נערך בהתאם לעקרונות המנחים על טיפוח ועל השימוש של בעלי חיים ו אושרה על ידי הוועדה חיה מחקר של אוניברסיטת קיוטו (בקיוטו, יפן; מספר אישור: R-16-16). נעשה כל מאמץ כדי למזער את סבלם של בעלי החיים, ואת כל המקטעים של דו ח זה לדבוק יגיעו (חיה מחקר: דיווח של ניסויים in Vivo ) הנחיות.

1. ייצור של הצינור PGA-C

  1. כדי לפברק למוליך עצבי מלאכותי באמצעות שפופרת (PGA) חומצה polyglycolic שנספג, השתמש במחט צינורי במכונת מצוידים הצירים 48 סיבים PGA חמש, המורכב צרורות של חוטים 26 (איור 1)18.
  2. עיבוד פני השטח צינור PGA הידרופיליות, לחשוף אותם בפני פליטת פלזמה.
  3. השתמש atelocollagen v/w 1% פתרון הידרוכלוריד7.
    הערה: Atelocollagen מופק חזירי העור באמצעות אנזים טיפול, שעבר המחאה וירוס. זה בעיקר מורכב סוג אני (70-80 אחוז), הקלד קולגן III, היחס אשר מתואר בפירוט במקום7. להכין את הפתרון קולגן על ידי המסת 1 g קולגן 100 מ ל תמיסת הידרוכלוריד (ה-pH = 3.0). מאחר הצפיפות של הפתרון הידרוכלוריד היא כ 1.0, ריכוז w/w קולגן הוא כמעט 1%.
  4. מעיל הצינור עם השכבות קולגן בטבילת אותו שוב ושוב לתוך הפתרון הידרוכלוריד קולגן 1% עבור 5 s בכל פעם.
    1. לאחר טבילה, לייבש את הצינורית על ספסל נקיים בטמפרטורת החדר. לבצע טבילה הבא לאחר להבטיח הצינור יבש לחלוטין (בערך 6 h עבור air-drying).
    2. חזור על תהליך ציפוי פי 10.
  5. נושא הצינור PGA-C עד 140 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה תחת ואקום (טיפול dehydrothermal), על מנת לשלוט ביו-הקליטה, crosslinking של מולקולות קולגן. לבצע את התהליך כולו בתנאים אספטי.
    הערה: הליך זה יוצר שפופרת של 14 מ מ אורך סופי הקוטר הפנימי של 3 מ מ, עובי הקיר 50-μm.

2. ניתוח הגדרת

  1. השתמש ביגל זכר בוגר במשקל של 9.0 כדי 13.0 ק ג.
    1. חיות הבית בכלובים נפרדים, בתנאים מבוקרים מלונה (12-h אור וחושך -מחזור).
    2. לספק מזון מוצק, מים ad libitum.
  2. שוקלים את ביגל.
  3. אוטוקלב כל כלי כירורגי.
  4. דון כפפות סטיריליים ולחטא את כל המשטחים של הגדרת הפעלה עם פתרון 80% אתנול. למחוק את הכפפות בשימוש.
  5. לבצע ניתוח רחיצת ידיים.
  6. לשים מסכה טריים, חלוק, כפפות סטריליות.

3. הרדמה והכנת העור

  1. עזים ומתנגד הכלב עם תערובת של 5 מ"ג/ק"ג קטמין הידרוכלוריד 1 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים על ידי זריקה תוך שרירית.
  2. לצנרר על ידי צינור הנשימה של 7.5 מ"מ קוטר ו- 25 ס מ אורך.
  3. מניחים את הכלב על העמדה הימנית. לשמור על הרדמה כללית עם 3.2% sevoflurane עם חמצן (1.0 L/דקה).
  4. השתמש כרית החימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף 37 מעלות צלזיוס.
  5. חלות של ג'ל אופטלמולוגיות מעל המשטח הקדמי של העין כדי למנוע שחיקה הקרנית.
  6. בזהירות לגלח לשדה כירורגי (באזור החזה צד שמאל) באמצעות קוצץ כירורגי. תרסיס כמות משמעותית של פתרון אלכוהוליים מעל האתר פעיל. חכה לפחות 15 סעיף חזור על היישום 3 פעמים.
  7. להקליט את קצב הלב ואת רווית חמצן במהלך הניתוח.

4. נחות מכתשי עצב שחזור באמצעות PGA-C צינור: פיתוח של המודל שחזור בלבד

  1. להזריק 3 מ"ל של לידוקאין 1% באמצעות מחט 27 G כדי gingiva הלסת השמאלית הרדמה מקומית, שיכוך כאב.
  2. לבצע חתך רוחבי של 5 ס מ עם להב סכין המספר 15 ב gingiva הלסת השמאלית, לחשוף את הלסת של החיה.
  3. השתמש ויברציות ultrasonic פיזואלקטריים כדי לטחון את ההיבט הפרוקסימלית של הלסת התחתונה לתוך מלבן 8 מ מ 3-ס"מ × דרך נקב הנפש האחורי.
    הערה: תדירות הרטט היה 28 \u2012 32 kHz.
  4. הסר את החלק הקדמי של צלחת עצם הלסת (מידות, 3 ס"מ × 8 מ מ) לחשוף את איאן (איור 2 א) השמאלי18.
    הערה: האתר שחזור מקביל בפסגת שורש השן הטוחנת הראשונה
  5. Transect את איאן עם איזמל להסיר מקטע 10 מ מ.
  6. הכנס גדמי הפרוקסימלית ו דיסטלי של עצב קטועה לתוך הצינור העצבי עד לעומק של 2 מ מ.
  7. השתמש התפרים ניילון 8-0 ומסתיים מיקרוסקופ כירורגי בהגדלה X 8 לתפור את הצינור כדי העצב לקרע, (איור 2B)18.
  8. להחזיר את הצלחת עצם לאתר המקורי שלו ללסת התחתונה.
  9. לסגור את הפצע עם התפרים ניילון 4-0.
  10. יום אחד לאחר הניתוח, לאשר הצלחת עצם הלסת במקומו הנכון.
    1. 4.10.1 לבצע הדמיה טומוגרפיה (CT) של העצם פנים תחת הרדמה. הגדר פרמטרים CT כדלקמן: 120 kVp 200 mAs, 0.5 מ מ/s, פרוסה 0.5 מ מ עובי.
      1. לנהל הרדמה בעזרת תערובת של 5 מ"ג/ק"ג קטמין הידרוכלוריד, 1 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים (איור 3).
  11. לנהל אמפיצילין (100mg/day) אנטיביוטיקה, פרצטמול (100 מ ג/יום) בתור מקבל במשך שבוע לאחר הניתוח.

5. אתנול-induced CSGB: פיתוח שיקום + דגם CSGB

  1. לבצע שחזור איאן כמתואר בסעיף 4 ולאפשר שבוע להתאוששות.
  2. עזים ומתנגד החיה עם sevoflurane 1.5% חמצן (4 L/דקה), אוויר (6 L/דקה). לגלח ולנקות השדה הכירורגי המיועד, כמתואר בסעיף 3.
  3. לסמן קו החתך עם סמן כירורגי העור על ידי ציור קו באזור החזה צד שמאל (איור 4, קו החתך הוא 20 ס מ אורך).
  4. להזריק 5 מ של לידוקאין 1% באמצעות מחט 21 G באזור החזה צד שמאל הרדמה מקומית, שיכוך כאב.
  5. פצעים וחתכים העור בחזה צד שמאל עם להב סכין מספר 10.
  6. פצעים וחתכים על שכבת השומן עם אזמל חשמלי לחשוף שרירים fascia.
  7. לחשוף את שריר המשור ventralis ואת scalenus השריר.
  8. הרימו את שריר המשור ventralis ואת scalenus מ הגחוני / שרירים כדי הגבי לחשוף את הצלעות השני והשלישי (איור 5).
  9. לבצע ניקור הלטראלי השמאלי ברווח הבין-צלעי השני והשלישי לחשוף את צוואר הרחם השמאלי סימפטי גנגליון (איור 6).
  10. להזריק 0.2 מ של 99.5% אתנול לתוך גנגליון סימפטי צוואר הרחם באמצעות מחט 30 G תחת פריט חזותי ישיר (איור 7).
  11. סגור לחלל הבין-צלעי עם תפרים שנספג קטע 1-0.
  12. סגור את העור עם תפרים ניילון קטע 3-0.
  13. לנהל אמפיצילין (100mg/day) אנטיביוטיקה, פרצטמול (100 מ ג/יום) בתור מקבל במשך שבוע לאחר הניתוח.
  14. ב 1 שבוע לאחר CSGB, למדוד טמפרטורת עור הפנים עם הדמאה תרמית אינפרא אדום כדי לאשר את CSGB.

6. אלקטרופיזיולוגיות הקלטות

  1. כדי למדוד פוטנציאל הפעולה עצבי חישה (SNAP), מהירות הולכה עצבי חישה (SCV) של איאן שלושה חודשים לאחר השיקום, עזים ומתנגד חיות כמתואר בסעיף 3.
    הערה: הצמד ו SCV יש למדוד בצדדים שליטה ניסויית נורמלי אצל כל כלב בשתי הקבוצות טיפול.
  2. לעשות חתך ב gingiva הלסת השמאלית עם להב סכין מספר 10.
  3. הסר בזהירות את הצלחת עצם הלסת כדי למנוע נזק פיזי העצב מחדש.
  4. לעורר את איאן באמצעות זוג אלקטרודות מחט, כדי להקליט את הצמד ואת SCV.
    1. הכנס האלקטרודות הציר הקרוב אל הצינור העצבי.
    2. החל גירוי חשמלי 10 kHz 20 פעמים.
  5. לנתח את התוצאות.
    1. לקבוע SNAP על ידי חישוב של משרעת התגובה הממוצע כדי גירוי חשמלי.
    2. למדוד את שיא השהיה ואת משרעת השיא מהקלטות תרשים.
    3. לחשב את האינדקס התאוששות עם המשוואה הבאה: משרעת השיא של איאן השמאלי של שחזור בלבד או שחזור + CSGB משרעת קבוצתי / מגיעות לשיא של הפקד נורמלי (מרכזי קטע איאן נכון בקבוצה שחזור בלבד)19 ,20.

7. ניתוח היסטולוגית

  1. סעיף הכנה
    1. שלושה חודשים לאחר שיקום, לקצור את איאן שמאל, כולל 1 ס מ של עצב משני צדדיו של אתר משוחזר.
    2. לקצור את איאן נכון ברמה המתאימה לאתר הקציר בצד שמאל.
    3. קידומת העצבים שנקטפו על ידי טבילה גלוטראלדהיד 2.5% בריכוז 0.1 M cacodylate מאגר (pH 7.4, 48 ° C, 24 שעות ביממה).
    4. Postfix עם 2% פתרון אוסמיום ארבע-חמצני (48 ° C, 4 h), אשלגן ferrocyanide ב 0.1 M בופר פוספט (pH 7.4, 2 h).
    5. מייבשים את העצבים עם סדרה של אתנול מדורגת פתרונות.
    6. להטביע שרף אפוקסי (פרפין).
    7. בסעיף דגימות-עובי של μm \u2012 1.0 0.5.
  2. טולדין כחולים מוכתמים וניתוח מורפולוגי
    1. כתם מקטעים עם פתרון טולדין כחול.
    2. להשיג כמה תמונות מיקרוסקופ נעזרת במיקרוסקופ אופטי, בהגדלה X 400-אזורים הבאים לאורך הדגימות: עזבו את איאן, המרכז של קטע regenerated, 2 מ מ יש את הגדם; ? איאן נכון, במרכז קטע איאן המתאים לאתר הקציר בצד שמאל.
    3. בחר תמונות של כל האזורים עם סיבי עצב מחדש.
      1. בחר באופן אקראי 8 \u2012 10 תחומי 100 μm × 100 μm המכיל מחדש סיבי עצב.
      2. לבצע ניתוח מורפולוגי באמצעות תוכנה מתאימה כדי למדוד את הפרמטרים הבאים: קוטר סיבי עצב סיבי העצב (μm) וצפיפות (ספירה/אזור), עצבים אחוז רקמת, יחס-G (סיבי העצב האקסון סיבי העצב/קוטר סיבי עצב קוטר ).
  3. Immunostaining
    1. בצע פרוטוקולים סטנדרטיים עבור צביעת סעיף פרפין.
    2. דגירה עם נוגדנים ראשי במשך 30 דקות ב 25 º C.
    3. לשטוף עם באגירה פוספט תמיסת מלח 3 פעמים ב 25 º C.
    4. דגירה עם נוגדנים משניים המסומנת חזרת-peroxidase למשך 30 דקות ב 25 º C.
    5. להשיג תמונות באמצעות מיקרוסקופ אור.
  4. במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים (TEM)
    1. להכין את העצבים כפי שמתואר בשלב 7.1.
    2. את העצבים-עובי של 70 \u2012 90 μm באמצעות ultramicrotome של מקטע.
    3. כתם מקטעים עם עופרת ציטראט של וריינולד ו uranyl.
    4. לבחון, תמונה מאת במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הבחנו עלייה טמפרטורת עור הפנים של הצד החסום 1 שבוע לאחר CSGB השמאלי (איור 8).

ב 3 חודשים שלאחר שיקום, הצינור PGA-C באזור השיקום נספג התחדשות של עצב מכתשי נחות נצפתה ב שחזור בלבד, שחזור + CSGB קבוצות (איור 9 א, ב')18.

הצמד היה מדיד בשני צידי שחזור + CSGB ושיפוץ קבוצות שחזור בלבד. התוצאות של ההערכה אלקטרופיזיולוגיות מסוכמים בטבלה 118. אינדקס שחזור של SCV היו גבוהות משמעותית שחזור + CSGB מאשר בקבוצה שחזור בלבד.

הבחנו סיבי העצב סיבי עצב ב פילוחי המרכזי ו דיסטלי איאן מחדש ב שחזור בלבד וקבוצות שחזור + CSGB (איור 10A, B)18. השיקום בלבד שחזור + קבוצות CSGB הראה קטנים מחדש סיבי העצב עצב קטרים בהשוואה לקבוצת בקרה נורמלית (מרכזי קטע איאן נכון בקבוצה שחזור, איור 10C). לא בוגר סיבי עצב סיבי העצב נצפו גם.

בחינת שחזור בלבד, שחזור + קבוצות CSGB באמצעות TEM הראה מחדש סיבי עצב סיבי העצב שוואן תאים (איור 10D, E). איור 10F מציג תוצאות אלו של TEM עבור קבוצת בקרה נורמלית (מרכזי מקטע של איאן נכון הקבוצה שחזור).

הנוכחות של אקסונים regenerated ותאי שוואן אושר ב פילוחי המרכזי ו דיסטלי שחזור בלבד ועל שיקום + CSGB קבוצות, על-ידי מכתימה עם אנטי-neurofilament (NF), נוגדנים anti-S100, בהתאמה (איור 11 )18.

תוצאות ההערכה מורפולוגי מסוכמות בטבלה 218. קוטר סיבי עצב סיבי העצב במרכז קטע איאן השמאלי regenerated היה 4.27 ± 1.5 מיקרומטר בקבוצה שחזור ו 5.11 ± 1.98 מיקרומטר בקבוצה CSGB, על חלקו הדיסטלי של מחדש איאן השמאלי הקוטר היה מיקרומטר ± 1.21 3.47 בשנת reconstruc קבוצה tion, 4.53 מיקרומטר ± 1.36 בקבוצה CSGB. בשני המקרים, הקוטר היה גדול יותר באופן משמעותי בקבוצה CSGB, אשר גם הדגימו באופן משמעותי אחוז גבוה יותר סיבי עצב סיבי העצב צפיפות, עצב רקמות המרכז והן חלקו הדיסטלי של איאן השמאלי מחדש. G-היחס במרכז איאן השמאלי regenerated היה 0.75 ± 0.04 בקבוצה שחזור 0.68 ± 0.05 בקבוצה CSGB, ואילו בחלק הדיסטלי היה ± 0.74 0.04 בקבוצה שיחזור ולא 0.69 ± 0.04 בקבוצה CSGB. לפיכך, בשני המקרים, G-היחס היה קטן באופן משמעותי בקבוצה CSGB.

המדגם מידות עבור שחזור בלבד, שחזור + קבוצות CSGB היו n = 7. ניתוחים סטטיסטיים עבור קוטר סיבי עצב סיבי העצב, צפיפות, יחס-G, SCV בוצעו באמצעות הבדיקה של Dunnett. ניתוח של מדד השחזור בוצעה באמצעות של סטודנט אינטראקצית t-מבחן. רמת מובהקות סטטיסטית הוגדר ב-5% (p < 0.05).

Figure 1
איור 1: צינור חומצה Polyglycolic מלא עם ספוג קולגן. A) תמונה ברוטו של הצינור. המידות הסופיות של הצינור העצבי היו 14 מ"מ אורך הקוטר הפנימי של 3 מ מ, עובי 50 מיקרומטר. B) סריקת אלקטרונים micrograph של הצינור. איור זה פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: עזב עצב מכתשי נחות (איאן) קדם ושיחזור פוסט- A) קדם שחזור תמונה של איאן שמאל לאחר חשיפה על ידי הסרה של העצם. B) שיקום שלאחר דימוי איאן השמאלי שיחזר באמצעות צינור קולגן חומצה polyglycolic. איור זה פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: שחושב טומוגרפיה הדמיה של העצם פנים לאחר שחזור העצבים מכתשי נחות. התמונה מציגה הצלחת עצם הלסת נמצא במצב תקין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: סימנים בעור שטרם-נותחו על אזור החזה בצד שמאל לפני הניתוח. תצלום מציג את הסימנים העור לפני ביצוע הרחוב גנגליון סימפטי צוואר הרחם. קו החתך הוא 20 ס מ אורך. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5: ההפעלה תצוגה של גוש בצוואר הרחם גנגליון סימפטי: ניקור חזה מראש. התמונה מראה את הצלעות השני והשלישי לאחר גיוס השרירים המשור ventralis ו- scalenus. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6: ההפעלה תצוגה של גוש בצוואר הרחם גנגליון סימפטי: פוסט-ניקור חזה. התמונה מראה צוואר הרחם גנגליון אוהדים שמאל לאחר ניקור חזה לרוחב ברווח הבין-צלעי השני והשלישי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7: גנגליון סימפטי צוואר הרחם טרום ואתנול שלאחר הזרקת באמצעות מחט 30 G. A) הזרקת אתנול קדם דימוי גנגליון אוהדים שמאל צוואר הרחם. B) אתנול שלאחר הזרקת תמונה של צוואר הרחם גנגליון אוהדים שמאל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 8
איור 8: תמוגרפיה לאחר בלוק גנגליון אוהדים שמאל צוואר הרחם (CSGB). תמוגרפיה נרכשה שבוע לאחר CSGB על ידי הזרקת אתנול. שים לב טמפרטורת עור הפנים בצד שמאל הוא גבוה יותר מאשר על הצד contralateral. סרגל הצבע מציין הטמפרטורות מעלות צלזיוס. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 9
איור 9: מחדש עצב מכתשי נחות (איאן). ) דימוי איאן בקבוצה שחזור בלבד. תמונה ב') של איאן שחזור + קבוצה CSGB (גנגליון סימפטי צוואר הרחם חסום). התחדשות עצבים (אזור בין ראשי חץ לבן) הוא ציין בשתי הקבוצות. איור זה פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 10
איור 10: טולדין כחול ושידור מיקרוסקופ אלקטרונים ניתוח של העצב מכתשי נחות מחדש (איאן). - C) למחצה דק קטעי רוחבי איאן-שיקום שלאחר 3 חודשים מוכתם טולדין כחול. תמונות הצג את מקטעי דיסטלי של איאן השמאלי מחדש כל קבוצה, כמצוין. D - F) שידור תמונות מיקרוסקופ אלקטרונים ממקטעים למחצה דק מציג סיבי עצב סיבי העצב וסיבי העצב (שחור ולבן ראשי חץ, בהתאמה). סולם העמודות מייצגות מיקרומטר 50 ב (א) - (ג) ו- 5 מיקרומטר (ד) - (נ). בקרה נורמלית: קטע מרכזי של איאן נכון הקבוצה שחזור בלבד. איור זה פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 11
איור 11: ניתוח Immunohistochemical של מקטעי דיסטלי של regenerated השמאלי נחות מכתשי עצב (איאן). , B) חלקים איאן מחדש ב 3 חודשים שלאחר שיקום צבעונית עם נוגדן אנטי neurofilament (NF) עבור קבוצת שיקום בלבד (א) ו שחזור + צוואר הרחם גנגליון סימפטי בלוק (CSGB; B) קבוצות. ראשי חץ שחור מציינים אקסונים מחדש. C, D) חלקים איאן מחדש ב 3 חודשים שלאחר שיקום צבעונית עם נוגדן anti-S-100 עבור קבוצת שיקום בלבד (ג) ו שחזור + קבוצות CSGB (D). ראשי חץ לבן מצביעים על תאי שוואן. גודל ברים, 50 מיקרומטר. איור זה פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

הובלת העצבים החישה (m/s) שחזור אינדקס
בקרה נורמלית 48.5 ± 2.8 -
קבוצת שיקום בלבד 2.9* 36.8 ± 0.22 ± 0.04
קבוצת שיקום + CSGB 2.4* 42.0 ±# 0.35 ± 0.06#

טבלה 1: ממצאים אלקטרופיזיולוגיות עצב מכתשי נחות (איאן) בגיל 3 חודשים לאחר הניתוח. הנתונים מוצגים רשע ± סטיית התקן (n = 7). השוואות נעשו באמצעות של סטודנט אינטראקצית t-מבחן. . איאן, עצב מכתשי נחות; CSGB, בלוק גנגליון סימפטי צוואר הרחם. *, p < 0.05 לעומת קבוצת הביקורת נורמלי; #, p < 0.05 לעומת קבוצת שיקום בלבד. בקרה נורמלית: קטע מרכזי של איאן נכון הקבוצה שחזור בלבד; שחזור אינדקס: יחס של משרעת השיא של איאן השמאלי של שחזור בלבד או שחזור + CSGB לקבוצה משרעת השיא של הפקד נורמלי. טבלה זו פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור.

קוטר סיבי עצב סיבי העצב (μm) צפיפות סיבי עצב סיבי העצב (ספירה/100 μm2) פרופורציה של רקמת עצב (%) יחס G
בקרה נורמלית מרכז 8.83 ± 3.11 103 ± 8 41.3 ± 3.9 0.62 ± 0.03
קבוצת שיקום בלבד מרכז 1.5* 4.27 ± 126 ± 20 * 2.1* 11.6 ± 0.04* 0.75 ±
דיסטלי 1.21* 3.47 ± 109 ± 17 * 2.0* 7.3 ± 0.04* 0.74 ±
קבוצת שיקום + CSGB מרכז 5.11 ± 1.98*# 140 ± 22 *# 15.9 ± 3.0*# 0.68 ± 0.05*#
דיסטלי 4.53 ± 1.36*$ 123 ± 15 *$ 2.1* 12.5 ±$ 0.04* 0.69 ±$

בטבלה 2: ממצאים מורפולוגיים העצב מכתשי נחות (איאן) בגיל 3 חודשים לאחר הניתוח. הנתונים מוצגים רשע ± סטיית התקן (n = 7). השוואות נעשו באמצעות הבדיקה של Dunnett. . איאן, עצב מכתשי נחות; CSGB, בלוק גנגליון סימפטי צוואר הרחם. *, p < 0.05 לעומת קבוצת הביקורת נורמלי; * #, p < 0.05 לעומת חלקו המרכזי של איאן השמאלי בקבוצה שחזור בלבד; * $,p < 0.05 בהשוואה לסוף דיסטלי איאן השמאלי בקבוצה שחזור בלבד. בקרה נורמלית: קטע מרכזי של איאן נכון הקבוצה שחזור בלבד; יחס G הוא היחס בין קוטר האקסון סיבי העצב עד לקוטר סיבים הכולל סיבי העצב. טבלה זו פורסם בעבר ע י. Shionoya et al. 18 ו הוא הודפס מחדש באישור.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

אנו מציגים שיטה יעילה עבור התחדשות איאן באמצעות צינור העצבים bioabsorbable בשילוב עם אתנול-induced CSGB. במחקר זה השתמשנו בכלבים, מאז מודלים בבעלי חיים אחרים, כמו עכברים, חולדות, ארנבים, יש תוחלת חיים קצרה, גודל גוף קטן, ולכן לא ניתן להשתמש כדי לבצע את הניתוחים מדויק. כמו איאן ממוקם בתוך התעלה mandibular מוקף העצם, טכניקה כירורגית נחוצה למנוע נזק העצבים ואת כלי הדם בעת ביצוע שחזור העצבים. טיפ טכני חשוב עבור ההליך היא להסיר בזהירות את הצלחת עצם הלסת כדי למזער את הסיכון של פגיעה העצב ואת כלי. Burs מסורתיים ו saws מיקרו מסוגל להבחין בין רקמות רך וקשה21. בנוסף, כלים אלה נוטים להחליק גרימת נזק הרקמות הסמוכות, במיוחד איאן, על ידי קשר מקרי22. ולכן השתמשנו פיזואלקטריים כלי ניתוח עצם וצעדי העיבוד. זהו ניתוח עצם חדשים וחדשניים טכניקה המשתמשת microvibrations אולטרה סאונד של מתמחה ואזמלי מנתחים. לכן, רקמות רכות אינן פגומות אפילו בעת מגע עם חיתוך טיפים23,24. Microvibrations של 60-200 מיקרומטר/s ב 24-29 kHz הם אופטימליים עבור חיתוך רקמה אלסטית על בסיס מינרלים מן בעוד חוסך אלסטי רקמות רכות; . זה לא אפשרי בתדרים מעל 50 קילוהרץ25... יתר על כן, כשעוצמת בבלוטות האנאליות או נדנוד מסורים דורשים כוח כדי לנטרל את סיבוב או רטט של המכשיר. לעומת המכשירים האלה, כלי ניתוח פיזואלקטריים לא זקוקים יישום של כוח נוסף והוא כל כך בטוחים ומדויקים עצם עיבוד אפשרי26. הדבר חשוב במיוחד בידיו של משתמש הרומן.

היבט חשוב נוסף בשיטה שלנו היא הצלחת עצם לא היה קבוע באמצעות לוחות מתכת אבל הוצב במקומו המקורי ללסת התחתונה לאחר מיקום הצינור PGA-C. הסיבה לכך היתה למנוע את הסיכון של חשיפה של הצלחת אוראלי נמק הרירית, אשר מתעוררת כאשר באמצעות לוחות מתכת עבור קיבעון. עם זאת, במקרים מסוימים הצלחת עצם חרג מן האתר המקורי. לכן, חשוב לבצע בדיקת ct של העצם פנים כדי לוודא הצלחת עצם הלסת בתנוחה נכונה לאחר הניתוח. בעת שימוש צלחת מתכת עבור קיבעון, תפירת חזק יש להימנע שכן היא עלולה לגרום דרך הפה הרירית נמק עקב הפרעות בזרימת הדם.

CSGB הוא טיפול יעיל עבור מחלות כלי דם היקפיים, תסמונות כאב של הפנים והצוואר13,14,15. עם זאת, המנגנונים השפעותיו טיפולית נותרו בלתי ברורים. אחת הסיבות העדר מחקרים על ההשפעות הטיפוליות של CSGB הוא הקושי בקבלת אפקט sympatholytic עקבית ואחידה. לדוגמה, ההתפשטות של המצור סימפטי לאחר CSGB מלעורית אינו אחיד27,28. . Mullenheim et al. 29 מושתל כלבים עם צנתר פוליאתילן, לאחר ניקור חזה, מתחת fascia, לצד סימפטי לרצועה העליונה, והופיע CSGB על ידי הזרקת לידוקאין דרך הקטטר. אף-על-פי גישה זו יכול להתפשט סימפטי המצור על האזורים יישוב, הוא נושא הסיכונים של קטטר סגר או פריקה, כמו גם זיהום, במיוחד בניסויים לטווח ארוך. במודל הכלביים שלנו של CSGB, הזרקה ישירה של 99.5% אתנול המופק לטווח ארוך מגביר זרימת הדם לאזור orofacial חולשת. בגישה שלנו, בלוק הזרקת היה מנוהל תחת פריט חזותי ישיר, כך CSGB היה יכול. להתבצע בדייקנות. לכן, הגישה שלנו מפחיתה את הסיכון של התפשטות לא אחידה של האפקט sympatholytic ושל המצור סימפטי. מצב זה נחשב להיות יתרון במיוחד בניסויים לטווח ארוך. יתר על כן, השתמשנו הדמאה תרמית כדי לאשר את ההצלחה של CSGB, מאז טמפרטורת עור הפנים מגדיל בצד בלוק על CSGB מוצלח. במקרה זה, הדמאה תרמית שימושית, כי זה פשוט לא פולשנית. חשוב לציין, אפי את, לא את טמפרטורת עור הפנים יש למדוד, מאז זה אינו מושפע השיער של הכלב. המודל שלנו יכול לתרום מחקר נוסף על ההשפעות הטיפוליות של CSGB. במחקר הקודם שלנו, זרימת הדם באזור orofacial גדל במשך 6-11 שבועות לאחר ganglionectomy אוהדת צוואר הרחם. חוקרים יכולים לבחור שיטה חלופית זו30 במידת הצורך.

המגבלה של מחקר זה היא כי אתנול-induced CSGB מהווה את הסיכון לפתח קבוע הורנר תסמונת (צנחת ו מיוזיס)31. שיטות אחרות, לרבות אבלציה גלי רדיו, פנול אוהדת ganglionectomy השתמשו לביצוע sympathectomies; עם זאת, במיוחד עבור sympathectomy של צוואר הרחם גנגליון סימפטי, ננקטה רק אבלציה גלי רדיו הקלינית32,33,34,35. לכן, אבלציה גלי רדיו, הרדמה מקומית יכול להיחשב כאמצעי חלופי כדי CSGB הנוצרות על-ידי אתנול. מחקרים עתידיים יהיה צורך לאמת כמה עצב התחדשות מתווך על ידי צינור העצבים bioabsorbable יכול להיות מוגברת על ידי CSGB עם הרדמה מקומית או אבלציה גלי רדיו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי המחלקה של Bioartificial האיברים בקיוטו המכון האוניברסיטאי למדעי הרפואה הגבול. ברצוננו להודות הצוות הוטרינרי של המכון למדעי הרפואה הגבול.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
NMP Collagen PS Nippon Meatpackers 301-84621 Atelocollagen extracted from young porcine skin by enzyme treatment
Surgical clippers Roboz Surgical Instrument Company RC-5903
Disposable scalpel (No.15) Kai medical 219ABBZX00073000
VarioSurg3 Nakanishi VS3-LED-HPSC, E1133 Piezoelectric surgery for bone processing
4-0 nylon sutures Ethicon 8881H
8-0 nylon sutures Ethicon 2775G
Isepamicin sulfate Nichi-Iko 620005641
Disposable scalpel (No.10) Kai medical 219ABBZX00073000
30-gauge needle Nipro 1134
1-0 absorbable stitches Ethicon J347H
3-0 Nylon stitches Ethicon 8872H
Neo Thermo NEC Avio TVS-700 Infrared thermography 
Neuropack Σ NIHON KOHDEN MEB-5504 Orthodromic recorder for electrophysiological recording
Toluidine Blue Sigma-Aldrich T3260-5G
Light microscope Keyence BZ-9000
Mouse anti-human neurofilament protein monoclonal antibody DAKO N1591
Polyclonal rabbit anti-S100 antibody DAKO Z0311
Transmission electron microscopy Hitachi High Technologies Hitachi H-7000
Dynamic cell count Keyence BZ-H1C Software for morphological evaluation

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Al-Sabbagh, M., Okeson, J. P., Bertoli, E., Medynski, D. C., Khalaf, M. W. Persistent pain and neurosensory disturbance after dental implant surgery: prevention and treatment. Dental Clinics of North America. 59 (1), 143-156 (2015).
  2. Chaushu, G., Taicher, S., Halamish-Shani, T., Givol, N. Medicolegal aspects of altered sensation following implant placement in the mandible. International Journal of Oral and Maxillofacial Implants. 17 (3), 413-415 (2002).
  3. Robinson, P. P., Loescher, A. R., Yates, J. M., Smith, K. G. Current management of damage to the inferior alveolar and lingual nerves as a result of removal of third molars. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 42 (4), 285-292 (2004).
  4. Gregg, J. M. Studies of traumatic neuralgia in the maxillofacial region: symptom complexes and response to microsurgery. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 135-140 (1990).
  5. Pogre, M. A. The results of microneurosurgery of the inferior alveolar and lingual nerve. Journal of Oral and Maxillofacial Sureryg. 60 (5), 485-489 (2002).
  6. Strauss, E. R., Ziccardi, V. B., Janal, M. N. Outcome assessment of inferior alveolar nerve microsurgery: a retrospective review. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 64 (12), 1767-1770 (2006).
  7. Nakamura, T., et al. Experimental study on the regeneration of peripheral nerve gaps through a polyglycolic acid-collagen (PGA-collagen) tube. Brain Research. 1027 (1-2), 18-29 (2004).
  8. Yoshitani, M., et al. Experimental repair of phrenic nerve using a polyglycolic acid and collagen tube. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 133 (3), 726-732 (2007).
  9. Seo, K., et al. One-year outcome of damaged lingual nerve repair using a PGA-collagen tube: a case report. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 66 (7), 1481-1484 (2008).
  10. Seo, K., et al. Protracted delay in taste sensation recovery after surgical lingual nerve repair: a case report. Journal of Medical Case Reports. 7, 77 (2013).
  11. Seo, K., Terumitsu, M., Inada, Y., Nakamura, T., Shigeno, K., Tanaka, Y. Prognosis after surgical treatment of trigeminal neuropathy with a PGA-c tube: report of 10 Cases. Pain Medicine. 17 (12), 2360-2368 (2016).
  12. Okuda, Y., Kitajima, T. Comparison of stellate ganglion block with intravascular infusion of prostaglandin e1 on brachial artery blood flow in dogs. Anesthesia and Analgesia. 84 (6), 1329-1332 (1997).
  13. Kohjitani, A., Miyawaki, T., Kasuya, K., Shimada, M. Sympathetic activity-mediated neuropathic facial pain following simple tooth extraction: a case report. Cranio. 20 (2), 135-138 (2002).
  14. Melis, M., Zawawi, K., al-Badawi, E., Lobo Lobo, S., Mehta, N. Complex regional pain syndrome in the head and neck: a review of the literature. Journal of Orofacial Pain. 16 (2), 93-104 (2002).
  15. Salvaggio, I., Adducci, E., Dell'Aquila, L., Rinaldi, S., Marini, M., Zappia, L., Mascaro, A. Facial pain: a possible therapy with stellate ganglion block. Pain Medicine. 9 (7), 958-962 (2008).
  16. Atsumi, M., Sunada, K. The effect of superior cervical ganglion resection on peripheral facial palsy in rats. Journal of Anesthesia. 30 (4), 677-683 (2016).
  17. Hanamatsu, N., Yamashiro, M., Sumitomo, M., Furuya, H. Effectiveness of cervical sympathetic ganglia block on regeneration of the trigeminal nerve following transection in rats. Regional Anesthesia and Pain Medicine. 27 (3), 268-276 (2002).
  18. Shionoya, Y., Sunada, K., Shigeno, K., Nakada, A., Honda, M., Nakamuram, T. Can nerve regeneration on an artificial nerve conduit be enhanced by ethanol-induced cervical sympathetic ganglion block? PLoS One. 12 (12), e0189297 (2017).
  19. Suzuki, Y., Tanihara, M., Ohnishi, K., Suzuki, K., Endo, K., Nishimura, Y. Cat peripheral nerve regeneration across 50 mm gap repaired with a novel nerve guide composed of freeze-dried alginate gel. Neuroscience Letters. 259 (2), 75-78 (1999).
  20. Ichihara, S., et al. Development of new nerve guide tube for repair of long nerve defects. Tissue Engineering, Part C, Methods. 15 (3), 387-402 (2009).
  21. Grenga, V., Bovi, M. Piezoelectric surgery for exposure of palatally impacted canines. Journal of Clinical Orthodontics. 38, 446-448 (2004).
  22. Degerliyurt, K., Akar, V., Denizci, S., Yucel, E. Bone lid technique with piezosurgery to preserve inferior alveolar nerve. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology, and Endodontology. 108 (6), e1-e5 (2009).
  23. Kotrikova, B., et al. Piezosurgery--a new safe technique in cranial osteoplasty? International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 35 (5), 461-465 (2006).
  24. Vercellotti, T. Piezoelectric surgery in implantology: a case report-a new piezoelectric ridge expansion technique. International Journal of Periodontics and Restorative Dentistry. 20 (4), 358-365 (2000).
  25. Stübinger, S., Kuttenberger, J., Filippi, A., Sader, R., Zeilhofer, H. F. Intraoral piezosurgery: Preliminary results of a new technique. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 63 (9), 1283-1287 (2005).
  26. Eggers, G., Klein, J., Blank, J., Hassfeld, S. Piezosurgery: an ultrasound device for cutting bone and its use and limitations in maxillofacial surgery. British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 42 (5), 451-453 (2004).
  27. Hardy, P. A., Wells, J. C. Extent of sympathetic blockade after stellate ganglion block with bupivacaine. Pain. 36 (2), 193-196 (1989).
  28. Hogan, Q. H., Erickson, S. J., Haddox, J. D., Abram, S. E. The spread of solutions during stellate ganglion block. Regional Anesthesia. 17 (2), 78-83 (1992).
  29. Mullenheim, J., et al. Left stellate ganglion block has only small effects on left ventricular function in awake dogs before and after induction of heart failure. Anesthesia and Analgesia. 91 (4), 787-792 (2000).
  30. Tsujimoto, G., Sunada, K., Nakamura, T. Effect of cervical sympathetic ganglionectomy on facial nerve reconstruction using polyglycolic acid-collagen tubes. Brain Research. 1669, 79-88 (2017).
  31. Ghai, A., Kaushik, T., Kumar, R., Wadhera, S. Chemical ablation of stellate ganglion for head and neck cancer pain. Acta Anaesthesiologica Belgica. 67 (1), 6-8 (2016).
  32. Forouzanfar, T., van Kleef, M., Weber, W. E. Radiofrequency lesions of the stellate ganglion in chronic pain syndromes: retrospective analysis of clinical efficacy in 86 patients. Clinical Journal of Pain. 16 (2), 164-168 (2000).
  33. Ohno, K., Oshita, S. Transdiscal lumbar sympathetic block: a new technique for a chemical sympathectomy. Anesthesia and Analgesia. 85 (6), 1312-1316 (1997).
  34. Slappendel, R., Thijssen, H. O., Crul, B. J., Merx, J. L. The stellate ganglion in magnetic resonance imaging: a quantification of the anatomic variability. Anesthesiology. 83 (2), 424-426 (1995).
  35. Wang, Y. C., Wei, S. H., Sun, M. H., Lin, C. W. A new mode of percutaneous upper thoracic phenol sympathicolysis: report of 50 cases. Neurosurgery. 49 (3), 628-634 (2001).

Tags

מדעי המוח גיליון 141 מדעי המוח בחיי עיר הנדסת רקמות צינור העצבים מלאכותי שפופרת קולגן חומצה polyglycolic צוואר הרחם גנגליון סימפטי בלוק מודל הכלבי
אתנול-Induced את צוואר הרחם גנגליון סימפטי לחסום יישומים לקידום התחדשות הכלבי עצב מכתשי נחות באמצעות עצב מלאכותי
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Shionoya, Y., Sunada, K., Tsujimoto, … More

Shionoya, Y., Sunada, K., Tsujimoto, G., Shigeno, K., Nakamura, T. Ethanol-Induced Cervical Sympathetic Ganglion Block Applications for Promoting Canine Inferior Alveolar Nerve Regeneration Using an Artificial Nerve. J. Vis. Exp. (141), e58039, doi:10.3791/58039 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter