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Neuroscience

人工神経を用いた犬の下歯槽神経再生を促進するためエタノールによる頸部交感神経節ブロック ・ アプリケーション

Published: November 30, 2018 doi: 10.3791/58039

Summary

人工神経管を用いた神経修復に及ぼす頸部交感神経節ブロックを行った。雄性ビーグル成犬それぞれ移植された人工神経と左の下歯槽神経; で 10 mm のギャップの間で左頸部交感神経節を注入することによりブロックされた側方開胸で 99.5% エタノール。

Abstract

ポリグ リコール酸コラーゲン (PGA C) 管は、薄いコラーゲンの膜で構成される複室構造のコラーゲン生体吸収性神経管です。破損した下歯槽神経 (IAN) の治療のためのこれらの管を使用する場合は、良好な臨床結果を実現しています。PGA C チューブを使用して成功した神経の再生の重要な要因は、周囲の組織への血液供給です。頸部交感神経節ブロック (CSGB) は、エリア内の血流が増えて頭頸部領域の交感神経ブロックを作成します。十分な効果を確保するため、封鎖する必要があります、管理局所麻酔薬 1 ~ 2 回いくつかの連続した週間日この手法を調査するための動物モデルを作成する場合、問題が生じます。この制限に対処するため、長期的な口腔顔面領域の血流増加の犬モデルにおけるエタノール誘発性 CSGB を開発しました。このモデルによって PGA C 管打込みによりイアン ・再生を高めることができるかどうかを検討しました。14 ビーグル犬それぞれが左のイアンの 10 mm ギャップ間で PGA C 管と移植されました。イアンは骨に囲まれた下顎管内にある、したがって我々 は神経や血管の損傷のリスクを最小限にするために超音波骨処理から成る圧電手術を選んだ。この方法良い手術結果が得られました。手術後、1 週間これらの犬の 7 つを受けた左 CSGB エタノールの注入による。エタノール誘発 CSGB 結果改善された神経再生、血流量の増加が効果的にイアン ・欠陥で神経再生を促進することを示唆しています。この犬のモデルは、CSGB の長期効果の更なる研究に貢献できます。

Introduction

下歯槽神経 (IAN) の外傷は、多くの場合、医原性、頻繁に第 3 大臼歯の抽出または歯科インプラント1,2,3の配置によって引き起こされています。イアンの傷害は熱で赤字につながるし、感覚知覚、感覚、感覚鈍麻、アロディニアをタッチできます。神経損傷は、保存的治療のみならず他のメソッド、縫合を含む自家配置によっても扱われます。ただし、これらのメソッドには、しばしば症状の改善とドナー サイト4,5,6時神経学的欠陥の欠如が含まれての欠点があります。

人工神経-ポリグ リコール酸コラーゲン (PGA C) 管はもともと日本で開発されました。生体吸収性海綿状コラーゲン7でいっぱいの内部ルーメン チューブです。動物実験で、このチューブは腓骨神経欠陥、ビーグル犬における神経再生を高めるために使用された、自家神経移植8よりも回復の高いレベルを促進するために示されていた。C PGA チューブの臨床応用は、患者末梢神経損傷で 2002 年に始まった。さらに、三叉神経障害 (イアンおよび舌神経)9,10,11の治療に良好な臨床結果を実現しています。正常な神経再生 PGA C チューブを使用しての重要な要因は周囲組織8への血液供給です。頸部交感神経節ブロック (CSGB) 頭頸部領域の交感神経ブロックを作成し、それぞれの支配領域12; への血流が増加したがって、それは、複合性局所疼痛症候群と循環不全13,14,15の治療に使用されています。しかし、増加血液の流れ16,17CSGB の効果にのみ、いくつか実験的調査があった。適切な CSGB の効率を確保するため封鎖する必要がありますと共に適用する局所麻酔薬を一度か二度毎日数週間、この手法を調査する動物モデルを生成するとき従って挑戦を提起します。以前の研究では、この制限に対処するため長期的な口腔顔面領域18増加血流の犬モデルを開発しました。モデルは注入することにより、CSGB を実行することによって生成された 99.5% エタノール。口腔粘膜血流とレーザードップラーと 12 週間週 1 回赤外線サーモグラフィによる鼻部皮膚温度を評価しています。このモデルでは 7-10 週間の口腔顔面領域の血流が増加したことがわかった。

本研究では神経再生に及ぼすエタノールによる CSGB を評価しました。
PGA C 管は左のイアンの 10 mm のギャップの間でビーグル犬に注入されました。一週間後、エタノールを注入することにより CSGB を行った。術後後 3 か月さまざまな CSGB の神経再生に及ぼす影響を評価するための電気生理学的、組織学的、形態学的研究を行った。イアン ・復興 PGA C チューブと CSGB のエタノールを使用して詳細なプロトコルを提供します。

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Protocol

本研究はケアと動物の使用のための指針に従って実施され、京都大学動物研究委員会で承認 (京都, 日本; 承認番号: R-16-16)。動物の苦痛を最小限に抑えるために行われたすべての努力と、このレポートのすべてのセクションは、到着に準拠 (動物資源研究領域: in Vivo実験のレポート) のガイドライン。

1. PGA C チューブの作製

  1. 吸収性ポリグ リコール酸 (PGA) 管による人工神経管を作製、48 スピンドル、26 フィラメント (図 1)18の束から成る 5 つの PGA の繊維を搭載した管状の編組機を使用します。
  2. PGA チューブ表面を親水性にレンダリングするには、プラズマ放電を公開します。
  3. 塩酸ソリューション7で 1 %v/w アテロコラーゲンを使用します。
    注: アテロコラーゲンは酵素処理による豚の皮から抽出した、ウイルス チェックを受けます。それは主にから成っているタイプ (70-80%) 私とタイプ III のコラーゲン、比が他の場所で詳細に記載されている7。100 mL の塩酸溶液に 1 g のコラーゲンを溶解することによりコラーゲン溶液を準備 (pH 3.0 を =)。塩酸溶液の密度は、約 1.0 は、w/w コラーゲン濃度は約 1% です。
  4. 5 の 1% コラーゲン塩酸溶液に浸漬して繰り返しによってコラーゲン層チューブをコート s たびに。
    1. 浸漬後、室温でクリーン ベンチの管を乾燥します。チューブが (約 6 常温乾燥用 h) 完全に乾燥を確認した後次浸漬を実行します。
    2. 塗装工程を 10 回繰り返します。
  5. 140 ° C (dehydrothermal 治療)、真空下で 24 時間のバイオ吸収、コラーゲン分子の架橋反応を制御するために PGA C 管を対象します。無菌条件下で全体のプロセスを実行します。
    注: この手順は、肉厚 50 μ m、内径 3 mm、14 mm の最終的な長さのチューブを生成します。

2. 手術のセットアップ

  1. 大人の雄ビーグル犬に 13.0 9.0 kg を使用します。
    1. 家動物別のケージ、犬小屋制御条件 (12 h 明暗サイクル)。
    2. 固形食を提供し、広告自由水します。
  2. ビーグル犬の重量を量る。
  3. オートクレーブすべて手術器具。
  4. 滅菌手袋をドンし、80% エタノール溶液で動作の設定のすべての表面を消毒します。使用される手袋を破棄します。
  5. 手術手洗いを実行します。
  6. 新鮮なマスク、ガウン、滅菌手袋を置きます。

3. 麻酔と皮膚の消毒

  1. 塩酸ケタミン 5 mg/kg ・ 1 mg/kg キシラジンの混合物と犬の筋肉内注射で麻酔します。
  2. 直径 7.5 mm、長さ 25 cm の気管チューブ挿管します。
  3. 右側臥位に犬を配置します。酸素 (1.0 L/分) と 3.2% セボフルラン麻酔を維持します。
  4. 37 ° C の体温を維持するために加熱パッドを使用します。
  5. 角膜上皮剥離を避けるために目の前方の表面にゲル状の目薬を適用します。
  6. 慎重に手術野 (左側胸部領域) 手術のバリカンを使用してひげをそる。手術部位にかなりの量のアルコール溶液をスプレーします。待ち時間少なくとも 15 秒は、アプリケーションを 3 回繰り返します。
  7. 手術中に酸素飽和度と心拍数を記録します。

4. 劣った歯槽神経再建を使用して PGA-C チューブ: 復興専用モデルの開発

  1. 3 mL の 1% リドカイン局所麻酔薬と鎮痛薬として左の下顎の歯肉に 27 G の針を使用して注入します。
  2. 動物の無顎類を公開する、左の下顎歯肉 15 番メス刃で 5 cm の横切開を実行します。
  3. 後部のオトガイ孔を 3 cm × 8 mm 四角形に下顎骨の近位側面を挽く圧電超音波振動を使用します。
    注: 振動周波数は 28 \u2012 32 kHz。
  4. (寸法、3 cm × 8 mm) 左のイアン (図 2 a)18を公開する下顎骨プレートの正面部分を削除します。
    注: 復興サイトは、第一大臼歯の根尖に対応します。
  5. 10 mm のセグメントを削除するメスとイアンを縦断面します。
  6. 切断された神経の近位および遠位切り株を 2 mm の深さに神経管に挿入します。
  7. 8 倍の倍率で近位および遠位神経 (図 2 b) の端18にチューブを縫合を 8-0 ナイロン縫合糸と手術顕微鏡を使用します。
  8. 骨プレートを顎でその元のサイトに戻ります。
  9. 4-0 ナイロン縫合糸で傷口を閉じます。
  10. 手術後 1 日は、下顎骨骨プレートは、適切な位置を確認します。
    1. 4.10.1 麻酔下で顔の骨のコンピューター断層撮影 (CT) 画像を実行します。CT のパラメーターを次のように設定: 120 kVp、200 Ma、0.5 mm/s、0.5 mm スライス厚。
      1. 5 mg/kg ケタミン 1 mg/kg と塩酸キシラジン (図 3) の混合物を使用して麻酔を管理します。
  11. 手術後 1 週間の鎮痛剤としてアセトアミノフェン (100 mg/日) と抗生物質アンピシリン (100 mg/日) を管理します。

5. エタノール誘発 CSGB: 復興 + CSGB モデルの開発

  1. セクション 4 で説明されているようにイアン ・復興を実行し、回復の週をできるように。
  2. 1.5% セボフルラン (4 L/分) の酸素と空気 (6 L/分) で動物を麻酔します。剃るし、セクション 3 で説明するように目的の外科分野をきれい。
  3. 左側の胸の部分に線を描画して切開線外科皮膚マーカーで印をつける (図 4切開線は長さ 20 cm)。
  4. 5 mL の 1% リドカイン局所麻酔薬と鎮痛薬として左側胸部に 21 G の針を使用して注入します。
  5. 10 番のメス刃で左側胸部皮膚を切開します。
  6. 筋膜を公開する電気メスで脂肪層を切開します。
  7. 鋸側筋や斜角筋を公開します。
  8. 鋸側筋と 2 番目と 3 番目の肋骨 (図 5) を公開する背側に腹斜筋を上げます。
  9. 左頸部交感神経節 (図 6) を公開する 2 番目と 3 番目の肋間スペースで左の側方開胸を実行します。
  10. 99.5% エタノール 0.2 mL を直接可視化 (図 7) の下で 30 G の針を用いて子宮頸部交感神経節に注入します。
  11. 中断された 1-0 吸収ステッチで肋を閉じます。
  12. 中断された 3-0 ナイロン糸で皮膚を閉じます。
  13. 手術後 1 週間の鎮痛剤としてアセトアミノフェン (100 mg/日) と抗生物質アンピシリン (100 mg/日) を管理します。
  14. CSGB 後 1 週間で、CSGB を確認する赤外線サーモグラフィによる顔面皮膚温を測定します。

6. 電気生理学的記録

  1. 感覚神経活動電位 (スナップ) および感覚神経伝導速度 (SCV)、イアン ・再建術後後 3 カ月を測定、セクション 3 で説明した動物を麻酔します。
    注: スナップと SCV 両治療群で各犬のため両方の実験そして正常な制御の側面を測定ください。
  2. 数 10 メス刃を持つ左の下顎歯肉に切開を行います。
  3. 再生神経を物理的に損傷を防ぐため下顎骨プレートを慎重に取り外します。
  4. 針電極のペアを使用して、スナップと SCV を記録するイアンを刺激します。
    1. 近位の神経管に電極を挿入します。
    2. 20 倍 10 kHz の電気刺激を適用します。
  5. 結果を分析します。
    1. スナップを電気刺激する平均応答振幅を計算することによって決定します。
    2. ピーク潜時とグラフの録音からピークの振幅を測定します。
    3. 次の方程式で回復指数を計算する: 復興専用の左のイアンのピーク振幅または再構成 + CSGB (復興専用のグループの右のイアンの中心セグメント) の通常のコントロールのグループ/ピーク振幅19 ,20

7. 組織学的解析

  1. セクションの準備
    1. 再構築後、3 カ月の左のイアンは、再建されたサイトのいずれかの側には神経の 1 cm を含む収穫します。
    2. 左側にある収穫サイトに対応するレベルで右のイアンを収穫します。
    3. 0.1 M cacodylate 緩衝液 (pH 7.4、48 ° C、24 h) 2.5% グルタルアルデヒド浸漬によって収穫された神経をプレフィックスします。
    4. 2% 四酸化オスミウム液 (48 ° C, 4 h) とフェロシアン化カリウム 0.1 M リン酸緩衝液 (pH 7.4, 2 h) 後置します。
    5. 傾斜のエタノール溶液の一連の神経を脱水します。
    6. エポキシ樹脂 (パラフィン) に埋め込みます。
    7. 0.5 \u2012 1.0 μ m の厚さで標本をセクションします。
  2. トルイジン ブルー染色と形態学的解析
    1. トルイジン ブルー溶液でのセクションを染色します。
    2. サンプルに沿って次の地域で 400 倍の倍率で、光学顕微鏡を用いた顕微鏡画像を得る: イアンは、再生成されたセグメントと遠位切り株; に 2 mm の中心を左右のイアンは、左側にある収穫サイトに対応するイアン ・ セグメントの中心。
    3. 神経線維の再生とすべての地域の画像を選択します。
      1. 100 μ m × 100 μ m を含むをランダムに選択 8 \u2012 10 分野には、神経線維が再生成されます。
      2. 以下のパラメーターを測定するための適切なソフトウェアを使用して形態素解析を実行: 有髄神経線維の径 (μ m)、密度 (カウント ・地域)、神経組織の割合と G 比 (有髄軸索直径/有髄神経線維の直径).
  3. 免疫染色
    1. パラフィン セクションを汚すための標準的なプロトコルに従います。
    2. 25 ° C で 30 分間一次抗体とインキュベートします。
    3. 25 ° C で 3 回をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄します。
    4. 25 ° C で 30 分間西洋ワサビペルオキシダーゼと分類される二次抗体とインキュベートします。
    5. 光学顕微鏡を使用して画像を取得します。
  4. 透過型電子顕微鏡 (TEM)
    1. 手順 7.1 で説明されているように、神経を準備します。
    2. セクション神経をウルトラミクロトームを使用して 70 \u2012 90 μ m の厚さで。
    3. レイノルドの鉛クエン酸とウラニルのセクションを染色します。
    4. 調べるし、透過型電子顕微鏡画像します。

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Representative Results

左の CSGB (図 8) 後 1 週間ブロックされた側の顔の皮膚温度の上昇を見ました。

3 ヵ月後の復興再建領域で PGA C 管がおこった下歯槽神経の再生は、再建だけで観察された、復興 + CSGB グループ (図 9 a, B)18

スナップは復興両面復興 + CSGB と復興のみのグループで測定されました。表 118は、電気生理学的評価の結果をまとめたものです。回復と SCV 有意に高かった復興 + よりも CSGB 復興専用のグループで。

我々 は復興だけで再生のイアンの中央から遠位のセグメントで有髄神経線維観察し、復興 + CSGB グループ (図 10 a、B)18。復興だけ復興 + CSGB 群は小さい再生正常対照群 (復興グループ、図 10の右側のイアンの中心セグメント) に比べて有髄神経の直径と。未熟な有髄神経線維はまた観察されました。

復興だけ、復興 + TEM を使用して CSGB グループが認められた再生有髄神経線維とシュワン細胞 (図 10E)。図 10 階は、通常の制御グループ (復興グループで右のイアンの中心セグメント) の TEM のこれらの結果を示しています。

復興専用の中央と遠位のセグメントで再生軸索とシュワン細胞の存在を確認し、復興 + CSGB グループ、それぞれ抗ニューロ フィラメント (NF) と抗 s-100 抗体染色により (図 11)18

表 218は、形態学的評価の結果をまとめたものです。再生左イアン ・ セグメントの中心で有髄神経線維の直径は 4.27 復興グループで ± 1.5 μ m と CSGB グループで 5.11 ± 1.98 μ m 再生された遠位区分にある左イアン ・直径は、reconstruc μ m ± 1.21 3.47グローバリゼ-ション グループと CSGB グループ 4.53 ± 1.36 μ m。両方のケースで直径はまた中心と再生左イアンの遠位のセグメントの両方で有意に高い有髄神経線維密度と神経組織割合を示した CSGB グループで大きく。再生左イアンのセンターで G 比が 0.75 ± 0.04 再建群と CSGB 群 0.68 ± 0.05 中遠位部では 0.74 ± 0.04 再建群と CSGB 群 0.69 ± 0.04 だった。したがって、両方のケースで G 比 CSGB グループで有意に大きかった。

サンプル サイズが復興だけ、復興 + CSGB グループ n = 7。Dunnett のテストを使用して有髄神経線維の径と密度、比の G、SCV の統計的解析を行った。回復指標の分析を行った独立スチューデントのtを使用して-をテストします。統計的有意性のレベルは、5% (p < 0.05) に設定されました。

Figure 1
図 1: コラーゲン スポンジ充填ポリグ リコール酸材A) 管の総画像。神経管の最終的な寸法は、50 μ m 厚、内径 3 mm、長さ 14 mm だった。B) チューブの電子顕微鏡写真。この図は、以前塩野谷によって公開されていました18許可を得て転載。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 2
図 2: 下歯槽神経 (IAN) を左前と復興A) 骨の除去によってさらされた後左のイアンの事前復興イメージ。左のイアンのB) 復興イメージは、ポリグ リコール酸コラーゲン チューブを用いた再構築。この図は、以前塩野谷によって公開されていました18許可を得て転載。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 3
図 3: 下歯槽神経再建を去った後の顔面骨の断層イメージングを計算します。下顎の骨板が適切な位置にあるイメージを示しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 4
図 4: 手術前に左側胸部領域への術前皮膚マーキング。ワカ皮膚マーキングを頸部交感神経節ブロックを実行する前に。切開線は、長さ 20 cm です。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 5
図 5: 頸部交感神経節ブロックのビューの動作: 前開します。画像は、鋸のリブロースと斜角筋の筋肉を引き上げ後の 2 番目と 3 番目のリブを示します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 6
図 6: 頸部交感神経節ブロックのビューの動作: 開胸術後。画像は、2 番目と 3 番目の肋間スペースで側方開胸後左頸部交感神経節を示します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 7
図 7: 30 G の針を用いて頸部交感神経節前と後のエタノール注入A)左頸部交感神経節の前のエタノール注入イメージ。B) 左頸部交感神経節の後エタノール注入イメージ。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 8
図 8: 左頸部交感神経節ブロック (CSGB) の後のサーモグラム。サーモグラムは、エタノール注入による CSGB 後一週間を買収されました。左側の顔面皮膚温が側よりも高いことに注意してください。° C. の温度を示すカラー バーこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 9
図 9: 下歯槽神経 (IAN) を再生成します。)復興専用グループのイアンのイメージ。B) 画像再構成 + CSGB (頸部交感神経節ブロック) グループのイアンの。神経再生 (白い矢印の間の地域) は、両方のグループで観察されます。この図は、以前塩野谷によって公開されていました18許可を得て転載。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 10
図 10: 再生下歯槽神経 (IAN) のトルイジン ブルーと透過電子顕微鏡による解析。- C) 3 カ月復興でイアンの半薄い横断とトルイジン ブルー染色します。画像は、示されているように各グループの再生左イアンの遠位のセグメントを表示します。D - F) 有髄と無髄神経線維を示す半薄いセクションからの透過電子顕微鏡像 (黒し、白の矢印、それぞれ)。スケール バーを表す 50 μ m (A) - (C) および 5 μ m (D) - (F)。通常のコントロール: 復興専用のグループの右のイアンの中央部分。この図は、以前塩野谷によって公開されていました18許可を得て転載。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 11
図 11: 再生左下歯槽神経 (IAN) の遠位区分の免疫組織化学的解析しますA B) 復興専用のグループ (A) と復興 + 頸部交感神経節ブロック (CSGB; 抗ニューロ フィラメント (NF) 抗体と 3 ヶ月後の復興再生のイアンの染色B) グループ。黒矢印は、軸索の再生を示しています。C, D) 復興専用グループ (C) および復興 + CSGB (D) グループの反 S 100 抗体染色 3 ヶ月後の復興再生のイアンの。白い矢印は、シュワン細胞を示します。スケール バーは、50 μ m。この図は、以前塩野谷によって公開されていました18許可を得て転載。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

感覚神経伝導 (m/s) 回復インデックス
通常のコントロール 48.5 ± 2.8 -
復興専用グループ 36.8 ± 2.9* 0.22 ± 0.04
復興 + CSGB グループ 42.0 ± 2.4# 0.35 ± 0.06#

表 1: 電気生理学的所見、手術後 3 ヵ月で下歯槽神経 (IAN).データを提示する、平均 ± 標準偏差 (n = 7)。比較した独立スチューデントのt-テストします。イアンは、下歯槽神経;CSGB、頸部交感神経節ブロック。*、通常の制御グループと比較してp < 0.05# p < 0.05 復興専用のグループとの比較。通常のコントロール: 復興だけグループ内右のイアンの中央部分回復: 復興専用の左のイアンのピーク振幅の比率または再構成 + 通常のコントロールのピーク振幅する CSGB グループ。この表以前塩野谷によって公開されて18許可を得て転載。

有髄神経線維の径 (μ m) 有髄神経線維密度 (2カウント/100 μ m) 神経組織 (%) の割合 G 比率の推移
通常のコントロール センター 8.83 ± 3.11 103 ± 8 41.3 ± 3.9 0.62 ± 0.03
復興専用グループ センター 4.27 ± 1.5 126 ± 20 * 11.6 ± 2.1 0.75 ± 0.04*
遠位 3.47 ± 1.21* 109 ± 17 * 7.3 ± 2.0 0.74 ± 0.04*
復興 + CSGB グループ センター 5.11 ± 1.98*# 140 ± 22 *# 15.9 ± 3.0# 0.68 ± 0.05*#
遠位 4.53 ± 1.36*$ 123 ± 15 *$ 12.5 ± 2.1$ 0.69 ± 0.04*$

表 2: 手術後 3 ヵ月で下歯槽神経 (イアン) の形態学的所見。データを提示する、平均 ± 標準偏差 (n = 7)。Dunnett のテストを使用して比較を行った。イアンは、下歯槽神経;CSGB、頸部交感神経節ブロック。*、通常の制御グループと比較してp < 0.05*# p < 0.05 復興だけグループ内左のイアンの中央のセグメントと比較して*$p < 0.05 復興専用グループに左のイアンの遠位端との比較。通常のコントロール: 復興だけグループ内右のイアンの中央部分G 率と総有髄繊維径有髄軸索直径の比率です。この表以前塩野谷によって公開されて18許可を得て転載。

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Discussion

エタノールによる CSGB との組み合わせで吸収性神経管を用いたイアン ・再生のための効率的な方法を提案する.この研究のため、マウス、ラットおよびウサギ、寿命は短いと小さなボディサイズがあるし、それゆえ、正確な手術を実行する使用ことはできませんように他の動物モデル以来犬を使用しました。イアンは骨に囲まれた下顎管の中に位置し、手術手技は神経再建術を実行するときに神経や血管の損傷を避けるために必要です。プロシージャの重要な技術的なヒントは、慎重に神経や血管損傷のリスクを最小限に抑えるため下顎骨プレートを削除することです。伝統的なバリとマイクロののこぎりは、硬・軟組織21と区別できません。さらに、これらのツールは、スリップの偶発的な接触22特にイアン、隣接する組織の損傷を引き起こす傾向があります。したがって、処理骨の圧電手術器具を使いました。これ専門のメスの超音波 microvibrations を使用して、新しい、革新的な骨手術手法です。したがって、軟部組織は切削のヒント23,24との偶発的な接触の時にも破損していません。24-29 kHz で 60-200 μ m/s の Microvibrations、弾性軟組織を温存しながら弾性硬組織を切断に最適これは2550 kHz 以上の周波数で可能ではありません。また、burs を回転または振動鋸の回転や楽器の振動を打ち消すために力が必要です。これらの計測器と比較して、圧電手術ツール必要としない余分な力の適用、安全で正確な骨の処理が可能な26。これは、新規ユーザーの手に特に重要です。

本手法ではもう一つの重要な側面は骨プレートは金属板を使用してを修正できませんでしたが、PGA C 管の配置後、下顎で元の位置に置かれていた。これは、プレートの固定用の金属板を使用するときに発生する口腔粘膜壊死への暴露のリスクを回避するためでした。ただし、いくつかのケースで骨プレートは、元のサイトから外れた。したがって、手術後、下顎の骨板が適切な位置にことを確認する顔面の骨の CT スキャンを実行することが重要です。固定用の金属板を使用している場合タイトな縫合避けるべきであるそれは血流の乱れによる口腔粘膜壊死を引き起こす可能性があります。

CSGB は、末梢血管疾患、首や顔の13,14,15の疼痛症候群の効果的な治療法です。しかし、その治療効果のメカニズムは不明します。CSGB の治療効果に関する研究の不足のための 1 つの理由は、一貫性と均一交効果を得ることが困難です。たとえば、経皮的 CSGB 後交感神経ブロックの普及は制服27,28ではないです。Mullenheim29開胸、下筋と一緒に上部の交感神経鎖後ポリエチレン カテーテルで犬を注入カテーテル経由でリドカインを注入することにより CSGB を実行.このアプローチは、対象地域に交感神経ブロックを広がることができる、ただし、長期実験で特にカテーテル閉塞または脱臼、感染症のリスクを運ぶ。CSGB の私達の犬のモデルでは、99.5% エタノールの直接噴射は同側顔面・口腔領域への血流の長期的な増加を作り出した。CSGB は精度で実行されることができるように我々 のアプローチでブロック注射は直接観察下で投与されました。したがって、私たちのアプローチは、交効果と交感神経ブロックの不均一広がりの危険を減らします。これは、長期的な実験で特に有利であると見なされます。さらに、成功した CSGB にブロック側の顔の皮膚温度が上昇するので、CSGB の成功を確認するのにサーモグラフィを使用しました。この場合、サーモグラフィは役に立つ、簡単かつ非侵襲的であります。重要なは、鼻腔と顔面皮膚温ないを判断しなければならないので犬の毛の影響を受けません。私たちのモデルは、CSGB の治療効果の更なる研究に貢献できます。以前の研究では、顎・口腔領域の血流増加子宮頸肺尖後 6 月 11 日週。研究者は必要な場合この代替方法30を選択できます。

本研究の限界はエタノールによる CSGB が永久的なホルネル症候群 (眼瞼下垂、縮瞳)31を開発のリスクをもたらします。ラジオ波焼灼術、フェノール、肺尖など、他の方法は、sympathectomies; を実行するために使用されています。ただし、頸部交感神経節の交感神経、用のみラジオ波焼灼は臨床32,33,34,35で採用されています。したがって、ラジオ波焼灼術、局所麻酔薬は、エタノール誘発 CSGB に代わる方法として考えることが。将来の研究局所麻酔薬またはラジオ波焼灼術と CSGB により生体吸収性神経管を介した神経再生を拡張できる方法を検証する必要があります。

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Disclosures

著者が明らかに何もありません。

Acknowledgments

この作品は京都の人工臓器部によってサポートされていた大学フロンティア医科学研究所。再生医科学研究所の獣医のスタッフに感謝したいと思います。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
NMP Collagen PS Nippon Meatpackers 301-84621 Atelocollagen extracted from young porcine skin by enzyme treatment
Surgical clippers Roboz Surgical Instrument Company RC-5903
Disposable scalpel (No.15) Kai medical 219ABBZX00073000
VarioSurg3 Nakanishi VS3-LED-HPSC, E1133 Piezoelectric surgery for bone processing
4-0 nylon sutures Ethicon 8881H
8-0 nylon sutures Ethicon 2775G
Isepamicin sulfate Nichi-Iko 620005641
Disposable scalpel (No.10) Kai medical 219ABBZX00073000
30-gauge needle Nipro 1134
1-0 absorbable stitches Ethicon J347H
3-0 Nylon stitches Ethicon 8872H
Neo Thermo NEC Avio TVS-700 Infrared thermography 
Neuropack Σ NIHON KOHDEN MEB-5504 Orthodromic recorder for electrophysiological recording
Toluidine Blue Sigma-Aldrich T3260-5G
Light microscope Keyence BZ-9000
Mouse anti-human neurofilament protein monoclonal antibody DAKO N1591
Polyclonal rabbit anti-S100 antibody DAKO Z0311
Transmission electron microscopy Hitachi High Technologies Hitachi H-7000
Dynamic cell count Keyence BZ-H1C Software for morphological evaluation

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References

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人工神経を用いた犬の下歯槽神経再生を促進するためエタノールによる頸部交感神経節ブロック ・ アプリケーション
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Shionoya, Y., Sunada, K., Tsujimoto, G., Shigeno, K., Nakamura, T. Ethanol-Induced Cervical Sympathetic Ganglion Block Applications for Promoting Canine Inferior Alveolar Nerve Regeneration Using an Artificial Nerve. J. Vis. Exp. (141), e58039, doi:10.3791/58039 (2018).

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