정 맥 합성 펩 티 드, 단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제, 국 소 빈 혈 reperfusion 유발 급성 폐 상해 감소를 제공 하는 골드 나노 펩 티 드 하이브리드를 사용 이전 했습니다. 여기 우리가 약물 배합의 상세한 프로토콜을 보여줍니다. 다른 세포내 펩 티 드 유사 하 게 공식화 될 수 있습니다.
단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 (PKCδi)은 국 소 빈 혈 reperfusion 유도 장기 부상을 방지 하기 위해 유망 약 이다. 그것은 일반적으로 세포 관통 펩 티 드, 문신, 세포내 전달에 활용 됩니다. 그러나, 문신 일반적인 생물 학적 활동을 보이고 있다. 금 나노 입자 (GNPs) 인식된 독성 없이 약물 전달 매개체로 사용할 수 있습니다. 따라서, PKCδi를 제공 하는 한나라당/펩 티 드 하이브리드를 사용 했습니다. 두 개의 짧은 펩 티 드 (P2: CAAAAE 및 p 4: CAAAAW), 95:5 비율로 한나라당의 표면 특성을 수정 하는 데 했다. GNPs PKCδi (한나라당/PKCi)와 함께 활용 된 증류수, 안정는 0.9 %NaCl, 그리고 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 소 혈 청 알 부 민 또는 소 태아 혈 청에 포함 된. 한나라당-PKCi의 정 맥 주입 이전 폐의 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 방지 하기 위해 표시 했다. 이 문서는 한나라당/PKCi 공식화 한나라당/PKCi의 physiochemical 속성을 평가 하는 프로토콜을 설명 합니다. 한나라당과 다른 펩 티 드 기반 약물을 공식화 하 유사한 방법을 사용 했습니다. 이 문서 잘하면이 소설 세포내 약물 전달 기술을 vivo에서 응용 프로그램에 더 많은 관심을 그릴 것입니다.
폐 이식 말기 폐 질환1환자를 저장합니다. 그러나, 폐 이식 후 심각한 합병증 걸림돌이 남아 있다. 폐 이식 다음 초기 단계에서 기본 이식 부전 가장 유해한 합병증1이며 그 주요 원인이 국 소 빈 혈 reperfusion (IR)-유도 된 급성 폐 손상2.
차가운 보존에서 기증자 폐 물질 대사는 매우 낮은 수준으로 제한 됩니다. 그러나, 반응 산소 종 및 산화 질소 합성 혈액 흐름3의 중단으로 인해 활성화 됩니다. 이식 후 혈액 순환을 복원 하 고 반응성 산소 종 및 냉 허 혈 중에 생성 된 산화 질소 염증과 세포 죽음, 조직 상해의 결과 강화 한다.
부상을 방지 하기 위해 IR, 단백질 키 니 아 제 Cδ 억제제 (PKCδi)은 마음, 두뇌 및 폐4,,56,7,8에서 사용 되었습니다. 이러한 연구는 그 PKCδi 감소 염증 그리고 apoptosis reperfusion 동안 보여주었다. 그것은 또한 쥐 및 폐 이식 모델6폐 IR 부상을 하지 못했습니다. PKCδi은 일반적으로 세포 관통 펩 티 드, 문신, 세포내 배달용으로 활용 됩니다. 그러나, 그것은 혼자 문신 펩타이드는 일반적인 생물 학적 효과, angiogenesis, apoptosis, 그리고 여러 cytokines9,,1011의 금지의 승진을 포함 하 여 표시 되었습니다. 나노 입자, 작은 입자를 1에서 100 까지의 직경12nm 마약 배달13촉진에 후보자로 탐험 되었습니다. 특히, 금 나노 입자 (GNPs) 비 침 투 하 고 무 독성으로 간주 됩니다. 따라서, 우리는 펩 티 드 근거한 약14,15약물 전달 매개체로 GNPs를 개발 했습니다.
GNPs의 표면 분자 인식16,17, 화학 감지18, 이미징19, 약물 전달 등 특정 응용 프로그램에 대 한 조작할 수 있습니다. 20 nm GNPs 및 2 개의 짧은 펩 티 드를 포함 하는 한나라당/펩 티 드 하이브리드 시스템 개발 되었습니다 (P2: CAAAAE 및 p 4: CAAAAW) 비율로 95:5, GNPs의 표면 특성을 수정 하려면. P2 펩 티 드, 끝, 부정 청구 글루탐산 (E)와 함께 수성 해결책에서 GNPs 안정화 하 고 끝에, 소수 성 트립토판 (W)와 P4 펩타이드, GNPs 셀14로 입구. 이러한 펩 티이 드의 N terminus에 시스테인 (C) 잔류물 골드 표면14켤레 수 thiol 그룹을 포함 합니다. 이 펩 티 드/한나라당 하이브리드 추가 PKCδi (CSFNSYELGSL)를 전달 하기 위해 사용 되었다. PKCδi에 P2:P4의 최적화 된 어 금 니 비율은 47.5:2.5:50 이다. GNPs PKCδi (한나라당/PKCi)와 함께 활용 된 증류수, 0.9%에에서 안정적인 NaCl, 그리고 PBS 소 알 부 민 또는 소 태아 혈 청14를 포함 하는. 한나라당/PKCi의 정 맥 주입 폐15의 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 방지 하기 위해 표시 되었습니다. 이 문서에서는 한나라당/PKCi를 공식화 하는 방법에 설명 하 고 한나라당/PKCi의 물리 화학적 특성을 평가 하는 방법에 설명 합니다. 한나라당20,,2122에 활용 된 다른 펩 티 드 기반 약물을 공식화 하기 위해 유사한 방법을 사용 했습니다. 이 문서는 세포내 약물 전달에 대 한 소설이 공식에 더 많은 관심을 그릴 것입니다 바랍니다.
적절 한 배합을 보장 하기 위해, 그것은 중요 δPKCi 솔루션 1.6에서 설명 쥡니다 단계를 겪 습입니다. ΔPKCi 펩 티 드 순서는 sonicator 50% 이기 솔루션에서 PKCi를 녹이는 데 도움이 그래서 소수 moieties를 포함 되어 있습니다. 또한, 그것은 매우 꼼꼼하게, 2.7 단계에 설명 된 용 매를 혼합 하는 것이 중요입니다. 다음이 단계는 제대로 하지, 때문에 δPKCi 펩 티 드23의 집계 경우이 한나라?…
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 건강 연구의 캐나다 학회 (PJT-148847), 사역의 연구와 혁신의 온타리오 (재-08-029), 캐나다 첫 번째 연구의 우수 프로그램, 토론토 대학에서 디자인 하 여 의학에서 연구 보조금에 의해 지원 됩니다. 박사 Mingyao 리 우 제임스와 메리 Davie의 자 폐 상해, 수리, 및 재생 이다.
negatively charged glutamic acid peptide (P2) | CanPeptide | Sequence: CAAAAE-NH2 Length: 6aa Modification: C-terminal amidation Quantity: 50mg Purity: >95% |
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hydrophobic tryptophan peptide (P4) | CanPeptide | Sequence: CAAAAW-NH2 Length: 6aa Modification: C-terminal amidation Quantity: 50mg Purity: >95% |
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δPKCi peptide | CanPeptide | Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 Length: 11aa Modification: C-terminal amidation Quantity: 50mg Purity: >95% |
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Conical tube(50ml) | Corning Life Sciences | 3582070 | |
Conical tube(15ml) | Corning Life Sciences | 3582096 | |
Acetonitrile | Sigma-Aldrich | 271004-100ML | |
Sonicator | Branson Ultrasonics Corp. | Branson 2510MTH | |
Microtube | Diamed.ca | AD 150-N | |
Gold nanoparticle solution | Ted Pella | 15705-5 | A particle size is 20nm |
Rocking Platform shaker | VWR international | 40000-304 | |
Microcentrifuge | Eppendorf | 5417R | |
Acryl cuvette | SARSREDT | 67.758 | |
UV-Vis spectrophotometer | Agilent | Caty 60 UV-Vis |