Summary
Мы представляем простой цитогенетических техника, с помощью 4′, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) для определения частоты оплодотворения и первичного соотношение инвазивных вредитель haplodiploid Bemisia tabaci.
Abstract
Несколько видов роста сокососущих белокрылки являются одними из наиболее разрушительных наземных вредителей во всем мире благодаря урожая ущерба, который они наносят и вирусов растений, которые они вектор. Несмотря на многочисленные исследования биологии этих видов в различных средах параметра ключа истории жизни, потомство соотношения полов, уделялось мало внимания, но имеет важное значение для прогнозирования динамики народонаселения. Основной секс отношение (соотношение полов в откладки яиц) Bemisia tabaci никогда не сообщалось, но можно найти путем определения скорости оплодотворение яйца это насекомое haplodiploid. Этот метод предполагает dechorionation яйца с отбеливателем, ряд шагов фиксации и применение общего ДНК флуоресцентные пятна, DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole, ДНК связывающих Люминесцентную краску), для привязки к мужского и женского pronuclei. Здесь мы представляем технику и пример его применения, чтобы проверить ли облигатно бактерии, риккетсии sp. nr. bellii, влияние первичной соотношение полов B. tabaci. Этот метод может помочь в демографических исследований белокрылки, или определения, если распределении секс существует с некоторых экологических раздражителей.
Introduction
Изучение распределения секс, или относительно инвестиций в мужские и женские потомство, является краеугольным камнем поведенческой экологии1,2,3. В дополнение к своей власти для тестирования адаптивные модели поведения зная стратегию распределения секс организма может улучшить модели динамики его населения. У многих видов распределение секса контролируется матерей. Чтобы определить распределение секса, важно определить основной соотношение полов или доля женщин в то время яйцо осаждения. Хотя соотношение полов в взрослых с появлением могут предоставлять ключи для секса выделения, дифференциального развития смертности между мужской и женской несовершеннолетних часто может наклонить взрослых соотношение полов существенно. В некоторых видов перепончатокрылых, порядок насекомых, содержащий муравьи, пчелы и осы, основной соотношение полов было определено с цитогенетических анализов, окрашивание эмбрионов для просмотра генетическим ДНК. Потому что перепончатокрылых haplodiploid, зарождающегося мужской яйцо гаплоидным и содержит только женского пронуклеусами (n), а зарождающегося женского яйца диплоидных и содержат как мужчин, так и женский pronuclei (2n). Хотя Aleyrodidae, sap питание семьи клопы (полужесткокрылые) известен как белокрылки, также являются haplodiploid, не было установленной assay найти основной соотношение полов в этих насекомых. Это может быть удивительно, учитывая интенсивность изучения нескольких космополитичный серьезных вредителей в этой семье и важное значение соотношения полов в конкурентных взаимодействий белокрылки4,5,6,7 ,8,9,10 и в динамике народонаселения в целом. В haplodiploid насекомых, соотношения полов непринужденно секс определение систем, позволяя возможность селективного оплодотворение и лабильных соотношения полов, которые зависят от окружающей среды2. Здесь мы представляем технику, чтобы определить основной секс соотношение видов комплекса белокрылки, вместе известные как sweetpotato белокрылки, B. tabaci. Это один из видов имя охватывает более чем 28 видов во всем мире11и включает в себя некоторые из наиболее разрушительных глобальной инвазивных вредителей12,13. Применение этого метода для определения шаблонов выделения секс в B. tabaci и другие Aleyrodidae позволит более тщательное расследование переменных, включая температуру, растения-хозяина, облигатно бактерий или завод/белокрылки патогены, которые могут повлиять белокрылки первичной соотношения полов и динамикой народонаселения белокрылки.
Мы не знают о каких-либо сопоставимых яйцо окрашивание методы B. tabaci. Протокол является удобным по сравнению с пятная методы, используемые для других насекомых яйца14 , как он опускается ночь фиксации шаг и, таким образом, может быть завершена в течение 3 ч. В качестве примера приложения, облигатно бактерии, риккетсии sp. nr. bellii, связан с женской предвзятости в нашей лаборатории линии B. tabaci Ближний Восток Азия незначительные 1 (MEAM1)15,16. В одной линии B. tabaci MEAM1 лаборатории («MAC1, «собранные от Марикопа сельскохозяйственного центра), мы проверить ли риккетсии-инфицированных женщин (R+) оплодотворить больше яиц, чем неинфицированных женщин (R–).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: Убедитесь, что вся работа выполняется при комнатной температуре в хорошо проветриваемом помещении или под вытяжного шкафа. Все «капли» в этом протоколе определены как 5 – 20 мкл, в зависимости от предпочтений оператора.
1. Начальная настройка
- Разрешить женского белокрылки к разведению на чистые листья. Для откладки яиц Аренас примерами клип клетки или листья, вырезать под размер на агаре в чашке Петри. Сделайте покрываемых отверстие в клетке клип или Петри Обложка для вставки и удаления взрослых. Кроме того, быстро поместить сосуд собранных взрослых на льду и, затем, хранение их на лист. Ограничить время между откладки яиц и яичных фиксации до не более чем 60 мин, для обеспечения наблюдения за переход спермы в отцовской пронуклеусами в яйцах.
Примечание: Яйца, не удаляются из листьев может воспитываться до совершеннолетия для записи взрослых соотношения полов. - До или во время откладки яиц белокрылки Подготовьте микроскопа, очищая его с мылом и водой, сушки, ну, а затем растяжение кусок парафина фильм за один конец, убедившись, что поверхности пленки парафин не ломаются (рис. 1).
Примечание: Парафин фильм гидрофобных и полу opaque, позволяя жидкости в виде капель и яйца более легко увидеть.
2. Dechorionation
- С бокалом Пастер Пипетка, добавить капель раствор отбеливателя (0,83% гипохлорита натрия) в фильме парафина.
Примечание: Это проще для отслеживания яйца если только 2-3 яйца в каждой капле. Кроме того чтобы управлять числом большое яйцо, Соберите яйца в капель 1 x фосфат амортизированное saline (PBS).
ОСТОРОЖНОСТЬЮ: Отбеливатель коррозионные; Надевайте перчатки при обращении с отбеливателем и не вдыхать. - Удалите из листьев взрослых белокрылки.
- Поместите лист под микроскопом, чтобы ясно видеть яйца и самостоятельно собирать яйца и тщательно с тонкий зонд. Чтобы сделать зонд, вставьте штифт Надель minuten на 45° или в комфортабельный рабочий угол в кончик расплавленный пипетки (рис. 2).
- Передавать яйца отбеливатель или ПБС. При использовании ПБС, удалите 1 x PBS с бокалом Пастер однажды Пипетка все яйца собраны и, затем, добавить отбеливатель яйца.
Примечание: Когда собирать яйца, медленно поднимите яйцо из своей базы до тех пор, пока стебельков удаляется из листьев. Стебельков липкие, и яйца обычно будет придерживаться кончик зонда до тех пор, пока он погружается в отбеливателя.
Примечание: Рекомендуется использовать отдельный стекла, которую пипетки Пастера для всех реагентов, и дозаторы могут быть изменены с тепла, чтобы сузить советы и снизить риск случайного аспирационных белокрылки яйца. Чтобы предотвратить остатков и загрязнение, очистите пипетки с дейонизированной водой после каждого использования. - Подождите 10 минут. Если есть интерес в эмбриогенезе в яйцах старше 1 h, оставьте яйца в Отбеливатель для до 15 мин.
Примечание: Для яйца, которые до 1 ч старый 10 минут вполне достаточно.
3. Фиксация
Примечание: Эти шаги, взяты из Hymenopteran протокол17.
- Снимите отбеливатель (содержащие фрагменты Хорион) с стеклянной пипетки Пастера и выбросьте его. Добавьте капли уксусной кислоты кристаллизированной с бокалом Пастер Пипетка и ждать 3 мин.
ОСТОРОЖНОСТЬЮ: Продолжите этот шаг под вытяжного шкафа. Ледниковая укусная кислота коррозионные; носить защитные перчатки при обработке Ледниковая укусная кислота и не вдыхать, особенно в сочетании с остаточной отбеливатель. - Удаление Ледниковая укусная кислота с стеклянной пипетки Пастера и добавить капель раствора Кларка (3:1 абсолютного этанола: Ледниковая укусная кислота) с бокалом Пастер Пипетка. Подождите, пока большая часть решения испарится (или 10 мин макс).
- Добавьте яйца с стеклянной пипетки Пастера и ждать, пока большая часть этанола испарится (или 10 мин макс) капель на 70% спирте.
4. Окрашивание
- Удалите любые остаточные этанола с стеклянной пипетки Пастера и добавить капель ПБС яйца с стеклянной пипетки Пастера получить pH рядом 7.0. Установите микроскопа в камере влажности для предотвращения высыхания, например, в поле Подсказка пустой пипетку с влажной салфеткой внутри (рис. 3). Подождите, по крайней мере 30 мин.
Примечание: Это лучший момент, если необходима пауза, пока влажность палата может предотвратить усыхание. - Удаление ПБС с стеклянной пипетки Пастера и добавить капель 0,1 мкг/мл DAPI, флуоресцентные пятна ДНК, с бокалом Пастер Пипетка. Установите микроскопа в камере темно влажность и подождите по меньшей мере 15 мин.
ОСТОРОЖНОСТЬЮ: DAPI вызывает раздражение, так что справишься с перчатками.
5. мытье
- Удаление DAPI с стеклянной пипетки Пастера.
- Добавить капель 1 x TBST (5 x раствор из 30г Tris, 43.8 г NaCl, 5 мл Полисорбат 20 и 1,0 г НАН3 [pH 7.5] и доведены до 1 Л с ПЦР класс воды) на яйца с бокалом Пастер Пипетка. Подождите 5 минут перед удалением 1 x TBST с бокалом пипетка Пастера. Повторите этот шаг 2 раза.
6. Монтаж
- После окончательной стирки тщательно Пипетка все яйца из парафина фильма на чистой части микроскопа. Удалите избыток 1 x TBST; Затем, добавить 20 мкл монтажа СМИ (80% глицерина и 20% 1 x TBST с 2% n пропил эпигаллокатехина) и место слайда чистого покрытия поверх яйца.
- Для длительного хранения уплотнение крышки слайд с четкой лак и, затем, хранить слайд в темноте на 2 ° C или сразу его просмотра под микроскопом флуоресцентные.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Чтобы проверить ли риккетсии влияет на скорость Оплодотворение самок MEAM1 B. tabaci , мы воспитал риккетсии-инфицированных (R+) или неинфицированных (R–) B. tabaci вигны растений (Vigna unguiculata) в отдельные клетки на 27 ° C, относительная влажность 70% и 16 h свет/8 h темные фотопериода. + R и R– , четвертый instar белокрылки были тщательно удалены из листьев и изолированных в 200 мкл газа трубы. Когда появился взрослых, они были собраны в группы по 50% женщин и переданы чистые листья в чашках Петри (n = ~50-100/leaf) для 4 дней спаривания. Затем группы приблизительно 20 женщин и несколько мужчин были переведены в диск чистый лист (один для R– взрослых, один для взрослых R+ ) в 35 мм Петри покоится на 1% агар. Петри блюдо крышкой были вырезаны и тонкой ткани сетка используется для сдерживания также предотвратить превышение конденсации. После примерно 45 минут все взрослые были удалены, некоторые из яйца были собраны для определения коэффициента оплодотворения, и яйца, которые не были собраны воспитывались до совершеннолетия для вычисления взрослых соотношение полов. Один из когорты за один день, для+ R и R– белокрылки, был определен как блок. Там были семь блоков для расчета ставки оплодотворение или первичной соотношение полов, хотя существует шесть блоков для расчета взрослых соотношение полов, как там были не достаточно оставшихся яиц от одного блока к заднему до совершеннолетия. Обобщенной линейной модели был использован в Статистический пакет R для определения ли оплодотворение ставок или Взрослый секс соотношения значительно повлияла риккетсии инфекции и/или блока. Ответ переменные были доля оплодотворенные яйца/все яйца, или доля взрослых женщин/всех взрослых, соответственно, хотя пояснительные переменные были блок и риккетсии ВИЧ-статуса.
Яйцо dechorionation следуют DAPI ядерной пятнать допускается недвусмысленные назначение оплодотворение (и пола эмбриона) когда наблюдается с флуоресцентный микроскоп (рис. 4). Для этого эксперимента 90 яиц от R–MEAM1B. tabaci самок и забили 82 яйца самки MEAM1B. tabaci R+. Что касается яйца, выращенные в зрелом возрасте забили 95 R+ взрослых и 60 R– . Хотя женщины уклоном в взрослых секс соотношения показал последовательно в более ранних исследований15,18,19, в текущем исследовании, взрослых R+ соотношения полов (69% женщин, средний) были девушки предвзятым по сравнению с R – женщины (50% женщин, средний), но в соотношении полов в двух лечения не различались (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0,31; Рисунок 5). Основная соотношения полов R– (60% оплодотворенных яиц, средний) были девушки предвзятым по сравнению с R+ соотношения полов (44% оплодотворенных яиц, средний), но также не различались (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47), обеспечивая нет свидетельство для большей ставки оплодотворения самки R+ (рис. 5). Блок также не имеют значительное влияние на основной (χ2 = 0.29, df = 1, p = 0,59) или взрослого (χ2 = 1.20, df = 1, p = 0,27) соотношение полов.
Рисунок 1: Фото микроскопа с парафином фильм и капель отбеливателя. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: пример зонда, фигурный с тепла, от кончика пипетки и ПИН-код minuten nadeln. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: пример камеры влажности, вылепленный из поле Подсказка пустым пипетки и влажной салфеткой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: Флуоресцентный Микроскоп изображения B. tabaci яиц. () MEAM1 B. tabaci оплодотворенной, зарождающегося женская яйцеклетка. (b) Unfertilized, зарождающегося мужской яйцо. Яйца были исправлены в менее чем 1 ч после откладки яиц и витражи с DAPI. База каждое яйцо флуоресцирующих из-за бактериальной ДНК (Portiera, Hamiltonellaи, возможно, риккетсии) в ячейке прародителя bacteriome, который включен в положил яйцо20,21. В каждом яйце женский пронуклеусами находится недалеко от центра яйцо, и в женская яйцеклетка только, сперма видна как полоса ярко вблизи верхушки яйцо возле предположительно микропиле autofluorescing. Изображения являются скриншоты взяты из Z-стека генерируется видео, производимые лазерного сканирования конфокальный инвертированным микроскопом. Масштаб баров были оценены из предыдущих изображений микроскопа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: Первичной и взрослых секс соотношения риккетсии-инфицированных и неинфицированных tabaci б. Коробки и столбик участки основного соотношения полов (процент оплодотворенные яйца, или процент женщин зигот) в черном, по сравнению с Взрослый соотношение полов (в процентах от взрослых женщин) в Грей, риккетсии-(R+) инфицированных и неинфицированных (R -) B. tabaci MEAM1, «MAC1» генетические линии. Коробки и столбик участки показывают средний средней линии, означает как знак плюс, а верхней и нижней квартили как линии, которые делают концы коробки, и диапазон представлена во внешние линии, простирающейся от коробки. Для яиц R– забил: n = 90; для яиц R+ забил: n = 82. Для взрослых R– насчитал: n = 60; для взрослых R+ насчитал: n = 95. В материально анализ первичных соотношения полов (доля оплодотворенных яиц) выступал в Статистический пакет R, никаких значительных эффектов были найдены для блока (n = 7, χ2 = 0.29, df = 1, p = 0,59) или для риккетсии инфекции (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47). Взрослый секс коэффициенты, как влиянием блок (n = 6) и риккетсии ВИЧ-статуса, были также проанализированы. Здесь также, никаких значительных эффектов были найдены для блока (χ2 = 1.20, df = 1, p = 0,27) или риккетсии инфекции (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0,31). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот протокол является первым, чтобы захватить оплодотворение ставки или первичной соотношение полов B. tabaci. Задача настоящего Протокола является, что она требует исследователей научиться обрабатывать белокрылки яйца быстро, обеспечить не более, чем 1 час прошло с тех пор яйца были oviposited до тех пор, пока они являются фиксированными. Во время предварительных экспериментов яйца, которые были исправлены в 3 ч или более postoviposition были слишком стар, чтобы наблюдать за оплодотворение, syngamy имели место и митотического дивизий были ведется. Между 1-3 ч pronuclei взял на круглее формы. Хотя раннее присутствие двух ядер указывает оплодотворенное яйцо, немного позже, приложение двух ядер в рамках подготовки к syngamycan, как представляется, одно ядро и позже снова, эти два продукта первого дивизиона митотическая находятся в мужской и женской яйца. Таким образом различие между полами не ясно в этих более поздних моменты времени, и мы советуем ограничить интервал от откладки яиц до фиксации до 1 ч как меру консервативной. Это также сложно научиться быть нежным с яйца с каждой передачи жидкости, таким образом, чтобы они не придыханием случайно в пипетку. В то время просмотра яйца под микроскопом флуоресцентные несколько яиц может сломанной во время протокол, поэтому эти яйца не может быть сексуальны и считаются pronuclei и желток могут иметь бежал. В противном случае когда оператор становится комфортно с этими шагами, протокол может быть завершена удобно в течение 3 ч, как ночь фиксации шаг не требуется. Он также является гибким в том, что он может быть изменен пятно старые яйца, для тех исследователей, заинтересованных в захвате развития.
Применение настоящего протокола включает в себя исследования о распределении секса. Хотя многие десятки исследований биологии белокрылки сообщили взрослых соотношения полов в различных средах, Взрослый секс соотношения confound распределение секс матери с развития секс-смертность нимф и сделать невозможным определить причину любой формы соотношение полов. Цитогенетический метод, описанный здесь допускает возможность понимания белокрылки шаблонов выделения секс вообще. Во время большой дисперсионные населения B. tabaci и других вредителей, таких как парниковых белокрылки Trialeurodes vaporariorum, может быть предсказано приведет к 1:1 соотношение, как часто выставляются в лабораторных параметров22, 23, мы также предсказывают, что репродуктивные вмешательства, endosymbionts и потенциально хост завод качество может повлиять первичной соотношения полов. Что эти же факторы также могут оказывать влияние конкретного пола смертности во время разработки, систематически наклон соотношение полов оценкам, подчеркивает необходимость прямого измерения основного соотношения полов.
Хотя женский предвзятости, связанные с инфекцией риккетсии последовательно обнаружено в генетической линии «MAC1»15,18,19, Взрослый соотношения полов не были значительно женского предвзятым в текущем исследовании. Основной секс, коэффициенты, наблюдается с техникой цитогенетика не были значительно предвзятым либо. Мы слившихся первичной и взрослых секс соотношения B. tabaci самок на только 1 день, в начале откладки яиц схватки, когда женщины были 4 до 5 дней, так что учился в соотношении полов не могут представлены соотношения полов, которые мы наблюдали в течение длительных периодов времени. Тем не менее, метод сделал возможным определить скорость оплодотворение или первичной соотношение полов и, в данном случае, показали соответствие между первичной и взрослых секс соотношения.
Определение оплодотворение также может быть ценным в случаях, в которых исследователи может потребоваться определить тип репродуктивной изоляции среди населения белокрылки. Хотя это был вопрос некоторые споры по12,24,25, сейчас общепринято что имя B. tabaci относится к десятки загадочные видов, с представленные как генетической дивергенции и пересечение испытания, в которых несколько самок, производится12,25. В этих исследованиях было бы интересно узнать, где происходит изоляции. Передается ли спермы и неспецифический спермы оплодотворить яйца, или попытка вязки неудачной? Относительно определения первичной соотношение полов этот метод можно определить ли первичный соотношение полов находится под влиянием endosymbionts, эгоистичным генетические элементы или один из многих других факторов, включая сородичами, конкуренты, хищников, гемоцитов, патогенные микроорганизмы, растения-хозяина или абиотические воздействия.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Это исследование финансировалось NSF Грант (DEB-1020460) для М.Ш.Х и USDA AFRI Грант (2010-03752) для М.Ш.Х Авторы благодарят Brennan зер для окрашивания белокрылки яйца с большим мастерством и Дзэн. Авторы благодарят Майка Рихль за разрешение использовать его флуоресцентный микроскоп для изображений. Авторы благодарят Сюзанн Келли и Марко Gebiola за яйца изображений. Авторы благодарят за помощь в решающие моменты в ходе экспериментов Сюзанн Келли и Джимми Конвей.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1x PBS | Any | ||
| 1x TBST | Any | 5x solution made from 30 g Tris, 43.8 g NaCl, 5 mL Tween-20 and 1.0 g NaN3 pH 7.5, and brought to 1 L with PCR grade water | |
| Bleach | Clorox | Any household bleach will work as long as it can be diluted to 0.83% Sodium hypochlorite | |
| Clear nail polish | Any | ||
| DAPI dilactate | Santa Cruz Biotechnology | sc300415 | |
| Ethanol | Any | Dilute to 70% EtOH | |
| Fluorescent microscope | Nikon | Nikon Eclipse 50i was used in this experiment, but any fluorescent microscope with 340/380 nm excitation filter and at least 4-10x magnification can be used | |
| Glacial acetic acid | Mallinckrodt | UN2789 | |
| Glycerol | Any | ||
| Microscope | Wild | A Wild M5A microscope was used for this experiment, but any microscope where the operator can clearly see the whitefly eggs can be used | |
| Microscope slide covers | Any | Methods are for 18 mm x 18 mm sized slide covers. More mounting media will need to be added for larger slide covers. | |
| Microscope slides | Any | ||
| Minuten nadel pins | BioQuip | 1208SA | Minuten nadel pins are optional for fashioning as probes with pipette tips |
| NaCl | Any | ||
| NaN3 | Any | ||
| n-propyl-gallate | Sigma/Santa Cruz Biotechnology | P3130/sc-250794 | |
| Parafilm | Bemis | ||
| Pasteur pipettes | Fisher Scientific | 13-678-20A | Fisherbrand Disposable Borosilicate glass Pasteur pipettes 5.75 in. A Bunsen burner may also be needed if operator would like to lengthen and narrow pipettes |
| PCR grade water | Any | ||
| Pipette tips | Any | Pipette tips are optional for fashioning as probes with minuten nadel pins | |
| Small dropper bulb | Any | Must fit on Pasteur pipette | |
| Tris | Any | ||
| Tween-20 | Any |
References
- Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. The Theory of Sex Allocation. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).
- Godfray, H. C. J. Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).
- Bourke, A. F. G., Franks, N. R. Social Evolution in Ants. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1995).
- Pascal, S., Callejas, C. Intra- and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) from Spain. Bulletin of Entomological Research. 94 (4), 369-375 (2004).
- Liu, S. -S., et al. Asymmetric mating interactions drive widespread invasion and displacement in a whitefly. Science. 318 (5857), 1769-1772 (2007).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Mate discrimination in invasive whitefly species. Journal of Insect Behavior. 23 (5), 364-380 (2010).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Plasticity in mating behaviour drives asymmetric reproductive interference in whiteflies. Animal Behaviour. 79 (3), 579-587 (2010).
- Tsueda, H., Tsuchida, K. Reproductive differences between Q and B whiteflies, Bemisia tabaci, on three host plants and negative interactions in mixed cohorts. Entomologia Experimentalis et Applicata. 141, 197-207 (2011).
- Wang, P., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Roles of mating behavioural interactions and life history traits in the competition between alien and indigenous whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 102 (4), 395-405 (2012).
- Sun, D. -B., Li, J., Liu, Y. -Q., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Effects of reproductive interference on the competitive displacement between two invasive whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 104 (3), 334-346 (2014).
- Liu, S. -S., Colvin, J., De Barro, P. J. Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: how many species are there? Journal of Integrative Agriculture. 11 (2), 176-186 (2012).
- Invasive Species Specialist Group. Global Invasive Species Database. , Available from: http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php (2018).
- Gilbertson, R. L., Batuman, O., Webster, C. G., Adkins, S. Role of the insect supervectors Bemisia tabaci and Frankliniella occidentalis in the emergence and global spread of plant viruses. Annual Review of Virology. 2 (1), 67-93 (2015).
- Giorgini, M., et al. Rickettsia symbionts cause parthenogenetic reproduction in the parasitoid wasp Pingala soemius (Hymenoptera: Eulophidae). Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2589-2599 (2010).
- Himler, A. G., et al. Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias. Science. 332 (6026), 254-256 (2011).
- Cass, B. N., et al. Dynamics of the endosymbiont Rickettsia in an insect pest. Microbial Ecology. 70 (1), 287-297 (2015).
- Vavre, F., de Jong, J. H., Stouthamer, R. Cytogenetic mechanism and genetic consequences of thelytoky in the wasp Trichogramma cacoeciae. Heredity. 93 (6), 592-596 (2004).
- Cass, B. N., et al. Conditional fitness benefits of the Rickettsia bacterial symbiont in an insect pest. Oecologia. 180 (1), 169-179 (2016).
- Hunter, M. S., Asiimwe, P., Himler, A. G., Kelly, S. E. Host nuclear genotype influences phenotype of a conditional mutualist symbiont. Journal of Evolutionary Biology. 30, 141-149 (2017).
- Gottlieb, Y., et al. Inherited intracellular ecosystem: symbiotic bacteria share bacteriocytes in whiteflies. FASEB Journal. 22 (7), 2591-2599 (2008).
- Luan, J., Sun, X., Fei, Z., Douglas, A. E. Maternal inheritance of a single somatic animal cell displayed by the bacteriocyte in the whitefly Bemisia tabaci. Current Biology. 28 (3), 459-465 (2018).
- Guo, J. -Y., Cong, L., Wan, F. -H. Multiple generation effects of high temperature on the development and fecundity of Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae) biotype B. Insect Science. 20 (4), 541-549 (2013).
- Cui, X., Wan, F., Xie, M., Liu, T. Effects of heat shock on survival and reproduction of two whitefly species, Trialeurodes vaporariorum and Bemisia tabaci biotype B. Journal of Insect Science. 8 (24), (2008).
- Boykin, L. M. Bemisia tabaci nomenclature: Lessons learned. Pest Management Science. 70 (10), 1454-1459 (2014).
- Qin, L., Pan, L. -L., Liu, S. -S. Further insight into reproductive incompatibility between putative cryptic species of the Bemisia tabaci whitefly complex. Insect Science. 23 (2), 215-224 (2016).
