細胞遺伝学的手法を用いたタバココナジラミの卵の受精率を決定します。
Summary
4 ′、6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 受精率を決定して haplodiploid 侵襲的病害虫タバココナジラミの一次性比を使用して単純な細胞遺伝学的手法を提案します。
Abstract
Sap を吸うコナジラミのいくつかの種は世界の最も有害な地上の害虫の一部を作物損傷、植物ウイルスのベクトルの彼らのためです。異なる環境でこれらの種の生物学の多くの研究にもかかわらず、キーの生活史パラメーター、子孫の性の比率はほとんど注目されて、まだ個体群動態を予測することが重要です。タバココナジラミの一次性比 (産卵性比) ことが報告されているが、この haplodiploid の昆虫の卵の受精率を決定することによって見つけることができます。このテクニックは、漂白剤、一連の固定の手順、一般的な DNA 蛍光染色 DAPI (4 ‘、6-diamidino-2-phenylindole、DNA 結合色素)、女性と男性の前核にバインドするアプリケーションと卵の dechorionation を伴います。ここでは、技法と共生細菌、リケッチアの sp nr かどうかをテストするのには、そのアプリケーションの一例を提案します。bellii、 B. タバココナジラミの一次性比に影響。このメソッドには、コナジラミ、個体群の研究、ある特定の環境の刺激のセックス割り当てが存在する場合を決定するを助けるかもしれない。
Introduction
性配分に関する研究または男性および女性の子孫の相対的な投資行動生態1,2,3の礎石です。行動の適応モデルをテストするため、その力に加え生物のセックス割り当て戦略を知ることがその個体群の動態のモデルを向上します。多くの種で性配分は母親によって制御されます。セックスの割り当てを調べるには、産卵の時に一次性比や女性の割合を決定することが重要です。羽化で性比が性配分への手がかりを提供しますが、男性と女性の稚魚の間発達死亡率差分が大人の性比を大幅に偏る一般的可能性があります。ハチ、アリ、ハチやハチを含む昆虫の順序のいくつかの種の細胞遺伝学的アッセイ、遺伝的 DNA を表示する胚の汚損と一次性比が決定しました。ハエは haplodiploid なので初期オス卵は半数体と初期女性卵は二倍体で、男性と女性の両方前核 (2 n) が含まれている間のみの雌性前核 (n) が含まれています。コナジラミ科、sap 供給族 (半翅目) カメムシ、コナジラミとして知られているがまた haplodiploid、これらの昆虫で主の性比を見つける確立されたアッセイされてはいません。これはおそらく、意外なこの家族にいくつかの国際的な深刻な害虫の研究とコナジラミ4,5,6,7 の競争の相互作用性比の重要性強度を与えられました。 ,8,9,10と個体群動態の一般に。Haplodiploid 昆虫でも、性の比率にとらわれない選択受精と環境2変化する不安定性比の可能性を可能にするセックス定量システム。サツマイモ コナジラミと総称コナジラミの種複合体の主要な性比を把握する手法の紹介B. タバココナジラミ。この 1 つの種名以上 28 種世界11を包含する、最も有害なグローバル侵襲害虫12,13のいくつかが含まれています。B. タバココナジラミと他のコナジラミ科セックス割り当てパターンを決定するためのこの技術の応用は、温度、植物、細胞内共生細菌植物/コナジラミなどの変数のより厳密な調査になります病原体は、コナジラミ一次性比とコナジラミ個体群動態に影響を与える可能性があります。
B. タバココナジラミのための同等の卵染色テクニックと意識しております。プロトコルは、一晩固定ステップを省略し、したがって、3 h 以内に完了することができます他の昆虫の卵14用染色法と比較すると便利です。としてアプリケーション、細胞内共生細菌、リケッチアの sp nr の一例。bellii、 B. タバココナジラミ中東アジア マイナー 1 (MEAM1)15,16の研究室ライン女性のバイアスに関連付けられます。B. タバココナジラミMEAM1 研究室に 1 行で (「MAC1、「マリコパ農業センターから収集) 我々 はテストどうかリケッチアの感染 (R+) 女性 (R–) の感染していない女性よりより多くの卵を受精させます。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコル受精率またはB. のタバココナジラミの一次性比をキャプチャする最初のです。このプロトコルへの挑戦はできない以上 1 h は、彼らが修正されるまで、卵が頭から経過したことを確認のコナジラミ卵を迅速に処理する方法について説明する研究者です。予備実験の間に 3 h またはより多くの postoviposition で固定した卵が配偶子が発生するいたし、の分裂が進められていた?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
細胞刺戟する NSF grant (デブ 1020460) 細胞刺戟して米国農務省アフリカ グラント (2010-03752) によって資金が供給されたこの研究著者は、多くのスキルと禅コナジラミ卵の汚損のためブレナン ジョンゼをありがとうございます。著者は、マイク Riehle が彼の蛍光顕微鏡イメージングのための使用を許可することをありがちましょう。著者らは、卵画像スザンヌ ケリーとマルコ Gebiola をありがとうございます。著者は、実験中に重要な瞬間を助けるのためのスザンヌ ケリーとジミー コンウェイをありがとうございます。
Materials
| 1XPBS | Any | ||
| 1XTBST | Any | 5X solution made from 30g Tris, 43.8g NaCl, 5 mL Tween-20 and 1.0g NaN3 pH7.5, and brought to 1L with PCR grade water | |
| Bleach | Clorox | Any household bleach will work as long as it can be diluted to 0.83% Sodium hypochlorite | |
| Clear nail polish | Any | ||
| DAPI dilactate | Santa Cruz Biotechnology | sc300415 | |
| Ethanol | Any | Dilute to 70% EtOH | |
| Fluorescent microscope | Nikon | Nikon Eclipse 50i was used in this experiment, but any fluorescent microscope with 340/380 nm excitation filter and at least 4-10X magnification can be used | |
| Glacial acetic acid | Mallinckrodt | UN2789 | |
| Glycerol | Any | ||
| Microscope | Wild | A Wild M5A microscope was used for this experiment, but any microscope where the operator can clearly see the whitefly eggs can be used | |
| Microscope slide covers | Any | Methods are for 18mm x 18mm sized slide covers. More mounting media will need to be added for larger slide covers. | |
| Microscope slides | Any | ||
| Minuten nadel pins | BioQuip | 1208SA | Minuten nadel pins are optional for fashioning as probes with pipette tips |
| NaCl | Any | ||
| NaN3 | Any | ||
| n-propyl-gallate | Sigma/Santa Cruz Biotechnology | P3130/sc-250794 | |
| Parafilm | Bemis | ||
| Pasteur pipettes | Fisher Scientific | 13-678-20A | Fisherbrand Disposable Borosilicate glass Pasteur pipettes 5.75 in. A Bunsen burner may also be needed if operator would like to lengthen and narrow pipettes |
| PCR grade water | Any | ||
| Pipette tips | Any | Pipette tips are optional for fashioning as probes with minuten nadel pins | |
| Small dropper bulb | Any | Must fit on Pasteur pipette | |
| Tris | Any | ||
| Tween-20 | Any |
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