Denne protokol præsenterer en standardiseret metode til at dyrke VX2-celler i kulturen og til at skabe en ortotopisk VX2-model af endometriecancer med retroperitoneal lymfeknude metastaser hos kaniner. Ortotopiske endometriale Cancer modeller er vigtige for den prækliniske undersøgelse af nye billedbehandlings metoder til diagnosticering af lymfeknudemetastaser.
Endometriecancer er den mest almindelige gynækolog malignitet i Nordamerika og forekomsten er stigende på verdensplan. Behandling består af kirurgi med eller uden adjuverende behandling afhængigt af lymfeknude involvering som bestemt af lymfadadenektomi. Lymfadadenektomi er en morbid procedure, som ikke har vist sig at have en terapeutisk fordel hos mange patienter, og dermed en ny metode til at diagnosticere lymfeknude metastaser er påkrævet. For at teste nye billedbehandlings midler er der behov for en pålidelig model af endometriecancer med retroperitoneal lymfeknude metastaser. Den VX2-endometriale Cancer model er blevet beskrevet hyppigt i litteraturen; der er dog betydelige forskelle med hensyn til metoden for etablering af modeller. Endvidere har ingen undersøgelser rapporteret om brugen af dyrkede VX2-celler til at skabe denne model, da kun celler, der er formeret in vivo, tidligere er blevet anvendt. Heri, præsenterer vi en standardiseret kirurgisk metode og postoperativ overvågning metode til etablering af VX2-endometriecancer model og rapport om den første anvendelse af dyrkede VX2-celler til at skabe denne model.
Endometriecancer, eller kræft i slimhinden i livmoderen, er den næstmest almindelige gynækolog malignitet på verdensplan og den mest almindelige malignitet i udviklede nationer1. Forekomsten af endometriecancer er steget støt og stiger med 2,3% pr. år mellem 2005-2013 med en tilsvarende stigning i dødelighed på 2,2%1,2,3. Diagnosen lymfeknude metastaser er altafgørende, da tilstedeværelsen af positive lymfeknuder er en stærk negativ indikator for overlevelse4,5,6,7 og kan vejlede administrationen af adjuverende behandling8,9,10,11,12,13. Lymfeknude metastaser diagnosticeres i øjeblikket ved kirurgisk fjernelse af lymfevævet, der ligger over de store blodkar i bækkenet og maven. Denne procedure, kendt som en lymfadektomi, er kontroversiel på grund af modstridende overlevelse data fra to store forsøg14,15,16,17,18 og den kendte risiko for intra-operative15,19,20 og post-operative sygelighed21,22,23. Da nuværende ikke-invasive billedbehandlings metoder ikke har den nødvendige følsomhed og specificitet til at erstatte lymfeknude dissektion24, har der været et skub til at udvikle nye diagnostiske Imaging teknikker. For at afprøve disse nye teknikker i en præklinisk indstilling er en pålidelig model af endometriecancer med retroperitoneal lymfeknude metastaser påkrævet.
Kanin VX2-tumor model er en veletableret model, som har været anvendt i udstrakt grad at studere flere menneskelige solide organ tumorer25 herunder lunge26, hoved og nakke27,28, leveren29, nyre30, knogle31,32, hjernen33, bugspytkirtlen34 oguterus 35,36,37. Den VX2-model blev oprindeligt udviklet i 1940 af Kidd og Rous38 ved succesfuld Trans plantering af en cottontail kanin papilloma virus opdaget af shope i 193339. Siden den tid, VX2-model er blevet opretholdt in vivo, kræver seriel passage i quadriceps muskel af hvide New Zealand kaniner40. Mere for nylig dog, flere grupper har med succes vokset VX2-celler in vitro40,41,42 og påvist den bevarede tumorigenecity af den dyrkede cellelinje31, 42af43. VX2-tumorer er histologisk defineret som Anaplastisk planocellulært karcinomer44 og indeholder glandulære funktioner, der ligner adenokarcinom26. Tumorer er karakteriseret ved nem implantation, hurtig vækst og hyper-vaskularisering44,45 og pålideligt metastasize, mest almindeligt til regionale og fjerne lymfeknuder45. Ligheder i uterin vaskulær og lymfe anatomi46 samt den ortotopiske vækst site sikre, at det metastatiske mønster af kanin VX2-karcinom efterligner den humane endometriecancer, hvilket gør VX2-model en pålidelig model for at studere Human metastatisk sygdom. Desuden tyder histologiske egenskaber såsom unormal mikrovaskulær spredning47 , samt immunologisk48 og genetiske ligheder49,50 mellem mennesker og kaniner på, at tumoren mikromiljø kan afspejle den humane endometriecancer.
Flere grupper har rapporteret om brugen af VX2-til at skabe en model af endometriecancer med retroperitoneale metastaser med en høj rapporterede hastighed af succes36,51,52; der findes dog betydelige variationer i den nuværende litteratur med hensyn til model skabelens metode. Cellesuspension doser så lavt som 4 x 105 celler/uterine horn51 og så højt som 5 x 109 celler/uterine horn37,53 er blevet rapporteret uden standard konsensus om den krævede VX2-cellulære dosis. Samt, en række inokulering metoder er blevet rapporteret herunder mikro-kirurgisk implantation af tumor i uterin myometrium36, injektion af VX2-cellesuspension37,44,52 , 53 og i nogle tilfælde tilsætning af uterin horn suturering før innoculation52. Endelig har ingen grupper rapporteret brugen af dyrkede VX2-celler til at skabe denne model. Således formålet med denne undersøgelse er at demonstrere en vellykket standardiseret metode til VX2-model skabelse og til at rapportere den første anvendelse af dyrkede VX2-celler til at skabe en model af endometriecancer med retroperitoneale metastaser i en kanin.
Heri, vi har rapporteret en standardiseret kirurgisk metode til etablering af en VX2-endometriecancer model og rapporterede om den første brug af dyrkede VX2-celler til at skabe denne model. Tumoren tager sats på 75% er lavere end 100% procentsats tidligere rapporteret i litteraturen35,37,53,56; men THW 90% af patologisk bekræftede lymfeknuder metastaser er i overensstemmelse med tidligere u…
The authors have nothing to disclose.
Denne undersøgelse blev finansieret af Terry Fox Research Institute (PPG # 1075), det canadiske Institut for sundhedsforskning (Foundation Grant #154326), den canadiske Cancer Society Research Institute (704718), Natural Sciences og Engineering Research Council of Canada, Сanada Foundation for innovation og prinsesse Margaret Cancer Foundation.
Jeg vil gerne takke Dr. Marguerite Akens for at give de indledende VX2-celler til etablering af den oprindelige VX2-model og de frosne VX2-tumorblokke. Jeg vil gerne takke Marco DiGrappa for at hjælpe med at udføre indledende VX2-cellekultur eksperimenter og Lili Ding for at hjælpe med VX2-cellekultur.
11-blade scalpel, Sterile, Disposible | Aspen Surgical (VWR) | 80094-086 | |
22-gague ear vein catheter | CDMV | 14332 | |
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon | Falcon | 352350 | |
Acepromazine (Atravet) | CDMV | 1047 | |
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) | CDMV | 4363 | |
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) | UHN Stores | 457955 | |
Buprenorphine | McGill University | ||
Cefazolin | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Chlorhexidine solution | CDMV | 119872 | |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes | Corning | 354450 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates | Corning | 354408 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates | Corning | 354400 | brand not important |
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL | Corning | 354234 | |
DMEM/HAM F12 1:1 | Life Technologies | 11320 | brand not important |
DMSO | Caledon Lab Chem | 1/10/4100 | |
Enrofloxacin (Baytril injectable) | CDMV | 11242 | |
Falcon Tube | Corning Centri-Star | 430828 | |
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml | Life Technologies | 12483020 | brand/source not important |
Isoflurane | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Isohexol contrast | GE Healthcare | 407141210 | |
Meloxicam (Metacam 0.5%) | CDMV | 104674 | |
Normal Saline | House Brand (UofT Medstore) | 1011 | |
PBS | Multicell or Sigma | 331-010-CL or D8537-500mL | |
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) | Corning-Cellgro | CA45000-652 | |
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) | T.C.M.F (Dr Bristow) | 28-Jan-11 | |
Surgical Glue (Tissue Adhesive) | 3M Vetbond | 14695B | |
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade | Sigma | T-6567-5X20UG | |
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml | Wisent Inc | 325-542-EL | brand not important |