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Cancer Research

एक Orthotopic एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल Retroperitoneal Lymphadenopathy के साथ Vivo Propagated और संस्कृति VX2 कोशिकाओं में से बनाया

Published: September 12, 2019
doi:
10.3791/59340
, , , , , , , , ,
1Institute of Medical Science,University of Toronto, 2Department of Obstetrics and Gynecology,University of Toronto, 3Guided Therapeutics Laboratory, TECHNA Institute,University Health Network, 4Department of Pathology, Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 5Department of Medical Biophysics,University of Toronto, 6Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 7Techna Institute,University Health Network, 8Department of Surgery,University of Toronto, 9Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery,University of Toronto, 10Division of Gynecologic Oncology, University of Toronto /Princess Margaret Cancer Center,University Health Network, 11Princess Margaret Cancer Center,University Health Network

Summary

इस प्रोटोकॉल संस्कृति में VX2 कोशिकाओं को विकसित करने के लिए और खरगोशों में retroperitoneal लिम्फ नोड metastases के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर के एक orthotopic VX2 मॉडल बनाने के लिए एक मानकीकृत विधि प्रस्तुत करता है। ऑर्थोटोपिक एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के निदान के लिए उपन्यास इमेजिंग तौर तरीकों के पूर्व नैदानिक अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण हैं।

Abstract

एंडोमेट्रियल कैंसर उत्तरी अमेरिका में सबसे आम gynecologic द्रोह है और घटना दुनिया भर में बढ़ रहा है. उपचार के साथ या के बिना सहायक चिकित्सा के होते हैं लिम्फ नोड भागीदारी के आधार पर के रूप में लिम्फैडेनेक्टॉमी द्वारा निर्धारित. लिम्फैडेनेक्टॉमी एक रुग्ण प्रक्रिया है, जो कई रोगियों में एक चिकित्सीय लाभ के लिए नहीं दिखाया गया है, और इस प्रकार लिम्फ नोड मेटास्टेसिस का निदान करने के लिए एक नई विधि की आवश्यकता है। उपन्यास इमेजिंग एजेंटों का परीक्षण करने के लिए, रेट्रोपेरिटोनियल लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है। VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल साहित्य में अक्सर वर्णित किया गया है; तथापि, मॉडल स्थापना की विधि के संबंध में महत्वपूर्ण भिन्नता मौजूद है। इसके अलावा, कोई अध्ययन सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के उपयोग पर रिपोर्ट किया है इस मॉडल बनाने के रूप में केवल विवो में प्रचारित कोशिकाओं पहले इस्तेमाल किया गया है. इसमें, हम VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल की स्थापना के लिए एक मानकीकृत शल्य चिकित्सा विधि और बाद ऑपरेटिव निगरानी विधि पेश करते हैं और इस मॉडल को बनाने के लिए सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग पर रिपोर्ट करते हैं।

Introduction

एंडोमेट्रियल कैंसर, या गर्भाशय की परत के कैंसर, दुनिया भर में दूसरा सबसे आम स्त्री रोग द्रोह और विकसित देशों में सबसे आम द्रोह1है। एंडोमेट्रियल कैंसर की घटनाओं में तेजी से वृद्धि हुई है, 2005-2013 के बीच प्रति वर्ष 2.3% की वृद्धि हुई है, जिसमें मृत्यु दर1,2,3में इसी 2.2% की वृद्धि हुई है . लिम्फ नोड मेटास्टेसिस का निदान सर्वोपरि है क्योंकि सकारात्मक लिम्फ नोड्स की उपस्थिति अस्तित्व के एक मजबूत नकारात्मक भविष्यवक्ताहै 4,5,6,7 और के प्रशासन मार्गदर्शन कर सकते हैं सहायक चिकित्सा8,9,10,11,12,13. लिम्फ नोड मेटास्टेसिस वर्तमान में श्रोणि और पेट में प्रमुख रक्त वाहिकाओं overlying लसीका ऊतक को शल्य चिकित्सा द्वारा निदान कर रहे हैं। यह प्रक्रिया, एक lymphadenectomy के रूप में जाना जाता है, दो बड़ेपरीक्षणोंसे परस्पर विरोधी अस्तित्व डेटा के कारण विवादास्पद है 14,15,16,17,18 और ज्ञात अन्तर-ऑपरेटिव15,19,20 और पोस्ट-ऑपरेटिव रूग्णता21,22,23काखतरा . के रूप में वर्तमान गैर इनवेसिव इमेजिंग रूपरेखा आवश्यक संवेदनशीलता और विशिष्टता लिम्फ नोड विच्छेदन24को बदलने के लिए नहीं है, वहाँ एक नई नैदानिक इमेजिंग तकनीक विकसित करने के लिए धक्का दिया गया है. एक पूर्व नैदानिक सेटिंग में इन उपन्यास तकनीकों का परीक्षण करने के लिए, retroperitoneal लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है।

खरगोश VX2 ट्यूमर मॉडल एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है जो बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है फेफड़ों सहित कई मानव ठोस अंग ट्यूमर25 का अध्ययन करने के लिए26, सिर और गर्दन27,28, जिगर29, गुर्दे30, हड्डी31,32, मस्तिष्क33, अग्न्याशय34 और गर्भाशय35,36,37. VX2 मॉडल मूल रूप से 193339में Shope द्वारा की खोज की एक कपास की पूंछ खरगोश पेपिलोमा वायरस को सफलतापूर्वक प्रत्यारोपण द्वारा किड और रूर38 द्वारा 1940 में विकसित किया गया था . उस समय के बाद से, VX2 मॉडल vivo में बनाए रखा गया है, सफेद न्यूजीलैंड खरगोश40के चतुष्क मांसपेशियों में सीरियल मार्ग की आवश्यकता होती है. हाल ही में हालांकि, कई समूहों को सफलतापूर्वक इन विट्रो40,41,42 में VX2 कोशिकाओं हो गया है और सुसंस्कृत सेल लाइन31के बनाए रखा tumorigencity का प्रदर्शन किया, 42,43. VX2 ट्यूमर हिस्टोलॉजिकल रूप से एनाप्लास्टिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा44 के रूप में परिभाषित किया गया है और ग्रंथियों की विशेषताएं होती हैं जो एडेनोकार्सीनोमा26के समान होती हैं। ट्यूमर प्रत्यारोपण की आसानी से विशेषता है, तेजी से विकास और अति संवहनी44,45 और मज़बूती से metastasize, सबसे अधिक क्षेत्रीय और दूर लिम्फ नोड्स45के लिए. गर्भाशय संवहनी और लसीका शरीर रचना विज्ञान में समानता46 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से orthotopic विकास साइट सुनिश्चित करें कि खरगोश VX2 कार्सिनोमा के metastatic पैटर्न मानव एंडोमेट्रियल कैंसर की नकल करता है, VX2 मॉडल मानव अध्ययन के लिए एक विश्वसनीय मॉडल बना मेटास्टैटिक रोग। इसके अलावा, असामान्य सूक्ष्मवाहिक प्रसार47 के रूप में इस तरह के हिस्टोलॉजिक सुविधाओं , साथ ही इम्यूनोलॉजिकल48 और आनुवंशिक समानताएं49,50 मनुष्यों और खरगोशों के बीच सुझाव है कि ट्यूमर सूक्ष्म पर्यावरण मानव एंडोमेट्रियल कैंसर की है कि प्रतिबिंबित कर सकते हैं.

कई समूहों VX2 के उपयोग पर सूचना दी है कि सफलता की एक उच्च रिपोर्ट दर के साथ retroperitoneal मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक मॉडल बनाने के लिए36,51,52; हालांकि, मॉडल निर्माण की विधि के संबंध में वर्तमान साहित्य के भीतर महत्वपूर्ण भिन्नता मौजूद है। सेल निलंबन खुराक के रूप में कम के रूप में 4 x 105 कोशिकाओं / गर्भाशय सींग51 और के रूप में उच्च के रूप में 5 x 109 कोशिकाओं / के रूप में अच्छी तरह से, टीका तरीकों की एक किस्म गर्भाशय मायोमेट्रियम36में ट्यूमर के सूक्ष्म शल्य चिकित्सा प्रत्यारोपण सहित सूचित किया गया है, VX2 सेल निलंबन37केइंजेक्शन ,44,52 , 53 और कुछ मामलों में, अहानिकर552से पहले गर्भाशय सींग का अतिरिक्त सेवन किया जाता है। अंत में, कोई समूह इस मॉडल को बनाने के लिए सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के उपयोग की सूचना दी है। इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य VX2 मॉडल निर्माण के एक सफल मानकीकृत विधि का प्रदर्शन करने के लिए और सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग की रिपोर्ट करने के लिए एक खरगोश में retroperitoneal metastases के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक मॉडल बनाने के लिए है.

Protocol

गहरी पेट की दीवार बंद: peritoneal चीरा के शीर्ष की पहचान और ऊतक संदंश के साथ peritoneum, रेक्टस मांसपेशियों और फासिया समझ. सभी पशु अध्ययन पशु संसाधन केंद्र (एआरसी) विश्वविद्यालय स्वास्थ्य नेटवर्क की अनुमोदित सुविधा?…

Representative Results

अट्ठाईस खरगोशों एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल के निर्माण के लिए इस्तेमाल किया गया. प्रयोग के समय खरगोशों का औसत वजन 2.83 किग्रा (2.71-3.58 किग्रा) था। गर्भाशय ट्यूमर सफलतापूर्वक 75% की एक समग्र मॉडल सफलता …

Discussion

इसमें, हम एक VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल की स्थापना के लिए एक मानकीकृत शल्य चिकित्सा विधि की सूचना दी है और सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग पर रिपोर्ट इस मॉडल बनाने के लिए. 75% की ट्यूमर ले दर साहित्य<sup class=…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस अध्ययन टेरी फॉक्स अनुसंधान संस्थान (PPG $ 1075), कनाडा स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (#154326 फाउंडेशन अनुदान), कनाडा कैंसर सोसायटी अनुसंधान संस्थान (704718), प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद द्वारा वित्त पोषित किया गया था, अभिनव और राजकुमारी मार्गरेट कैंसर फाउंडेशन के लिए ज़नाडा फाउंडेशन.

मैं प्रारंभिक VX2 मॉडल और जमे हुए VX2 ट्यूमर ब्लॉक की स्थापना के लिए प्रारंभिक VX2 कोशिकाओं को उपलब्ध कराने के लिए डॉ Margurite Akens शुक्रिया अदा करना चाहूँगा. मैं प्रारंभिक VX2 सेल संस्कृति प्रयोगों और Lili डिंग VX2 सेल संस्कृति के साथ मदद करने के लिए प्रदर्शन करने में मदद करने के लिए मार्को DiGrappa शुक्रिया अदा करना चाहते हैं.

Materials

11-blade scalpel, Sterile, Disposible Aspen Surgical (VWR) 80094-086
22-gague ear vein catheter CDMV 14332
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) Covidien 356718
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) Covidien 356718
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon Falcon 352350
Acepromazine (Atravet) CDMV 1047
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) CDMV 4363
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) UHN Stores 457955
Buprenorphine McGill University
Cefazolin UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Chlorhexidine solution CDMV 119872
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes Corning 354450 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates Corning 354408 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates Corning 354400 brand not important
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL Corning 354234
DMEM/HAM F12 1:1 Life Technologies 11320 brand not important
DMSO Caledon Lab Chem 1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injectable) CDMV 11242
Falcon Tube Corning Centri-Star 430828
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml Life Technologies 12483020 brand/source not important
Isoflurane UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Isohexol contrast GE Healthcare 407141210
Meloxicam (Metacam 0.5%) CDMV 104674
Normal Saline House Brand (UofT Medstore) 1011
PBS Multicell or Sigma 331-010-CL or D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) Corning-Cellgro CA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) T.C.M.F (Dr Bristow) 28-Jan-11
Surgical Glue (Tissue Adhesive) 3M Vetbond 14695B
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade Sigma T-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml Wisent Inc 325-542-EL brand not important
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Philp, L., Chan, H., Rouzbahman, M., Rostami, A., Ding, L., Bratman, S. V., Akens, M. K., Irish, J. C., Bernardini, M. Q., Zheng, G. An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells. J. Vis. Exp. (151), e59340, doi:10.3791/59340 (2019).
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