Denne protokollen presenterer en standardisert metode for å vokse VX2 celler i kultur og å skape en orthotopic VX2 modell av livmorkreft med retroperitoneal lymfe node metastaser i kaniner. Orthotopic livmorkreft modeller er viktig for pre-klinisk studie av romanen Imaging modaliteter for diagnostisering av lymfeknuter metastaser.
Livmorkreft er den vanligste Gynecologic kreft i Nord-Amerika og forekomsten er økende over hele verden. Behandling består av kirurgi med eller uten adjuvant behandling avhengig av lymfe node engasjement som bestemmes av lymfadenektomi. Lymfadenektomi er en sykelig prosedyre, som ikke har vist å ha en terapeutisk fordel hos mange pasienter, og dermed en ny metode for å diagnostisere lymfeknuter metastaser er nødvendig. For å teste romanen Imaging agenter, en pålitelig modell av livmorkreft med retroperitoneal lymfe node metastaser er nødvendig. Den VX2 livmorkreft modellen har blitt beskrevet ofte i litteraturen; Imidlertid finnes betydelig variasjon med hensyn til metoden for modellen etablering. Videre har ingen studier rapportert om bruk av kulturperler VX2 celler for å lage denne modellen som bare celler overført in vivo har vært tidligere brukt. Heri, presenterer vi en standardisert kirurgisk metode og post-operative overvåking metode for etablering av VX2 livmorkreft modell og rapport om den første bruken av kultivert VX2 celler for å lage denne modellen.
Livmorkreft, eller kreft i slimhinnen i livmoren, er den nest vanligste Gynecologic kreft verden og den vanligste kreft i utviklede land1. Forekomsten av livmorkreft har stadig økt, stiger med 2,3% per år mellom 2005-2013 med en tilsvarende 2,2% økning i dødelighet1,2,3. Diagnostisering av lymfeknuter metastaser er viktig som tilstedeværelsen av positive lymfeknuter er en sterk negativ indikasjon på overlevelse4,5,6,7 og kan veilede administrasjonen av adjuvant behandling8,9,10,11,12,13. Lymfeknuter metastaser er for tiden diagnostisert ved kirurgisk fjerne lymfesystemet overliggende de store blodkarene i bekkenet og magen. Denne prosedyren, kjent som en lymfadenektomi, er kontroversiell på grunn av motstridende overlevelses data fra to store forsøk14,15,16,17,18 og den kjente risiko for intra-operative15,19,20 og postoperativ sykelighet21,22,23. Som dagens ikke-invasiv Imaging modaliteter ikke har den nødvendige følsomhet og spesifisitet til å erstatte lymfeknuter disseksjon24, har det vært et push for å utvikle nye diagnostiske Imaging teknikker. For å teste disse romanen teknikker i en pre-klinisk setting, en pålitelig modell av livmorkreft med retroperitoneal lymfe node metastaser er nødvendig.
The Rabbit VX2 tumor modellen er en veletablert modell som har blitt brukt i stor utstrekning for å studere flere menneskelige solide organsvulster 25 inkludert lunge26, hode og nakke27,28, lever29, nyre30, Bone31,32, Brain33, bukspyttkjertel34 oglivmor 35,36,37. Det VX2 modell var opprinnelig bebygget inne 1940 av Kidd og Rous38 av med hell transplantere en smukken kanin papilloma virus oppdaget av Shope inne 193339. Siden det tid, det VX2 modell er blitt holdt inne Vivo, behøver føljetong passasje inne det quadriceps muskelen av hvit New Zealand kanin40. Flere nylig men flere grupper har blitt dyrket VX2 celler in vitro40,41,42 og demonstrerte beholdt tumorigenecity av kultivert cellelinje31, 42,43. VX2 svulster er histologisk definert som anaplastisk plateepitel celle kreftsvulster44 og inneholder kjertel funksjoner som ligne adenokarsinom26. Svulster kjennetegnes ved enkel implantation, rask vekst og Hyper-vascularity44,45 og pålitelig metastase, oftest til regionale og fjerne lymfeknuter45. Likheter i livmor vaskulær og lymfatisk anatomi46 samt orthotopic vekst området sikre at metastatisk mønster av kanin VX2 kreft etterligner at menneskets livmorkreft, noe som gjør VX2 modellen en pålitelig modell for å studere menneskelig metastatisk sykdom. Videre histologic funksjoner som unormal mikrovaskulær spredning47 , så vel som immunologiske48 og genetiske likheter49,50 mellom mennesker og kaniner tyder på at svulsten mikromiljøet kan gjenspeile at menneskets livmorkreft.
Flere grupper har rapportert om bruk av VX2 å lage en modell av livmorkreft med retroperitoneal metastaser med en høy rapportert rate av suksess36,51,52; Det finnes imidlertid betydelig variasjon innenfor gjeldende litteratur med hensyn til metoden for modell opprettelse. Cell suspensjon doser så lavt som 4 x10 5 celler/livmorhorn 51 og så høyt som 5 x 109 celler/livmor horn37,har53 blitt rapportert uten standard konsensus om den nødvendige VX2 Cellular dose. I tillegg har en rekke inoculation metoder er rapportert inkludert mikro-kirurgisk implantation av tumor inn i livmor myometriet36, injeksjon av VX2 celle suspensjon37,44,52 , 53 og i noen tilfeller, tilsetning av livmor horn suturing før innoculation52. Til slutt, ingen grupper har rapportert bruk av kultivert VX2 celler for å lage denne modellen. Således er hensikten med denne studien er å demonstrere en vellykket standardisert metode for VX2 modell opprettelse og å rapportere den første bruken av kultivert VX2 celler for å skape en modell av livmorkreft med retroperitoneal metastaser i en kanin.
Heri har vi rapportert en standardisert kirurgisk metode for etablering av en VX2 livmorkreft modell og rapportert om første bruk av kultivert VX2 celler for å lage denne modellen. Svulsten tar sats på 75% er lavere enn 100% prosentsats tidligere rapportert i litteraturen35,37,53,56; men THW 90% rate på patologisk bekreftet lymfeknuter metastaser er forenlig med tidligere studier av denne m…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble finansiert av Terry Fox Research Institute (PPG # 1075), Canadian Institute of Health Research (Foundation Grant #154326), Canadian Cancer Society Research Institute (704718), naturvitenskap og engineering Research Council of Canada, Сanada Foundation for innovasjon og prinsesse Margaret Cancer Foundation.
Jeg vil gjerne takke Dr. Marguerite Akens for å gi den første VX2 cellene for etablering av den innledende VX2 modellen og den frosne VX2 tumor blokker. Jeg vil gjerne takke Marco DiGrappa for å bidra til å utføre første VX2 cellekultur eksperimenter og Lili Ding for å hjelpe med VX2 cellekultur.
11-blade scalpel, Sterile, Disposible | Aspen Surgical (VWR) | 80094-086 | |
22-gague ear vein catheter | CDMV | 14332 | |
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon | Falcon | 352350 | |
Acepromazine (Atravet) | CDMV | 1047 | |
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) | CDMV | 4363 | |
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) | UHN Stores | 457955 | |
Buprenorphine | McGill University | ||
Cefazolin | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Chlorhexidine solution | CDMV | 119872 | |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes | Corning | 354450 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates | Corning | 354408 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates | Corning | 354400 | brand not important |
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL | Corning | 354234 | |
DMEM/HAM F12 1:1 | Life Technologies | 11320 | brand not important |
DMSO | Caledon Lab Chem | 1/10/4100 | |
Enrofloxacin (Baytril injectable) | CDMV | 11242 | |
Falcon Tube | Corning Centri-Star | 430828 | |
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml | Life Technologies | 12483020 | brand/source not important |
Isoflurane | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Isohexol contrast | GE Healthcare | 407141210 | |
Meloxicam (Metacam 0.5%) | CDMV | 104674 | |
Normal Saline | House Brand (UofT Medstore) | 1011 | |
PBS | Multicell or Sigma | 331-010-CL or D8537-500mL | |
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) | Corning-Cellgro | CA45000-652 | |
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) | T.C.M.F (Dr Bristow) | 28-Jan-11 | |
Surgical Glue (Tissue Adhesive) | 3M Vetbond | 14695B | |
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade | Sigma | T-6567-5X20UG | |
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml | Wisent Inc | 325-542-EL | brand not important |