Detta protokoll presenterar en standardiserad metod för att odla VX2 celler i kulturen och att skapa ett ortoämne VX2 modell av endometriecancer med retroperitoneal lymfkörtel metastaser i kaniner. Ortoämnet endometriecancer modeller är viktiga för den prekliniska studien av nya Imaging modaliteter för diagnos av lymfkörteln metastaser.
Endometriecancer är den vanligaste gynekologiska malignitet i Nordamerika och incidensen stiger över hela världen. Behandling består av kirurgi med eller utan adjuvant terapi beroende på lymfkörtelengagemang som bestäms av lymfadenektomi. Lymfadenektomi är ett Morbid förfarande, som inte har visat sig ha en terapeutisk nytta hos många patienter, och därmed en ny metod för att diagnostisera lymfkörtel metastaser krävs. För att testa nya avbildnings agenter behövs en tillförlitlig modell av endometriecancer med retroperitoneala lymfnodmetastaser. Den VX2 endometriecancer modellen har beskrivits ofta i litteraturen; Det finns dock en betydande variation när det gäller metoden för modell etablering. Dessutom har inga studier rapporterat om användningen av odlade VX2 celler för att skapa denna modell eftersom endast celler som sprids in vivo tidigare har använts. Häri presenterar vi en standardiserad kirurgisk metod och postoperativ övervakningsmetod för inrättandet av VX2 endometriecancer modellen och rapportera om den första användningen av odlade VX2 celler för att skapa denna modell.
Endometriecancer, eller cancer i livmoderslemhinnan, är den näst vanligaste gynekologiska malignitet i världen och den vanligaste malignitet i utvecklade nationer1. Incidensen av endometriecancer har stadigt ökat, ökar med 2,3% per år mellan 2005-2013 med en motsvarande 2,2% ökning av dödlighet1,2,3. Diagnosen lymfkörteln metastaser är av största vikt eftersom närvaron av positiva lymfkörtlar är en stark negativ prediktor för överlevnad4,5,6,7 och kan vägleda administrationen av adjuvant terapi8,9,10,11,12,13. Lymfkörtel metastaser diagnostiseras för närvarande genom kirurgiskt avlägsnande av lymfvävnaden överliggande de stora blodkärlen i bäckenet och buken. Detta förfarande, känd som en lymfadenektomi, är kontroversiellt på grund av motstridiga överlevnadsdata från två stora prövningar14,15,16,17,18 och den kända risk för intraoperativ15,19,20 och postoperativ morbiditet21,22,23. Eftersom nuvarande icke-invasiva avbildning modaliteter inte har erforderlig känslighet och specificitet för att ersätta lymfkörtel dissektion24, det har varit en push att utveckla nya diagnostiska Imaging tekniker. För att testa dessa nya tekniker i en preklinisk miljö krävs en tillförlitlig modell av endometriecancer med retroperitoneal lymfnodmetastaser.
Den kanin VX2 tumör modell är en väletablerad modell som har använts i stor utsträckning för att studera flera humana solida organtumörer 25 inklusive lung26, huvud och hals27,28, lever29, njure30, Ben31,32, Brain33, bukspottkörteln34 och livmodern35,36,37. Den VX2 modellen utvecklades ursprungligen i 1940 av Kidd och Rous38 genom att framgångsrikt transplanterade en cottontail kanin papillomvirus upptäcktes av shope i 193339. Sedan dess, den VX2 modellen har bibehållits in vivo, vilket kräver seriell passage i quadriceps muskeln av vita nya Zeeland kaniner40. På senare tid har dock flera grupper framgångsrikt vuxit VX2 celler in vitro40,41,42 och visat den balanserade tumorigenecity av den odlade cell linjen31, 42,43. VX2 tumörer är histologiskt definieras som anaplastiskt skivepitelcancer cell karcinom44 och innehåller körtelfunktioner som liknar adenocarcinom26. Tumörer kännetecknas av enkel implantation, snabb tillväxt och Hyper-vascularity44,45 och tillförlitligt metastasize, oftast till regionala och avlägsna lymfkörtlar45. Likheter i livmoder vaskulär och lymfatiska anatomi46 samt ortotopisk tillväxt webbplats se till att metastaserande mönster av kanin VX2 carcinoma härmar den av mänskliga endometriecancer, vilket gör VX2 modellen en tillförlitlig modell för att studera mänskliga metastaserande sjukdom. Dessutom, histologiska funktioner såsom onormal mikrovaskulär proliferation47 , samt immunologiska48 och genetiska likheter49,50 mellan människor och kaniner tyder på att tumören mikromiljö kan återspegla den mänskliga endometriecancer.
Flera grupper har rapporterat om användningen av VX2 att skapa en modell av endometriecancer med retroperitoneala metastaser med en hög rapporterade andelen framgångsrika36,51,52; Det finns dock en betydande variation inom den aktuella litteraturen med hänsyn till metoden för att skapa modeller. Cell suspension doser så låga som 4 x10 5 celler/livmoderhorn 51 och så hög som 5 x 109 celler/livmoder horn37,53 har rapporterats utan standard konsensus om den erforderliga VX2 cellulära dosen. Samt, en mängd olika inokuleringsmetoder har rapporterats inklusive mikro-kirurgisk implantation av tumör i livmodern myometrium36, injektion av VX2 cellsuspension37,44,52 , 53 och i vissa fall, tillsats av livmoder horn suturering före innoympning52. Slutligen har inga grupper rapporterat användningen av odlade VX2 celler för att skapa denna modell. Sålunda, syftet med denna studie är att demonstrera en framgångsrik standardiserad metod för VX2 modellskapande och att rapportera den första användningen av odlade VX2 celler för att skapa en modell av endometriecancer med retroperitoneala metastaser i en kanin.
Häri har vi rapporterat en standardiserad kirurgisk metod för inrättandet av en VX2 endometriecancer modell och rapporterade om den första användningen av odlade VX2 celler för att skapa denna modell. Tumören ta hastighet av 75% är lägre än 100% procentsatsen tidigare rapporterats i litteraturen35,37,53,56; emellertid, THW 90% frekvens av patologiskt bekräftade lymfkörtel metastaser…
The authors have nothing to disclose.
Denna studie finansierades av Terry Fox Research Institute (PPG # 1075), den kanadensiska Institute of Health Research (Stiftelsen Grant #154326), den kanadensiska cancer fonden Research Institute (704718), naturvetenskap och teknik Forskningsrådet i Kanada, Сanada Stiftelsen för innovation och Princess Margaret cancer Foundation.
Jag skulle vilja tacka Dr Marguerite Akens för att tillhandahålla den initiala VX2 celler för inrättandet av den ursprungliga VX2 modellen och frysta VX2 tumör blocken. Jag skulle vilja tacka Marco DiGrappa för att hjälpa till att utföra inledande VX2 cellkultur experiment och Lili Ding för att hjälpa till med VX2 cellkultur.
11-blade scalpel, Sterile, Disposible | Aspen Surgical (VWR) | 80094-086 | |
22-gague ear vein catheter | CDMV | 14332 | |
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) | Covidien | 356718 | |
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon | Falcon | 352350 | |
Acepromazine (Atravet) | CDMV | 1047 | |
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) | CDMV | 4363 | |
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) | UHN Stores | 457955 | |
Buprenorphine | McGill University | ||
Cefazolin | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Chlorhexidine solution | CDMV | 119872 | |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes | Corning | 354450 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates | Corning | 354408 | brand not important |
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates | Corning | 354400 | brand not important |
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL | Corning | 354234 | |
DMEM/HAM F12 1:1 | Life Technologies | 11320 | brand not important |
DMSO | Caledon Lab Chem | 1/10/4100 | |
Enrofloxacin (Baytril injectable) | CDMV | 11242 | |
Falcon Tube | Corning Centri-Star | 430828 | |
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml | Life Technologies | 12483020 | brand/source not important |
Isoflurane | UHN in-patient pharmacy | No Cat # Needed | |
Isohexol contrast | GE Healthcare | 407141210 | |
Meloxicam (Metacam 0.5%) | CDMV | 104674 | |
Normal Saline | House Brand (UofT Medstore) | 1011 | |
PBS | Multicell or Sigma | 331-010-CL or D8537-500mL | |
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) | Corning-Cellgro | CA45000-652 | |
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) | T.C.M.F (Dr Bristow) | 28-Jan-11 | |
Surgical Glue (Tissue Adhesive) | 3M Vetbond | 14695B | |
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade | Sigma | T-6567-5X20UG | |
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml | Wisent Inc | 325-542-EL | brand not important |