Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Analys av Iophenoxic Acid-analoger i små indiska Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera för användning som en oral rabiesvaccination biologisk markör

Published: May 31, 2019 doi: 10.3791/59373
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 2, 2, 1
1US Department of Agriculture, Animal and Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National Wildlife Research Center, 2IDT Biologika GmbH, Am Pharmapark

Summary

Vi erbjöd captive Manguster placebo oral rabies vaccin beten med etyl eller metyl-iofenoxic syra som en biomarkör och kontrollerat bete upptag med hjälp av en ny vätskekromatografi med tandem masspektrometri (LC-MS/MS) metod.

Abstract

Den lilla indiska Mongoose (Herpestes auropunctatus) är en reservoar av rabiesvirus (rabv) i Puerto Rico och omfattar över 70% av djur rabies fall rapporteras årligen. Kontrollen av RABV cirkulation i Wildlife reservoarer är typiskt åstadkommas genom en strategi för oral rabies vaccination (ORV). För närvarande ingen Wildlife ORV program finns i Puerto Rico. Forskning om orala rabiesvaccin och olika typer av bete för manguser har genomförts med lovande resultat. Övervaka framgången för ORV förlitar sig på uppskattning av bete upptag av målarter, som vanligtvis innebär att utvärdera en förändring i RABV neutraliserande antikroppar (RVNA) efter vaccination. Denna strategi kan vara svår att tolka i områden med en aktiv Wildlife ORV program eller i områden där rabv är enzootisk och bakgrundsnivåer av rvna är närvarande i reservoararter. I sådana situationer kan en biomarkör som ingår i vaccinet eller bete matrisen vara användbar. Vi erbjöd 16 captive Manguster placebo ORV beten som innehåller etyl-iofenoxic syra (et-IPA) i koncentrationer av 0,4% och 1% inne i betet och 0,14% i den externa bete matris. Vi erbjöd också 12 captive Manguster ORV beten som innehåller metyl-iofenoxic Acid (ME-IPA) i koncentrationer av 0,035%, 0,07% och 0,14% i den externa Bait Matrix. Vi samlat ett serumprov före bete erbjudande och sedan veckovis för upp till åtta veckor efter erbjudande. Vi extraherade Iophenoxic syror från sera till acetonitril och kvantifieras med hjälp av vätskekromatografi/masspektrometri. Vi analyserade serum för et-IPA eller me-IPA genom vätskekromatografi-masspektrometri. Vi fann tillräcklig märkning förmåga för minst åtta och fyra veckor för et-och Me-IPA, respektive. Båda IPA-derivaten kan vara lämpliga för fältutvärdering av ORV-bete i Mongooses. På grund av markörens livslängd i Mungo serum måste man vara noga med att inte blanda ihop resultat genom att använda samma IPA-derivat under efterföljande utvärderingar.

Introduction

Rabies virus (RABV) är en negativ känsla enda strandsatta lyssavirus, och cirkulerar bland olika djurarter reservoar inom ordningarna Carnivora och Chiroptera. Flera arter av Mongoose är reservoarer av RABV, och den lilla indiska Mongoose(Herpestes auropunctatus) är den enda reservoaren i Puerto Rico och andra karibiska öarna på västrahalvklotet 1,2,3 . Kontrollen av RABV cirkulation i Wildlife reservoarer är typiskt åstadkommas genom en strategi för oral rabies vaccination (ORV). I USA (USA), denna förvaltning verksamhet samordnas av USDA/APHIS/Wildlife Services National rabies Management program (NRMP)4. För närvarande ingen Wildlife ORV program finns i Puerto Rico. Forskning om rabiesvaccin och olika agn typer för manguser har utförts med lovande resultat tyder på ett ORV program för manguser är möjligt5,6,7,8.

Övervakning av effekterna av ORV förlitar sig på uppskattning av bete upptag av målarter, som vanligtvis innebär att utvärdera en förändring i RV antikropp seroprevalens. Men, denna strategi kan vara utmanande i områden med en aktiv Wildlife ORV program eller i områden där RV är enzootisk och bakgrundsnivåer av rabv neutraliserande antikroppar (rvna) är närvarande i reservoararter. I sådana situationer kan en biomarkör som ingår i betet eller den externa bete matrisen vara användbar.

Olika biologiska markörer har använts för att övervaka bete upptaget i många arter, inklusive tvättbjörnar (Procyon lotor)9,10, stoats (Mustela hermelinen)11,12, European grävlingar ( Meles Meles) 13, vildsvin (Sus scrofa)14, små indiska Manguster15 och präriehundar (cynomysludovicianus)16,17, bland annat. I USA, operativa ORV beten ofta omfatta en 1% tetracyklin biomarkör i agn matrisen för att övervaka bete upptag18,19. Emellertid, nackdelar med användningen av tetracyklin inkluderar en växande oro över distributionen av antibiotika i miljön och att upptäcka tetracyklin är typiskt invasiv, kräver tandutdragning eller destruktion av djuret för att få ben prover20. Rhodamine B har utvärderats som en markör i en mängd olika vävnader och kan detekteras med ultraviolett (UV) ljus och fluorescens i hår och morrhår10,21.

Iophenoxic Acid (IPA) är ett vitt, kristallint pulver som har använts för att utvärdera bete konsumtion i Coyotes(Canis latrans)22, fjäll räv (Vulpes Lagopus)23, Red Fox (Vulpes vulpes)24, tvättbjörnar 9 , 25, vildsvin14, kronhjort (Cervus elaphus scoticus)26, Europeiska grävlingar12 och illrar (M. FURO)27, bland flera andra däggdjursarter. Retentionstiden för IPA varierar mellan arter från mindre än två veckor i vissa pungdjur28,29, till minst 26 veckor i hov-och klövdjuren26 och över 52 veckor hos tamhundar (Canis lupus familiaris)30. Retentionstider kan också vara dosberoende31. Iofenoxic syra binder starkt till serumalbumin och upptäcktes historiskt genom att mäta blod jod nivåer32. Detta indirekta tillvägagångssätt har ersatts av högpresterande vätskekromatografi (HPLC) metoder för att direkt mäta iophenoxic Acid koncentrationer med UV-detektion33, och så småningom med vätskekromatografi och masspektrometri (LCMS) 34,35. För denna studie utvecklades en mycket känslig och selektiv vätskekromatografi med tandem mass spektrometri (LC-MS/MS) metod som utnyttjar multipla reaktionsövervakning (MRM) för att kvantifiera två analoger av iofenoxic syra. Vårt mål var att använda denna LC-MS/MS metod för att utvärdera märkningen förmåga 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-trijodbenzyl) propansyra (metyl-IPA eller me-IPA) och 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-triiodobenzyl) butansyra (etyl-IPA eller et-IPA) och när den levereras i en ORV bete till fångenskap Mongooses.

Mongooses var levande fångas i bur fällor agnade med kommersiellt tillgängliga rökt korv och fiskolja. Mongooses var inrymt i enskilda 60 cm x 60 cm x 40 cm rostfrittstål burar och matas en daglig ransonera av ~ 50 g kommersiell torr kattmat, kompletteras två gånger per vecka med en kommersiellt tillgänglig kycklinglår. Vatten fanns tillgängligt AD libitum. Vi levererade två derivat av IPA, etyl-IPA och metyl-IPA, till fångenskap Manguster i placebo ORV beten. Alla beten bestod av en 28 mm x 20 mm x 9 mm folie Blisterförpackning med en extern beläggning (härefter "bete Matrix") som innehåller pulveriserad kyckling ägg och gelatin (tabell över material). Beten innehöll 0,7 mL vatten eller IPA-derivat och vägde cirka 3 g, varav ~ 2 g var den externa agn Matrix.

Vi erbjöd 16 captive Manguster et-IPA i tre koncentrationer: 0,14% (2,8 mg et-IPA i ~ 2 g bete matris; 3 hanar [m], 3 honor [f]), 0,4% (2,8 mg et-IPA i 0,7 ml blisterförpackning volym; 3m, 3F), och 1,0% (7,0 mg etyl-IPA i 0,7 ml blisterförpackning volym; 2m , 2F). Den sammanlagda dosen av 2,8 mg motsvarar till en dossats av 5 mg/kg27,36 och baseras på en genomsnittlig Mongoose väger av 560 g i Puerto Rico. Vi valde 1% som den högsta koncentrationen eftersom forskning tyder på att vissa biomarkörer kan ha en smak mot riskaversion vid koncentrationer > 1% hos vissa arter37. Vi erbjöd endast 1%-dosen i blisterförpackningen eftersom flockningen hindrade lösningens upplösning i lösningsmedlet tillräckligt för att integreras jämnt i bete matrisen. En kontrollgrupp (2m, 1f) fick beten fyllda med sterilt vatten och ingen IPA. Vi erbjöd beten till Manguster på morgonen (~ 8 a.m.) under eller före utfodring av deras dagliga underhåll ransonera. Betet kvarstod avlägsnades efter ca 24 timmar. Vi samlade blodprov före behandling, en dag efter behandling och sedan veckovis upp till 8 veckor efter behandling. Vi sövda Manguster genom inandning av isofluran gas och samlas upp till 1,0 ml helblod genom venipunktering av kranial Vena Cava som beskrivs för illrar38. Vi centrifugerar hela blodprov, överfört serum till kryovials och lagrat dem vid-80 ° c till analys. Alla djur provtogs inte under alla tidsperioder för att minimera effekterna av upprepade blod dragningar på djurens hälsa. Kontrolldjuren provtogs på dag 0, sedan veckovis i upp till 8 veckor efter behandling.

Vi levererade mig-IPA i tre koncentrationer: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) och 0,14% (2,8 mg), alla införlivas i Bait Matrix, med 2 hanar och 2 honor per behandlingsgrupp. Två hanar och två honor fick beten fyllda med sterilt vatten och ingen IPA. Bete erbjuder tider och Mongoose anestesi beskrivs ovan. Vi insamlade blodprov före behandling dag 1, och sedan veckovis upp till 4 veckor efter behandling.

Vi testade serum koncentrations data för normaliteten och uppskattade medel för SERUMIPA-koncentrationer av olika behandlingsgrupper. Vi använde en linjär blandad modell för att jämföra medelvärdet serum et-IPA koncentrationer poolade mellan individer. Bete typ (Matrix/blister Pack) var en fast effekt utöver experimentell dag, medan djur-ID var en slumpmässig effekt. Alla procedurer kördes med hjälp av gemensam statistisk programvara (tabell över material) och signifikans utvärderades vid α = 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla förfaranden godkändes av USDA National Wildlife Research Centers institutionella djuromsorg och användning kommittén under godkända Research Protocol QA-2597.

Anmärkning: följande protokoll beskriver analys proceduren för att detektera metyl-iofenoxic syra i Mongoose serum. Denna metod är den slutgiltiga versionen av en iterativ process som inleddes med analys av etyl-iofenoxic syra i Mongoose serum. Under den första utvärderingen av etyliofenoxic-syra gjordes smärre ändringar i metoderna, vilket resulterade i det slutliga protokoll som presenteras nedan. Representativa resultat inkluderar de som erhållits under båda iterationerna.

1. utarbetande av lösningar och standarder

  1. Köp me-IPA och et-IPA.
  2. För mobil fas A, Bered 1 l 0,1% (v/v) myrsyra i vatten genom att kombinera 1 ml myrsyra med 1 liter ultrarent vatten (≥ 18 MΩ). För mobil fas B, Bered 1 L 0,1% (v/v) myrsyra i acetonitril (ACN) genom att kombinera 1 mL myrsyra med 1 L ACN.
  3. Bered 200 mL av 0,5% (v/v) trifluorättiksyra (TFA) i ACN genom att kombinera 1 mL TFA med 200 mL ACN.
  4. Bered koncentrerade IPA-lagerlösningar av me-IPA och et-IPA i ACN vid koncentrationer på ca 1 000 μg/mL.
    1. Väg ca 10 mg av me-IPA på en Microbalance och registrera massan till ± 0,0001 mg. Överför kvantitativt me-IPA till en 10 mL-mätkolv med 45 mL ACN. Sonikera 1 min att lösa upp alla fasta ämnen, och sedan ta till volym med ACN.
    2. Överför ~ 8 mL av varje bestånd till Amber 8 mL glasflaskor med poly-tetrafluoreten (PTFE)-fodrade mössor. Förvaras i rumstemperatur (RT). Överför resterande lager till farligt avfall.
  5. För den 25x-7 Me-IPA Stock (tabell 1), Förbered ett lager av mig-IPA i ACN på cirka 200 μg/ml. Exempel: överför 1 mL av det koncentrerade lagret me-IPA från steg 1.4.2 till en 5 mL-mätkolv av klass A med hjälp av en 1 000 μL glasspruta. Späd till volym med ACN. Överför lagret till en Amber 8 mL injektionsflaska av glas med PTFE-fodrad mössa. Store på RT.
  6. Förbered de sex ytterligare 25x me-IPA-lagren som beskrivs i tabell 1. För varje bestånd, kombinera de volymer som anges med en upprepad multikanalspipettor i en Amber 8 mL bärnsten glas flaska med PTFE-fodrad mössa. Förvara varje lager på RT.
  7. För det 25x surrogat beståndet, Förbered ett surrogat lager av me-IPA i ACN på cirka 10 μg/mL från det koncentrerade beståndet som förberetts i steg 1.4.2. Överför 0,100 mL av det koncentrerade me-IPA-beståndet till en 10 mL-mätkolv av klass A med hjälp av en 100 μL glasspruta, och späd sedan till volym med ACN.
    1. Överför ~ 8 mL till en bärnsten 8 mL injektionsflaska av glas med PTFE-fodrad mössa. Förvara på RT. överför resterande lager till farligt avfall.
  8. Förbered 4x lager som innehåller båda analyter i 2 mL skruv-top glas autosampler injektionsflaskor som beskrivs i tabell 2.
    1. Till exempel, för att förbereda beståndet 4x-7, till en 2 mL injektionsflaska, tillsätt 0,20 mL av 25x-7 Me-IPA lager från steg 1,5 med hjälp av en upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL kapacitet spets. Tillsätt 0,20 mL av 25x surrogat et-IPA-lager från steg 1,7 med en upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL kapacitets spets.
    2. Tillsätt 0,85 mL ACN med en upprepad multikanalspipettor med 1 mL kapacitets spets. Locket flaskan säkert och vänd 5x för att blanda.
  9. Bered standardkurvan i 2 mL av autosampler-flaskorna med skruv topp enligt beskrivningen i tabell 3.
    1. Om du till exempel vill förbereda Standard 7 (STD 7), till en 2 mL-flaska, lägger du till 0,20 mL av 4x-7-lagret från steg 1.8.2 med en upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL kapacitets spets. Tillsätt 0,60 ml ultrarent di vatten med en upprepad multikanalspipettor med 1 ml kapacitets spets. Locket flaskan säkert och vänd 5x för att blanda.

2. provberedning

FÖRSIKTIGHET: personal som utför detta förfarande måste ha fått hela serien av rabies pre-Exposure profylax och har en dokumenterad rabies antikropp titer över 0,5 IU från en federal företagshälsovård utsedda medicinsk anläggning. Personalen måste bära laboratorie kappor och ögonskydd hela tiden medan de utför extraktionen. FÖRSIKTIGHET: Utför steg 2.3 − 2.6 i ett biosäkerhetsskåp i klass II.

  1. För varje prov, Förbered en 1,5 mL microcentrifug tub som innehåller 200 − 300 mg NaCl. ordna rören i en 80-position plast rack. Ställ åt sidan för användning i steg 2,6.
    Anmärkning: en mikro skopa (eller annan liten mätanordning) rekommenderas för ett stort antal prover.
  2. För varje prov, etikett två 1,5 mL microcentrifug rör: en som "A" och den andra som "B". Ordna rören i en 80-position plast rack.
  3. Placera följande material och utrustning som behövs för serum utvinning i ett biosäkerhetsskåp av klass II: mikrocentrifugrör (i rack) som bereds i steg 2,1 och 2,2, en Vortex-mixer, upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL och 5 mL kapacitets spetsar, 100 − 1000 μL luft förskjutning Pipettera med 1 000 μl spetsar, behållare med cirka 100 ml vardera av spädningsvätska och ultrarent di vatten, och en behållare för biologiskt riskavfall.
  4. Ta bort serumprover från fryst förvaring och Värm till RT i biosäkerhets skåpet. Vortexblanda varje serumprov före provtagning.
  5. Använd en upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL kapacitet tips, fördela 0,050 mL Mongoose serum i röret "A" och tillsätt 0,050 mL av 25x surrogat lager. Tillsätt sedan 0,950 mL spädningsvätska till röret "A" med en upprepad multikanalspipettor med 5 mL kapacitets spets. Locket säkert och Vortex mix för 10 − 15 s.
  6. Fördela de före vägda NaCl från steg 2,1 i röret "A" och Vortex blanda 3x för 8 − 12 s. torka ner utsidan av flaskan rack som innehåller röret "A" med 70% (v/v) isopropanol.
    Obs: rack av prover kan nu tas bort från klass II biosäkerhets skåpet.
  7. Centrifugera tub "A" vid 12 000 x g i 1 min för att separera vatten-och ACN-faserna. Pipettera över 0,80 mL av den övre ACN-fasen till rör "B" med en pipett på 100 − 1000 μL. Överför den återstående lösningen i rör "A" till farligt avfall och kassera det tomma röret i en behållare för biologiskt farligt avfall.
  8. Ta bort ACN och TFA från röret "B" med ett skonsamt flöde av N2 -gas i ett vattenbad på 45 ° c.
  9. Tillsätt 0,250 mL ACN till tub "B" med hjälp av en REPEAT-pipettor, Vortex mix för 4 − 5 s, och centrifugera sedan kort (2 − 4 s) vid 12 000 x g för att samla upp vätskan i botten av röret.
  10. Tillsätt 0,750 ml ultrarent di vatten till röret "B" med en upprepad multikanalspipettor med 5 ml kapacitets spets, Vortex mix för 4 − 5 s, och centrifugera sedan i 1 min vid 12 000 x g för att klargöra provet.
  11. Överför 0,75 mL av supernatanten till en autosampler-injektionsflaska med en 1 000 μL pipett med luftdeplacement. Kassera pipettspetsarna i behållaren för biologiskt farliga avfall.
  12. Cap autosampler injektionsflaskor säkert och analysera av LC-MS/MS (avsnitt 4). Överför den återstående lösningen i rör "B" till farligt avfall och kassera det tomma röret till en behållare för biologiskt farligt avfall. Kassera allt biologiskt farligt avfall genom autoklavering eller förbränning.

3. prover för kvalitetskontroll

FÖRSIKTIGHET: Följ de försiktighets uttalanden som beskrivs i avsnitt 2.

ANMÄRKNINGAR: följande procedur beskriver det minsta antalet kvalitetskontroll (QC)-prover som krävs för en analys. Replikat på varje nivå rekommenderas om tillräcklig kontroll Mongoose serum är tillgänglig.

  1. Förbered fyra 1,5 mL mikrocentrifugrör som innehåller 200 − 300 mg NaCl. Ordna rören i en 80-position plast rack.
  2. För varje QC prov, etikett två 1,5 mL microcentrifug rör: en som "A" och den andra som "B". Ordna rören i en 80-position plast rack.
  3. Upprepa steg 2,3.
  4. Ta bort Control Mongoose serum från fryst förvaring och Värm till RT i biosäkerhets skåpet. Vortex blanda kontrollserumet före provtagning.
  5. Fördela 0,050 mL kontroll Mongoose serum i de fyra 1,5-mL "A"-rören med en upprepad multikanalspipettor med 0,5 mL kapacitet spets.
  6. Förstärka vart och ett av de fyra QC-proverna enligt tabell 4 med hjälp av en upprepad multikanalspipettor med 0,5 ml kapacitets spets. Keps varje QC prov säkert och Vortex mix för 10 − 15 s.
  7. Utför extraktionsproceduren enligt beskrivningen i steg 2.6 − 2.12.

4. LC-MS/MS-analys

  1. Konfigurera LC-MS/MS med alla parametrar som beskrivs i tabell 5. Slå på LC-MS/MS och låt kolonnen nå 70 ° c innan du ställer in flödeshastigheten till 0,800 mL/min.
  2. Ställ in en sekvens i datainsamlingsprogrammet (tabell över material) för att injicera standardkurvan före och efter varje omgång som består av kvalitetskontroll prov och okända prover.
  3. Injicera alla standarder och prover och förvärva MRM-jonkromatogram med de parametrar som anges i tabell 5.
  4. Efter sekvens slutförandet, stänga av LC-MS/MS och avyttra alla autosampler flaskor som farligt avfall.

5. kvantifiering

  1. Använd dataanalysprogram vara för att generera en kalibreringskurva av relativa svar kontra relativa koncentrationer för me-IPA med et-IPA som den interna standarden. Beräkna de relativa svaren från kvantifierare MRM övergång för me-IPA (556,6 → 428,7) dividerat med MRM övergång för et-IPA (570,7 → 442,7). Konstruera en 7-nivå kalibreringskurva med hjälp av en andra ordningens kvadratisk funktion som är viktad 1/x och ignorerar ursprunget.
  2. Beräkna serumkoncentrationen (C-serum) av me-IPA med hjälp av följande ekvation:
    Equation 1
    där c-instrumentet är den koncentration som bestäms av instrumentet från kalibreringskurvan i enheter med μg/mL, 1,25 är utspädningsfaktorn Equation 2 , v-Final är den slutliga provvolymen (1,0 ml) och v-serum är serum volymen i ml ( 0,050 mL nominell).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Representativa jonkromatogram från en me-IPA-analys presenteras i figur 1. Kontroll Mongoose serum (figur 1a) illustrerar retentionstiden för et-IPA (surrogat analyte) och frånvaron av me-IPA vid den indikerade retentionstiden. Kvalitetskontroll provet (figur 1b) illustrerar baslinjen separation av me-IPA från et-IPA samt kvantifierare och kval övergångar för me-IPA. Figur 1c visar ett representativt urval från studien med en observerad serumkoncentration på 33,5 μg/ml me-IPA.

En representativ kalibreringskurva från en me-IPA-analys presenteras i figur 2. Den 7-nivå, 14-punkt standardkurvan varierar från 0,00202 till 8,27 μg/mL me-IPA med en korrelationskoefficient (r2) av 0,9998. Korrelationskoefficienterna varierade mellan 0,9998 och 0,99997 för de fem me-IPA-analyserna. Surrogat analyt et-IPA-koncentrationen var 0,502 μg/mL i alla standarder.

Tabell 6 visar noggrannhet och precision resultat för Control Mongoose serum berikade med 0, 1,3, 31, och 82 μg/ml me-IPA (n = 10 på varje nivå). Resultaten samlades in från fem separata analyser. Procent återkrav varierade från 96,9% till 109%. Procent relativ standardavvikelse (% RSD) på de tre befästnings nivåerna var 3,4%, 1,7% respektive 2,3%.

Signal/brus-förhållandet (S/N) som observerats i prover för kvalitetskontroll (n = 10 negativa kontroller, n = 10 vid 1,3 μg/mL me-IPA) användes för att fastställa detektionsgränsen (DL; 3 x S/N) och kvantifieringsgränsen (QL; 10 x S/N). DL och QL för me-IPA i Mongoose serum var 0,012 μg/mL respektive 0,042 μg/mL.

Peak Area svar av kvalificeraren MRM övergång dividerat med kvantifierare MRM övergång (Equation 3 beräknades för alla standarder och prover. Detta förhållande för varje prov divideras sedan med den genomsnittliga kvoten som observerades i kalibrerings standarderna för att fastställa kvalificeringen procent matchning. Kvalificeraren förhållandet för provet som visas i figur 1c var 0,439, med en 96,3% matchning.

Återhämtningen av et-IPA surrogat analyt beräknades för alla QC prover och okända prover genom att dividera et-IPA Peak Area respons med den genomsnittliga et-IPA Peak Area respons observerades i kalibrerings standarderna. Den genomsnittliga surrogat analyteåtervinningen var 91,0% (negativa kontroller), 91,4% (1,3 μg/mL), 92,8% (31 μg/mL) och 95,4% (82 μg/mL).

Inga störnings toppar för varken kvantifierare eller kval övergångar av me-IPA observerades i kontroll Mongoose serum (figur 1a).

Extraktionsförfarandet och instrumentella förhållanden som används för att bestämma et-IPA i Mongoose-serum (figur 3 och tabell 7) var IDENTISKT med me-IPA-metoden, men med följande förändringar. Propyl-iofenoxic syra (PR-IPA) användes som surrogat analyt och en äldre, mindre känsliga LC-MS/MS användes. Källan tork gastemperaturen var 350 ° c med ett flöde av 12 L/min och en nebulisator tryck på 35 psi. Den kapillära spänningen var-2 500 V. Källan hade ingen mantel gas eller medel för att justera munstycket spänning. Kvantifierare MRM övergång för et-IPA var 570,7 → 442,8 (584,7 → 456,8 för PR-IPA). Splittraren var 80 V och kollisionenergin var 10 V för båda analyterna. Kvalificeraren MRM för et-IPA var 570,7 → 126,8 med en krock energi på 40 V.

Testningen av alla Mongoose-serumprover för et-IPA utfördes över åtta analyser. Kalibreringskurvan på 7 nivåer varierade mellan 0,00207 och 8,48 μg/mL med korrelationskoefficienter (r2) från 0,9990 till 0,9999. Surrogat analyten PR-IPA-koncentrationen var 0,512 μg/mL. Tabell 7 visar noggrannhet och precision resultat för Control Mongoose serum berikade med 0, 1,3, 13, 32, 85, och 170 μg/ml me-IPA. Resultaten samlades in från åtta separata analyser. Procent återkrav varierade från 89,5% till 115%. % RSD vid de fem befästnings nivåerna var 4,3%, 1,5%, 2,3%, 5,6% respektive 1,1%. S/N som observerats i prover för kvalitetskontroll (n = 21 negativa kontroller, n = 21 vid 1,3 μg/mL me-IPA) användes för att bestämma DL och QL. DL och QL för me-IPA i Mongoose serum var 0,12 μg/mL respektive 0,42 μg/mL. Den genomsnittliga surrogat analytåtervinningen från kvalitetskontroll prov var 86,8% (n = 75). Inga störnings toppar för antingen kvantifierare eller kvalificerare övergångar av et-IPA observerades i Control Mongoose serum.

Alla Manguster erbjöd et-IPA beten konsumeras ≥ 25% av betet inom 24 timmars tid och hade kvantifierbara halter av et-IPA i sina serum (tabell 8). Från den blandade modellanalysen var den totala genomsnittliga SERUMIPA-koncentrationen marginellt högre från beten med 2,8 mg biomarkör i betet Matrix (17,5 μg/mL, 95% CI 11,7 − 23,3 μg/mL) jämfört med blisterförpackningen (9,8 μg/mL, 95% CI 4,0 − 15,6 μg/mL) (F = 3,6 , P = 0,07). Koncentrationer för båda betes typer som är sönderslitna med experimentell dag (β =-0,15 ± 0,04, F = 14,4, P = 0,0005). Individuell nivå variation i SERUMIPA-koncentrationer observerades (djur-ID kovariansparameter uppskattning = 46,6 ± 20,7). All Manguster konsumerade 100% av kontrollerar beten med endast den tomma folieblisterförpackningen resterande. Medelvärdet av koncentrationen av et-IPA-rester i serum var varierande efter tidsperiod och förefaller inte minska konsekvent över tiden (figur 3).

Alla Manguster erbjöd mig-IPA beten konsumerade ≥ 25% av betet inom 24 timmars tidsgräns och hade kvantifierbara nivåer av me-IPA i deras serum (tabell 9). Genomsnittlig serologisk koncentration av et-och Me-IPA i Mongoose sera verkade beroende på koncentrationen av IPA i betet. Högre koncentrationer av IPA i betet resulterade i högre serumrester även i de fall där den totala dosen (2,8 mg i fallet med et-IPA) förblev densamma. Intressant, jag-IPA verkade för att producera en jämnare nedbrytning mönster över tiden med en första spik på dag 1, följt av en stadig nedgång till dag 14 där koncentrationer verkade platå (figur 4).

Figure 1
Figur 1 : Representativa jonkromatogram. A) representativt MRM-jonkromatogram för kontroll Mongoose-serum berikat med surrogat analyt etyl-iofenoxic syra (et-IPA). Pilen anger retentionstiden för metyl-iofenoxic Acid (ME-IPA). B) representativt MRM-jonkromatogram för kontroll Mongoose-serum berikat med 31 μg/ml me-IPA. De relativa intensiteterna av kvantifierare (Quant) och kval (qual) övergångar för me-IPA visas. C) representativt MRM-jonkromatogram för ett mongooserum prov med en observerad me-IPA-koncentration på 33,5 μg/ml. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2 : Representativ kalibreringskurva. En ursprunglig kalibreringskurva som genereras av dataanalysprogram varan för metyl-iofenoxic syra (ME-IPA). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3 : Genomsnittlig serumetylipa-koncentration (et-IPA) med typ av agn och koncentration över tid. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4 : Genomsnittlig serummetylipa-koncentration (ME-IPA) genom betes koncentration över tiden. Alla me-IPA koncentrationer införlivades i den externa bete matris. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Me-IPA-koncentration (μg/mL)
Id
25x-7 Se steg 1,6 200
25x-6 Kombinera 1,000 mL 25x-7 lager med 3,000 mL ACN 50
25x-5 Kombinera 1,000 mL 25x-6 lager med 3,000 mL ACN 13
25x-4 Kombinera 1,000 mL 25x-5 lager med 3,000 mL ACN 3,1
25x-3 Kombinera 1,000 mL 25x-4 lager med 3,000 mL ACN 0,78
25x-2 Kombinera 1,000 mL 25x-3 lager med 3,000 mL ACN 0,2
25x-1 Kombinera 1,000 mL 25x-2 Stock med 3,000 mL ACN 0,049

Tabell 1: beredning av 25x me-IPA-aktier i ACN (i 8-mL bärnstensfärgade glasflaskor).

Koncentration (μg/mL)
Id Me-IPA et-IPA
4x-7 0,200 mL 25x-7 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 32 1,6
4x-6 0,200 mL 25x-6 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 8 1,6
4x-5 0,200 mL 25x-5 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 2 1,6
4x-4 0,200 mL 25x-4 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 0,5 1,6
4x-3 0,200 mL 25x-3 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 0,12 1,6
4x-2 0,200 mL 25x-2 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 0,031 1,6
4x-1 0,200 mL 25x-1 + 0,200 mL 25x surrogat + 0,850 mL ACN 0,008 1,6
4x-0 0,200 mL 25x surrogat + 1,050 mL ACN 0 1,6

Tabell 2: beredning av 4x IPA-aktier i ACN (i 2-mL autosampler injektionsflaskor).

Koncentration (μg/mL)
Id Me-IPA et-IPA
STD 7 0,200 mL 4x-7 + 0,600 mL DI vatten 8 0,4
STD 6 0,200 mL 4x-6 + 0,600 mL DI vatten 2 0,4
STD 5 0,200 mL 4x-5 + 0,600 mL DI vatten 0,5 0,4
STD 4 0,200 mL 4x-4 + 0,600 mL DI vatten 0,13 0,4
STD 3 0,200 mL 4x-3 + 0,600 mL DI vatten 0,03 0,4
STD 2 0,200 mL 4x-2 + 0,600 mL DI vatten 0,0078 0,4
STD 1 0,200 mL 4x-1 + 0,600 mL DI vatten 0,002 0,4
STD 0 0,200 mL 4x-0 + 0,600 mL DI vatten 0 0,4
Tom 0,200 mL ACN + 0,600 mL DI vatten 0 0

Tabell 3: beredning av me-IPA-standarder i 75/25 vatten/ACN (i 2-mL autosampler injektionsflaskor).

Koncentration (μg/mL) i serum
Id Me-IPA et-IPA
Negativ kontroll 0,050 mL 25x surrogat + 0,950 mL spädningsvätska 0 10
Låg Befästnings 0,050 mL 25x surrogat + 0,020 mL 25x-4 + 0,930 mL spädningsvätska 1,2 10
Mid Fortification 0,050 mL 25x surrogat + 0,030 mL 25x-6 + 0,920 mL spädningsvätska 30 10
Hög Befästnings 0,050 mL 25x surrogat + 0,020 mL 25x-7 + 0,930 mL spädningsvätska 80 10

Tabell 4: prov befästning av kvalitetskontroll (Förbered i 1,5-mL-mikrocentrifugrör).

Vätskekromatografi:
Kolumn: C18, 2,1 x 50 mm, partikelstorlek 2,5 μm
Kolumn temperatur: 70 ° c
Injektionsvolym: 5 μL
Flöde: 0,800 mL/min
Mobil fas: Spädningsvätska A: 0,1% myrsyra i vatten
Spädningsvätska B: 0,1% myrsyra i ACN
Gradient program:
Tid (min): 0 0,25 2,25 2,26 3,4 3,41 4,75
B 40 40 55 100 100 40 40
Nål tvätta: ACN, 3 s
MS/MS Källa: ESI (negativt läge)
Gas temperatur: 300 ° c
Gas flöde: 5 L/min
Nebulisatorn: 45 psi
Kapillär: -4000 V
Munstycke spänning: -500 V
Hölje gas temperatur: 250 ° c
Hölje gas flöde: 7 L/min
MRM övergångar:
Analyt Föregångare Jon (m/z) Produkt Jon (m/z) * Fragmentor (V) Kollision energi (V) Uppehållstid (MS) Tids segment
Me-IPA 556,6 428,7 74 12 60 2
126,9 65 60
126,8 61 60
Et-IPA 570,7 442,7 87 16 60
Tidssegment:
Segment Start (min) (min) Typ Omkastare Delta EMV Polaritet Data som lagras
1 0 0,6 MS2 Scan Att slösa 0 Negativa Nej
2 0,6 2 Mrm Till MS -100 Negativa Ja
3 2 4,75 MS2 Scan Att slösa 0 Positiva Nej
* Kvantifierare övergångar är fetade.

Tabell 5: parametrar för LC-MS/MS. Kvantifierare produkt joner är bolded.

Mål Observerade Procent
Id Dag Me-IPA Me-IPA Återhämtning
QC-1 1 0 Nd N/A
QC-2 1 0 Nd N/A
QC-11 2 0 Nd N/A
QC-12 2 0 Nd N/A
QC-21 3 0 Nd N/A
QC-22 3 0 Nd N/A
QC-31 4 0 Nd N/A
QC-32 4 0 Nd N/A
QC-3 5 0 Nd N/A
QC-4 5 0 Nd N/A
QC-13 1 1,25 1,26 101% Ave (10) = 102%
QC-14 1 1,25 1,23 98,40% SD = 3,50%
QC-23 2 1,25 1,26 101% % RSD = 3,40%
QC-24 2 1,25 1,28 102%
QC-33 3 1,29 1,3 101%
QC-34 3 1,29 1,25 96,90%
QC-5 4 1,29 1,37 106%
QC-6 4 1,29 1,41 109%
QC-15 5 1,29 1,3 101%
QC-16 5 1,29 1,34 104%
QC-25 1 30,1 30,2 100% Ave (10) = 103%
QC-26 1 30,1 31,2 104% SD = 1,80%
QC-35 2 30,1 31,1 103% % RSD = 1,70%
QC-36 2 30,1 31,1 103%
QC-7 3 31 31,6 102%
QC-8 3 31 31,4 101%
QC-17 4 31 32,5 105%
QC-18 4 31 32,8 106%
QC-27 5 31 31,7 102%
QC-28 5 31 32,1 104%
QC-37 1 80,2 77,8 97,00% Ave (10) = 101%
QC-38 1 80,2 78,9 98,40% SD = 2,30%
QC-9 2 80,2 81,8 102% % RSD = 2,30%
QC-10 2 80,2 79,8 99,50%
QC-19 3 82,7 83,5 101%
QC-20 3 82,7 84 102%
QC-29 4 82,7 84,7 102%
QC-30 4 82,7 87,2 105%
QC-39 5 82,7 83 100%
QC-40 5 82,7 84,1 102%

Tabell 6: QC-resultat för me-IPA i Mongoose-serum (μg/mL).

Mål-et-IPA (μg/mL) N Medelvärde (%) SD (%) % RSD
0 21
1,3 12 103 4,5 4,3
13 9 91,7 1,4 1,5
32 12 106 2,4 2,3
85 12 105 5,8 5,6
170 9 106 1,1 1,1

Tabell 7: QC-resultat för et-IPA i Mongoose-serum (μg/mL).

Typ av bete och etylipa-betes koncentration (μg/mL)
Tids period 0,4%-blister 1,0%-blister 0,14%-matris Kontroll
Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N
Dag 0 Nd 5 Nd 4 Nd 6 Nd 3
Dag 1 13,7 (10,9) 2 11,2 (10,4) 4 20,6 (17,3) 2 Na Na
Dag 7 11,5 (6,3) 6 9,9 (9,6) 4 21,4 (10,9) 6 Nd 3
Dag 14 10,2 (5,2) 6 5,7 (2,5) 3 17,8 (10,2) 6 Nd 3
Dag 21 8,9 (4,1) 4 10,0 (9,5) 4 23,8 (5,3) 3 Nd 2
Dag 28 8,5 (3,9) 5 11,1 (10,6) 3 17,7 (9,3) 4 Nd 3
Dag 35 17,0 (NA) 1 9,1 (9,0) 4 21,7 (9,3) 2 Nd 1
Dag 42 Na 0 8,4 (8,5) 4 16,5 (NA) 1 Nd 2
Dag 49 10,2 (5,8) 2 8,1 (8,4) 4 17,5 (4,7) 2 Nd 2
Dag 56 10,9 (5,4) 2 3,8 (1,1) 3 17,6 (6,1) 2 Nd 2

Tabell 8: medelvärde (Stand DEVIATION [SD]) ETYLIPA-serumkoncentration efter typ av agn. ND = ej detekterad, NA = ej tillämpbart.

Dos och metylipa-koncentration (μg/mL)
Tids period 0,04% 0,07% 0,14% Kontroll
Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N Medelvärde (SD) N
Dag 0 ND (NA) 4 ND (NA) 4 ND (NA) 4 ND (NA) 4
Dag 1 7,8 (7,1) 4 22,2 (9,2) 4 29,1 (16,0) 4 ND (NA) 4
Dag 7 4,4 (4,8) 4 14,4 (4,6) 4 21,3 (12,0) 4 ND (NA) 4
Dag 14 5,7 (5,9) 4 12,0 (3,5) 4 19,6 (10,6) 4 ND (NA) 4
Dag 21 4,9 (4,5) 4 12,0 (0,8) 3 18,3 (9,9) 4 ND (NA) 4
Dag 28 5,4 (5,0) 4 9,8 (2,4) 4 16,4 (8,1) 4 ND (NA) 4

Tabell 9: genomsnittlig (SD) metyl-IPA-serumkoncentration med dos. ND = ej detekterad, NA = ej tillämpbart. Alla metylipa-koncentrationer införlivades i den externa bete matrisen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

LC-MS/MS-metoden som utvecklats för studierna utnyttjade selektivitet av multipel reaktion övervakning för att exakt kvantifiera me-IPA och et-IPA i Mongoose serum. Selektiviteten i MS/MS-detektion tillät också ett enkelt saneringsprotokoll som enbart förlitade sig på acetonitril för att fälla ut proteiner från serum före analys.

Iofenoxiska syror är lösliga i ACN men är praktiskt taget olösliga i vatten. För att utesluta vatten från ACN-utvinningen tillsätts natriumklorid för att tvinga ett klart vatten: ACN Phase separation genom att öka den joniska styrkan i vattenfasen (serum). Den flyktiga syran trifluorättiksyra (TFA) lades också till för att säkerställa att iophenoxic syror var protonerade under extraktionen och skulle vara mer lätt solubilized i ACN-fasen. TFA avlägsnas under torrsteget före LC-MS/MS-analys.

Blod dragningar från Mongoose var ungefär 1 mL, vilket ger 0,5 mL eller mindre av serum. För att utföra replikations analyser av varje prov krävdes ett prov berednings förfarande i mikroskala som använde mikrocentrifugrör i stället för typiska analytiska laboratorieglas som t ex klass A-volymetriska pipetter och kolvar. För att uppnå exakta och exakta resultat är det nödvändigt att analytiker vara skickliga i användningen av glas microliters sprutor och positiv-deplacement upprepa pipettorer med microliters-size tips.

En begränsning av denna metod är att det kräver dyra LC-MS/MS Instrumentation och analytiker utbildade i dess användning och underhåll. Men eftersom jag-IPA och et-IPA är baseline lösas med hjälp av HPLC villkor som beskrivs, skulle metoden potentiellt kunna anpassas till en enda fyrpolig LCMS eller HPLC med UV-detektor förutsatt att inga störningar observerades.

Skillnaden i genomsnittliga serumkoncentrationer mellan Manguster som konsumerade beten med et-IPA i blisterförpackningen och Bait Matrix vid dosen 2,8 mg tyder på spill när markören finns i blisterförpackningen, i stället för att införlivas i bete matrisen. Detta kan ha konsekvenser för syftet att uppskatta vaccin i motsats till bete upptag. Till exempel, införliva markören i den externa bete matris kan blåsa uppskattning av vaccin täckning om djuret äter matrisen men vaccinet spill ut. Regulatoriska restriktioner kan dock utesluta möjligheten att blanda en biologisk markör direkt med ett vaccin i blisterförpackningen. I de fall < 100% konsumtion registrerades, var tre fall med beten som innehåller et-IPA i blisterförpackningen, varav två var den högre koncentrationen av 1%. Detta tyder på potentiell smak riskaversion när et-IPA är vid högre koncentrationer. När beten som innehåller 1% (20,0 mg) et-IPA införlivas i betet matrisen erbjöds Mongooses, avvisade alla djur betet.

Genomsnittliga IPA-koncentrationer för et-och Me-IPA vid dag 14 var cirka 17 respektive 19 μg/mL. Liknande forskning som utförs vid Instituto de Investigación en Recursos Cinegéticos, Ciudad Real, Spanien, med hjälp av butyl och pentyl-IPA fann dag 14 koncentrationer av cirka 45 och 10 μg/mL i Mongoose serum när de levereras med samma koncentration och bete formulering som i vår studie. Dessa skillnader tyder på att olika derivat av IPA kan metabolisera i olika takt i Mongooses, vilket kan vara användbart när markör lagring (antingen kort eller lång sikt retention) är ett bekymmer.

Skillnader i mag tarmsystemets fysiologi kan påverka absorptionen och utsöndringen av IPA hos olika arter. Halveringstiden i plasma för IPA hos tamkatter (Felis catus) när den levererades på 1,5 mg/kg var 107 dagar, medan andelen i Brushtail pungråttor vid samma dosraten var ungefär en dag28. När IPA gavs till tamgetter (Capra aegagrus hircus) vid en dossats på 1,5 mg/kg var den terminala elimineringshalveringstiden för IPA 81 dagar, även om utredarna fortsatte att hitta förhöjda jodkoncentrationer upp till 160 dagar efter administrering 39. det gastrointestinala systemet för medlemmar av vivveridae (den familj som Manguster tidigare hade tilldelats40) beskrivs som liknar den för tamkatt41, vilket kan förklara retentionstiden för IPA i Manguster. Forskning föreslår också IPA kan metaboliseras annorlunda i pungdjur, möjliggör snabbare utsöndring än i eutherian Art29.

Båda derivat av IPA utvärderas i denna studie gav långsiktiga (4 − 8 veckor) märkning förmåga i Mongooses. Användningen av IPA som biologisk markör i Manguster bör ta hänsyn till studiens mål och den önskade varaktigheten av märkningen. I de fall djuren skall märkas från samma studieplatser under en sammanhängande tidsperiod kan olika derivat av IPA användas för att säkerställa att resultaten från en märknings händelse inte blandas ihop genom märkning under tidigare händelser. Som en del av operativa ORV för vilda djur i USA, provtagning av målarter och testning för förekomst av rvna och biomarkör utförs vanligtvis 4 − 6 veckor efter ORV distribution42. Ur ett praktiskt perspektiv, verkar det antingen et-eller me-IPA kan lätt upptäckas under denna tidsperiod. Framtida forskning för att utvärdera restsubstanser sönderfalls funktionen i Manguster erbjuds olika koncentrationer av båda kongener av IPA utvärderas i denna studie skulle vara användbart.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna av och så är heltidsanställda av en muntlig rabies vaccin bete tillverkare.

Acknowledgments

Denna forskning stöddes delvis av interna forskningsprogram av det amerikanska departementet för jordbruk, djur-och växtskydds inspektion service, Wildlife Services, nationella rabies Management program och IDT biologika (Dessau-Rosslau, Tyskland).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetonitrile, Optima grade Fisher A996
Analytical balance Mettler Toledo XS204
C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-µm particle size Waters Corp. 186003085
ESI Source Agilent  G1958-65138
Ethyl-iophenoxic acid, 97 % Sigma Aldrich N/A Lot MKBP5399V
Formic acid, LC/MS grade Fisher A117
LCMS software Agilent MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis
Methyl-iophenoxic acid, 97 % (w/w) PR EuroChem Ltd. N/A Lot PR0709514717
Microanalytical balance Mettler Toledo XP6U
Microcentrifuge Eppendorf 5415C
MS/MS Agilent G6470A
N-Evap Organomation 115
Oral Rabies Vaccine Baits IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany N/A
Propyl-iophenoxic acid, 99 % (w/w) PR EuroChem Ltd. N/A Lot PR100612108RR
Repeat pipettor Eppendorf M4
Screw-top autosampler vial caps, PTFE-lined Agilent 5190-7024
Sodium chloride, Certified ACS grade Fisher S271
Statistical Software Package SAS Institute, Cary, North Carolina, USA N/A
Trifluoroacetic acid, 99 % Alfa Aesar L06374
UPLC Agilent 1290 Series
Vortex Mixer Glas-Col 099A PV6
0.2-mL pipettor tips Eppendorf 30089.413
0.5-mL pipettor tips Eppendorf 30089.421
1.5-mL microcentrifuge tubes Fisher 14-666-325
1250-µL capacity pipette tips GeneMate P-1233-1250
1-mL pipettor tips Eppendorf 30089.43
2-mL amber screw-top autosampler vials Agilent 5182-0716
5-mL pipettor tips Eppendorf 30089.456
80-position microcentrifuge tube rack Fisher 05-541-2
8-mL amber vials with PTFE-lined caps Wheaton 224754
70 % (v/v) isopropanol Fisher A459
100-1000 µL air displacement pipette Eppendorf ES-100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nel, L. H., et al. Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology. Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).
  2. Zieger, Z., et al. The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control. PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251 (2004).
  3. Monroe, B. P., et al. Rabies surveillance in the United States during 2014. Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).
  4. Slate, D., et al. Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States. Virus Research. 111, 68-76 (2005).
  5. Blanton, J. D., et al. Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies. Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).
  6. Vos, A., et al. Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies. Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).
  7. Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. Evaluation of ONRAB® bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination. Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).
  8. Ortmann, S., et al. Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus). BMC Veterinary Research. 14 (1), 90 (2018).
  9. Linhart, S. B., et al. A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor). Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).
  10. Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons. Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).
  11. Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations. New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).
  12. de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers. Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).
  13. Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles). Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).
  14. Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar. Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).
  15. Creekmore, T. E., et al. Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies. Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).
  16. Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs. Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).
  17. Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs. Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).
  18. Johnston, J. J., et al. Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits. Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).
  19. Algeo, T. P., et al. Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons. Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).
  20. Crier, J. K. Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents. Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).
  21. Fisher, P. Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies. Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).
  22. Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J. Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B. Vertebrate Pest Control and Management Materials. Shumake, S. A., Bullard, R. W. , American Society for Testing and Materials. Philadelphia. 5th Volume. STP 974 141-147 (1987).
  23. Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid. Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).
  24. Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes. Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).
  25. Hadidian, J., et al. Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons. Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).
  26. Sweetapple, P. J., Nugent, G. Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus). Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).
  27. Ogilvie, S. C., Eason, C. T. Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo). New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).
  28. Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums. Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).
  29. Fisher, P. M., Marks, C. A. Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor). Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).
  30. Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores. Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).
  31. Spurr, E. B. Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis). New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).
  32. Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. Excretion and distribution of iophenoxic acid. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).
  33. Jones, A. High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).
  34. Wiles, M. C., Campbell, T. A. Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum. Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).
  35. Ballesteros, C., et al. Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife. Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).
  36. Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals. New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).
  37. Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents. Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).
  38. Briscoe, J. A., Syring, R. Techniques for emergency airway and vascular access in special species. Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).
  39. Eason, C. T., Frampton, C. M. The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat. Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).
  40. Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. Mongooses: their natural history. , Oliver and Boyd. Edinburgh and London. (1967).
  41. Stevens, C. E., Hume, I. D. Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition. , Cambridge University Press. Cambridge. (1995).
  42. National Rabies Management Program (NRMP). Oral rabies vaccination draft operations manual. , USDA APHIS Wildlife Services. (2009).

Tags

Immunologi och infektion biologisk markör Herpestes auropunctatus iophenoxic Acid rabies små indiska MONGOOSE LC-MS/MS
Analys av Iophenoxic Acid-analoger i små indiska Mongoose (<em>Herpestes auropunctatus</em>) sera för användning som en oral rabiesvaccination biologisk markör
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Berentsen, A. R., Sugihara, R. T.,… More

Berentsen, A. R., Sugihara, R. T., Payne, C. G., Leinbach, I., Volker, S. F., Vos, A., Ortmann, S., Gilbert, A. T. Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker. J. Vis. Exp. (147), e59373, doi:10.3791/59373 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter