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Biology

生产近红外敏感、核心壳疫苗输送平台

doi: 10.3791/60569 Published: October 20, 2020

Summary

本文介绍了用于生产新型疫苗输送平台"多泡"的协议,以实现延迟突发释放。聚酯(乳酸共糖酸)和多丙酮用于形成多泡,小分子和抗原用作货物。

Abstract

疫苗交付战略可以限制货物接触有机溶剂,同时实现新的释放概况,对于提高全球免疫覆盖率至关重要。这里引进了一种新型的注射、紫外线固化和延迟突发释放-使疫苗输送平台,称为多泡。货物被注入聚酯基聚泡,形成于10%的碳基纤维素为基础的水溶液。本文包括保持多泡球形和优化货物放置和保留的协议,以最大限度地提高多泡内的货物量。为确保安全,使用中子活化分析对多泡中的氯化溶剂含量进行了分析。释放研究以小分子作为货物在多泡内进行,以确认延迟的爆裂释放。为了进一步展示货物按需交付的潜力,将金纳米棒混合在聚合物壳中,以实现近红外激光活化。

Introduction

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免疫覆盖率有限导致300万人死亡,具体由疫苗可预防疾病引起1。储存和运输条件不足导致功能性疫苗的浪费,从而导致全球免疫接种减少。此外,由于未遵守要求的疫苗计划而不完全接种疫苗也会导致疫苗覆盖率有限,特别是在发展中国家。在接受强化注射的建议期间内,需要多次看望医务人员,从而限制完全接种疫苗的人口比例。因此,有必要为控制性疫苗的交付制定新的战略,以规避这些挑战。

目前开发疫苗交付技术的努力包括基于乳液的聚合物系统3,4。3,然而,货物往往暴露在更多的有机溶剂,可能会导致聚集和变性,特别是在蛋白质为基础的货物5,6,的背景下。我们开发了一种新型的疫苗输送平台"多泡",可以潜在地装着多个货舱,同时最大限度地减少暴露于溶剂7中的货物数量。例如,在我们的多泡芯壳平台中,一个直径为 0.38 mm (SEM) 的货物口袋被注入 1 mm 多泡的中心。在这种情况下,暴露于有机溶剂的货物表面积约为0.453 mm2。在考虑球体(微粒)的包装密度后(货物库),可放入仓库的微粒(直径为10 μm)的实际体积为0.17 mm3。一个微粒的体积为5.24x10-8 mm3,因此可以容纳仓库的颗粒数量为+3.2x106颗粒。-8如果每个微粒有 20 个直径为 0 . 25 μm的货物口袋(由于液),则暴露于有机溶剂中的货物表面积为 1274 mm2。因此,与微粒中有机溶剂暴露的货物相比,多泡内的货库暴露于有机溶剂的表面面积要少2800倍。因此,我们的聚酯平台可能会减少暴露于有机溶剂的货物数量,否则会导致货物聚集和不稳定。

聚泡基于相分离原理形成,有机相中的聚酯被注入水溶液,形成球形气泡。水相中的货物可以注入多泡的中心。通过将不同的货物与聚合物壳混合,可以在多泡体中实现另一个货舱。在这个阶段,多泡将是可塑的,然后将被固化,导致一个坚实的多泡结构与货物在中间。选择球面多泡而不是其他几何形状,以增加多泡内的货物容量,同时最小化多泡的整体大小。选择在中心有货物的多泡来演示延迟爆裂释放。多泡体还与近红外(NIR)-敏感(即启用辐射)剂(即金纳米棒(AuNR)结合使用,导致多泡温度升高。这种效应可能促进更快的降解,并可用于控制未来应用中的动力学。在这篇论文中,我们描述了我们形成和描述多泡的方法,实现从多泡的延迟突发释放,并将AuNR纳入多泡中,导致NR激活。

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Protocol

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1. 多卡普罗基酮三聚丙酸酯 (PCLTA) 合成

  1. 干燥 3.2 mL 的 400 Da 多丙酮 (PCL) 三重奏在 50 °C 下过夜,在打开的 200 mL 圆形底部烧瓶和 K2CO3在玻璃小瓶中 90°C。
  2. 将三叶草与 6.4 mL 二氯甲烷 (DCM) 和 4.246 g 碳酸钾 (K2CO3)混合在砷下。
  3. 在27.2 mL的DCM中混合2.72 mL的氯化丙烯,并在5分钟内滴入烧瓶中的反应混合物中。
  4. 用铝箔盖住反应混合物,在室温下保持24小时不受干扰。
  5. 24 小时后,使用真空下的 Buchner 漏斗上的滤纸过滤反应混合物,以丢弃多余的试剂。
  6. 从步骤1.5沉淀滤料,该步骤在1:3(vol/vol)中含有二乙醚中的内切聚合物,并在30°C时旋转,以去除二乙醚。

2. 多泡的形成

注:在去电化 (DI) 水中注入聚合物会导致多泡迁移到小瓶底部,导致底部变平。使用 10% (wt/vol) 碳氧甲基纤维素 (CMC) 填充玻璃瓶,以避免多泡扁平化。

  1. 在 DI 水中准备 10% (wt/vol) CMC 溶液。
  2. 使用 1 mL 传输移液器将 0.92 mL 玻璃瓶填充 0.8 mL 10% CMC。
  3. 在 DCM 中混合 1000 mg/mL 的 14 kDa PCL,在 1:3(vol/vol)中合成 PCLTA,总体积为 200 μL,或在氯仿中制备 200 μL 1000 mg/mL 的 5 kDa 聚(乳酸糖酸)二酸)二酸(PLGADA)。
  4. 将2-羟基-4+-(2-羟基乙基)-2-甲基丙丙酮(光启动器)与聚合物(PLGADA或PCL/PCLTA)混合物混合在0.005:1(卷/伏)。
  5. 将 200 μL 聚合物混合物加载到安装在注射器泵上的 1 mL 玻璃注射器中,该注射器泵连接到内径为 0.016 英寸的分配不锈钢管。
  6. 使用微电机控制聚合物管的向前和向后运动,将聚合物注入玻璃瓶中的 10% CMC 中,形成多泡。
  7. 在254纳米波长的紫外线(UV)下治疗多泡,在2W/cm2下治疗60 s。
  8. 在0.010 mBar真空和-85°C下,闪冻液氮中的多泡液并冻干过夜。
  9. 使用钳子将多泡与干燥的 CMC 分离,用 DI 水清洗多泡,以去除任何残留的 CMC。请注意,其他聚合物可用于修改,以改变释放动力学。

3. 多泡直径的调制

  1. 使用 1 mL 传输移液器将 0.92 mL 玻璃瓶填充 10% CMC。
  2. 将 PCL/PCLTA 与 1000mg/mL 14kDa PCL 混合,合成 PCLTA。将光启动器与聚合物混合物混合在 0.005:1(vol/vol)中。
  3. 将聚合物混合物装入安装在注射器泵上的 1 mL 玻璃注射器中,该注射器泵连接到内径为 0.016 英寸的分配不锈钢管。
  4. 使用微电机控制聚合物管的向前和向后运动,将聚合物注入玻璃瓶中的 10% CMC 中,形成多泡。
  5. 要获得不同直径的多泡,将点胶速率从 0.0005 变化到 1 μL/s。
  6. 用直径不同的多泡拍摄小瓶的图像。
  7. 使用 ImageJ 量化多泡的直径,并使用小瓶的大小作为比例。

4. 将货物居中于多泡

  1. 使用 K2CO 3 调节 PCL/PCLTA粘度
    注:PLGADA 的粘度不必使用 K2CO3 进行改度, 因为 5 kDa PLAGDA 的粘度为 1000 mg/mL,足以使货物居中。
    1. 在PCLTA反应后以不同浓度加入K2CO3( 在PCLTA反应后分离),包括0mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、40毫克/mL和60毫克/mL。
    2. 使用流变法将剪切速率从 0 更改到 1000 1/s,测量溶液的动态粘度。
    3. 手动将货物注入中间(参见步骤 4.2 以准备货物混合物),这些多泡是使用不同浓度为 K2CO3 的 PCL/PCLTA 溶液形成的多泡(步骤 4.1.1)。通过观察步骤4.1.1中的哪种溶液可导致货物在中间保留,确定 K 2 CO3 的最佳浓度。
  2. 用CMC将货物居中(已显示出小分子的可行性)
    1. 将货物与 5% (wt/vol) CMC 混合在旋转器中过夜,以提高货物的粘度。
    2. 在多泡中手动注入 2 μL 的货物混合物,并在 2 W/cm 2 下以 254 nm 波长进行 60 s 的 UV固化
    3. 闪光将液氮中的多泡冷冻30 s,在0.010 mBar真空和-85°C下冻干过夜。
    4. 使用钳子将多泡从干燥的 CMC 中分离,用 DI 水清洗以去除任何残留的 CMC。
    5. 将多泡切成两半,并使用共和显微镜对两半进行图像,以确保货物居中(参见步骤 6,用于激发和发射波长)。

5. 货物配方

注:多泡制剂可以装点各种货物类型,包括小分子、蛋白质和核酸。

  1. 根据先前的研究,在蛋白质货物的情况下,使用辅料,包括聚乙二醇(PEG)6,聚氯基酮(PVP)和糖聚合物6, 以提高蛋白质在聚泡配方中的稳定性。
  2. 根据步骤 2 中的协议形成多泡。
  3. 通过将 17.11 g 的海激素添加到 625 μL 的 HIV gp120/41 抗原中,准备抗原溶液。
  4. 在多泡中间手动注射1μL抗原溶液。
  5. 打开第 0 天、第 7 天、第 14 天和第 21 天的多泡,并记录抗原的荧光,其激发和发射波长分别为 497 nm 和 520 nm。
  6. 使用酶链接免疫吸附剂测定(ELISA)确定抗原的功能,并使用5%的脱脂牛奶作为阻断缓冲液。

6. 货物放行

注:小分子或抗原可用作货物类型

  1. 小分子
    1. 在37°C、50°C为PLGA多泡和37°C、50°C、50°C、70°C(PCL/PCLTA多泡)中,用中基磷酸盐孵育多泡。
      注:我们建议在高于体温的测试中,之所以能模拟多泡在PCL和PLGA内激光照射金纳米棒(奥纳)时达到的温度(50°C);和 b) 加速 PCL(50°C,70°C)的降解过程。
    2. 在每个时间点,收集超自然剂,并更换400μL的新鲜PBS。
    3. 使用板读卡器量化收集的超级纳的荧光强度。
      注:使用 416 nm/514 nm 的 ex/em 进行 acriflavine。
  2. 抗原
    1. 在37°C的400μL中用中维牛白蛋白血清(BSA)-488孵育多泡,在37°C时孵育50°C,在37°C时孵育50°C,在PCL/PCLTA多泡中孵育50°C。
    2. 在每个时间点,收集超自然剂,并更换为400μL新鲜PBS。
    3. 使用板读卡器量化收集的超级纳的荧光强度。对于 BSA-488,请使用 497 nm/520 nm 的 ex/em。
      注:不应在70°C下对PCL/PCLTA多泡进行释放研究,以避免将抗原暴露在极端温度下。

7. 毒性

  1. 使用中子活化分析 (NAA) 量化多泡中的氯含量
    1. 在 0.010 mBar 真空和 -85 °C 下,使用冻干 2、4、6、20 和 24 h 的多泡进行本研究。
    2. 测量 5-9 毫克多泡,并把它们放在 LDPE 辐照小瓶上。
    3. 准备来自国家标准与技术研究所(NIST)可追溯校准解决方案的1000克/mL氯校准解决方案。
    4. 使用1兆瓦Triga反应器以9.1×1012/cm 2 μs的中子流速对每个样品进行中子辐照。
    5. 将多泡转移到未辐照小瓶中。
    6. 使用 HPGe 探测器在 360 秒衰变间隔后获取 500 s 的伽马射线光谱。
    7. 使用堪培拉工业的 NAA 软件来分析数据。
  2. 使用 NAA 量化从多泡中释放的氯含量
    1. 在 37 °C 的 400 μL PBS 中孵育过夜(在 0.010 mBar 真空和 -85 °C) 中冻干的多泡。
    2. 在孵育后的第1周、第2周和3周收集超级钠。
    3. 使用与上述步骤 7.1 中所述方法相同的方法,使用 NAA 分析超钠的氯含量。

8. S.等人的AUNR合成

  1. 通过混合 250 μL 10 mM 氯尿酸 (HAuCl 4)、7.5 mL 的 100 mm 甲基溴 (CTAB) 和 600 μL 的 10 mM 冰冷溴酸 (NaBH4) 来制备 AuNR 播种溶液。4
  2. 通过将 40 mL 的 100 mM CTAB、10 mM HAuCl4的 1.7 mL、250 μL 的硝酸银 (AgNO3)和 270 μL 的 17.6 mg/mL 抗坏血酸混合到管中,制备生长溶液。
  3. 在 1200 rpm 下将 420 μL 的种子溶液与生长溶液大力混合 1 分钟。然后让混合物不受干扰,反应16小时。
  4. 在8000克g下离心10×去除混合物中的过量试剂,然后丢弃上流剂g

9. 索利曼、M.G.等人对奥纳的疏水性 9

  1. 使用 1 mM 氢氧化钠 (NaOH) 将 1.5 mL 的合成 CTAB 稳定 AUNRs 的 pH 调整为 10。
  2. 在 400 rpm 的转速下,用 0.1 mL 0.3 mM 甲基化 PEG (mPEG) 硫醇搅拌溶液。
  3. 在 500 rpm 的氯仿中将 PEGylated AunRs 与 0.4 M 多二胺 (DDA) 混合 4 天。
  4. 移出含有疏水性AUNR的顶层有机层,并在4°C储存,直到将来使用。

10. 多泡的尼查活化

  1. 将聚合物(PLGADA 或 PCL/PCLTA)溶液与疏水性奥纳混合在 1:9(卷/伏)。中。
  2. 在0.005:1(卷/伏)中将光启动器添加到聚合物-AUNR混合物中。
  3. 通过将聚合物-AuNR混合物注入0.92 mL玻璃瓶中,用10%的CMC(wt/vol)形成多泡(参见步骤2)。
  4. 在2 W/cm 2下,以254纳米波长治疗60 s的多
  5. 在液氮中闪冻30 s,在0.010 mBar真空和-85°C下冻干过夜。
  6. 使用钳子分离干燥的多泡,用 DI 水清洗以去除任何残留的 CMC。
  7. 在37°C下孵育400μL PBS中的多泡。
  8. 每周一、周三和周五,使用 801 nm NIR 激光在 8A 下激活多泡,5 分钟。
  9. 在激光激活之前和之后拍摄多泡的前瞻性红外 (FLIR) 图像,以获得温度值。
  10. 根据FLIR图像中的温度值计算激光激活之前和之后的温度差异。

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Representative Results

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使用SEM和NAA广泛描述多泡。货物成功居中,导致延迟爆裂释放。由于多泡中存在AUNRs,多泡也成功地被激光激活。

多泡表征
在没有CMC水溶液中注入的多泡由于与玻璃瓶底部接触而导致多泡变平(图1A,B)。当使用 5% 基于 CMC 的水溶液代替 DI 水时,观察到部分扁平化(图 1C)。随后,玻璃瓶中10%基于CMC的水溶液导致溶液中悬浮多泡,从而成功维持多泡球的球度(图1D)。

货物中心
在没有CMC的情况下,货物注入多泡导致泄漏,导致多泡内货物没有滞留(图3)。为了应对这一挑战,使用了两种方法:1) 使用K 2 CO3成功地提高了PCLTA的粘度,K 2 CO3在用三晶酸盐进行末影化后分离(图2),2)用5%的CMC混合货物后,货物粘度成功增加(图3,图4)。PLGADA多泡的粘度足以方便货物的居中,因此没有使用K2CO3进行调节

抗原功能
HIV gp120/41抗原在注射到多泡之前与海激素混合,没有海激素(图5)。观察到抗体与抗原(称为功能)的结合效率与带海激素和无海哈洛糖无抗原无显著差异。

无需激光激活即可释放研究
在第19天和第5天,在PLGADA多泡体中观察到延迟爆发释放,这些多泡分别孵育在37°C(图6A)和50°C(图6B)。在PCL/PCLTA多泡体中,也观察到延迟爆发释放,在160天和60日,在50°C(图7A)和70°C(图7B)中孵育的多Figure 7泡。(7B)。这些释放研究是在没有激光可检测的AUNRs的情况下进行的。

多泡的体外激光活化
在PLGAD多泡(图8A)和PCL/PCLTA多泡(图A8B)中,在体中具有AUNRs的多泡成功多次被激光激活。在PCL/PCLTA多泡中,激光活化前和之后的温度变化分别为10±1°C和5±1°C,在外壳中AuNR浓度较高和较低。在PLGADA多泡中,激光活化前和±观察到的温度变化为11±2°C和6±1°C,在外壳中AuNR浓度较高和较低。

Figure 1
图1:保持多泡球的球面性。SEM图像 (A) 14 kDa PCL/300 Da PCLTA 扁平多泡由于多泡与玻璃瓶底部接触;(B) 14 kDa PCL/300 Da PCLTA 多泡从顶部与玻璃底部没有接触;(C) 与 DI 水溶液相比,注射到 5% CMC 溶液中时,PCL/PCLTA 多泡的扁平度较小,导致与小瓶接触点形成半球状形状;(D) 注射到 10% CMC 溶液中时未到达玻璃瓶底部的多泡,从而保持球形。指示的所有比例杆为 500 μm。这个数字已经修改了李等人7。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 2
图2:PCLTA粘度的调制。在PCLTA中K2CO3的浓度从0增加到80mg/mL,观察到动态粘度与K2CO3的浓度成比例增加。这个数字已经修改了阿伦库马尔等人10。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 3
图3:带无CMC的货液注入多泡。顶部面板显示在没有 CMC 的情况下,从喷射过程中货物泄漏的视频中提取的帧。底部面板显示从多泡内货物保留视频中提取的帧,在 5% CMC 存在的情况下。这个数字已经修改了李等人7。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 4
图4:中心货物荧光显微镜图像的 (A) PCL/PCLTA 聚泡与中心货物, (B) PCL/PCLTA 多泡与货物在壳和居中非荧光染料.这个数字已经修改了阿伦库马尔等人10。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 5
图5:具有海激素的抗原功能。使用ELISA对HIV gp120/41在多泡内带和没有带气囊素的功能进行了分析。抗体与蛋白质的结合效率通常被视为蛋白质功能的指标。当我们在这项研究中讨论抗原的功能时,我们打算它意味着它帮助抗体结合感兴趣的蛋白质(这是蛋白质功能的指标)。这两组之间没有统计意义。置信区间用实线和虚线表示。这个数字已经修改了李等人7。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 6
图6:PLGA多泡的延迟突发释放释放研究显示,在(A) 37°C, (B) 50°C)的中间,PLGADA多泡的延迟突发释放。 实线表示基于数据点获得的拟合曲线。这个数字已经修改了阿伦库马尔等人10。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 7
图7:PCL/PCLTA多泡的延迟突发释放释放研究表明,在(A) 50°C, ( B ) 70°C)的中间有克里弗拉文的PCL/PCLTA多泡的延迟突发释放。B 这个数字已经修改了阿伦库马尔等人10。请单击此处查看此图的较大版本。

Figure 8
图8:NIR激光激活多泡。在NIL激光活化之前和之后观察到的温度变化在PLGADA多泡中,( B ) PCL/PCLTA多泡在聚合物壳中AuNRs的浓度较高和较低。B这种温度的升高可能加速聚合物降解,导致货物提前释放。这个数字已经修改了阿伦库马尔等人10。请单击此处查看此图的较大版本。

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Discussion

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当前技术和挑战
基于乳化的微颗粒和纳米粒子通常被用作药物输送载体。虽然从这些装置释放货物的动力学已经进行了广泛的研究,控制爆裂释放动力学一直是一个重大挑战11。由于货物接触过量的水性和有机溶剂,基于乳液的系统也限制了货物的多功能性和功能性。由于货物变性和聚合的可能性,基于蛋白质的货物通常与微粒子和纳米粒子不兼容。除了货物稳定性外,货物动力学在疫苗中尤其重要,因为需要增压注射导致血清转化。以往在疫苗交付方面应对这些挑战的努力尚未充分成功,因为单一注射疫苗系统的概念已经存在了几十年,尚未在临床上得到翻译。

我们的多泡疫苗输送平台通过最大限度地减少暴露的货物量,可以潜在地克服货物接触有机溶剂的挑战。这项技术可能至少容纳两个货舱:壳体中的货物和中间的货物。具有中心货物的多泡可用于控制货物的爆裂释放,同时与不同的货物类型兼容,包括小分子和反原。在这项研究中,我们使用具有不同降解时间的聚酯、PLGADA(较短的降解时间)和PCL/PCLTA(更长的降解时间),作为聚合物载体和丙烯酸酯(小分子)作为货物类型,以证明延迟爆发释放。在以下各节中,我们描述了形成能够同时支持延迟突发释放和 NIR 激活的多泡的关键步骤,特别是对于未来的按需交付应用程序。

货物以多泡为中心
货物中心是多泡在配方过程中遇到的重大挑战之一。喷射后,货物将立即转移到水面,货袋将稳定,而不会爆裂到水性10%CMC溶液中。由于货物周围的聚合物厚度不均匀,具有这种非中心货物的多泡可能导致提前释放。因此,调节聚合物和货物的粘度对于解决与货物中心有关的问题至关重要。通过将货物溶液与 5% 的 CMC 混合,提高了货物的粘度。为了增加聚合物的粘度,聚合物的分子量可以被修改。然而,分子量的增加往往导致聚合物降解速度变慢,从而进一步延迟货物释放。因此,通过增加聚合物的浓度来改变聚合物的粘度。高浓度(1000毫克/mL)足以增加PLGADA的粘度。然而,PCL/PCLTA的粘度不足以将货物保留在中间。因此,在PCLTA的末端反应后分离的K2 CO3 用于增加PCLTA的粘度。

小说延迟发布
使用以中心货物的多泡进行的释放研究观察到延迟爆裂释放。小分子(acriflavine)在多泡中用作中心货物,用于研究释放轮廓。由于聚合物降解时间的差异,根据使用的聚酯观察到独特的释放轮廓。与PCL/PCLTA多泡相比,在PLGAD多泡中观察到了早期爆发释放。在PLGAD多泡中观察到了早期货物释放,因为与PCL 13相比,PLGA降解速度更快。在成功调制两种聚酯的释放动力学后,我们进一步希望对多泡进行设计,以可能按需释放货物。

多泡的尼尔激活
按需放行货物在病人需要的时间安排方面,在利用现行的运送策略方面一直具有挑战性。我们假设,通过使用NIR敏感(即启用性)剂,加速聚合物降解,可以加快货物按需放行。AUNRs已被广泛研究,因为他们的能力被激活使用N尼尔激光,可以通过皮肤15移动几厘米。因此,CTAB稳定奥纳是根据基特勒、S等人的协议编写的,并且根据索利蒙、M.G.等人出版的方法进行疏水性处理。然后,在所需的时间点用NIR激光照射壳体中具有疏水性AUN的多泡,观察温度变化5分钟。根据FLIR图像测量激光之前和之后的温度。固化聚合物外壳有助于在激光激活期间保持奥尼尔的形状,从而实现多泡的多尼欧活化。这是一个有趣的观察,因为在以前的文献中,由于激光激活16,AnRs经常失去其杆状的形状(对NIR激活至关重要)。使用AuNRs成功激光激活多泡,可以为控制下一代多泡中货物的按需释放铺平道路。

意义和未来应用
因此,从这项研究中获得的结果表明,多泡具有潜在的潜在应用,作为一个新的疫苗输送平台。本文中描述的多泡的制备将进一步使其他研究人员能够使用多泡作为其他治疗应用的传递平台。例如,除了疫苗输送外,多泡也可用于输送具有不同释放动力学的协同治疗剂。此外,多泡是由可生物降解的聚酯制成,在许多FDA批准的医疗设备中都有用。我们进一步验证了多泡的安全性,表明从多泡释放的氯在EPA17建议的安全水平。因此,我们新颖、可注射、可紫外线的多泡平台有可能被用作各种货物类型的安全有效的药物输送平台。

此技术的局限性
多泡平台技术可用作疫苗输送平台,有可能实现控制释放。我们的研究突出了该平台的多功能性,能够交付不同的货物类型,包括抗原和小分子。然而,这项技术目前的限制之一是,货物目前正在手动注入。出于扩展目的,我们目前正在设计一个自动化平台,该平台将在多泡中实现货物注入(即作为一个阵列),并可能帮助缓解有关该技术可译性的担忧。

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Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

我们要感谢B bryan E. Tomlin博士,他隶属于TAMU化学系的元素分析实验室,他协助了中子活化分析(NAA)。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1-Step Ultra Tetramethylbezidine (TMB)-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Substrate Solution Thermo scientific 34028
2-Hydroxy-2-methylpropiophenone TCI AMERICA H0991
450 nm Stop Solution for TMB Substrate Abcam ab17152
Acryloyl chloride Sigma Aldrich A24109-100G
Acriflavine Chem-Impex International 22916
Anhydrous ethyl ether Fisher Chemical E138-500
Anti-HIV1 gp120 antibody conjugated to horseradish peroxidase (HRP)
Bovine serum albumin (BSA) Fisher BioReagents BP9700100
BSA-CF488 dye conjugates Invitrogen A13100
Bromosalicylic acid Acros Organics AC162142500
Carboxymethylcellulose (CMC) Millipore Sigma 80502-040
Centrimonium bromide (CTAB) MP Biomedicals ICN19400480
Chloroform Fisher Chemical C2984
Coating buffer Abcam ab210899
Dichloromethane (DCM) Sigma Aldrich 270997-1L
Diethyl ether Fisher Chemical E1384
Dodeacyl Amine Acros Organics AC117665000
Doxorubicin hydrochloride Fisher BioReagents BP251610
L-ascorbic acid Acros Organics A61 100
Legato 100 Syringe Pump KD Scientific 14 831 212
mPEG thiol Laysan Bio NC0702454
Nonfat dry milk Andwin Scientific NC9022655
Potassium carbonate Acros Organics AC424081000
Phosphate saline buffer Fisher BioReagents BP3991
(Poly(caprolactone) Sigma Aldrich 440744-250G
(Poly(caprolactone) triol Acros Organics AC190730250
Poly (lactic-co-glycolic acid) diacrylate CMTec 280050
Potassium carbonate Acros Organics AC424081000
Recombinant HIV1 gp120 + gp41 protein Abcam ab49054
Silver nitrate Acros Organics S181 25
Sodium borohydride Fisher Chemical S678 10
Tetrachloroauric acid Fisher Chemical G54 1
Trehalose Acros Organics NC9022655
Triethyl amine Acros Organics AC157910010

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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生产近红外敏感、核心壳疫苗输送平台
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Arun Kumar, S., Lee, J., Bishop, C. J. Production of Near-Infrared Sensitive, Core-Shell Vaccine Delivery Platform. J. Vis. Exp. (164), e60569, doi:10.3791/60569 (2020).More

Arun Kumar, S., Lee, J., Bishop, C. J. Production of Near-Infrared Sensitive, Core-Shell Vaccine Delivery Platform. J. Vis. Exp. (164), e60569, doi:10.3791/60569 (2020).

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