Summary
Een fundamenteel aspect van de beoordeling van het welzijn van dieren in gevangenschap is de vraag of de dieren hebben wat ze willen. Hier presenteren we een protocol om de voorkeur van de behuizing in de zebravis(Danio rerio)te bepalen met betrekking tot de aanwezigheid/afwezigheid van milieuverrijking en toegang tot het stromen van water.
Abstract
De beoordelingstechnieken voor dierenwelzijn proberen rekening te houden met de specifieke behoeften en wensen van het dier in kwestie. Het bieden van verrijking (de toevoeging van fysieke voorwerpen of conspecificaties in de woonomgeving) is vaak een manier om in gevangenschap levende dieren de mogelijkheid te geven om te kiezen met wie of wat ze omgaan en hoe ze hun tijd doorbrengen. Een fundamenteel onderdeel van het aquatisch milieu dat vaak over het hoofd wordt gezien in gevangenschap, is echter het vermogen voor het dier om te kiezen voor lichaamsbeweging. Voor veel dieren, waaronder vis, oefening is een belangrijk aspect van hun leven geschiedenis, en is bekend dat vele voordelen voor de gezondheid hebben, met inbegrip van positieve veranderingen in de hersenen en gedrag. Hier presenteren we een methode voor de beoordeling van habitatvoorkeuren bij in gevangenschap levende dieren. Het protocol zou gemakkelijk kunnen worden aangepast om te kijken naar een verscheidenheid aan omgevingsfactoren (bijvoorbeeld grind versus zand als substraat, plastic planten versus levende planten, lage stroming versus hoge stroming van water) bij verschillende aquatische soorten, of voor gebruik met terrestrische soorten. Statistische beoordeling van de voorkeur wordt uitgevoerd met behulp van Jacob's preferentie-index, die de habitats rangschikt van -1 (vermijding) tot +1 (meest voorkeur). Met deze informatie kan worden bepaald wat het dier wil vanuit een welzijnsperspectief, inclusief hun voorkeurslocatie.
Introduction
De voorschriften voor de wijze waarop proefdieren in gevangenschap moeten worden gehuisvest, zijn expliciet en duidelijk gedefinieerd. De Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC) International houdt toezicht op en beheert alle organisaties en instellingen die met onderzoeksdieren werken en heeft specifieke richtlijnen voor soorten-geschikte veeteelt en huisvesting. Bijvoorbeeld, De AAALAC's Guidance on the Housing and Care of Zebrafish, Danio Rerio1 "sterk stimuleert" het gebruik van verrijking (de toevoeging van fysieke objecten of conspecifics in de woonomgeving) bij de huisvesting van zebravissen in gevangenschap. De gids gaat verder met de status: "Het verstrekken van kunstmatige planten of structuren die de zebravis habitat imiteren kunnen dieren een keuze binnen hun omgeving."
Bewijs suggereert dat verrijking de groei van nieuwe neuronen (neurogenese) kan stimuleren in gebieden van de hersenen die betrokken zijn bij de verwerking van ruimtelijke informatie2, en er wordt gedacht dat deze neurale veranderingen worden geassocieerd met verbeterde leervermogen3. De effecten van verrijking op neurogenese en leren zijn op grote schaal bestudeerd in verschillende taxa, waaronder vis4,5, vogels6, reptielen7, en zoogdieren8. Hoewel dit soort studies belangrijk zijn om de effecten van verrijking op de hersenen en het gedrag te begrijpen, houden ze geen rekening met de specifieke keuzes of voorkeuren van dieren voor een bepaalde omgeving ten opzichte van een andere.
Een fundamentele vraag die moet worden gesteld bij de beoordeling van het welzijn van in gevangenschap levende dieren is of de dieren al dan niet hebben wat ze willen9. Een manier om deze vraag die tastbaar bewijs biedt te onderzoeken is om dieren te voorzien van keuzes die ons in staat stellen om hun subjectieve voorkeuren te begrijpen. Twee studies hebben bijvoorbeeld onderzocht of zebravissen de voorkeur geven aan toegang tot een verrijkte of een effen omgeving, waarbij beide studies een voorkeur aangeven voor gebieden die verrijking10,11bevatten . Er is echter ook gesuggereerd dat zebravissen onverschillig lijken voor milieuverrijking12,dus het antwoord op de vraag is duidelijk niet duidelijk. Een andere toepassing van voorkeurstests in verband met dierenwelzijn strekt zich uit tot het proberen te begrijpen hoe verschillende aspecten van een verrijkte omgeving een rol spelen in de keuzes die een individueel dier maakt. Alleen al bij vissen hebben verschillende soorten verrijking differentiële effecten op de hersenen en het gedrag, en deze relatie wordt verder gecompliceerd door individuele verschillen in persoonlijkheidskenmerken13. Bovendien zou voorkeurstests nuttig kunnen zijn voor vergelijkende studies naar milieuverrijking. Zelfs bij verschillende vissoorten is aangetoond dat verrijking een effect heeft op veel verschillende soorten gedrag, waaronder agressie14, durf15, beweging16en risiconemend gedrag17.
Jacob's voorkeursindex is een statistische test die vaak wordt gebruikt om de woningvoorkeuren te kwantificeren18. Jacob's voorkeursindex wijst een waarde toe aan elke verschillende habitat op basis van het aantal dieren dat in elk habitattype op verschillende tijdspunten aanwezig is, waarbij de voorkeur varieert van -1 (vermijding) tot +1 (meest voorkeur). Hier beschrijven we een methode voor het gebruik van Jacob's voorkeursindex om de voorkeuren van de huisvesting in vis te onderzoeken en het voorbeeld te gebruiken om twee belangrijke kenmerken van het aquatisch milieu te beoordelen: 1) de aanwezigheid of afwezigheid van verrijking; en 2) de waterstroom19. Het protocol kan echter gemakkelijk worden aangepast om te kijken naar een verscheidenheid aan omgevingsfactoren (bijvoorbeeld grind versus zand als substraat, plastic planten versus levende planten, laag versus hoog waterstroom) tussen verschillende soorten en landschappen (bijvoorbeeld water en landte).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De huidige studie heeft goedkeuring en voldoet aan alle eisen van de dierenverzorging en gebruikprotocollen van de Pennsylvania State University; IACUC nr.
1. Opstelling van voorkeursapparatuur
- Goedkeuring krijgen van het Comité voor dierenverzorging van het instituut (of gelijkwaardige organisatie) voor alle experimentele en houderijprocedures waarbij levende dieren betrokken zijn voordat met het experiment wordt begonnen.
- Gebruik een experimentele tank gemaakt van ondoorzichtig wit plastic. De wanden tussen de zones zijn gemaakt van grijs acryl dat is bevestigd op zijn plaats met silicium kit.
OPMERKING: De grootte van de experimentele tank is afhankelijk van de grootte van de soorten van belang en het aantal gebruikte personen (bijvoorbeeld voor 8 volwassen zebravissen wordt een tank van 76 cm L x 76 cm W x 30 cm H aanbevolen). - Splits de experimentele tank op in vier zones die variëren in overeenstemming met de specifieke te testen habitatparameters. Voorbeelden van verschillende soorten verrijking om te onderzoeken zijn zandige versus rotsachtige ondergrond, kunstmatige planten versus schuilplaatsen, of stroom van water versus aanwezigheid van kunstmatige planten (Figuur 1).
- Als u de waterstroom als renteparameter gebruikt, gebruikt u kleine pompen om waterstralen te leveren (zie Tabel met materialen). Stel de pompen op een gekozen snelheid, zodat ze zorgen voor een constante en gerichte stroom van water. Kies de gewenste snelheid op basis van de ecologie en levensgeschiedenis van de soorten van belang (bijvoorbeeld 14 cm/s voor zebravissen).
- In het midden van de experimentele tank, hebben een centrale arena waar voedsel wordt geleverd (Figuur 1). Toegang tot de centrale arena van elke zone is door middel van een kleine opening in de scheidingswanden. De opening is groot genoeg voor de soorten van belang om te bewegen tussen zones ongehinderd, maar klein genoeg om eventuele visuele signalen van de vis zou kunnen ervaren uit andere zones te verminderen.
- Plaats een biofilter en een kachel in elke hoek van de tank, maar buiten het experimentele gebied om de waterstroom niet te verstoren en een constante watertemperatuur in alle zones te garanderen.
- Stel extra experimentele tanks in zoals de ruimte dicteert. Draai de verschillende zones in elke experimentele tank om eventuele sequentiële bias te beperken. Zorg ervoor dat alle replicerende tanks uniforme omstandigheden hebben (dezelfde lichtniveaus, watertemperatuur, enz.)
- Plaats camera's (zie Tabel met materialen)op statieven direct boven elke experimentele tank, zodat alle zones zichtbaar zijn. Vermijd groothoeklenzen en zorg ervoor dat de geheugenkaarten voldoende ruimte hebben om op te nemen.
- Stel de ruimteverlichting geleidelijk in (bijvoorbeeld 1/2 uur) 12 L: 12 D-cyclus om zonsopgang en zonsondergang te simuleren. Houd de watertemperatuur op 25 ± 1 °C.
2. Vastleggen, acclimatisatie en procedure
- Houd vis in huis tanks wanneer ze niet worden getest. Netto alle testvissen van hun huistanks en plaats in de centrumarena van de experimentele tank (Dag 1). Minimaliseer opnametijden om stress te verminderen (bijvoorbeeld minder dan 30 s).
OPMERKING: Een alternatieve procedure voor het overbrengen van vis van hun thuistank naar de experimentele tank die stress kan minimaliseren, is het vervoeren van de vis in een beker water. - Houd het aantal en het geslacht van de vis in elke experimentele tank constant over repliceren tanks en kies op basis van de grootte van de soort en ecologie.
- Op dag 1 tot 4 besteden vissen tijd aan het acclimatiseren en verkennen van de verschillende zones. Verzamel geen gegevens op deze dagen.
OPMERKING: Verleng of verminder het aantal dagen voor acclimatisatie, afhankelijk van het specifieke experimentele protocol. De acclimatisatieperiode moet echter voldoende zijn om de effecten van het hanteren te minimaliseren en om de vis te laten wennen aan het voeden in het apparaat. - Gedurende de acclimatisatieperiode wordt de waterkwaliteit nauwlettend in de gaten gehouden door regelmatige waterkwaliteitstests uit te voeren (bijvoorbeeld pH-, nitraat- of nitrietniveaus) en het water te vervangen als er problemen worden gedetecteerd (zie Materiaaltabel).
- Voer het visvlokvoedsel (zie Tafel van Materialen)in de centrale arena met behulp van een drijvende voedselring (zie Tafel van Materialen)aan de muur van de centrale arena aan het wateroppervlak. Een voedselring zorgt ervoor dat voedseldeeltjes binnen de centrale arena blijven en geen vooroordeel opleveren voor zones als gevolg van voedseldriften.
- Geef de vis .5 h om ad libitum te voeden voordat u het overgebleven voedsel uit de experimentele tank verwijdert met een dipnet. Voer de vis een keer in de ochtend en eenmaal in de middag.
- Beoordeel gedrag op dag 5 tot 7. Schakel camera's aan en neem visgedrag op voor 2 uur na elke geplande ochtend- en middagvoeding. Op dag 8 verwijder alle vissen uit de experimentele tanks met een dip net en plaats ze terug in hun huis tanks.
- Afhankelijk van hoeveel carter water beschikbaar is, vervang ten minste een 1/3 van het water in de experimentele tank met vers carter water om eventuele effecten van stresshormonen op vissen te verminderen in volgende repliceert.
- Stel de experimentele tanks in in overeenstemming met het zonerotatieschema voor die week. Het roteren van de zones vermindert de kans op gedragsbias als gevolg van de plaatsing van een zone ten opzichte van elkaar. Begin dan opnieuw met het testproces met een nieuwe partij vis.
3. Metingen en gegevensanalyse
- Download de video's naar een computer aan het einde van elke opnamedag. Dit zorgt ervoor dat er ruimte is op de geheugenkaart voor elk gebruik.
- Gebruik videosoftware (zie Tabel met materialen)om zonevoorkeur te kwantificeren. Tel handmatig het aantal vissen in elke zone met intervallen van 5 minuten in elke opnameperiode van 2 uur (inclusief de centrale arena in deze tellingen). Definieer het geslacht van de vis tijdens de analyse als differentiatie tussen mannen en vrouwen mogelijk is uit de videobeelden.
- Als u de habitatvoorkeur wilt analyseren, berekent u het gemiddelde aantal vissen per zone voor elke replicerende tank (d.w.z. alle gegevens gemiddeld over de 3 dagen). Om een voorkeursscore voor structuurgebruik te verkrijgen, berekent u Jacobs' voorkeursindex15 als
J = (rx − p)/[rx + p) – 2*rx*p]
wanneer x de belangenzone is, rx de verhouding tussen vis in zone x en het totale aantal vissen in alle zones is, en p het beschikbare aandeel van alle zones in de experimentele tank is. De index varieert tussen +1 voor maximale voorkeur en −1 voor maximale vermijding. - Om te bepalen of er veranderingen zijn in de snelheid waarmee vissen tijdens een observatieperiode tussen de zones schakelen, berekent u het schakelpercentage, rsr,in de eerste en laatste 5 min van elke observatieperiode, waarbij rsr het aantal keren is dat een vis elke zone binnenkomt vanuit de centrale arena, gedeeld door het totale aantal vissen.
- Overweeg een vis te zijn opgenomen in een zone wanneer het hele lichaam van de vis kruist door de opening scheiden van de zones. Bereken een start- en afwerkingsgemiddelde schakelsnelheid voor elke replicerende tank. Voer alle gedragsobservaties door dezelfde experimentator uit om elke experimentator observatiebias te verminderen.
- Aan de hand van statistische software (zie Tabel met materialen)voert u relevante statistische analyses uit. Voorgestelde analyses omvatten een enkele ANOVA, met voorkeursindex als de afhankelijke variabele en zone als voorspellervariabele, en een gekoppelde t-test op de start- en afwerkingsgemiddelde schakelsnelheid voor elke tank.
- Pas tukey's meervoudige vergelijking post hoc test toe om zonevergelijkingen verder te onderzoeken, waarbij elke zone met elkaar wordt vergeleken. Complexere statistische analyse omvat gemengde modellen die tijdeffecten, arena-effecten, geslachtseffecten of zelfs individuele verschillen in gedrag beoordelen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
We gebruikten de voorkeurstest om de voorkeuren van de behuizing in zebravissen te onderzoeken, gezien de keuze tussen verschillende verrijking, waaronder 1) plastic planten en zanderig substraat; en 2) waterstroom. Deze werden verdeeld in vier zones: i) Alleen verrijkt; ii) Alleen stroom; iii) Verrijkt en stroom; iv) Vlakte; en een centrale arena waar voedsel werd geleverd19. Zebravissen vertoonden de hoogste voorkeur voor de Enriched and Flow-zone, die aanzienlijk anders was dan alle andere zones (Enriched Only, Flow Only, Plain en Central Arena; p < 0,01). Vissen vermeden zowel de Flow Only en Plain zones, meer tijd doorbrengen in de Central Arena19 (Figuur 2A). Bovendien verplaatsten zebravis zich aan het begin van de observatieperiode vaker tussen verschillende habitatzones dan aan het einde (figuur 2B).
Figuur 1: Voorbeelden van verschillende experimentele ontwerpen om te testen op habitatvoorkeuren. (A) Setup van een experimentele tank om de voorkeur van een zandige versus een rotsachtige substraat te testen. (B) Opstelling van een experimentele tank om de voorkeur van verrijking (kunststof planten) ten opzichte van een schuilplaats te testen. (C) Opstelling van een experimentele tank om de voorkeur van verrijking (kunststofplanten) ten opzichte van een waterstroom te testen. In alle figuurpanelen waren de vier hoekcompartimenten niet toegankelijk voor de vis en bevatten alleen kachels en filters. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 2: Representatieve gegevens waaruit de resultaten van een habitatvoorkeurstest op zebravissen worden weergegeven. a) Jacobs' voorkeursindex voor elke zone:i) Alleen verrijkt; ii) Verrijkt en stromend; iii) Alleen stroom; iv) Vlakte; en een neutrale Central Arena. Positieve en negatieve waarden geven respectievelijk voorkeur en vermijding aan. De boxen geven het 25 ± 75e percentielbereik aan en bevatten de mediaanlijn; balken vertegenwoordigen de 10e en 90e percentielwaarden; open stippen vertegenwoordigen punten buiten deze waarden. a = significant verschil met alle zones(p < 0,05); b = aanzienlijk verschillen van Verrijkt en Flow, Enriched Only, en de Central Arena(p < 0,05); en (B) vakpercelen met de schakelsnelheid aan het begin en het einde van de observatieperiode (vakken geven het 25 ± 75e percentielbereik aan en bevatten de mediaanlijn; balken vertegenwoordigen de 10e en 90e percentielwaarden). Figuur 2A is gewijzigd van DePasquale et al.19. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier presenteren we een experimenteel ontwerp dat ons in staat stelt om de voorkeuren van vis voor verschillende soorten habitats te onderzoeken. Enkele kritische stappen die belangrijk zijn bij het testen van de voorkeur zijn: 1) ervoor te zorgen dat uniforme omstandigheden worden gehandhaafd in verschillende replicaties (bijvoorbeeld externe geluiden of beweging, experimentator, waterchemie, lichtniveaus); 2) ervoor te zorgen dat de zones tussen de replica's worden gedraaid en een aanzienlijke hoeveelheid water wordt vervangen door vers zinkwater tussen de tests om vooroordelen te verminderen; (3) ervoor te zorgen dat een geschikte steekproefgrootte wordt gebruikt om significante resultaten op te sporen, zowel wat betreft het aantal personen in elke groep als het aantal replicerende tanks; en 4) als proeven worden opgenomen, optimaliseren en zorgen voor een goede video-opname en bestandsoverdracht.
Wijzigingen in het huidige protocol omvatten het blootstellen van vissen aan een verscheidenheid van andere habitattypes, zoals verschillende verrijkingsitems, verschillende substraten of zelfs verschillende stroomsnelheden. Bovendien kan het mogelijk zijn om diervolgsoftware te gebruiken om verder te begrijpen hoe de vissen de ruimte in elke zone gebruiken (bijvoorbeeld de vissen besteden tijd aan het zwemmen tegen de stroming van het water in de stroomzones, of vermijden ze dat deel van de habitat helemaal). Het kan echter nodig zijn de wanden van de experimentele tank te wijzigen om dit soort trackingsoftware aan te passen. Ten slotte kan de hier beschreven voorkeurstest worden aangepast aan elke vissoort, of mogelijk een aquatisch organisme dat de experimentator wil onderzoeken.
Een beperking van het huidige protocol is dat het testen van de voorkeur wordt beperkt door de middelen die aan de dieren worden aangeboden. Daarom kan het dier niet kiezen voor een voorkeur keuze, maar de minst onaangename van degepresenteerde 20. Het kan echter zijn dat het hebben van een keuze in de eerste plaats beter is voor welzijn dan alleen beperkte opties krijgen (d.w.z. alleen toegang tot de meest geprefereerde habitat). Ook is gesuggereerd dat zebravissen vinden lichte achtergronden aversief23, dus een alternatieve tank kleur (bijvoorbeeld zwart) kan meer geschikt zijn. Bovendien is het preferentieonderzoek vaak beperkt tot waarnemingen die in een klein tijdsbestek worden gedaan, waarbij het betrokken dier mogelijk onmiddellijk actie ondervindt in plaats van toekomstige behoeften21,22. Bovendien zijn geslacht, groepsgrootte en sociale context factoren die van invloed zijn op de groepsdynamiek en dus mogelijk habitatvoorkeuren bij vissen, dus het is belangrijk om te proberen deze factoren consistent te houden tussen replicaties.
Met onze representatieve resultaten hebben we laten zien dat zebravissen bij voorkeur kiezen voor zowel Verrijkt e-to-flow en verrijkte alleen zones en flow only en plain zones vermijden. Kortom, de Enriched and Flow zone kreeg de voorkeur boven alle andere zones. Een voorkeur voor verrijkte omgevingen, en met name de Enriched and Flow Zone, kan het gevolg zijn van een toegenomen behoefte aan zintuiglijke stimulatie (exploratie) of het kan de noodzaak zijn om schuilplaatsplaatsen te vinden (verminderde concurrentie van conspecifics). Interessant is dat er een lichte voorkeur voor de Central Arena over de Flow Only en Plain zones, wat suggereert dat het potentieel van voedsel wordt geleverd was een hogere motiverende factor dan zwemmen. Wat de verplaatsing tussen de zones betreft, werd er aan het begin van de observatieperiode meer geschakeld tussen de zones dan aan het einde. De toename van de beweging aan het begin van de observatieperiode kan overeenkomen met de timing van het voederen (vis werd een half uur voor de opname begonnen), dus ze kunnen meer gemotiveerd zijn geweest om te bewegen en op zoek te gaan naar extra voedsel. Samengevat is het protocol dat in de huidige studie wordt beschreven, een effectief instrument om te kijken naar habitatvoorkeuren bij vissen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door een Research Collaboration Fellowship en het Huck Institute aan de Pennsylvania State University, evenals USDA AES 4558. Het onderzoek voldeed aan alle eisen van de dierenverzorging en gebruikprotocollen van de Pennsylvania State University; IACUC nr.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Artificial Aquarium Plants | Smarlin | B07PDZQ5M5 | |
| Artificial Seaweed Water Plants for Aquarium | MyLifeUNIT | PT16L212 | |
| Experimental tanks | United State Plastic Corporation | 6106 | |
| Floating food ring | SunGrow | B07M6VWH9V | |
| Flow meter | YSI | BA1100 | |
| Jager Aquarium Thermostat Heater | Ehiem | 3619090 | |
| Master Water Quality Test Kit | API | 34 | |
| SPSS Statistics for Macintosh | IBM | Version 25.0 | |
| Submersible Pump, SL- | Songlong | SL-381 | |
| TetraMin Tropical Flakes | Tetra | 16106 | |
| Triple Flow Corner Biofilter | Lee's | 13405 | |
| Video camera | Coleman | TrekHD CVW16HD | |
| Windows Media Player (video software) | Microsoft | Windows Media Player 12 |
References
- Reed, B., Jennings, M. Guidance on the housing and care of zebrafish, Danio rerio. AAALAC International. , 36 (2010).
- van Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. Neural consequences of environmental enrichment. Nature Reviews Neuroscience. 1, 191-198 (2000).
- Oomen, C. A., Berkinschtein, P., Kent, B. A., Sakisda, L. M., Bussey, T. J. Adult hippocampal neurogenesis and its role in cognition. Wiley Interdisciplinary Reviews - Cognitive Science. 5 (5), 573-587 (2014).
- DePasquale, C., Neuberger, T., Hirrlinger, A. M., Braithwaite, V. A. The influence of complex and threatening environments in early life on brain size and behaviour. Proceeedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 283 (1823), 1-8 (2016).
- Salvanes, A. G. V., et al. Environmental enrichment promotes neural plasticity and cognitive ability in fish. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 280, 1-7 (2013).
- Barnea, A., Pravosudov, V. V. Birds as a model to study adult neurogenesis: bridging evolutionary, comparative and neuroethological approaches. European Journal of Neuroscience. 34 (6), 884-907 (2011).
- LaDage, L. D., et al. Interaction between territoriality, spatial environment, and hippocampal neurogenesis in male side-blotched lizards. Behavioral Neuroscience. 127 (4), 555-565 (2013).
- Kempermann, G. Why New Neurons? Possible Functions for Adult Hippocampal Neurogenesis. Journal of Neuroscience. 22 (3), 635-638 (2002).
- Dawkins, M. S. Using behaviour to assess animal welfare. Animal Welfare. 13, 3-7 (2004).
- Kistler, C., Hegglin, D., Würbel, H., König, B. Preference for structured environment in zebrafish (Danio rerio) and checker barbs (Puntius oligolepis). Applied Animal Behaviour Science. 135, 318-327 (2011).
- Schroeder, P., Jones, S., Young, I. S., Sneddon, L. U. What do zebrafish want? Impact of social grouping, dominance and gender on preference for enrichment. Laboratory Animals. 48 (4), 328-337 (2014).
- Matthews, M., Trevarrow, B., Matthews, J. A virtual guide for zebrafish users. Lab Animal. 31 (3), 34-40 (2002).
- Näslund, J., Johnsson, J. I. Environmental enrichment for fish in captive environments: Effects of physical structures and substrates. Fish and Fisheries. 17 (1), 1-30 (2016).
- Oliveira, K. V., Barreto, R. E. Environmental enrichment reduces aggression of pearl cichlid, Geophagus brasiliensis, during resident-intruder interactions. Neotropical Ichthyology. 8 (2), 329-332 (2010).
- Brydges, N. M., Braithwaite, V. A. Does environmental enrichment affect the behaviour of fish commonly used in laboratory work. Animal Behaviour Science. 118, 137-143 (2009).
- Ahlbeck Bergendahl, I., Miller, S., Depasquale, C., Giralico, L., Braithwaite, V. A. Becoming a better swimmer: structural complexity enhances agility in a captive-reared fish. Journal of Fish Biology. 90 (3), 1112-1117 (2017).
- Roberts, L. J., Taylor, J., de Leaniz, C. G. Environmental enrichment reduces maladaptive risk-taking behavior in salmon reared for conservation. Biological Conservation. 144 (7), 1972-1979 (2011).
- Jacobs, J. Quantitative measurement of food selection. Oecologia. 14, 413-417 (1974).
- DePasquale, C., Fettrow, S., Sturgill, J., Braithwaite, V. A. The impact of flow and physical enrichment on preferences in zebrafish. Applied Animal Behaviour Science. 215, 77-81 (2019).
- Bekoff, M. Encyclopedia of Animal Rights and Animal Welfare, 2nd edition. , Greenwood Press. Santa Barbara, CA. 53 (2009).
- Fraser, D., Nicol, C. J. Preference and motivation research. Animal Welfare. , 183-199 (2011).
- Franks, B. What do animals want. Animal Welfare. 28, 1-10 (2019).
- Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test. PLoS One. 7 (5), 1-8 (2012).
