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Neuroscience

पुरुष और महिला चूहों में पेल्विक स्वायत्त गंगलिया और संबद्ध नसों का विच्छेदन

Published: March 7, 2020 doi: 10.3791/60904
Automatic Translation
1,2, 1
1Department of Anatomy and Neuroscience, University of Melbourne, 2Department of Visceral Surgery, CHU de Nîmes

Summary

प्रमुख पेल्विक गैंगलिया में पैरायुक्त और सहानुभूतिन्यूरॉन्स होते हैं जो इनरवेट पेल्विक अंग होते हैं। यहां हम एक विच्छेदन विधि का वर्णन करते हैं और इन गंगलिया और उनके संबद्ध नसों की पहचान के लिए योजनाबद्ध प्रदान करते हैं। इन तरीकों को आगे के अध्ययन के लिए वीवो में इन गैंगलिया में प्रायोगिक हेराफेरी या हटाने के लिए आवेदन किया जा सकता है।

Abstract

द्विपक्षीय प्रमुख पेल्विक गंगलिया (एमपीजी; पर्याय, श्रोणि गंगलिया) कृन्तकों के पेल्विक अंगों को पोस्टगैलियनसहानुभूति और पैराइम्सिपेटिक न्यूरॉन्स का प्राथमिक स्रोत हैं; मनुष्यों में कार्यात्मक रूप से समकक्ष संरचना अवर हाइपोगैस्ट्रिक प्लेक्सस है। प्रमुख पेल्विक गैंगलिया वह मार्ग भी प्रदान करता है जिसके द्वारा काठ और पवित्र संवेदी अक्षतश्पियों तक पहुंचते हैं। ये जटिल, मिश्रित गैंगलिया सामान्य स्वायत्त तंत्रों के आगे प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए या रोग, चोट या आंत के दर्द के पूर्वनैदानिक मॉडल स्थापित करने के लिए पहचानना और विच्छेदन करना चुनौतीपूर्ण साबित हो सकता है। यहां हम इन गंगलिया और उनके संबद्ध तंत्रिका क्षेत्रों तक पहुंचने और कल्पना करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। हम इस प्रोटोकॉल को पुरुष और मादा चूहों दोनों के लिए योजनाबद्ध प्रदान करते हैं, क्योंकि पहचान के लिए गैंगलियन आकार और स्थललिंग लिंगों के बीच भिन्न होते हैं। प्रोटोकॉल इन विट्रो अध्ययन ों के लिए गैंगलियन को हटाने का वर्णन करता है, लेकिन इस विधि को प्रयोगात्मक हस्तक्षेपों (जैसे, तंत्रिका क्रश, तंत्रिका रिसेक्शन) या न्यूरोनल सर्किट (उदाहरण के लिए, माइक्रोइंजेक्शन द्वारा) मानचित्रण के लिए एक शल्य चिकित्सा वसूली प्रोटोकॉल में एकीकृत किया जा सकता है तंत्रिका ट्रेसर की) । हम गैंगलियन और उससे जुड़ी नसों की प्राथमिक संरचनाओं को तुरंत विच्छेदन के बाद और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला होने के बाद भी प्रदर्शित करते हैं।

Introduction

चूहा श्रोणि अंग शरीर विज्ञान और शरीर रचना विज्ञान के अध्ययन में उपयोग की जाने वाली सबसे अच्छी विशेषता वाली प्रजातियों में से एक है। जबकि उत्कृष्ट संसाधन इन अंगों1,2के विवरण के लिए मौजूद हैं, वे आम तौर पर संबंधित तंत्रिका संरचनाओं के बारे में जानकारी प्रदान नहीं करते हैं या एक प्रयोगात्मक अध्ययन का मार्गदर्शन करने के लिए अपर्याप्त संकल्प पर ऐसा करते हैं। के रूप में आगे विस्तृत नीचे, स्वायत्त गैंगलिया के संगठन है कि श्रोणि अंग समारोह को विनियमित स्वायत्त तंत्रिका तंत्र के बाकी के लिए काफी अलग है, यह मुश्किल न्यूरोएनाटॉमी अंय स्वायत्त ganglia के लिए उपलब्ध जानकारी से श्रोणि अंतरावता सुविधाओं का अनुमान करने के लिए कर रही है । इस क्षेत्र में प्रवेश करने वाले शोधकर्ताओं का मार्गदर्शन करने के लिए संसाधनों में इस कमी से श्रोणि अंगों के तंत्रिका नियमन पर शोध धीमा हो सकता है । यहां हम आगे इन विट्रो अध्ययन या प्रायोगिक हस्तक्षेप के लिए तंत्रिका तंत्र के इस क्षेत्र तक पहुंचने के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं ।

द्विपक्षीय प्रमुख श्रोणि गंगलिया (एमपीजी; पर्याय: श्रोणि गंगलिया; पैरासर्वाइकल गैंगलिया [महिला]; फ्रेंकेनहॉयूजर का गैंगलियन [महिला]) पोस्टगालेओनिक सहानुभूति और परानुभूति न्यूरॉन्स के प्राथमिक स्रोत हैं जो कृंतकके श्रोणि अंगों को आंतरिक करते हैं; अवर हाइपोगैट्रिक प्लेक्सस में मनुष्यों में समतुल्य न्यूरोनल स्ट्रक्चर3,4,5,6शामिल हैं . काठ और पवित्र पृष्ठीय जड़ गंगलिया से संवेदी अनुमान भी पेल्विक अंगों तक पहुंचने के लिए एमपीजी के माध्यम से यात्रा करते हैं। इसलिए, एमपीजी के तंत्रिका सर्किटरी और जीव विज्ञान को समझना श्रोणि अंगों के विकास और वयस्क कार्य से संबंधित नैदानिक स्थितियों के असंख्य पर प्रीक्लिनिकल अध्ययनों के लिए महत्वपूर्ण है। कृंतक एमपीजी के कई उत्कृष्ट विवरण7,8प्रकाशित किए गए हैं, लेकिन हमारा अनुभव यह है कि सामान्य रूप से ये विवरण हमेशा जानवर की वसूली की आवश्यकता होने पर व्यावहारिक रूप से एक प्रयोगात्मक विच्छेदन या इन संरचनाओं के हेरफेर को सूचित करने के लिए पर्याप्त मार्गदर्शन प्रदान नहीं करते हैं। इसके अलावा, एमपीजी अध्ययन के बहुमत पुरुष चूहों पर ध्यान केंद्रित करते हैं। मादा चूहों में, एमपीजी छोटे9 हैं और अलग शारीरिक स्थल हैं, और इसलिए दृश्य और विच्छेदन के लिए एक स्पष्ट रूप से सिलवाया गाइड की आवश्यकता होती है।

सहानुभूतिपूर्ण और परानुभूति वाले रास्ते उनके शरीर रचना विज्ञान द्वारा प्रतिष्ठित होते हैं, विशेष रूप से उनके प्रीगालियनिक न्यूरॉन्स का स्थान, थोराको-काठ की रीढ़ की हड्डी में पूर्वाग्रही न्यूरॉन्स होने वाले सहानुभूतिपूर्ण रास्ते और ब्रेनस्टेम (कपाल तंत्रिका अनुमानों) और पवित्र रीढ़ की हड्डी में स्थित पैराइम्प्रेसिक न्यूरॉन्स होते हैं। स्वायत्त प्रणाली के अधिकांश अन्य क्षेत्रों में, उनके लक्षित गैंगलियन न्यूरॉन्स अलग सहानुभूति या परानुभूति गंगलिया में स्थित हैं। हालांकि, एमपीजी सहानुभूति-परानुपेश गैंगलिया मिश्रित होने में असामान्य हैं, और इसलिए स्थूल पैमाने पर थोराको-काठ और पवित्र रीढ़ दोनों क्षेत्रों के प्रीगाग्लियोटिक एक्सोन से अभिसरण की साइटें हैं। इसलिए हमने अपने प्रोटोकॉल में इन प्राथमिक तंत्रिका क्षेत्रों के स्थान और विवरण को शामिल किया है जो प्रत्येक रीढ़ के क्षेत्र को एमपीजी से जोड़ते हैं, प्रायोगिक विश्लेषण या इन तंत्रिका घटकों के अलग हेरफेर को सुविधाजनक बनाते हैं। हम पाठकों के लिए विशेष रूप से प्रजातियों में इन गैंगलिया की तुलना करते हैं, कि कृंतक में रीढ़ की हड्डी के प्रीगालियन न्यूरॉन्स जो 'कार्यात्मक रूप से पवित्र' हैं, उदाहरण के लिए, सक्रिय हैं और मिक्टोरिटेशन, शौच और लिंग निर्माण के दौरान आवश्यक हैं, रीढ़ की हड्डी के स्तर L6-S1 पर स्थित हैं बजाय विशेष रूप से पवित्र खंडों में10; इसी तरह L6 और S1 पृष्ठीय जड़ गंगलिया श्रोणि अंगों के लिए प्रमुख 'पवित्र' संवेदी इनपुट प्रदान करते हैं। कृंतक में, अधिक रोस्ट्रल तंत्रिका सर्किट से संवेदी और preganglionic इनपुट रीढ़ की हड्डी के स्तर L1 और L210में केंद्रित है ।

यहां हम नर और मादा चूहों में एमपीजी और उनके संबद्ध तंत्रिका क्षेत्रों तक पहुंचने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, और विशिष्ट स्थलों को समझाने के लिए योजनाबद्ध के साथ इसका समर्थन करते हैं। यह प्रोटोकॉल इन विट्रो अध्ययनों के लिए ऊतक को हटाने के प्रायोगिक संदर्भ में इन संरचनाओं तक सर्जिकल पहुंच का मार्गदर्शन करता है, उदाहरण के लिए, आणविक लक्षण वर्णन या प्राथमिक संस्कृति के लिए एमपीजी न्यूरॉन्स को अलग करना। इसे फिक्सेटिव के साथ इंट्राकार्डियक परफ्यूजन के बाद एमपीजी हटाने के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है, हालांकि यह एक अधिक कठिन विच्छेदन है क्योंकि निकटवर्ती ऊतकरक्त से रहित होने पर तंत्रिका ऊतक कल्पना करना अधिक कठिन हो जाता है। इस प्रोटोकॉल को इन तंत्रिका मार्गों (जैसे, तंत्रिका रिसेक्शन, तंत्रिका ट्रेसर के माइक्रोइंजेक्शन) के प्रायोगिक हस्तक्षेप के लिए सर्जिकल सेटिंग में भी एकीकृत किया जा सकता है। इस प्रकार के विच्छेदन बायोइलेक्ट्रॉनिक चिकित्सा के बढ़ते क्षेत्र के लिए तेजी से महत्वपूर्ण हैं, जहां श्रोणि आंत की नैदानिक स्थितियों के इलाज के लिए न्यूरोमोडुलेशन के लिए नए लक्ष्य और दृष्टिकोण विकसित किए जा रहे हैं11। हम पुरुष चूहों के लिए पहले पूरा प्रोटोकॉल पेश करते हैं, फिर विशेष रूप से मादा चूहों के अनुरूप प्रोटोकॉल की प्रतिकृति।

Protocol

सभी प्रक्रियाओं को पशु प्रयोग के लिए संस्थागत और वित्तपोषण निकाय आवश्यकताओं के अनुसार आयोजित किया जाना है । इस विच्छेदन के लिए जानवरों के इस्तेमाल और इच्छामृत्यु के लिए प्रोटोकॉल को यूनिवर्सिटी ऑफ मेलबर्न (प्रोटोकॉल नंबर 1814639) में एनिमल एथिक्स कमेटी ने मंजूरी दे दी है।

नोट: यहां सचित्र विच्छेदन वयस्क (~ 10 सप्ताह) पुरुष और महिला स्प्राग-Dawley चूहों (जैव चिकित्सा विज्ञान पशु सुविधा, मेलबोर्न विश्वविद्यालय), वजन २८० ग्राम (महिला) और ३५० ग्राम (पुरुष) पर प्रदर्शन किया गया । इन विच्छेदन से पहले, चूहों को 4−5 मिन के लिए सीओ2 कक्ष में इच्छामृत्यु दी गई थी । मौत के तुरंत बाद, एमपीजी विच्छेदन किया गया । यदि किसी जानवर से ऊतक विच्छेदन करना, जो फिक्सेटिव के साथ पार्फ्यूजन से गुजरा है, तो ऑपरेटर को फिक्सेटिव के संपर्क से बचाने के लिए सावधानी बरतें, यानी, धुएं की अलमारी या डाउनड्राफ्ट कैबिनेट में विच्छेदन करें और उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षाउपकरण पहनें। ट्रांसकार्डायल परफ्यूजन के लिए एक प्रोटोकॉल विस्तार से प्रकाशित किया गया है12.

1. प्रमुख श्रोणि गैंगलियन और आसन्न तंत्रिकाएं: पुरुष चूहे में पहुंच और रिसेक्शन

नोट: चित्रा 1 एक पुरुष चूहे में MPG दृश्य के लिए शारीरिक स्थलों से पता चलता है ।

  1. पेट गुहा और श्रोणि तक पहुंच
    1. चूहे को एक सुपाण्य स्थिति में रखें और फर के साथ सर्जिकल क्षेत्र के संदूषण से बचने के लिए ध्यान रखते हुए, एक वेंट्रल मिडलाइन चीरा के माध्यम से पेट और श्रोणि तक पहुंचें।
    2. धीरे-धीरे पेट के अंगों को संदंश या कपास-इत्तला देने वाले एप्लीकेटर का उपयोग करके एक तरफ ले जाएं। प्रोस्टेट ग्रंथि और मूत्राशय के वेंट्रल पालि के स्थान पर ध्यान दें।
    3. मौलिक वेसिकल को कॉन्ट्रालेटरल साइड में ले जाएं।
    4. गैंगलियन के क्षेत्र में बेहतर पहुंच प्रदान करने के लिए वास आस्थगित में कटौती करें।
      नोट: विच्छेदन के इस बिंदु से, ऊतक को सूखना नहीं चाहिए; ऊतक को शारीरिक खारा (ताजा ऊतक विच्छेदन के लिए) या फिक्सेटिव (परफ्यूजन-फिक्स्ड जानवर के लिए) के साथ नम रखें। खारा के साथ ऊतक नम रखते हुए न केवल ऊतक संरचना को लाभ पहुंचाता है बल्कि विच्छेदन को आसान बनाता है क्योंकि सूखी तंत्रिकाएं अधिक नाजुक होती हैं और हैंडलिंग के दौरान अधिक आसानी से आंसू होती हैं।
    5. प्रोस्टेट ग्रंथि के डोरसोलेटरल पालि की पहचान करें, जिसमें से पृष्ठीय सतह पर गैंगलियन का स्थान है; यह अभी तक दिखाई नहीं देगा।
    6. गैंगलियन की कल्पना करने के लिए, गैंगलियन के पास और ओवरलाइंग ऊतकों को ध्यान से साफ ़ करें। यदि आवश्यक हो, तो विच्छेदन क्षेत्र को स्पष्ट रखने के लिए एक रिट्रैक्टर का उपयोग करें।
    7. एडीपोस ऊतक के पास के कुल को हटा दें और श्रोणि के पार्श्व प्रावरणी खोलें।
  2. एमपीजी और उससे जुड़ी नसों का विच्छेदन
    1. निम्नलिखित स्थानों की पहचान करें जो विच्छेदन के अगले चरणों के लिए लैंडमार्क प्रदान करते हैं: प्रोस्टेट ग्रंथि का डोरसोलेटरल पालि (गैंगलियन इस पालि की सतह पर स्थित है, मौलिक वेसिकल के बीच जंक्शन की तुलना में थोड़ा अधिक काडल और प्रोस्टेट) और मौलिक वेसिकल्स (जहां वे मिडलाइन पर एकाग्र होते हैं, जानवर की रोस्ट्रोकौडल धुरी पर गैंगलियन स्थान को इंगित करता है)।
    2. इस बिंदु से आवश्यक के रूप में, ध्यान से किसी भी ऊतक है कि तंत्रिका संरचनाओं के पूर्ण दृश्य बाधाओं को हटा दें, प्रोस्टेट ग्रंथि या प्रमुख जहाजों के पतले कैप्सूल को नुकसान से बचने ।
    3. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके श्रोणि तंत्रिका की पहचान करें।
      1. आंतरिक इलियाक नस और एमपीजी और मूत्राशय की ओर पेश करने वाली इसकी ठीक शाखा का पता लगाएं। यह संवहनी शाखा समानांतर चलती है और कभी-कभी पेल्विक तंत्रिका के भीतर एम्बेडेड होती है, फिर गैंगलियन को पार करती है।
      2. धीरे-धीरे पेल्विक तंत्रिका के नीचे ठीक-इत्तला वाले कोण वाले संदंश रखें और इसे आसपास के ऊतकों से मुक्त करने के लिए संदंश को स्लाइड करें।
        नोट: यह भी छोटे बर्तन के समानांतर चल रहे से श्रोणि तंत्रिका अलग करने के लिए संभव हो सकता है, लेकिन प्रयोगों के अधिकांश प्रकार के लिए यह आवश्यक नहीं है । पुष्टि करें कि संरचना उच्च आवर्धन के तहत देखने के द्वारा श्रोणि तंत्रिका है यह निर्धारित करने के लिए कि तंत्रिका में कई शिथिल एकत्रित मुखाग्र होते हैं, जो आसानी से विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे प्रतिष्ठित होते हैं और श्रोणि की विशेषता होते हैं तंत्रिका, गैंगलियन से जुड़ी अन्य प्रमुख नसों में से कोई भी इस स्पष्ट मुखाग्नि को नहीं दिखाता है।
    4. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके गुफानुमा तंत्रिका की पहचान करें।
      1. गैंगलियन के साथ अपने जंक्शन पर पेल्विक तंत्रिका का पालन करने के बाद, गुफानुमा तंत्रिका का पालन करें क्योंकि यह प्रोस्टेट के पार यात्रा करता है और फिर लिंग के गुफाओंवाला निकायों की ओर caudally।
      2. यदि माइक्रोस्कोप आवर्धन परमिट देता है, तो ध्यान दें कि श्रोणि और गुफानुमा नसों के बीच गैंगलियन से उभरने वाली नाजुक नसों का एक छोटा समूह है; ये गुदा तंत्रिकाएं हैं जो निचले आंत्र की यात्रा करती हैं।
    5. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके हाइपोगैट्रिक तंत्रिका की पहचान करें।
      1. पहचानें कि मूत्रमार्ग के साथ यात्रा करने के बाद हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका अपने कपाल किनारे पर गैंगलियन में कहां मिलती है।
      2. पुष्टि करें कि हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका या तो श्रोणि या गुफाओंवाला नसों की तुलना में बहुत पतली है और बड़े जहाजों के साथ नहीं है।
    6. निम्नलिखित सुविधाओं की कल्पना करके एमपीजी की पहचान करें।
      1. एक त्रिकोणीय आकार बनाने, गंगशेर के वेंट्रल, पृष्ठीय और कपाल किनारों की कल्पना करें।
      2. प्रत्येक प्रमुख तंत्रिका के स्थान की पुष्टि करें: गैलियन के पृष्ठीय किनारे से उभरने वाली श्रोणि तंत्रिकाएं, गैंगलियन के सबसे कौडल कोने में गुफानुमा तंत्रिका, इसके कपाल किनारे से हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका, और गैंगलियन से उभरने वाली सहायक तंत्रिकाएं वेंट्रल एज।
    7. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके सहायक नसों की पहचान करें।
      1. गंगलियन के वेंट्रल किनारे के दृश्य को सक्षम करने के लिए ऊतक को साफ करने के बाद, नसों के एक समूह की पहचान करें जो मूत्र और प्रजनन क्षेत्रों की ओर परियोजना करते हैं।
      2. यदि माइक्रोस्कोप आवर्धन परमिट देता है, तो नसों के एक कौडल समूह की पहचान करें जो प्रोस्टेट लोब और मौलिक वेसिकल और मूत्राशय के बीच एक रोस्ट्रल समूह के बीच प्रवेश करते हैं।
  3. एमपीजी को अपनी संबंधित नसों के साथ हटाना
    1. धीरे-धीरे गैंगलियन और अंतर्निहित प्रोस्टेट ग्रंथि के बीच संदंश को स्लाइड करें, प्रोस्टेट के पतले कैप्सूल को पंचर न करने के लिए सावधान रहें। गैंगलियन और प्रोस्टेट के बीच किसी भी कनेक्शन को बाधित करें।
    2. प्रयोग के लिए आवश्यक नसों की लंबाई के लिए आसपास के ऊतकों के साथ किसी भी अंतिम कनेक्शन को साफ़ करें, फिर प्रत्येक तंत्रिका को काट दें।
    3. ठीक संदंश का उपयोग करना, प्रयोग के लिए उचित समाधान के लिए अपनी नसों के साथ गैंगलियन ले जाएँ और पुष्टि करें कि मुख्य नसों में से प्रत्येक बरकरार हैं।

2. प्रमुख श्रोणि गैंगलियन और आसन्न नसों: एक मादा चूहे में पहुंच और resection

नोट: चित्रा 2 एक महिला चूहे में MPG दृश्य के लिए शारीरिक स्थलों से पता चलता है ।

  1. पेट गुहा और श्रोणि तक पहुंच
    1. चूहे को एक सुपाण्य स्थिति में रखें और फर के साथ सर्जिकल क्षेत्र के संदूषण से बचने के लिए ध्यान रखते हुए, एक वेंट्रल मिडलाइन चीरा के माध्यम से पेट और श्रोणि तक पहुंचें।
      नोट: विच्छेदन के इस बिंदु से, ऊतक को सूखना नहीं चाहिए; ऊतक को शारीरिक खारा (ताजा ऊतक विच्छेदन के लिए) या फिक्सेटिव (परफ्यूजन-फिक्स्ड जानवर के लिए) के साथ नम रखें।
    2. धीरे-धीरे पेट के अंगों को संदंश या कपास-इत्तला देने वाले एप्लीकेटर का उपयोग करके एक तरफ ले जाएं। गर्भाशय सींग, मूत्राशय और मलाशय के स्थान पर ध्यान दें।
    3. अंडाशय और गर्भाशय के जहाजों को काट लें और गर्भाशय के सींग को वापस लें।
    4. पेरिटोनियल स्पेस दर्ज करें और गर्भाशय गर्भाशय के पास स्थित एडीपोस ऊतक के कुल को धीरे से साफ करें।
  2. एमपीजी और उससे जुड़ी नसों का विच्छेदन
    1. गर्भाशय गर्भाशय ग्रीवा की पार्श्व दीवार की पहचान करें, बस गर्भाशय सींग के साथ अपने जंक्शन के लिए कौडल; यह क्षेत्र जानवर की रोस्ट्रोकौडल धुरी पर एमपीजी स्थान को परिभाषित करने के लिए प्राथमिक मील का पत्थर है।
    2. जैसा कि इस बिंदु से आवश्यक है, ध्यान से किसी भी ऊतक को हटा दें जो तंत्रिका संरचनाओं के पूर्ण दृश्य को बाधित करता है, प्रमुख जहाजों को नुकसान से बचाता है।
    3. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके श्रोणि तंत्रिका की पहचान करें।
      1. आंतरिक इलियाक नस और एमपीजी और मूत्राशय की ओर पेश करने वाली इसकी ठीक शाखा का पता लगाएं। यह शाखा समानांतर चलती है और कभी-कभी पेल्विक तंत्रिका के भीतर एम्बेडेड होती है, फिर गैंगलियन को पार करती है।
      2. पुष्टि करें कि संरचना उच्च आवर्धन के तहत देखने के द्वारा श्रोणि तंत्रिका है यह निर्धारित करने के लिए कि तंत्रिका में कई शिथिल एकत्रित मुखाग्र होते हैं, जो आसानी से विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे प्रतिष्ठित होते हैं और श्रोणि की विशेषता होते हैं तंत्रिका, गैंगलियन से जुड़ी अन्य प्रमुख नसों में से कोई भी इस स्पष्ट मुखाग्नि को नहीं दिखाता है।
    4. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके हाइपोगैट्रिक तंत्रिका की पहचान करें।
      1. पहचानें कि मूत्रमार्ग के साथ यात्रा करने के बाद हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका अपने कपाल किनारे पर गैंगलियन में कहां मिलती है।
      2. पुष्टि करें कि हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका या तो श्रोणि या गुफाओंवाला नसों की तुलना में बहुत पतली है और बड़े जहाजों के साथ नहीं है।
    5. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके गुफानुमा तंत्रिका की पहचान करें।
      1. गैंगलियन के साथ अपने जंक्शन पर पेल्विक तंत्रिका का पालन करने के बाद, गुफानुमा तंत्रिका का पालन करें क्योंकि यह योनि की ओर गर्भाशय ग्रीवा की पार्श्व दीवार के साथ कायदे की यात्रा करता है।
      2. यदि माइक्रोस्कोप आवर्धन परमिट देता है, तो ध्यान दें कि श्रोणि और गुफानुमा नसों के बीच गैंगलियन से उभरने वाली नाजुक नसों का एक छोटा समूह है; ये गुदा तंत्रिकाएं हैं जो निचले आंत्र की यात्रा करती हैं।
    6. निम्नलिखित स्थलों और सुविधाओं की कल्पना करके सहायक नसों की पहचान करें।
      नोट: गौण नसों को देखने के लिए मुश्किल है, लेकिन MPG के मध्यस्थ पहलू से परियोजना । गंगलियन के वेंट्रल किनारे के दृश्य को सक्षम करने के लिए ऊतक को साफ करने के बाद, मूत्र और प्रजनन क्षेत्रों की ओर परियोजना करने वाली बहुत नाजुक नसों के एक क्लस्टर की पहचान करें।
    7. निम्नलिखित सुविधाओं की कल्पना करके एमपीजी की पहचान करें।
      1. गैंगलियन के वेंट्रल, पृष्ठीय और कपाल किनारों की कल्पना करें, जो एक त्रिकोणीय आकार बनाते हैं।
      2. प्रत्येक प्रमुख तंत्रिका के स्थान की पुष्टि करें: गैलियन के पृष्ठीय किनारे से उभरने वाली श्रोणि तंत्रिकाएं, गैंगलियन के सबसे कौडल कोने में गुफानुमा तंत्रिका, इसके कपाल किनारे से हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका, और गैंगलियन से उभरने वाली सहायक तंत्रिकाएं वेंट्रल एज।
  3. एमपीजी को अपनी संबंधित नसों के साथ हटाना
    1. धीरे-धीरे पेल्विक तंत्रिका के नीचे ठीक-इत्तला वाले कोण वाले संदंश को रखें और इसे अंतर्निहित गर्भाशय गर्भाशय ग्रीवा और आसपास के ऊतकों से मुक्त करने के लिए संदंश को स्लाइड करें।
      नोट: यह भी छोटे बर्तन के समानांतर चल रहे से श्रोणि तंत्रिका अलग करने के लिए संभव हो सकता है, लेकिन प्रयोगों के अधिकांश प्रकार के लिए यह आवश्यक नहीं है । यदि विच्छेदन का प्रदर्शन कर रहे हैं, तो इसके दृश्य को सुविधाजनक बनाने के लिए, पेल्विक तंत्रिका के नीचे एक सीवन रखें।
    2. गुफानुमा तंत्रिका के लिए प्रक्रिया दोहराएं, फिर हाइपोगैस्ट्रिक तंत्रिका, और अंत में सहायक नसों।
    3. धीरे-धीरे गैंगलियन और अंतर्निहित गर्भाशय गर्भाशय गर्भाशय के बीच संदंश स्लाइड। गैंगलियन और गर्भाशय ग्रीवा के बीच किसी भी कनेक्शन को बाधित करें।
    4. प्रयोग के लिए आवश्यक नसों की लंबाई के लिए आसपास के ऊतकों के साथ किसी भी अंतिम कनेक्शन को साफ़ करें, फिर प्रत्येक तंत्रिका को काट दें।
    5. ठीक संदंश का उपयोग करना, प्रयोग के लिए उचित समाधान के लिए अपनी नसों के साथ गैंगलियन ले जाएँ और पुष्टि करें कि मुख्य नसों में से प्रत्येक बरकरार हैं।

3. गैंगलियन घटकों की पुष्टि (वैकल्पिक)

  1. गैंगलियन को हटाने के बाद, न्यूनतम 1 घंटे के लिए पारंपरिक हिस्टोलॉजिकल फिक्सेटिव (उदाहरण के लिए, 4% बफरफॉर्मिन) में गैंगलियन को विसर्जित करें, 0.1 मीटर फॉस्फेट बफर के साथ फिक्सेटिव को धोएं और क्रायोसेक्शनिंग और फ्लोरेसेंस इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए ऊतक की प्रक्रिया करें, जैसा कि पहले13वर्णित था।
    नोट: कई उच्च गुणवत्ता वाले एंटीबॉडी जो विशेष रूप से इन तीन तंत्रिका मार्कर को पहचानते हैं, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं। चित्रा 3में दिखाए गए लेबलिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों के लिए सामग्री की तालिका देखें।
  2. वैकल्पिक रूप से, ऊपर की तरह एक समान विधि का उपयोग करके इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए गैंगलिया बरकरार (साबुत) प्रक्रिया करें, लेकिन एंटीबॉडी के लिए ऊष्मायन समय को 4 दिन (प्राथमिक एंटीबॉडी) और 2 दिन (द्वितीयक एंटीबॉडी) तक बढ़ाएं।
  3. संवेदी अक्षों की एक प्रमुख आबादी को प्रदर्शित करने के लिए, कैल्शियमिन जीन से संबंधित पेप्टाइड (सीजीआरपी) के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करें।
    नोट: इस अध्ययन में इस्तेमाल एंटीबॉडी की अनुशंसित कमजोर पड़ने 1:5,000 है।
  4. नोड्रेनेर्गिक सहानुभूति न्यूरॉन्स प्रदर्शित करने के लिए, टायरोसिन हाइड्रोक्सीलेस (टीएच) के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करें।
    नोट: इस अध्ययन में इस्तेमाल एंटीबॉडी की अनुशंसित कमजोर पड़ने 1:5,000 है।
  5. कोलिनेर्जिक न्यूरॉन्स की एक प्रमुख आबादी को प्रदर्शित करने के लिए, न्यूरोनल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथासे (एनओ) के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करें।
    नोट: इस अध्ययन में इस्तेमाल एंटीबॉडी की अनुशंसित कमजोर पड़ने 1:500 है ।

Representative Results

एक सफल विच्छेदन न केवल एमपीजी के पूर्ण शरीर को बरकरार रखेगा, बल्कि अभी भी संलग्न प्रत्येक प्रमुख नसों के पहले खंड को बनाए रखेगा। ये तंत्रिकाएं वीवो में गैंगलियन अभिविन्यास के मूल्यवान संकेतक हैं और इसलिए कई प्रकार के शारीरिक अध्ययनों (उदाहरण के लिए, अभिव्यक्ति पैटर्न या एक प्रयोगात्मक क्षोभ के बाद सेलुलर परिवर्तनों का मानचित्रण) के लिए आवश्यक जानकारी प्रदान करती हैं। यद्यपि संबद्ध नसों को संरक्षित करना कुछ प्रयोग प्रकारों (उदाहरण के लिए, अलग-थलग न्यूरॉन्स की संस्कृति के लिए गैंगलियन विसोशन) के लिए कम महत्व का हो सकता है, नसों की उपस्थिति भी बिना छूए गैंगलियन को संभालने का एक तरीका प्रदान करती है (और संभावित रूप से) हानिकारक) न्यूरोनल सेल निकाय।

एक असफल विच्छेदन में एक अधूरा या क्षतिग्रस्त गैंगलियन होगा, या जहां प्राथमिक तंत्रिकाएं अब संलग्न नहीं हैं। यह भी संभव है कि गैंगलिया या नसों अनजाने में विच्छेदन के दौरान क्षतिग्रस्त हो जाते हैं, या तो क्योंकि शारीरिक क्षति विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत पता लगाने के लिए बहुत सूक्ष्म है या क्योंकि नुकसान केवल कुछ प्रकार के परखों के दौरान स्पष्ट हो जाता है। उदाहरण के लिए, यदि गैंगलियन ऊतक विच्छेदन के दौरान शुष्क हो जाता है, तो ऊतक बाद में हैंडलिंग के दौरान सामान्य दिखाई दे सकता है, लेकिन सतह पर गैर-विशिष्ट फ्लोरेसेंस के उच्च स्तर को दिखाएगा।

विच्छेदित एमपीजी के उदाहरण चित्रा 3में दिखाए गए हैं, जो पूरे एमपीजी के उदाहरण प्रदान करता है जो पूरी मोटाई पूर्ण गैंगलियन(चित्रा 3ए)और एक एमपीजी के रूप में दिखाई देता है जिसे नोराड्रिनर्गिक और कोलिनेर्जिक न्यूरॉन्स(चित्रा 3बी, सी)प्रदर्शित करने के लिए प्रतिकार करने के लिए क्रायोसेक्शन किया गया है।

Figure 1
चित्रा 1: एक पुरुष चूहे में एमपीजी दृश्य के लिए शारीरिक स्थलों। 1, मौलिक वेसिकल; 2, मूत्र मूत्राशय; 3, गला घोंटने ग्रंथि; 4 और 5, सहायक नसों; 6, प्रोस्टेट (वेंट्रल पालि); 7, गुफानुमा तंत्रिका; 8, वास आस्थगित; 9, मूत्रमार्ग; 10, बल्बोकावर्नोसस मांसपेशी; 11, आइचिओकावर्नोस मांसपेशी; 12, गुदा नसों; 13, अपहरणकर्ता कौडे एक्सटर्नस; 14, प्रमुख श्रोणि गैंगलियन; 15, श्रोणि तंत्रिका; 16, अपहरणकर्ता कौडे इंटर्नस; 17, हाइपोगैट्रिक तंत्रिका; 18, आंतरिक इलियाक नस; 19, आनन-फानन कौडे ब्रेविस; 20, आनन-फानन कौडे लांगस; 21, यूटर; 22, पीएसओएएस प्रमुख; 23, पेट महाधमनी; 24, अवर वेना कावा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: एक महिला चूहे में एमपीजी दृश्य के लिए शारीरिक स्थलों। 1, डिस्टल कोलन; 2, मूत्र मूत्राशय; 3, गर्भाशय शरीर; 4, हाइपोगैट्रिक तंत्रिका; 5, गौण नसों; 6, प्रमुख श्रोणि गैंगलियन; 7, गुफानुमा तंत्रिका; 8, योनि; 9, मूत्रमार्ग; 10, मलाशय; 11, अपहरणकर्ता कौडे एक्सटर्नस; 12, गुदा नसों; 13, आनन-फानन कौडे ब्रेविस; 14, श्रोणि तंत्रिका; 15, आंतरिक इलियाक नस; 16, अपहरणकर्ता कौडे इंटर्नस; 17, आनन-फानन कौडे लांगस; 18, बाहरी इलियाक धमनी; 19, यूटर; 20, psoas प्रमुख; 21, गर्भाशय सींग; 22, पेट महाधमनी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: इम्यूनोहिस्टोकेमिकल रूप से वयस्क पुरुष चूहों से एमपीजी का लेबल लगाया गया है। सभी तैयारियों को मोनोक्रोम कैमरे से लैस एक पारंपरिक वाइडफील्ड फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के साथ कल्पना की गई है, फिर डिजिटल रूप से रंगीन। (A)होलमाउंट (पूर्ण मोटाई), संबद्ध नसों के साथ फिक्स्ड एमपीजी, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल रूप से संवेदी नसों के लिए लेबल किया गया है जो कैल्शियमनोइन जीन से संबंधित पेप्टाइड (सीजीआरपी) को व्यक्त करते हैं; 1, श्रोणि तंत्रिका (कई fascicles दिखा; 2, गुफानुमा तंत्रिका; 3, हाइपोगैट्रिक तंत्रिका; 4, गौण नसों; 5, गुदा नसों; 6, प्रमुख श्रोणि गैंगलियन (एमपीजी) । (बी, सी) फिक्स्ड एमपीजी के क्रायोसेक्शन (14 माइक्रोन), इम्यूनोहिस्टोकेमिकल द्वारा गैंगलियन की मिश्रित नोराड्रेनेर्गिक-कोलिनेर्गिक प्रकृति को प्रदर्शित करने के लिए लेबल किया गया; (ख)नोरेन्रिनिक न्यूरॉन्स ने टायरोसिन हाइड्रोक्सीलेस के लिए एंटीबॉडी द्वारा प्रदर्शित किया और(सी)न्यूरोनल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथाज के लिए एंटीबॉडी द्वारा कोलिनेर्जिक न्यूरॉन्स की एक प्रमुख आबादी । अंशांकन बार(ए)1,000 माइक्रोन,(बी,सी)200 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

श्रोणि अंगों के तंत्रिका नियंत्रण को दैहिक, परानुभूति, सहानुभूतिपूर्ण और आंत संवेदी घटकों14,15,16,17सहित जटिल रास्तों द्वारा मध्यस्थता की जाती है । इनमें से अधिकांश रास्ते एमपीजी में उत्पन्न होते हैं या गुजरते हैं। यहां उल्लिखित विच्छेदन प्रोटोकॉल एमपीजी शरीर रचना विज्ञान, संबंधित संबंधित नसों और पास के स्थूल शारीरिक स्थलों का परिचय प्रदान करते हैं; उत्तरार्द्ध शारीरिक योजनाबद्ध द्वारा सचित्र हैं। MPG विच्छेदन के लिए अन्य दृष्टिकोण भी सफल हो सकते हैं, लेकिन हम यहां वर्णित एक मजबूत और तंत्रिका तंत्र के इस क्षेत्र के लिए एक नए शोधकर्ता के लिए उपयुक्त होने के लिए लगता है ।

प्रोटोकॉल के सबसे महत्वपूर्ण पहलू प्रत्येक प्रमुख तंत्रिका की सही पहचान और एमपीजी ऊतक को पूरी तरह से हटाना है। ऊतकों को सावधानीपूर्वक देखने और हैंडलिंग के साथ, एमपीजी ऊतकों को शारीरिक, आणविक और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल इन विट्रो अध्ययन18,19,20,21, 22के लिए हटाया जा सकता है। प्रोटोकॉल को वीवो प्रायोगिक हेरफेर23,24,25में भी अनुकूलित किया जा सकता है, यह देखते हुए कि इस मामले में, गैंगलियन से जुड़ी प्राथमिक नसों के संपर्क को कम करने या पास के वास्कुलचर को नुकसान पहुंचाने के लिए बहुत सावधानी बरती जानी चाहिए। यदि प्रयोग में एक या अधिक नसों के व्यवधान से चयनात्मक निंदा की आवश्यकता होती है, तो पुनर्निरनीकरण और विश्लेषण ों को भ्रमित करने से रोकने के लिए कटे हुए तंत्रिका को पुनः उत्पन्न करने की सिफारिश की जाती है। इस विच्छेदन प्रोटोकॉल का उपयोग माउस के लिए भी किया जा सकता है, जहां तुलनात्मक कार्य26,27,28के साथ एक एमपीजी भी है।

न्यूरोएनाटिकल अध्ययनों के लिए, एंटीजन और ऊतक संरचना का सबसे अच्छा संरक्षण एमपीजी को एक एनेस्थेटाइज्ड जानवर से विच्छेदन करके प्राप्त किया जाता है जिसे प्रयोग29के लिए उपयुक्त हिस्टोलॉजिकल फिक्सेटिव के साथ ट्रांसकार्डियली रूप से पार कर दिया गया है ; हालांकि, इस प्रक्रिया के बाद गैंगलियन और तंत्रिका संरचनाओं की पहचान अधिक कठिन होती है, क्योंकि ऊतक रंगन खो जाता है। परफ्यूजन के बाद इस विच्छेदन के प्रयास से पहले गैर-परफेक्यड जानवरों से गैंगलियन की पहचान करने और विच्छेदन करने में कुशल बनने की सिफारिश की जाती है। इसी तरह, पहले पुरुषों में विच्छेदन में कुशल बनने की सिफारिश की जाती है क्योंकि समकक्ष उम्र और शरीर के आकार के जानवरों के लिए, एमपीजी और इससे जुड़ी तंत्रिकाएं महिलाओं में बहुत छोटी होती हैं।

यह मान्य करने के लिए कि हटाया गया ऊतक वास्तव में एमपीजी है, शोधकर्ता को पहले प्रत्येक प्राथमिक तंत्रिका के स्थान और विशेषताओं की जांच करने की सलाह दी जाती है। कई अक्षेत्रों को पेल्विक तंत्रिका और गुफानुमा तंत्रिका सबसे आसान सीटू में पहचान करने के लिए लगता है; हाइपोगैस्ट्रिक और सहायक तंत्रिकाएं आसपास के ऊतकों से अलग होने के लिए अधिक नाजुक और अधिक कठिन होती हैं। यदि ये तंत्रिकाएं अब विच्छेदन के दौरान समस्याओं के कारण उपलब्ध नहीं हैं, या यदि उनकी संरचना के बारे में अनिश्चितता है, तो यह सिफारिश की जाती है कि प्रारंभिक एमपीजी विच्छेदन को पारंपरिक हिस्टोरोलॉजी (न्यूरोनल सेल निकायों8की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए) और दूसरा इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के साथ विशेषता है (यह पहचानने के लिए कि कोलिनर्जिक और नोराड्रेनेस दोनों न्यूरॉन्स30,31)(चित्र3)मौजूद हैं। प्रमुख नसों की सही पहचान को मान्य करने के लिए, गुफानुमा नसों को एमपीजी के करीब अपने प्रारंभिक भाग में न्यूरोनल सेल निकायों के उच्च घनत्व से आसानी से पहचाना जाता है; इन न्यूरॉन्स के अधिकांश कोलिनेर्गिक, नाइटर्जिक न्यूरॉन्स32,33के मार्कर एक्सप्रेस . पेल्विक, हाइपोगैस्ट्रिक और सहायक नसों में बहुत कम न्यूरोनल सेल बॉडी34होती है।

इस विच्छेदन के प्रदर्शन में कई आम नुकसान हैं। यदि नौसिखिया अक्षेत्रों प्रमुख नसों या MPG में से किसी को खोजने की समस्या है, वे कदम है कि प्रमुख स्थलों का वर्णन करने के लिए लौटने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है । माइक्रोस्ट्रक्चर को खोजने पर इतना ध्यान केंद्रित करना बहुत आम है कि कोई स्थूल संदर्भ का ट्रैक खो देता है। सबसे अधिक, नौसिखिए डिससेक्टर या तो अपनी विच्छेदन साइट में बहुत दूर रोस्ट्रल चलते हैं या बहुत 'सतही'- यानी, गहरे (यानी, अधिक पृष्ठीय) संरचनाओं की जांच करने के बजाय पेट के वेंट्रल खोलने के बहुत करीब रहते हैं। विच्छेदन के दौरान एक आम समस्या विच्छेदन के दौरान वास्कुलचर को नुकसान पहुंचाती है। यदि रक्तस्राव शुरू होता है, तो धीरे-धीरे स्रोत पर एक कपास-इत्तला देने वाला एप्लिकेटर पकड़ें जब तक रक्तस्राव बंद हो जाता है, तो विच्छेदन को फिर से शुरू करने से पहले क्षेत्र को उदारतापूर्वक खारा के साथ फ्लश करें। यह संभव है कि एमपीजी प्रयोगों के लिए उपयोग करने योग्य नहीं होगा यदि बहुत अधिक रक्त से दूषित या यदि विच्छेदन बहुत देर ी हो जाती है, जबकि रक्तस्राव को रोकने के लिए इंतजार कर रहा है। एक और आम विच्छेदन त्रुटि प्रोस्टेट ग्रंथि के कैप्सूल को नुकसान पहुंचाती है जो एमपीजी दृश्य और हटाने को काफी ख़राब करती है। यह कैप्सूल एक बहुत ही नाजुक संरचना है जो प्रोस्टेट की पार्श्व दीवार से वसा को हटाते समय आसानी से पंचर हो जाती है, भले ही केवल कपास-इत्तला देने वाले एप्लिकेटर का उपयोग करके। अंत में एमपीजी से जुड़ी मुख्य तंत्रिकाएं हर एक की पहचान करने की प्रक्रिया के दौरान और फिर एमपीजी को हटाने के दौरान आसानी से क्षतिग्रस्त हो जाती हैं। अक्षेत्रों को एक नियमित विकसित करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है जिससे प्रत्येक तंत्रिका को एक विशेष क्रम में अलग-थलग कर दिया जाता है, ताकि गैंगलियन हटाने के अंतिम चरणों के दौरान भ्रम की कम अवसर हो ।

इस विच्छेदन ने सहायक नसों के प्रत्येक घटक को विशिष्ट अंगों में ट्रेस करने या श्रोणि गंगलिया और श्रोणि अंगों8के बीच विभिन्न बिंदुओं पर झूठ बोलने वाले कई माइक्रोगांगलिया में से प्रत्येक की पहचान करने की कोशिश नहीं की। विशिष्ट दाग ों का उपयोग किए बिना वीवो में कल्पना करना काफी मुश्किल है; हालांकि, उन्हें अंगों की ओर प्रत्येक तंत्रिका ट्रैक्ट का पालन करके हटाया जा सकता है, और गैंगलियन स्थान निर्धारित करने के लिए विशिष्ट तंत्रिका दाग पोस्ट तदर्थ का उपयोग करके। ये माइक्रोगाग्लिया, भले ही एमपीजी की तुलना में न्यूरोनल आबादी का केवल छोटा सा अंश शामिल है, उन अंगों को विशिष्ट प्रकार के इनपुट प्रदान कर सकते हैं जिनके लिए वे सबसे बारीकी से स्थित हैं। हम यहां क्षेत्र में एक सीमा पर ध्यान दें कि न तो इन माइक्रोगाग्लिया और न ही एमपीजी से बाहर निकलने वाले कई छोटे तंत्रिका क्षेत्रों को पेल्विक अंगों की यात्रा करने के लिए अभी तक मोटे तौर पर नाम स्वीकार किए जाते हैं । इसके अलावा, मादा चूहों में माइक्रोगांगलिया का इसी तरह का विस्तृत अध्ययन अभी तक नहीं किया गया है।

संक्षेप में, प्रोटोकॉल और योजनाबद्ध यहां प्रदान की प्राथमिक श्रोणि अंगों को स्वायत्त तंत्रिका आपूर्ति प्रदान संरचनाओं का अध्ययन करने के लिए उपकरण के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करते हैं, साथ ही साथ lumbosacral पृष्ठीय जड़ से संवेदी नसों के प्रमुख परिधीय नाली गंगलिया जो एमपीजी के माध्यम से श्रोणि अंगों के लिए यात्रा करते हैं।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस प्रकाशन में रिपोर्ट किए गए अनुसंधान को निदेशक, राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के कार्यालय द्वारा समर्थित किया गया था, परिधीय गतिविधि को राहत देने के लिए परिधीय गतिविधि (SPARC) कार्यक्रम, पुरस्कार संख्या OT2OD023872 । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करता है । डॉ केस्ट की प्रयोगशाला में डॉ बर्ट्रेंड की फैलोशिप का वित्तपोषण किया गया था: एनीम्स के विश्वविद्यालय अस्पताल, मोंटपेलियर-नेम्स के मेडिसिन संकाय, एसोसिएशन फ्रैंकाइज डी चिरुर्गी (एएफसी), द सोसिएट इंटरडिस्किलिनियर फ्रैंकोफोन डी'UroDynamique एट de Pelvipérinéologie (SIFUD-पीपी) और पीपुल्स प्रोग्राम (मैरी क्यूरी एक्शन) यूरोपीय संघ के सातवें फ्रेमवर्क कार्यक्रम (FP7/2007-2013) के REA अनुदान समझौते के तहत कोई PCOFUND-GA-2013-609102, परिसर द्वारा समन्वित प्रेस्टीज कार्यक्रम के माध्यम से फ़्रांस.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anti-calcitonin gene-related peptide; RRID AB_259091 Merck C8198
Anti-nitric oxide synthase, RRID AB_2533937 Invitrogen 61-7000
Anti-rabbit IgG, Cy3 tag, RRID AB_2307443 Jackson 711-165-152
Anti-tyrosine hydroxylase, RRID AB_390204 Millipore AB152
Dissecting microscope Olympus SZ40, SC
Dumont AA epoxy coated forceps Fine Science Tools 11210-10
Dumont #5 forceps Fine Science Tools 11255-20
Dumont #5/45 curved forceps Fine Science Tools 11251-35
LED light source Schott KL 1600
Micro-Adson forceps Fine Science Tools 11019-12
Student Vannas spring scissors Fine Science Tools 91500-09
Surgical scissors Fine Science Tools 14054-13

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References

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न्यूरोसाइंस इश्यू 157 स्वायत्त गैंगलिया गुफानुमा तंत्रिका हाइपोगैस्ट्रिक प्रमुख श्रोणि गैंगलियन पैरासर्वाइकल गैंगलियन पैरापेनुअल पेल्विक गैंगलियन पेल्विक स्प्लैंचुनिक तंत्रिका सहानुभूति
पुरुष और महिला चूहों में पेल्विक स्वायत्त गंगलिया और संबद्ध नसों का विच्छेदन
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Bertrand, M. M., Keast, J. R.… More

Bertrand, M. M., Keast, J. R. Dissection of Pelvic Autonomic Ganglia and Associated Nerves in Male and Female Rats. J. Vis. Exp. (157), e60904, doi:10.3791/60904 (2020).

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