यह प्रोटोकॉल भ्रूणीय माउस मस्तिष्क से प्राथमिक हिप्पोकैम्पल न्यूरॉन्स को बनाने के लिए एक विधि का वर्णन करता है। सुसंस्कृत न्यूरॉन्स की बाहेल सतह पर प्रमुख हिस्टोकंपैटिबिलिटी जटिल वर्ग 1 की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण द्वारा किया जाता है।
बढ़ते सबूत इस परिकल्पना का समर्थन करते हैं कि न्यूरो-प्रतिरक्षा इंटरैक्शन होमोस्टेटिक और पैथोलॉजिकल दोनों स्थितियों में तंत्रिका तंत्र के कार्य को प्रभावित करता है। प्रमुख हिस्टोकंप्यूटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स क्लास 1 (एमएचसीआई) का एक अच्छी तरह से अध्ययन किया गया कार्य विशेष रूप से संक्रमण के जवाब में अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए सेल-व्युत्पन्न पेप्टाइड्स की प्रस्तुति है। हाल ही में यह दर्शाया गया है कि न्यूरॉन्स पर MHCI अणुओं की अभिव्यक्ति सामान्य विकास और न्यूरोलॉजिक विकारों के दौरान सिनैप्टिक कनेक्टिविटी में गतिविधि पर निर्भर परिवर्तनों को संशोधित कर सकती है। मस्तिष्क स्वास्थ्य के लिए इन कार्यों का महत्व एक संवेदनशील परख की आवश्यकता का समर्थन करता है जो न्यूरॉन्स पर MHCI अभिव्यक्ति का आसानी से पता लगाता है। यहां हम मुरीन हिप्पोकैम्पल न्यूरॉन्स की प्राथमिक संस्कृति के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं और फिर प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण द्वारा MHCI अभिव्यक्ति का आकलन करते हैं। मुरीन हिप्पोकैम्पस भ्रूणीय दिन 18 में जन्म के पूर्व माउस पिल्ले से microdissected है । ऊतक को एंजाइमेटिक और यांत्रिक तकनीकों का उपयोग करके एकल कोशिका निलंबन में अलग किया जाता है, फिर सीरम-मुक्त मीडिया में सुसंस्कृत किया जाता है जो गैर-न्यूरोनल कोशिकाओं के विकास को सीमित करता है। विट्रो में 7 दिनों के बाद, MHCI अभिव्यक्ति बीटा इंटरफेरॉन के साथ सुसंस्कृत कोशिकाओं के इलाज के द्वारा प्रेरित किया जाता है। MHCI अणुओं को एक फ्लोरोसेंटली टैग किए गए एंटीबॉडी के साथ सीटू में लेबल किया जाता है, फिर कोशिकाओं को एक एकल कोशिका निलंबन में गैर-एंजाइमेटिक रूप से अलग किया जाता है। न्यूरोनल पहचान की पुष्टि करने के लिए, कोशिकाओं को पैराफॉर्मलडिहाइड, परमीबिलाइज्ड के साथ तय किया जाता है, और एक फ्लोरोसेंटली टैग किए गए एंटीबॉडी के साथ लेबल किया जाता है जो न्यूरोनल न्यूक्लियर एंटीजन न्यून को पहचानता है। एमएचसीआई अभिव्यक्ति तो प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण द्वारा न्यूरॉन्स पर मात्रा निर्धारित है । न्यूरोनल संस्कृतियों को आसानी से विशिष्ट परिकल्पनाओं का परीक्षण करने के लिए आनुवंशिक संशोधनों या फार्माकोलॉजिक हस्तक्षेपों से छेड़छाड़ की जा सकती है। मामूली संशोधनों के साथ, इन तरीकों का उपयोग अन्य न्यूरोनल आबादी को संस्कृति या ब्याज के अन्य प्रोटीन की अभिव्यक्ति का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।
केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) को एक बार प्रतिरक्षा निगरानी से रहित माना जाता था, जिसे “प्रतिरक्षा विशेषाधिकार प्राप्त1″कहा जाता है। अब यह स्पष्ट है कि यह विशेषाधिकार प्रतिरक्षा घटकों की पूर्ण अनुपस्थिति के बराबर नहीं है, बल्कि, एक विशेष विनियमन जो इम्यूनोपैथोलॉजी1से जुड़े नुकसान को सीमित करने के लिए कार्य करता है। वास्तव में, सीएनएस और प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच संचार एक सतत वार्तालाप है जो स्वस्थ मस्तिष्क के विकास और संक्रमण2,3के प्रति प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक है।
प्रमुख हिस्टोकंपनि जटिल वर्ग 1 (एमएचसीआई) अणु पॉलीजेनिक और बहुरूपिक ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन हैं जो संक्रमण 4 केदौरानसीडी 8+ टी कोशिकाओं को एंटीजेनिक पेप्टाइड्स पेश करने में अपने कार्य के लिए जाने जाते हैं। शास्त्रीय एमएचसीआई परिसरों में एक ट्रांसमेम्ब्रेन α-चेन और एक एक्सट्रासेलुलर लाइट चेन शामिल है, जिसे 2-माइक्रोग्लोबुलिन कहा जाता है। α-श्रृंखला में एक बहुरूपी नाली होती है जो प्रस्तुति5के लिए एक एंटीजेनिक पेप्टाइड को बांधती है। बाह्य झिल्ली पर MHCI की उचित अभिव्यक्ति के लिए एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम पर आणविक चैपरोन की समन्वित कार्रवाई की आवश्यकता होती है ताकि उच्च एफ़िनिटी पेप्टाइड लिगामेंट5की लोडिंग के साथ-साथ α-श्रृंखला और 2-माइक्रोग्लोबुलिन की उचित तह सुनिश्चित की जा सके। केवल एक बार MHCI परिसरों को इकट्ठा कर रहे हैं, वे एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम से प्लाज्मा झिल्ली6को निर्यात कर रहे हैं । पेप्टाइड-लोडेड एमएचसीआई कॉम्प्लेक्स के साथ कॉग्नेट टी सेल रिसेप्टर की सगाई पर, सीडी 8+ टी कोशिकाएं पेफोरिन और ग्रेन्ज़िम्स युक्त लिटिक ग्रेन्यूल्स को रिहा करके या लक्ष्य कोशिका झिल्ली7पर बाइंडिंग फास रिसेप्टर के माध्यम से एपोप्टोसिस को प्रेरित करके सेल की हत्या में मध्यस्थता करती हैं। इसके अतिरिक्त, सीडी 8+ टी कोशिकाएं साइटोकिन्स का उत्पादन करती हैं, जैसे गामा इंटरफेरॉन (IFNγ) और ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर अल्फा (टीएनएफएα), जो साइटोपैथिक प्रभाव8,9के बिना संक्रमित कोशिकाओं में एंटीवायरल तंत्र को सक्रिय कर सकते हैं। कई न्यूरोट्रोपिक वायरस के लिए सीएनएस10, 11,12से संक्रमण को साफ करने के लिए सीडी 8+ टी कोशिकाएं आवश्यक हैं।
यह पहले सोचा गया था कि न्यूरॉन्स केवल नुकसान, वायरल संक्रमण, या इन विट्रो साइटोकिन उत्तेजना की स्थिति में MHCI व्यक्त करते हैं । हाल ही में, अनुसंधान ने सिनैप्टिक रीमॉडलिंग और प्लास्टिसिटी13, 14में एमएचसीआई की न्यूरोनल अभिव्यक्ति के लिए एक भूमिका की पहचान की है । यद्यपि सिनैप्स विनियमन में अंतर्निहित सटीक तंत्र अच्छी तरह से समझ में नहीं आते हैं, लेकिन डेटा इंगित करता है कि एमएचसीआई अभिव्यक्ति स्तर को सिनैप्टिक गतिविधि15,16द्वारा विनियमित किया जाता है। एक परिकल्पना यह है कि न्यूरॉन्स ने इम्यूनोग्लोबुलिन जैसे रिसेप्टर बी (पीरबी) को पूर्वनिर्धारणात्मक रूप से जोड़ा, जो MHCI को13,17से बांधता है। यह बातचीत पीरबी द्वारा एक संकेत झरना शुरू करती है जो सिनैप्टिक रीमॉडलिंग में शामिल रास्तों का विरोध करती है, इस प्रकार सिनैप्टिक कनेक्शन17,18,19को मजबूत और स्थिर करती है। न्यूरोनल गतिविधि के अभाव में, एमएचसीआई अभिव्यक्ति14कम हो जाती है, और एमएचसीआई के नुकसान के परिणामस्वरूप दोषपूर्ण सिनैप्स उन्मूलन और गलत संगठित सिनैप्टिक सर्किट20,21 होतेहैं।
यहां वर्णित परख, जिसे शेवेलियर एट अल9से अनुकूलित किया गया था, मुरीन हिप्पोकैम्पल न्यूरॉन्स की प्राथमिक संस्कृतियों पर MHCI की बाह्य प्रोटीन अभिव्यक्ति का मात्रात्मक रूप से आकलन करने के लिए प्रवाह साइटोमेट्रिक विश्लेषण का उपयोग करता है। यह प्रोटोकॉल भ्रूणीय माउस पिल्ले से हिप्पोकैम्पस ऊतक को माइक्रोडिसेक्टिंग करने के लिए प्रारंभिक तकनीकों को दिखाता है। इसके बाद यह ऊतक के एंजाइमेटिक और यांत्रिक वियोजन के लिए प्रक्रियाओं को एकल कोशिका निलंबन और विट्रो में संस्कृतियों को बनाए रखने के तरीकों में विवरण देताहै । क्योंकि वे विभाजित नहीं है, एक बार वे संस्कृति में हैं, न्यूरॉन्स एक डिश और उनके प्रयोगात्मक अंत बिंदु के लिए उपयुक्त घनत्व में चढ़ाया जाना चाहिए । इसके बाद, यह बीटा इंटरफेरॉन (IFNο) के साथ MHCI अभिव्यक्ति को प्रेरित करने, MHCI और न्यूरोनल न्यूक्लिय मार्कर न्यून के लिए इम्यूनोलेबेलिंग और प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा कोशिकाओं का विश्लेषण करने के लिए कदम रेखांकित करता है । अंत में, यह एमएचसीआई-सकारात्मक न्यूरॉन्स की पहचान करने और MHCI अभिव्यक्ति के स्तर की मात्रा निर्धारित करने के लिए प्रवाह साइटोमेट्री डेटा का आकलन करने के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन करता है । इसके अलावा इस प्रोटोकॉल में उल्लेख किया छोटे समायोजन है कि आदेश में या हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन्स के अलावा या इसके बजाय कॉर्टिकल न्यूरॉन्स संस्कृति के लिए किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल को आनुवंशिक विविधताओं या औषधीय उपचारों का उपयोग करके विशिष्ट परिकल्पनाओं का परीक्षण करने के लिए आसानी से संशोधित किया जा सकता है।
यह प्रोटोकॉल भ्रूणीय दिन 18 में जन्म के पूर्व माउस पिल्ले से प्राथमिक हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन्स के विच्छेदन और संस्कृति का वर्णन करता है। कृंतक से सुसंस्कृत प्राथमिक न्यूरॉन्स का उपयोग आधुनिक न्यूरोबायोलॉजी22में विकसित सबसे मौलिक पद्धतियों में से एक है । यद्यपि अमर कोशिका रेखाएं न्यूरॉन्स के कुछ पहलुओं को मॉडल कर सकती हैं, ट्यूमर-व्युत्पन्न कोशिकाओं के रूप में उनकी प्रकृति, परिभाषित अक्षों को विकसित करने में विफलता, और निरंतर सेल विभाजन संदेह उठाता है कि क्या वे वीवो23में पोस्ट-माइटोटिक न्यूरॉन्स के गुणों को ईमानदारी से पुन: रीकैपिटुलेट करते हैं। प्राथमिक न्यूरॉन्स का एक और विकल्प मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (HiPSCs) का उपयोग है। HiPSCs का उपयोग करने के लिए प्रौद्योगिकी, विशेष रूप से उन है कि रोगी व्युत्पन्न कर रहे हैं, हाल के वर्षों में तेजी से उंनत है24। हालांकि, सेल लाइनों के बीच परिवर्तनशीलता, कार्यात्मक परिपक्वता की कमी और एपिजेनेटिक प्रोफाइल25में अंतर सहित HiPSCs के साथ काम करने की अभी भी सीमाएं हैं। यद्यपि प्राथमिक कृंतक न्यूरॉन्स के न्यूनीकरण मॉडल के साथ काम करने की सीमाएं भी हैं, सुसंस्कृत न्यूरॉन्स वीवो में न्यूरॉन्स की माइटोटिक प्रकृति को बनाए रखते हैं। इसके अलावा, विशाल आणविक जीव विज्ञान उपकरण और चूहों के लिए उपलब्ध आनुवंशिक संशोधनों कई अनुप्रयोगों के लिए HiPSCs पर प्राथमिक न्यूरॉन्स के उपयोग के पक्ष में है, और माउस अध्ययन आसानी से प्रयोगात्मक आनुवंशिक प्रणाली को खोने के बिना वीवो जीव में अधिक जटिल करने के लिए अनुवाद किया जा सकता है । इन कारणों से, कई शोधकर्ता अपने शोध के प्रमुख पहलुओं, यदि थोक नहीं, तो सत्यापित करने के लिए प्राथमिक कृंतक न्यूरॉन्स का उपयोग करते हैं।
कुछ परख के लिए, मस्तिष्क पूर्व वीवो से अलगाव के बाद न्यूरॉन्स का सीधे विश्लेषण किया जा सकताहै। यह वयस्क चूहों से जुड़े प्रयोगों के लिए विशेष रूप से वांछनीय है जिन्हें विशिष्ट प्रयोगात्मक स्थितियों के अधीन किया जा सकता है या जो कई सेल प्रकारों की बातचीत पर निर्भर हो सकता है; हालांकि, ऐसे कई मुद्दे हैं जो विश्लेषण के प्रकार को सीमित करते हैं जो किए जा सकते हैं। वयस्क चूहों के दिमाग से न्यूरॉन्स का एकल कोशिका निलंबन तैयार करना तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है क्योंकि न्यूरॉन्स विशिष्ट रूप से आपस में जुड़े हुए हैं और मायलिन26से जुड़े हुए हैं । ऊतक त्रयोदश के गैर-एंजाइमेटिक तरीके ऊतक को अलग करने और कोशिका मृत्यु का कारण 10 00 00 00 00 00 000 हैं, जबकि एंजाइमेटिक तैयारी अक्सर सेल सतह एंटीजन27को क्लीव करती है। इसके अलावा, जबकि myelin भ्रूण चूहों से काफी हद तक अनुपस्थित है, इसमें वयस्क मस्तिष्क का लगभग 20% शामिल है, और व्यवहार्य कोशिका अलगाव को ख़राब कर सकता है और प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण28में बाधा डाल सकता है। विकसित की गई कई तकनीकों ने अंततः अपने साइटोसोल के न्यूरॉन्स को स्ट्रिप किया और छोटे, गोल सेल निकायों को छोड़ दिया जिसमें मुख्य रूप से नाभिक29शामिल हैं। यद्यपि यह कुछ विश्लेषणों के लिए स्वीकार्य है, यह साइटोप्लाज्मिक या बाह्राश प्रोटीन अभिव्यक्ति की मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयुक्त नहीं है। इसके अलावा, न्यूनीकरण कोशिका संस्कृति प्रणाली एक कम समय पैमाने पर विशिष्ट यंत्रवादी सवालों के परीक्षण की अनुमति देता है की तुलना में अक्सर एक वीवो प्रणाली में संभव है ।
इसके अलावा इस प्रोटोकॉल में वर्णित आईएफएन के साथ एमएचसीआई अभिव्यक्ति को औषधीय रूप से उत्तेजित करने के तरीके हैं, और प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा अतिरिक्त एमएचसीआई अभिव्यक्ति का मात्राकरण है। आईएफएनएनए द्वारा उत्तेजना अन्य प्रयोगात्मक स्थितियों के परीक्षण के लिए एक उपयोगी सकारात्मक नियंत्रण है, लेकिन यह ध्यान दिया जा सकता है कि IFNγ और कायनिक एसिड न्यूरॉन्स9,30में एमएचसीआई अभिव्यक्ति को भी उत्तेजित कर सकता है, जबकि टेट्रोडोटॉक्सिन एमएचसीआई अभिव्यक्ति14को कम कर देता है। एमएचसीआई अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए पिछले तरीकों पर सीटू संकरण और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण14,15,20,31पर भरोसा किया गया । जबकि एमआरएनए-आधारित परख, जैसे सीटू संकरण और क्यूआरटी-पीसीआर में, स्थानिक स्तरीय स्थानीयकरण, सेल प्रकार विशिष्टता और जीन ट्रांसक्रिप्शन के स्तर का निर्धारण कर सकते हैं, ये परख प्लाज्मा झिल्ली में प्रोटीन अनुवाद या परिवहन का आकलन नहीं कर सकते हैं। इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और पश्चिमी दाग विश्लेषण प्रोटीन अभिव्यक्ति और संभावित सेलुलर स्थानीयकरण में अंतर निर्धारित कर सकते हैं, लेकिन सही मात्रा में बताना मुश्किल हो सकता है । इसके अलावा, कई MHCI एंटीबॉडी परिसर की तृतीयक संरचना को पहचानते हैं, और अनुरूप परिवर्तनों के प्रति अत्यधिक संवेदनशील होते हैं। इस प्रकार पारगम्यीकरण या दुर्बलता की स्थिति के परिणामस्वरूप एमएचसीआई इम्यूनोरिएक्टिविटी32की हानि होती है । यहां प्रस्तुत विधि MHCI के लिए सीटू इम्यूनोस्टेटिंग में उपयोग करती है, जो अपने मूल संरचना में एंटीबॉडी द्वारा प्रोटीन की मान्यता के लिए अनुमति देती है, इसके बाद निर्धारण और पारमेबिलाइजेशन विधियों द्वारा।
मामूली संशोधनों के साथ, यहां वर्णित तरीकों का उपयोग अन्य न्यूरोनल आबादी को संस्कृति देने या ब्याज के अन्य बाह्राश प्रोटीन की अभिव्यक्ति का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में उल्लेख किया गया आसान संशोधन हैं जो कॉर्टिकल न्यूरॉन्स को संस्कृति के लिए बनाया जा सकता है, लेकिन यहां वर्णित तरीकों का उपयोग अन्य न्यूरोनल आबादी को संस्कृति में भी किया जा सकता है, जैसे कि स्ट्रेटल न्यूरॉन्स33। इसके अलावा, हालांकि यह प्रोटोकॉल एमएचसीआई और न्यून के इम्यूनोस्टेपिंग को निर्दिष्ट करता है, अन्य सेलुलर मार्कर को इसी तरह से पहचाना जा सकता है। सामान्य तौर पर, एक्सट्रासेलुलर मार्कर को एमएचसीआई की तरह माना जा सकता है और इंट्रासेलुलर मार्कर को न्यून की तरह माना जा सकता है। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सेलुलर वियोजन चरण के दौरान, अक्षानल अनुमानों को सोमा से कटे हुए हैं। क्योंकि यहां परिभाषित गेटिंग रणनीति सेलुलर मलबे को स्क्रीन करती है और न्यूरोनल न्यूक्लिय मार्कर न्यून पर केंद्रित है, प्रोटीन जो विशेष रूप से अक्षीय अनुमानों में व्यक्त किए जाते हैं, का पता नहीं लगाया जा सकता है।
हाल ही में जब तक, न्यूरॉन्स को केवल क्षति, संक्रमण, या इन विट्रो साइटोकिन उत्तेजना के जवाब में MHCI व्यक्त करने के लिए सोचा गया था ताकि साइटोटॉक्सिक सीडी 8+ टी कोशिकाओं9संलग्न करने के लिए । नए शोध ने विकास13के दौरान सिनैप्टिक कनेक्शनों को विनियमित करने में MHCI के एक और कार्य को स्पष्ट किया है । यहां वर्णित प्रोटोकॉल वाइल्डटाइप सुसंस्कृत न्यूरॉन्स में MHCI अभिव्यक्ति को प्रोत्साहित करने के लिए IFNο का उपयोग करता है, लेकिन इसी तरह के तरीकों का उपयोग विशिष्ट परिकल्पनाओं का परीक्षण करने के लिए विभिन्न सेलुलर उत्तेजनाओं या आनुवंशिक संशोधनों के साथ किया जा सकता है। यह विधि शोधकर्ताओं को आणविक तंत्र की जांच करने में सक्षम करेगी जो एमएचसीआई अभिव्यक्ति को विनियमित करता है, जो इन दो अलग सेलुलर कार्यों पर MHCI की विरोधाभासी भूमिका की समझ में सुधार करेगा ।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को एनआईए आर00 एजी053412 (केईएफ) ने सपोर्ट किया।
1.5 ml Microcentrifuge Tubes | Fisher | 05-408-129 | Laboratory Supplies |
100 mm sterile culture dish | Fisher | FB012924 | Tissue Culture Supplies |
15 ml Centrifuge Tubes | Genesee | 21-103 | Laboratory Supplies |
50 ml centrifuge tube | Genesee | 21-108 | Laboratory Supplies |
500 mM EDTA | Invitrogen | AM9260G | FACS Buffer Reagent |
70% Ethanol | Fisher | BP82031Gal | Tissue Culture Supplies |
96 well U-bottom plate | Genesee | 25-221 | Flow Cytometry Supplies |
B27 | Gibco | 17504044 | Neuron Culture Reagent |
Borate Buffer | Thermo Scientific | 28341 | Tissue Culture Supplies |
Borosilicate Glass Pasteur Pipette | Fisher | 13 678 20C | Laboratory Supplies |
Cell Dissociation Buffer | Gibco | 13 151 014 | Flow Cytometry Supplies |
DNase I | Thermo | 90083 | Dissociation Solution Reagent |
dPBS | Gibco | 14190-235 | Tissue Culture Supplies |
Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | Dissection Tool |
Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 91197-00 | Dissection Tool |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140079 | Tissue Culture Supplies |
Fine Forceps | Fine Science Tools | 91113-10 | Dissection Tool |
Fine Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | Dissection Tool |
Fix and Perm Cell Permeabilization Kit | Invitrogen | GAS003 | Flow Cytometry Supplies |
Glutamax | Gibco | 35050061 | Neuron Culture Reagent |
Hibernate-E Medium | Gibco | A1247601 | Neuron Culture Reagent |
Instant Sealing Sterilization Pouches | Fisher | 181254 | Tissue Culture Supplies |
Interferon Beta | PBL Assay Science | 12405-1 | Flow Cytometry Supplies |
Milli-Mark Anti-NeuN-PE Antibody, clone A60 | MilliporeSigma | FCMAB317PE | Flow Cytometry Antibody |
Neurobasal Media | Gibco | 21103049 | Neuron Culture Reagent |
Pacific Blue anti-mouse H-2Kb Antibody | BioLegend | 116513 | Flow Cytometry Antibody |
Papain Solution | Worthington | LS003126 | Dissociation Solution Reagent |
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15714 | Fixative |
Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140122 | Neuron Culture Reagent |
Poly-D-Lysine | Sigma | P7280 | Neuron Culture Reagent |
Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 91100-12 | Dissection Tool |
Stereo dissection microscope | Swift | M29TZ-SM99CL-BTW1 | Dissection Tool |
Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91401-10 | Dissection Tool |
Transfer Pipets | Corning | 357575 | Laboratory Supplies |
TruStain FcX (anti-mouse CD16/32) Antibody | BioLegend | 101319 | Flow Cytometry Antibody |
Trypan Blue | Sigma | T8154-100ML | Tissue Culture Supplies |