مُسَاَنّة مُعَدِيّة سابقة لدراسة المبيضات المبيضات البَيكانسِيّة الواصلة Morphogenesi في الجهاز الهضمي

Summary

مقايسة الجسم الحي السابق المذكورة في هذه الدراسة باستخدام مستخلصات التجانس الأمعاء وتلطيخ المناعة الفلوريس يمثل طريقة جديدة لدراسة التشكل الواصل من المبيضات albicans في الجهاز الهضمي. ويمكن استخدام هذه الطريقة للتحقيق في الإشارات البيئية التي تنظم التحول المورفوجينيك في القناة الهضمية.

Abstract

المبيضات albicans الواصلة morphogenesi في الجهاز الهضمي (GI) يتم التحكم بإحكام من قبل مختلف الإشارات البيئية، ويلعب دورا هاما في نشر والعوامل المسببة للأمراض الفطرية الانتهازية. ومع ذلك، طرق لتصور هيفا الفطرية في الجهاز الهضمي في الجسم الحي هي التحدي الذي يحد من فهم الإشارات البيئية في السيطرة على عملية تكوين هذه المورفون. البروتوكول الموصوف هنا يوضح طريقة رواية ex vivo للتصور من المورفينجينيات الواصلة في مقتطفات متجانسة الأمعاء. باستخدام مقايسة الجسم الحي السابق ، توضح هذه الدراسة أن محتويات cecal من الفئران المعالجة بالمضادات الحيوية ، ولكن ليس من فئران التحكم غير المعالجة ، تعزز تولد الواصلة C. alphcans في محتوى الأمعاء. وعلاوة على ذلك، إضافة مجموعات محددة من الأيض الأمعاء مرة أخرى إلى محتويات cecal من الفئران المعالجة بالمضادات الحيوية ينظم بشكل تفاضلي الفرتال morphogenesis السابقين. يمثل هذا البروتوكول، الذي يُؤخذ معًا، طريقة جديدة لتحديد الإشارات البيئية التي تتحكم في التشكل الواصلي C. albicans في الجهاز الهضمي والتحقيق فيها.

Introduction

المبيضات albicans هو الانتهازية ، متعدد الأشكال المسببة للأمراض الفطرية التي عادة ما تكون commensal ، ولكن يمكن أن تخضع لتغيير مورفولوجية في شكل خبيث قادر على التسبب في التهابات تهدد الحياة في الأفراد المناعة^{1،2،3،4،5،6،8،9،11،12،13}. C. albicans هو السبب الرئيسي للعدوى الانسومية الجهازية، مع معدل وفيات 40\u201260٪ حتى مع العلاج المضاد للفطريات^2،14،15. على الرغم من أن C. albicans يقيم في مختلف المنافذ المضيفة بما في ذلك الجهاز التناسلي الإناث^16,17, تجويف الفم من الأفراد الأصحاء¹⁸ والجهاز الهضمي (GI) المسالك^19,20, الغالبية العظمى من الالتهابات الجهازية تنشأ من الجهاز الهضمي وعلاوة على ذلك, وكثيرا ما أكد مصدر العدوى الجهازية أن الجهاز الهضمي^{21،22،23،24،25،26،27،28،29،30،31،32،33،34}. C. تتأثر الإمراضية albicans في الجهاز الهضمي بمجموعة واسعة من العوامل; ومع ذلك ، فإن السمة الرئيسية الضرورية للوعاء هي الانتقال من مورفولوجيا خلية الخميرة إلى مورفولوجيا الخلايا الواصلة^{35،36،37،38،39،40،41،42،43،44}. C. albicans التعلق والنشر من الجهاز الهضمي أثناء العدوى يرتبط بشدة مع قدرته على الانتقال من خميرة commensal إلى hyphae ضراوة، مما يسمح للفطريات أن تسبب الأمراض الغازية^{44،45،46،47،48،49،}50^،51،52،53.

مجموعة متنوعة من العوامل في الأمعاء، بما في ذلك ن أسيتيلغلوسكامين، تنظيم تشكيل الواصلة من قبل C. albicans . ولذلك، فمن الأهمية بمكان لتضييق الفجوة في المعرفة فيما يتعلق بتشكل الغشاء الواصل لهذا الممرض الفطري في الجهاز الهضمي^54،55،56. تشير الأدلة الحديثة إلى أن مختلف الأيضات الأمعاء السيطرة بشكل تفاضلي في morphogenesis الواصلة من C. albicans في المختبر^57,58,59,60. ومع ذلك، تشكل القيود التقنية قضايا عند محاولة دراسة تكوّن الأمعاء في عينات الأمعاء الحية في العينات، خاصة تلطيخ الخميرة وخلايا الواصلة والتحليل الكمي لتطوير الواصلة. لفهم C. albicans الواصلة morphogenesis في الجهاز الهضمي، تم تطوير طريقة فيفو السابق باستخدام مقتطفات قابلة للذوبان من محتوى الأمعاء المتجانسة من الفئران لدراسة تأثير الأيض على تكوين الواصلات الفطرية. استخدام عينات الأمعاء من الفئران التي هي مقاومة وعرضة لعدوى ج. albicans GI، وهذه الطريقة سوف تساعد على تحديد ودراسة تأثير الأيض والمضادات الحيوية وxenobiotics على تكوين الحمى الفطرية في الجهاز الهضمي.

Protocol

تمت الموافقة على جميع بروتوكولات الحيوان من قبل جامعة الغرب الأوسط لجنة الرعاية الحيوانية المؤسسية واستخدام (IACUC) كما هو موضح قبل57. وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه في جامعة الغرب الأوسط على هذه الدراسة بموجب بروتوكول MWU IACUC #2894. وتتبع سياسات رعاية الحيوانات في و…

Representative Results

هذه النتائج جنبا إلى جنب مع النتائج السابقة من مختبر ثانغاماني60 تشير إلى أنه عندما يتم زراعة C. albicans السابقين في مستخلصات تجانس الأمعاء مأخوذة من المعدة والأمعاء الدقيقة والأمعاء الغليظة من السيطرة غير المعالجة والفئران المعالجة بالمضادات الحيوية، C. albicans يتطور عمو…

Discussion

الطريقة الموصوفة هنا تقدم طريقة جديدة للتحقيق في تأثير المضادات الحيوية، والآثار الغذائية، وxenobiotic والعلاجية على C. albicans الهضاب المورفيجن في الجهاز الهضمي. منذ غالبية الالتهابات الجهازية تنشأ من الجهاز الهضمي^{21،22،23،2…}

Materials

1 – 10 µL Pipet Tips	Fisher Scientific	02-707-454	Misc
100 – 1000 µL Pipet Tips	Fisher Scientific	02-707-400	Misc
20 – 200 µL Pipet Tips	Fisher Scientific	02-707-451	Misc
2-methylbutyric acid	Sigma	193070-25G	hyphal-inhibitory compound
488 goat anti-rabbit IgG	Invitrogen (Fisher)	A11008	IF Staining secondary ab
Agar	Fisher	BP1423-500	YPD agar component
Automated Imaging Microscope	Keyence	BZX700
Candida Albicans Antibody	Invitrogen (Fisher)	PA1-27158	IF Staining primary ab
cefoperazone	Cayman	16113	antibiotic
deoxycholic acid	Sigma	30960	hyphal-inhibitory compound
D-Glucose	Fisher	D16-500	hyphal-promoting compound
forceps	Fisher	08-885
lactic acid	Alfa Aesar	AAAL13242-06	hyphal-inhibitory compound
lithocholic acid	Sigma	L6250-10G	hyphal-inhibitory compound
palmitic acid	Sigma	P5585-10G	hyphal-inhibitory compound
Paraformaldehyde	Alfa Aesar	A11313	IF Staining fixative
Phosphate-buffered saline (PBS), 10x	Alfa Aesar	J62692	PBS component
p-tolylacetic acid	SCBT	sc-257959	hyphal-inhibitory compound
sebacic acid	Sigma	283258-250G	hyphal-inhibitory compound
sharp ended scissors	Fisher	28301
sterile Milli-Q water	N/A	N/A	Misc
YPD Broth	BD Biosciences	242810	YPD agar component