Summary

Метрический тест для оценки пространственной рабочей памяти у взрослых крыс после черепно-мозговой травмы

Published: May 07, 2021
doi:

Summary

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) обычно связана с ухудшением памяти. Здесь мы представляем протокол для оценки пространственной рабочей памяти после ЧМТ с помощью метрической задачи. Метрический тест является полезным инструментом для изучения нарушения пространственной рабочей памяти после ЧМТ.

Abstract

Нарушения сенсорной, кратковременной и долговременной памяти являются распространенными побочными эффектами после черепно-мозговой травмы (ЧМТ). Из-за этических ограничений исследований на людях модели на животных предоставляют подходящие альтернативы методам тестирования методов лечения и изучению механизмов и связанных с ними осложнений состояния. Экспериментальные модели грызунов исторически были наиболее широко использованы из-за их доступности, низкой стоимости, воспроизводимости и проверенных подходов. Метрический тест, который проверяет способность вспоминать размещение двух объектов на разных расстояниях и углах друг от друга, является методом изучения нарушений пространственной рабочей памяти (SWM) после ЧМТ. К существенным преимуществам метрических задач можно отнести возможность динамического наблюдения, низкую стоимость, воспроизводимость, относительную простоту выполнения и низкую стрессовую среду. Здесь мы представляем протокол метрического теста для измерения нарушения SWM у взрослых крыс после ЧМТ. Этот тест обеспечивает реальный способ более эффективной оценки физиологии и патофизиологии функции мозга.

Introduction

Распространенность неврологических дефицитов, таких как внимание, исполнительная функция и некоторые дефициты памяти после умеренной черепно-мозговой травмы (ЧМТ), составляет более 50 процентов1,2,3,4,5,6,7,8. ЧМТ может привести к серьезным нарушениям пространственной кратковременной, долгосрочной и рабочей памяти9. Эти нарушения памяти наблюдались у грызунов, моделей ЧМТ. Модели грызунов позволили разработать методы тестирования памяти, что позволило глубже идентиировать влияние ЧМТ на обработку памяти в нейронных системах памяти.

Два теста, связанные с топологической и метрической обработкой пространственной информации соответственно, помогают измерить пространственную рабочую память (SWM). Топологический тест зависит от изменения размера пространства окружающей среды или связанных пространств связи или ограждения вокруг объекта, в то время как метрический тест оценивает изменения углов или расстояния между объектами10,11. Goodrich-Hunsaker et al. впервые адаптировали топологический тест человека для крыс10 и применили метрическую задачу для диссоциатов ролей теменной коры (ПК) и дорсального гиппокампа в пространственной обработке информации11. Аналогичным образом, Гуркофф и его коллеги оценили метрические, топологические и временные задачи по упорядочению памяти после боковой жидкостной перкуссионной травмы9. Существует корреляция между повреждением определенных областей мозга и ухудшением метрической или топологической памяти. Было высказано предположение, что метрическое ухудшение памяти связано с поражениями в двусторонней дорсальной дентитовой извилине и подрайоне рога аммониса (CA) CA3 гиппокампа, и что топологическое ухудшение памяти связано с двусторонними поражениями теменной коры10,12.

Целью этого протокола является оценка дефицита пространственной памяти в популяции крыс с помощью метрической задачи. Этот метод является подходящей альтернативой для исследования механизмов SWM после черепно-мозговой травмы, и его преимущества включают относительную простоту реализации, высокую чувствительность, низкую стоимость воспроизводимости, возможность динамического наблюдения и низкую стрессовую среду. По сравнению с другими поведенческимизадачами,такими как лабиринт Барнса13,14,задача водной навигации Морриса15,16,17или пространственный лабиринт18,19,этот метрический тест менее сложен. Из-за простоты выполнения метрический тест требует более короткого и менее напряженного периода обучения и проходит всего в течение 2дней 9: 1 день для привыкания и 1 день для задачи. Более того, предлагаемый нами тест легче выполнить, чем другие тесты с низким уровнем стресса, такие как задача распознавания новых объектов (NOR), и не требует дополнительного дня привыкания20.

В этой статье представлена простая модель для оценки SWM после черепно-мозговой травмы. Эта оценка пост-ЧМТ SWM может помочь в более всестороннем исследовании его патофизиологии.

Protocol

Эксперименты проводились в соответствии с рекомендациями Хельсинкской и Токийской деклараций и Руководства по использованию экспериментальных животных Европейского сообщества. Эксперименты были одобрены Комитетом по уходу за животными Университета Бен-Гуриона в Негеве. Временная …

Representative Results

Значимость сравнений между группами определяли с помощью теста Манна-Уитни. Статистическая значимость результатов рассматривалась на уровне P < 0,05, в то время как статистически высокая релевантность измерялась при P < 0,01. Результаты не показали различий в НСС между всеми …

Discussion

Специально ориентируясь на процесс метрической пространственной информации, этот метрический тест предоставляет необходимый инструмент для понимания дефицита памяти после ЧМТ. Протокол, представленный в данной работе, является модификацией ранее описанных поведенческих задач<sup clas…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы благодарим профессора Елену Севериновскую; Марина Кущерьява M.Sc; Максим Кривоносов M.Sc; Дарина Якуменко M.Sc; Евгения Гончарык M.Sc; и Ольга Шаповал, кандидат физиологических наук кафедры биологии, экологии и медицины Днепровского университета имени Олеся Гончара, Днепр, Украина, за их поддерживающий и полезный вклад. Данные были получены в рамках кандидатской диссертации Дмитрия Франка.

Materials

2% chlorhexidine in 70% alcohol solution SIGMA – ALDRICH 500 cc For general antisepsis of the skin in the operatory field
 Bupivacaine 0.1 %
4 boards of different thicknesses (1.5cm, 2.5cm, 5cm and 8.5cm) This is to evaluate neurological defect
4-0 Nylon suture 4-00
Bottles Techniplast ACBT0262SU 150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Bottlses (four) for topological an metric tasks For objects used two little bottles, first round (height 13.5 cm) and second faceted (height 20 cm) shape and two big faceted bottles, first 9×6 cm (height 21 cm) and second 7×7 cm (height 21 cm).
Diamond Hole Saw Drill 3mm diameter Glass Hole Saw Kit Optional. 
Digital Weighing Scale SIGMA – ALDRICH Rs 4,000
Dissecting scissors SIGMA – ALDRICH Z265969
Ethanol 99.9 %  Pharmacy 5%-10% solution used to clean equipment and remove odors
EthoVision XT (Video software) Noldus, Wageningen, Netherlands Optional
Fluid-percussion device custom-made at the university workshop    No specific brand is recommended.
Gauze Sponges Fisher 22-362-178
Gloves (thin laboratory gloves) Optional.
Heater with thermometer Heatingpad-1 Model: HEATINGPAD-1/2    No specific brand is recommended.
Horizon-XL Mennen Medical Ltd
Isofluran, USP 100% Piramamal Critical Care, Inc NDC 66794-017 Anesthetic liquid for inhalation
Office 365 ProPlus Microsoft Microsoft Office Excel
Olympus BX 40 microscope Olympus
Operating  forceps SIGMA – ALDRICH
Operating  Scissors SIGMA – ALDRICH
PC Computer for USV recording and data analyses Intel Intel® core i5-6500 CPU @ 3.2GHz, 16 GB RAM, 64-bit operating system
Plexiglass boxes linked by a narrow passage Two transparent 30 cm × 20 cm × 20 cm plexiglass boxes linked by a narrow 15 cm × 15 cm × 60 cm passage
Purina Chow Purina 5001 Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5
Rat cages  (rat home cage or another enclosure) Techniplast 2000P No specific brand is recommended
Scalpel blades 11 SIGMA – ALDRICH S2771
SPSS SPSS Inc., Chicago, IL, USA  20 package
Stereotaxic Instrument custom-made at the university workshop    No specific brand is recommended
Timing device Interval Timer:Timing for recording USV's Optional. Any timer will do, although it is convenient to use an interval timer if you are tickling multiple rats
Topological and metric tasks device Self made in Ben Gurion University of Negev White circular platform 200 cm in diameter and 1 cm thick on table
Video camera Logitech C920 HD PRO WEBCAM Digital video camera for high definition recording of rat behavior under plus maze test
Windows 10 Microsoft

References

  1. Binder, L. M. Persisting symptoms after mild head injury: A review of the postconcussive syndrome. Journal of Clinical and Experimental Neuropsychology. 8 (4), 323-346 (1986).
  2. Binder, L. M. A review of mild head trauma. Part II: Clinical implications. Journal of Clinical and Experimental Neuropsychology. 19 (3), 432-457 (1997).
  3. Binder, L. M., Rohling, M. L., Larrabee, G. J. A review of mild head trauma. Part I: Meta-analytic review of neuropsychological studies. Journal of Clinical and Experimental Neuropsychology. 19 (3), 421-431 (1997).
  4. Leininger, B. E., Gramling, S. E., Farrell, A. D., Kreutzer, J. S., Peck, E. A. Neuropsychological deficits in symptomatic minor head injury patients after concussion and mild concussion. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 53 (4), 293-296 (1990).
  5. Levin, H. S., et al. Neurobehavioral outcome following minor head injury: a three-center study. Journal of Neurosurgery. 66 (2), 234-243 (1987).
  6. McMillan, T. M. Minor head injury. Current Opinion in Neurology. 10 (6), 479-483 (1997).
  7. Millis, S. R., et al. Long-term neuropsychological outcome after traumatic brain injury. The Journal of Head Trauma Rehabilitation. 16 (4), 343-355 (2001).
  8. Stuss, D., et al. Reaction time after head injury: fatigue, divided and focused attention, and consistency of performance. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 52 (6), 742-748 (1989).
  9. Gurkoff, G. G., et al. Evaluation of metric, topological, and temporal ordering memory tasks after lateral fluid percussion injury. Journal of Neurotrauma. 30 (4), 292-300 (2013).
  10. Goodrich-Hunsaker, N. J., Howard, B. P., Hunsaker, M. R., Kesner, R. P. Human topological task adapted for rats: Spatial information processes of the parietal cortex. Neurobiology of Learning and Memory. 90 (2), 389-394 (2008).
  11. Goodrich-Hunsaker, N. J., Hunsaker, M. R., Kesner, R. P. Dissociating the role of the parietal cortex and dorsal hippocampus for spatial information processing. Behavioral Neuroscience. 119 (5), 1307 (2005).
  12. Goodrich-Hunsaker, N. J., Hunsaker, M. R., Kesner, R. P. The interactions and dissociations of the dorsal hippocampus subregions: how the dentate gyrus, CA3, and CA1 process spatial information. Behavioral Neuroscience. 122 (1), 16 (2008).
  13. Rosenfeld, C. S., Ferguson, S. A. Barnes maze testing strategies with small and large rodent models. Journal of Visualized Experiments:JoVE. (84), e51194 (2014).
  14. O’leary, T. P., Brown, R. E. The effects of apparatus design and test procedure on learning and memory performance of C57BL/6J mice on the Barnes maze. Journal of Neuroscience Methods. 203 (2), 315-324 (2012).
  15. Bromley-Brits, K., Deng, Y., Song, W. Morris water maze test for learning and memory deficits in Alzheimer’s disease model mice. Journal of Visualized Experiments:JoVE. (53), e2920 (2011).
  16. Smith, C., Rose, G. M. Evidence for a paradoxical sleep window for place learning in the Morris water maze. Physiology & Behavior. 59 (1), 93-97 (1996).
  17. Roof, R. L., Zhang, Q., Glasier, M. M., Stein, D. G. Gender-specific impairment on Morris water maze task after entorhinal cortex lesion. Behavioural Brain Research. 57 (1), 47-51 (1993).
  18. Deacon, R. M., Rawlins, J. N. P. T-maze alternation in the rodent. Nature Protocols. 1 (1), 7 (2006).
  19. Penley, S. C., Gaudet, C. M., Threlkeld, S. W. Use of an eight-arm radial water maze to assess working and reference memory following neonatal brain injury. Journal of Visualized Experiments:JoVE. (82), e50940 (2013).
  20. Davis, A. R., Shear, D. A., Chen, Z., Lu, X. -. C. M., Tortella, F. C. A comparison of two cognitive test paradigms in a penetrating brain injury model. Journal of Neuroscience Methods. 189 (1), 84-87 (2010).
  21. Jones, N. C., et al. Experimental traumatic brain injury induces a pervasive hyperanxious phenotype in rats. Journal of Neurotrauma. 25 (11), 1367-1374 (2008).
  22. Kabadi, S. V., Hilton, G. D., Stoica, B. A., Zapple, D. N., Faden, A. I. Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats. Nature Protocols. 5 (9), 1552 (2010).
  23. Ohayon, S., et al. Cell-free DNA as a marker for prediction of brain damage in traumatic brain injury in rats. Journal of Neurotrauma. 29 (2), 261-267 (2012).
  24. Frank, D., et al. Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration. Journal of Visualized Experiments:JoVE. (159), e61198 (2020).
  25. Hunter, A., et al. Functional assessments in mice and rats after focal stroke. Neuropharmacology. 39 (5), 806-816 (2000).
  26. Yarnell, A. M., et al. The revised neurobehavioral severity scale (NSS-R) for rodents. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-16 (2016).
  27. Fujimoto, S. T., Longhi, L., Saatman, K. E., McIntosh, T. K. Motor and cognitive function evaluation following experimental traumatic brain injury. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 28 (4), 365-378 (2004).
  28. Hausser, N., et al. Detecting behavioral deficits in rats after traumatic brain injury. Journal of Visualized Experiments:JoVE. (131), e56044 (2018).
  29. Ma, C., et al. Sex differences in traumatic brain injury: a multi-dimensional exploration in genes, hormones, cells, individuals, and society. Chinese Neurosurgical Journal. 5 (1), 1-9 (2019).
  30. Shahrokhi, N., Khaksari, M., Soltani, Z., Mahmoodi, M., Nakhaee, N. Effect of sex steroid hormones on brain edema, intracranial pressure, and neurologic outcomes after traumatic brain injury. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 88 (4), 414-421 (2010).
  31. Farace, E., Alves, W. M. Do women fare worse: a metaanalysis of gender differences in traumatic brain injury outcome. Journal of Neurosurgery. 93 (4), 539-545 (2000).
  32. Basso, M. R., Harrington, K., Matson, M., Lowery, N. FORUM sex differences on the WMS-III: findings concerning verbal paired associates and faces. The Clinical Neuropsychologist. 14 (2), 231-235 (2000).
  33. Janowsky, J. S., Chavez, B., Zamboni, B. D., Orwoll, E. The cognitive neuropsychology of sex hormones in men and women. Developmental Neuropsychology. 14 (2-3), 421-440 (1998).
  34. Halari, R., et al. Sex differences and individual differences in cognitive performance and their relationship to endogenous gonadal hormones and gonadotropins. Behavioral Neuroscience. 119 (1), 104 (2005).
  35. Rowe, R. K., Griffiths, D., Lifshitz, J. . Pre-Clinical and Clinical Methods in Brain Trauma Research. , 97-110 (2018).
  36. Kabadi, S. V., Hilton, G. D., Stoica, B. A., Zapple, D. N., Faden, A. I. Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats. Nature Protocols. 5 (9), 1552-1563 (2010).
  37. Losurdo, M., Davidsson, J., Sköld, M. K. Diffuse axonal injury in the rat brain: axonal injury and oligodendrocyte activity following rotational injury. Brain Sciences. 10 (4), 229 (2020).
  38. Kuts, R., et al. A novel method for assessing cerebral edema, infarcted zone and blood-brain barrier breakdown in a single post-stroke rodent brain. Frontiers in Neuroscience. 13, 1105 (2019).

Play Video

Cite This Article
Frank, D., Gruenbaum, B. F., Melamed, I., Grinshpun, J., Benjamin, Y., Vzhetson, I., Kravchenko, N., Dubilet, M., Boyko, M., Zlotnik, A. A Metric Test for Assessing Spatial Working Memory in Adult Rats Following Traumatic Brain Injury. J. Vis. Exp. (171), e62291, doi:10.3791/62291 (2021).

View Video