רצועות אימונוכרומטוגרפיות זרימה לרוחב מבוססות ממברנה (ICSs) הן כלים שימושיים לאבחון עצמי בעלות נמוכה ויושמו ביעילות על רעלן, אינדקס פיזיולוגי וזיהוי סמנים ביולוגיים קליניים. בפרוטוקול זה, אנו מספקים תיאור מפורט של השלבים לפיתוח אימונואסי מהיר, רגיש וכמותי לרוחב (באמצעות AuNPs כסמן ו- mAbs כגשוש). ההליך מתאר את ההכנה והאפיון של זהב קולואידי, סינתזה של מצומד AuNP-mAb, הרכבה של הרצועה החיסונית, וחקירה מתודולוגית של ההסתה. התוצאות הראו כי ניתן להשתמש ברצועות הסופיות עוד יותר לאבחון עצמי מהיר ונוח של מולקולה קטנה, אשר עשויה לספק כלי חלופי בניתוח מהיר ומדויק של מדדים פיזיולוגיים וביולוגיים.
רצועות אימונוכרומטוגרפיות זרימה לרוחב מבוססות ממברנה (ICSs) הן כלים שימושיים לזיהוי בעלות נמוכה ומהירה. קרום הניטרוצלולוז כנשא וזהב קולואידי כסמנים של ריאגנטים אבחון מהיר כרומטוגרפיה חיסונית הם שיטת POCT (נקודת הטיפול) הנפוצה ביותר, ואת היקף הבדיקה של הפרויקט הוא רחב יותר. מהיישום המקורי שלהם בניטור במהלך ההריון, השימוש בהם הוארך כדי לפקח על מצב קרישת הדם1,2, פגיעה בשריר הלב3,תרופה וטרינרית 4, שאריות חומרי הדברה5, מחלות זיהומיות6 וריכוזים סמים. ניתן להעריך סוגים נוספים של דגימות, כולל שתן, רוק, דם שלם, סרום ונוזלים אחרים בגוף7,8,9.
בשנים האחרונות פותחו בדיקות חדשניות רבות לאיתור סמנים ביולוגיים באבחון הפרעות, כולל HPLC, UPLC, LC-MS ו- ELISA, שהם רגישים ומדויקים, אמינים וספציפיים. עם זאת, שיטות אלה דורשות מכשור מתוחכם, עיבוד מקדים מורכב וטיפולים גוזלי זמן9. לפיכך, פיתוח אסטרטגיית אבחון מהירה ונוחה יותר של נקודת טיפול לגילוי עצמי ובזמן אמת של תרכובות פעילות מרפא הוא דחוף10,11.
הפופולריות של ICSs, במיוחד עבור בדיקות נפוצות, מונעת על ידי קלות השימוש שלהם, כפי שהם אינם דורשים אנשי מקצוע או הגדרות אינסטרומנטליות משוכללות12. במילים אחרות, אנשים שאין להם הכשרה מיוחדת יכולים להפעיל רצועות או בדיקות עצמיות13. את תוצאות הבדיקה ניתן להשיג בתוך 5 דקות, מה שאומר שזה יכול לשמש לבדיקות באתר14. יתר על כן, על פי החישובים שלנו, העלות של רצועות יכול להיות נמוך יותר מ 1 RMB15, כלומר הבדיקות זולות כדי לקדם16. לפיכך, ICS הוא מכשיר חד פעמי מדויק יחסית, פשוט וזול. ICSs המבוסס על זהב קולואידי17,18 מיושמים גם בגילוי מהיר COVID-19.
העיקרון של ICS ניתן לחלק כריך ICS ו- ICS תחרותי. איור 1A הוא תרשים סכמטי של כריך ICS, המשמש בעיקר לאיתור חומרים מקרומולקולריים כגון חלבונים, כולל סמני גידול, גורמים דלקתיים וגונדוטרופין כוריוני אנושי (HCG, אנטיגן הריון מוקדם). בשיטה זו, נוגדנים מזווגים המיועדים לאפיטופים שונים של האנטיגן משמשים, ונוגדן הלכידה מיובש על קרום NC כקו בדיקה. נוגדן שכותרתו מיובש על כרית מצומד, ונוגדן משני משמש כקו הביקורת.
איור 1B הוא תרשים סכמטי של ICS תחרותי, המשמש בעיקר לזיהוי חומרים של מולקולות קטנות (MWCO < 2000 Da). אנטיגן הציפוי קבוע על קרום NC כקו בדיקה, ואת הנוגדן המסומן מיובש על כרית מצומד. במהלך הזיהוי, המדגם והתווג הנוגדנים זורמים דרך קו הזיהוי תחת פעולה נימית, והאנטיגן המצולף קושר באופן תחרותי אנטיגן חינם במדגם ומפתח צבע אדום בקו הזיהוי.
לאחרונה, תיארנו את ההליך של ייצור נוגדנים חד שבטיים נגד מוצרים טבעיים19. בעבודה זו, פיתחנו אימונואזיה זרימה לרוחב רומן המבוסס על mA20 מוכן נגד SSD לגילוי מהיר באתר. התוצאות מצביעות על כך שבדיקת החיסונים היא כלי חיוני ונוח לאיתור תרכובות טבעיות המופקות ממוצר.
איור 1 תרשים סכמטי של בדיקת החיסונים (A)רצועות בדיקה אימונוכרומטיות של כריך. (B)רצועות בדיקה כרומטוגרפיות חיסון עקיפות. נתון זה שונה מ ג’אנג ואח‘, 201821. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
בעבודה זו, אנו מציגים פרוטוקול להכנת mAbs נגד מולקולות קטנות טבעיות המופקות ממוצר. הצעדים החיוניים והעניינים הזקוקים לתשומת לב בהליך תוארו, והדגמנו את התועלת של פרוטוקול זה באמצעות המולקולה הקטנה SSD כדוגמה. ספקטרום לדוגמה, תמונות TEM, תוצאות כמותיות וחקירות מתודולוגיות מוצגים בנתונים מייצגי…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרנות המיוחדות לקרנות מחקר יסודיות של מוסדות להשכלה גבוהה המזוהים עם מחלקות מרכזיות. אנו מעריכים את התמיכה של מרשם קלאסי צוות מחקר בסיסי של אוניברסיטת בייג’ינג לרפואה סינית.
Chloroauric acid solution (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
bovine serum albumin | AMRESCO | 332 | |
centrifuge tube 15 mL | Corning | 430645 | |
centrifuge tube 50 mL | Corning | 430828 | |
ELISA plates, 96 well | NUNC | 655101 | |
Filter paper | Sinopharm | H5072 | |
Glass fibre membranes | Jieyi | XQ-Y6 | |
goat-anti-mouse IgG antibody | applygen | C1308 | |
Nitrocellulose membranes | Millipore | millipore 180 | |
ovalbumin | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
PEG20000 | Sigma Aldrich | RNBC6325 | |
Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
semi-rigid PVC sheets | Jieyi | JY-C104 | |
Sodium citrate | Beijing Chemical Works | C1034 | |
sodium periodate | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
Sulfo-GMBS | Perbio Science Germany | 22324 | |
TipOne Tips 1,000 µL | Starlab | S1111-2021 | |
Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |