Summary
Denna artikel beskriver en ny djurmodell som utvecklats för att studera hornhinnans anatomi och histologi och dess läkningsprocesser. Denna nya djurmodell använder den mongoliska gerbilen, som har en hornhinna med många likheter med den mänskliga hornhinnan.
Abstract
Corneal sårläkningsstudier har genomförts under lång tid och har bidragit till att minska lidande och utveckla behandlingar som bidrar till att förbättra patienternas ögonhälsa. Historiskt sett har hornhinneläkning studerats hos gnagare som möss och råttor, men dessa modeller kanske inte helt efterliknar mänskliga störningar. Informationen om andra gnagare som mongoliska gerbiler (Meriones unguiculatus) är dock knapphändig i hornhinneforskningen.
Här beskriver vi en teknik för att utveckla en ny djurmodell för att studera hornhinneläkning efter fotorefraktiv keratektomi. På grund av den begränsade litteraturen som finns tillgänglig på hornhinnan av M. unguiculatus beskriver vi också en histologisk analys av den normala hornhinnan. Dessa forskningstekniker kan också användas vid studier av ögonsjukdomar på grund av likheten mellan hornhinnorna hos mongoliska gerbiler och människor när det gäller genetik, anatomi och fysiologi.
Introduction
Några av de viktigaste aspekterna av hornhinnans sårläkning, som är viktiga problem för främre segmentkirurgi, är integriteten hos epitelarkitekturen, upprätthållandet av hornhinnans stromagenomskinlighet och slutligen resultatet när det gäller hornhinnans brytningsegenskaper1.
Hornhinnan är den yttersta klara vävnaden på framsidan av ögongloben och är därför mottaglig för trauma, infektioner och brännskador; Den försämrade läkningen av dessa sår kan äventyra den visuella hälsan2.
För närvarande finns flera djurmodeller tillgängliga för att studera hornhinneläkning, och vissa av dem är bättre än andra, beroende på art och typ av mekanism som ska studeras1. Det finns några uppgifter om tidigare undersökningar på näthinnan hos gerbils2. Men hittills finns det ingen publicerad litteratur om ärrbildningsprocesserna i hornhinnan hos dessa gnagare.
Här presenterar vi Meriones unguiculatus (mongolisk gerbil) som en djurmodell för sårläkning i hornhinnan. Förfaranden för att framkalla hornhinneläkning efter fotorefraktiv keratektomi beskrivs, vilket gör att vi kan studera de olika typerna av hornhinneärrprocesser, förstå sårläkning när det gäller de dynamiska faserna i levande vävnad och slutligen planera lämpliga framtida behandlingar3. Fototerapeutisk keratektomi är en mycket reproducerbar teknik med möjlighet att exakt kontrollera parametrar som djupet och diametern på hornhinneskadan4. Dessutom kräver denna teknik inte procedurer med kirurgiska instrument eller kemiska lösningar (t.ex. saltlösning, formalin, alkohol etc.) som kan lägga till variabler som är specifika för instrumenten eller för operatören som utför proceduren5.
Tre 6 månader gamla manliga gerbiler av liknande storlekar och vikter (cirka 90 g) användes för experimentet som presenteras i denna artikel. Procedurerna utfördes endast i rätt ögon. En gerbil (kallad gerbil 1 eller kontroll) genomgick inte fototerapeutisk keratektomi och enucleerades för att utvärdera alla normala okulära strukturer. Fototerapeutisk keratektomi innebär kontrollerad leverans av excimerlasergenererat ultraviolett ljus till hornhinnan och utvecklades för att utföra brytningskirurgi6. Det har använts i andra gnagare, såsom möss7. De andra två gerbilerna utsattes för fototerapeutisk keratektomi. En av dem enukcleerades vid 24 h (kallad gerbil 2) och den andra vid 96 h efter operation (kallad gerbil 3).
För att utföra detta experiment filmades en gerbil som valts slumpmässigt för varje tillstånd som skulle studeras, men detta experiment utfördes tidigare med totalt 16 gerbiler för varje tillstånd. Av redigeringsskäl beslutades att använda en slumpmässigt utvald gerbil för varje tillstånd (totalt tre gerbiler) som exempel.
Huvudsyftet med denna forskning är att utforska den bästa djurmodellen som finns tillgänglig. Det är dock viktigt att notera att inte alla arter har ögonegenskaper som liknar det mänskliga ögat8. Denna artikel beskriver den metod som används för att studera hornhinnan av Meriones unguiculatus och proceduren som utförs för att generera hornhinneskadan, vilket gör att vi kan studera läkningsprocessen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla forskningsförfaranden godkändes av "Institutional Commission for the Care and Use of Laboratory Animals" vid Universidad Católica de Córdoba och följde National Research Council Guide för vård och användning av laboratoriedjur. Dessa förfaranden godkändes också av myndigheterna vid "Facultad de Ciencias de la Salud" vid Universidad Católica de Córdoba och "Instituto de la Visión Cerro".
1. Gerbilhantering och anestesi
OBS: Alla djur var specifika patogenfria (SFP) manliga mongoliska gerbiler och hölls i Center for Research and Development in Immunology and Infectious Diseases (CIDIE) anläggningar (Córdoba, Argentina). De erhölls från Universidad de La Plata (Buenos Aires, Argentina).
- Hysa gerbilerna socialt i polysulfonburar bäddade med corncob sängkläder. Ge mat och filtrerat kranvatten i vattenflaskor ad libitum. Se till att rumstemperaturintervallet är 18 °C till 24 °C och att en ljus-mörk cykel på 12:12 timmar används.
- Väg varje gerbil separat och identifiera var och en för att undvika förvirring. Gör ett märke med en outplånlig bläckmarkör på basen av gerbilens svans. Använd pincett för att hålla gerbilens öra och gör ett märke med den outplånliga markören på gnagarens öra. Om ett laboratorium och ett stort biotherium finns tillgängligt, tilldela en unik bur för varje gnagare med motsvarande identifiering.
- Desinficera den laminära flödeshuven med 70% etanollösning. Placera alla kirurgiska instrument och engångsinstrument inklusive nålar, sprutor och rack i arbetsområdet inuti huven. Placera också ett kirurgiskt engångsskum i huven.
- Använd en liten öppen plastbehållare för att hålla gnagaren på precisionsbalansen för att underlätta mätningen.
- Använd tre 6 månader gamla manliga mongoliska gerbiler av liknande storlekar och vikter (~ 80 g) för detta experiment. En i taget, placera varje bur med gnagaren inuti den laminära flödeshuven. Öppna burarna, identifiera var och en av gerbilerna och väg dem på vågen.
OBS: Gerbils är ofarliga men känsliga djur. Använd engångshandskar vid hantering av gerbilerna. - Ta tag i gerbilen med den icke-dominerande handen för att hålla den stadigt i svansen. Använd den dominerande handen, med tummen och pekfingret bakom öronen, för att hålla djuret med det ventrala området uppåt. Använd lillfingret för att hålla svansen.
- Fyll en spruta med en 30 G nål med 1 ml ketamin och xylazin. Administrera anestesin intraperitonealt i gnagaren (50-100 mg/kg ketamin och 2 mg/kg xylazin)9 med den dominerande handen. Effektens varaktighet kommer att vara cirka 20-50 min (variationer kan uppstå).
- För att säkerställa att gerbilen är helt bedövad, kontrollera med en tåklämma, svansnypa och hornhinnereflektion etc. innan du gör snitt i hornhinnan.
OBS: Utför endast alla procedurer i höger öga.
2. Optisk koherenstomografi (ULT) av hornhinnan
- Placera sterila kirurgiska draperier för att skydda utrustningen från sekret eller djurhår.
- Se till att en av operatörerna håller i djuret medan en annan operatör tar bilderna. Operatören ska vila händerna på utrustningen medan han håller gerbilen så att gerbilens öga är så stabilt och stilla som möjligt att studera. Vila handen som håller gerbilen på hakstödet..
- Starta programvaran som styr OCT och tryck på Ta bild och spara sedan önskad bild. Utför flera sagittala och koronala skivor av hornhinnan. Föreställ dig ögat under OCT och gör flera skivor för att se det främre segmentet av gnagarens hornhinna.
OBS: Om den erhållna bilden inte är skarp och ögat har rört sig något, upprepa proceduren flera gånger för att få tillräckligt med bilder. - Med hjälp av OCT-programvaran utför du pachymetriska mätningar av de centrala och perifera regionerna. På programvarans huvudskärm trycker du på Ta bild och trycker sedan på knappen Spara önskad bild .
- Utför mätningar på det normala eller kontrollera ögat och omedelbart efter fototerapeutisk kerektomi på de andra gnagarögonen.
3. Excimer laser fototerapeutisk keratektomi (PTK)
- Placera sterila kirurgiska draperier på excimerlaseranordningen för att skydda utrustningen från sekret eller djurhår.
- Sätt in en droppe topisk proparakainhydroklorid (0,5%) i ögat som ska behandlas 5 minuter före det kirurgiska ingreppet.
- Använd den icke-dominerande handen för att hålla gerbilen ordentligt. Öppna djurets ögonlock med den dominerande handen så att bilderna kan tas ordentligt. För att kunna fokusera och få en skarp bild, se till att händerna på den person som håller gerbilen vilar på utrustningens huvud. Placera händerna som håller djuret där en patient skulle placera nacken.
- Utför PTK-ablation på höger öga. Använd följande parametrar: en ablation mellan 60 μm och 62 μm tjock, en optisk zon på 3 mm, en varaktighet på 4 s och totalt 1 867 pulser.
OBS: PTK utförs endast på gerbil 2 och gerbil 3. I detta steg förbereder och aktiverar den andra operatören lasern för att ablatera hornhinnevävnaden. - Omedelbart efter proceduren, ta fotografier och utför OCT-analys för att registrera och dokumentera ytförändringar i de behandlade ögonen.
- När proceduren är klar, placera gnagaren tillbaka i buret, övervaka vitala tecken (hjärtfrekvens: 360 slag per minut; rektal temperatur: 37-38,5 ° C; andningsfrekvens: 90 andetag per minut) och låt djuret återhämta sig från anestesi.
4. Uppvaknande av gerbilerna efter hornhinnan PTK
- Administrera buprenorfin (0,1 mg/kg till 0,05 mg/kg) och atipamezol (0,1-1 mg/kg) via intraperitoneala injektioner.
- Placera varje gerbil i respektive hembur och övervaka vitala tecken för normalt uppvaknande (den normala kroppstemperaturen är 37-39 °C).
- Applicera en erytromycinsalva för att hålla ytan ren och förhindra infektion. Utför denna procedur två gånger per dag.
- Administrera buprenorfin (var 6-12 h) subkutant (0,01-0,05 ml) för analgesi och ögonsalva två dagar i följd efter PTK.
5. Eutanasimetod
- Utför eutanasi i hemburet när det är möjligt.
- Inför komprimerad koldioxid (CO2) gas i hemburet. En fyllningshastighet på 30%-70% av kammarvolymen per minut medCO2 tillsatt till den befintliga luften i hemburet är tillräcklig för att uppnå en blandning som uppfyller målet (för en 10 L volymkammare, använd en flödeshastighet på 3-7 L / min). Använd cervikal dislokation (som en sekundär metod för eutanasi) för att säkerställa gnagarnas död.
- Vid 24 h och 96 h efter operation för gerbil 2 respektive gerbil 3, ta bort djuret från hemburet för att utföra enucleation av ögongloben (både den normala ögongloben och den som genomgår operation) för att observera hornhinneläkning.
- Placera djuret på operationsbordet och kontrollera om det inte finns hjärtslag i ca 1 min.
6. Ögonkirurgi
- Ta bort de övre och nedre ögonlocken för att få tillgång till ögongloben. Använd kirurgiska pincett och sax för att ta bort ögonlocken. Arbetsområdets storlek är så liten och känslig att avlägsnande av ögonlocken gör att ögongloben kan enucleated utan att skada den.
- För att enukcleate ögongloben, gör ett snitt i den yttre canthusen och styr saxen i en bakre riktning. Upprepa denna procedur från den inre canthus genom att separera ögongloben från banan.
- Sektion optisk nerv på baksidan av ögongloben. Det bör klargöras att den bakre orbitalplexusen vanligtvis genererar liten blödning vid utförandet av denna teknik, vilket gör arbetet svårt.
- Inför ögongloben i ett mikrocentrifugrör med steril saltlösning i 30 s till 1 min för att tvätta bort eventuellt kvarvarande blod.
- Placera ögongloben i ett mikrocentrifugrör innehållande 10% formaldehyd för efterföljande anatomi-patologisk analys enligt beskrivningen nedan. Ta flera bilder och fotografier.
7. Anatomopatologisk analys
- Bädda in hela ögat i 10% buffrat formalin i 6-24 timmar.
- Skär vävnaden med en mikrotom. Se till att den skurna vävnaden har en tjocklek av 3 mm.
- Blötlägg vävnaden i 96% alkohol i 30-90 min och upprepa denna procedur två gånger.
- Placera vävnaden i isopropylalkohol i 30-90 minuter och upprepa denna procedur två gånger.
- Sätt vävnaden i xylen eller xylenersättning för 1-3 h.
- Bädda in vävnaden i flytande fotogen i minst 1 timme.
- Använd ett block för att placera vävnaden och bädda in den i flytande paraffin. Låt den stelna (placera den på en kall plats) och skär den.
- Förbered mikrotomen för sektionering enligt tillverkarens instruktioner.
- Använd därefter fläckar som hematoxylin och eosin.
- Få bilder med kameran tillagd i mikroskopet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I den aktuella studien analyserades hela hornhinnestrukturen grundligt med hjälp av histologiska tekniker och kompletterande studier av det främre segmentet, såsom optisk koherenstomografi. Bildanalysen med optisk koherenstomografi av de främre segmentstrukturerna visar ett normalt epitel och stroma (figur 1), med centrala och perifera hornhinnetjocklekar på 160 μm respektive 106 μm ± 2 μm. Andra publikationer har också visat att hornhinnan hos andra gnagare blir tunnare mot periferin10.
Efter PTK observerades debrideringen av hornhinneepitelet (figur 2). Makroskopiska bilder av gerbilögat före och efter behandlingen togs också. Efter att ha utfört PTK observerades en oregelbunden hornhinneyta, som färgades genom att införa en droppe fluorescein och belysa den med violett ljus (som visar epitelsåret) (Figur 3).
När det gäller den histologiska analysen visade den normala hornhinnan hos den obehandlade gerbilen (gerbil 1) samma lager som hos människor: det stratifierade främre epitelet med fyra till sex lager av celler, vilket representerar 28% av hornhinnans totala tjocklek, Bowmans skikt, stroma, som representerar 66% av hornhinnans totala tjocklek, Descemets membran, och endotelet (figur 4 och figur 5).
De förändringar som observerades i gerbil nummer 2 (24 h efter PTK) var ett sår i hornhinnan, sphacelation av det intilliggande främre epitelet, flera fläckar av epitelial akantolys och isolerade discheratocyter, akut subepitelial inflammatorisk infiltrat och ödem vid stromanivån (Figur 6).
De förändringar som observerades i gerbil nummer 3 (96 h efter PTK) var närvaron av större ödem än i gerbil nummer 2, uppdelning av stromafibrerna och cellerna, fullständig regenerering av det främre epitelet och inget inflammatoriskt infiltrat (figur 7).
Sammanfattningsvis visar histologisk färgning den normala sårläkningsprocessen i hornhinneepitelet och ytlig stroma, med inflammatoriskt infiltrat och ödem.
Figur 1: Representativ OCT-avbildning av normal hornhinna. Hornhinnan kan ses i sin fulla storlek (med en tjockleksmätning vid toppen av 160 μm och tjockleksmätningar på 108 μm och 110 μm i periferin), och den främre kammaren, iridocornealvinkeln, irisen och den kristallina linsen (som sticker ut i den främre kammaren) kan också ses. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Representativ OCT-avbildning av hornhinnan före och efter PTK . (A) Bild av den normala hornhinnan. (B) Bild av hornhinnan 10 min efter PTK. Pilen till vänster visar kanten på ett sår med en ansamling av cellulärt skräp, och pilen till höger visar också skräp på hornhinnans yta som är typisk för operationen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Representativt makrofotografi av ögongloben på gerbilen (höger öga). (A) Regelbunden yta på den normala ögongloben. (B) Bild tagen 5 min efter att PTK utfördes, som visar oegentligheter på hornhinnans yta. (C) Tecken på ett hornhinnessår färgat med 0,25% fluorescein med hjälp av en LED-ljuskälla (violett). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Representativ fullständig histologisk sektion (främre-bakre) av hela den normala hornhinnan i gerbilen (40x) färgad med H&E. (A) De perifera och centrala fragmenten är inramade. Skalstången är 20 μm. (B-D) Hornhinnans periferi visar ett tunnare epitel med mindre stratifiering och ett minskat antal stromafibrer. Figuren visar ett något fristående endotel i hornhinnans periferi, vilket beror på en artefakt av tekniken. Följaktligen är den perifera hornhinnans tjocklek tunnare än den centrala. C) Den uppmätta tjockleken liknar den tjocklek som beräknats med bilderna från ULT. Både epitel och stroma visar en större tjocklek på nivån av hornhinnans topp. Skalstrecket är 40 μm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: Representativ normal hornhinna av den mongoliska gerbilen färgad med H&E (gerbil nummer 1). De fem skikten i hornhinnan och det intakta epitelet observeras. Skalstrecket är 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6: Representativ hornhinna 24 timmar efter excimerlaserfototerapeutisk keratektomi (PTK) (färgad med H&E). Pilen visar kanten på hornhinnesåret (gerbil nummer 2). Skalstrecket är 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7: Representativ hornhinna 96 h efter excimer laser fototerapeutisk keratektomi (PTK). Färgad med H&E; Gerbil nummer 3. Det regenererade epitelet och stromalödem observeras i denna figur. Skalstrecket är 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fysiologin för hornhinnans sårläkning är en balans mellan vävnadsregenerering och upprätthållande av homeostas. Överdriven sårläkning kan leda till fibros och ärrbildning, vilket i slutändan kan leda till förlust av organfunktion. Med den snabba utvecklingen av hornhinnekirurgiska ingrepp kan vikten av att förstå hornhinnans sårläkning och de fysiologiska och patologiska händelserna som är inblandade inte överskattas11.
Flera forskningsarbeten hävdar att gerbiler har många sensoriska egenskaper som gör dem till en gynnsam art för synstudier, inklusive främst dagligt beteende12 och överlägsen och mer akut syn jämfört med möss eller råttor13. Deras retinala struktur är mer analog med den hos människor14. Av denna anledning har de använts som en djurmodell för utveckling av retinala parasitinfektioner15, terapeutiska läkemedel, genleverans och för att studera retinal fysiologi. Dessutom har nyligen publicerade genetiska analyser visat att de flesta av de identifierade gerbilgenerna (81%) delas mellan möss och människor16. Dessutom har studier dokumenterat de genetiska likheterna mellan gerbiler och både möss och människor och identifierat viktiga likheter och skillnader mellan arter17. Därför valde vi den nuvarande djurmodellen av gerbiler för att studera de normala hornhinnestrukturerna och deras patofysiologiska processer associerade med PTK-ärrbildning.
Flera forskare hävdar att PTK är en idealisk modell för att studera hornhinnans ärrbildning eftersom det möjliggör studier av apoptotiska processer, keratocytvitalitet, cellmigration och lokal vävnadsinflammation, bland andra aspekter18.
Betydelsen av detta arbete avser inte bara studier av ärrbildning i hornhinnan och sårläkning utan också förslaget om en ny djurmodell med vetenskaplig potential för resultaten att extrapoleras till andra tidigare publicerade modeller.
Denna djurmodell, på grund av dess likhet och likhet med det mänskliga ögats beteende, möjliggör reproduktion av samma protokoll med olika varianter och sätter ett prejudikat för utvecklingen av andra modeller, såsom modeller av infektiös keratit och hornhinnans neovaskularisering, bland andra.
Detta arbete och denna djurmodell har dock vissa begränsningar. För det första är gerbilen inte en utbredd djurmodell som möss, råttor eller kaniner. Av denna anledning kanske det inte finns så många reagenser som önskas. För det andra är den tillgängliga litteraturen om oftalmologi i gerbiler också mycket begränsad.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi vill tacka ingenjör Rodrigo de la Fuente för hans ovärderliga hjälp och tekniska support. Vi tackar också María Eugenia Corbela för berättelsen och Priscilla Hazrún för upplagan av figurerna. Hugo Luján tillät oss att använda anläggningarna vid Center for Research and Development in Immunology and Infectious Diseases (CIDIE).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthesia | Tododrogas | ||
| Eppendorf tubes | Tododrogas | ||
| Excimer Laser | Technolas | 2022445 | |
| Fluorescein | Poen | ||
| Forceps | Ofcor | 3339 | |
| Formaldehyde | Tododrogas | ||
| Gloves | Tododrogas | ||
| Ketamine | Sigma-Aldrich | ||
| Optical coherence tomography | Optovue | 659007 | |
| Proparacaine | Poen | ||
| Scisors | Ofcor | 3336 | |
| Sterile drapes | Soporte hospitalario | ||
| Sterile gauzes | Soporte hospitalario | ||
| Syringes and needles | Tododrogas | ||
| Xylazine | Sigma-Aldrich |
References
- Kuo, I. C.
- Agrawal, V. B., Tsai, R. J.
- Lu, L., Reinach, P. S., Kao, W. W.
- Rathi, V. M., Vyas, S. P., Sangwan, V. S.
- Baumeister, M., Bühren, J., Ohrloff, C., Kohnen, T. Corneal re-epithelialization following phototherapeutic keratectomy for recurrent corneal erosion as in vivo model of epithelial wound healing. Ophthalmologica. 223 (6), 414-418 (2009).
- Fagerholm, P. Phototherapeutic keratectomy: 12 years of experience. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 81 (1), 19-32 (2003).
- Mohan, R. R., Stapleton, W. M., Sinha, S., Netto, M. V., Wilson, S. E. A novel method for generating corneal haze in anterior stroma of the mouse eye with the excimer laser. Experimental Eye Research. 86 (2), 235-240 (2008).
- Shah, D., Aakalu, V. K. Murine corneal epithelial wound modeling. Methods in Molecular Biology. 2193, 175-181 (2021).
- Gerbil-Specific Anesthesia Guidance. Animal Resources Center. The University of Texas at Austin. , Available from: research.utexas.edu/wp-content/uploads/sites/7/2020/02/Gerbil_Anesthesia_Guidance_ARC_112519.pdf (2020).
- Zorio, D. A. R., et al. De novo sequencing and initial annotation of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus) genome. Genomics. 111 (3), 441-449 (2019).
- Kalha, S., Kuony, A., Michon, F. Corneal epithelial abrasion with ocular burr as a model for cornea wound. Journal of Visualized Experiments. (137), e58071 (2018).
- Yang, S., et al. The electroretinogram of Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus.): Comparison to mouse. Neuroscience Letters. 589, 7-12 (2015).
- Baker, A. G., Emerson, V. F. Grating acuity of the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). Behavioural Brain Research. 8 (2), 195-209 (1983).
- Govardovskii, V. I., Röhlich, P., Szél, A., Khokhlova, T. V. Cones in the retina of the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus: An immunocytochemical and electrophysiological study. Vision Research. 32 (1), 19-27 (1992).
- Zanandréa, L. I., Oliveira, G. M., Abreu, A. S., Pereira, F. E. Ocular lesions in gerbils (Meriones unguiculatus) infected with low larval burden of Toxocara canis: Observations using indirect binocular ophthalmoscopy. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. 41 (6), 570-574 (2008).
- Cheng, S., et al. Enhancement of de novo sequencing, assembly and annotation of the Mongolian gerbil genome with transcriptome sequencing and assembly from several different tissues. BMC Genomics. 20 (1), 903 (2019).
- Henriksson, J. T., McDermott, A. M., Bergmanson, J. P. Dimensions and morphology of the cornea in three strains of mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 50 (8), 3648-3654 (2009).
- Panagiotopoulos, M., Gan, L., Fagerholm, P. Stroma remodelling during healing of corneal surface irregularities induced by PTK. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 85 (4), 387-394 (2007).
