我们描述了复合大鼠后肢的手术技术和去细胞化过程。使用低浓度十二烷基硫酸钠通过 离体 机灌注系统进行脱细胞。
严重创伤和组织丢失的患者需要复杂的手术重建。血管化复合同种异体移植(VCA)是一种不断发展的重建途径,用于将多个组织作为复合亚单位转移。尽管VCA具有前景,但由于恶性肿瘤、终末器官毒性和机会性感染的风险增加,长期免疫抑制需求是一个重大限制。无细胞复合支架的组织工程是减少免疫抑制需求的潜在替代方案。本文描述了大鼠后肢的获取及其随后使用十二烷基硫酸钠(SDS)的去细胞化。所提出的采购策略基于股总动脉。构建了基于机器灌注的生物反应器系统,用于后肢 离体 脱细胞。成功进行了灌注脱细胞,导致后肢呈白色半透明状外观。观察到整个后肢的完整、可灌注的血管网络。组织学分析显示,所有组织隔室的核内容物去除和组织结构的保存。
VCA是需要复杂手术重建的患者的新兴选择。创伤性损伤或肿瘤切除会导致难以重建的体积组织丢失。VCA 提供多种组织的移植,例如皮肤、骨骼、肌肉、神经和血管,作为从供体到受体的复合移植物1.尽管VCA具有希望的性质,但由于长期免疫抑制方案而受到限制。终身使用此类药物会增加机会性感染、恶性肿瘤和终末器官毒性的风险1,2,3。为了帮助减少和/或消除对免疫抑制的需求,使用VCA脱细胞方法的组织工程支架显示出巨大的前景。
组织脱细胞需要保留细胞外基质结构,同时去除细胞和核内容物。这种脱细胞支架可以用患者特异性细胞重新填充4。然而,保存复合组织的ECM网络是一个额外的挑战。这是由于支架内存在多种组织类型,具有不同的组织密度、结构和解剖位置。本协议提供了一种用于大鼠后肢的手术技术和去细胞化方法。这是将这种组织工程技术应用于复合组织的概念验证模型。这也可以促使随后的努力通过细胞再生再生复合组织。
大鼠后肢可用作VCA5中的实验模型。无细胞支架的组织工程是解决与VCA相关的长期免疫抑制方案缺点的第一步。鉴于存在多种组织,每种组织都具有独特的功能、免疫原性和结构特性,复合移植物的使用带来了额外的挑战。本协议显示了获得无细胞复合大鼠后肢的成功方法。这些支架可以进一步重新细胞化,并代表VCA的概念验证模型。
为了确保成功的采购和?…
The authors have nothing to disclose.
图 3A 是在 BioRender.com 中创建的。
0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL | Baxter Corporation | JB1308M | |
1 mL Disposable Serological Pipets | VWR | 75816-102 | |
10 cc Disposable Syringes | Obtained from Research Institution | ||
3-way Stopcock | Obtained from Research Institution | ||
5cc Disposable Syringes | Obtained from Research Institution | ||
70% Isopropyl Alcohol | Obtained from Research Institution | ||
Acrodisc Syringe Filter 0.2 µm | VWR | CA28143-310 | |
Adson Forceps, Straight | Fine Science Tools | 11006-12 | |
Angiocatheter 24 G 19 mm (¾”) | VWR | 38112 | |
Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL | Multicell | 450-115-EL | |
Bone Cutter | Fine Science Tools | 12029-12 | |
Connectors for 1/16" to 1/8" Tubes | McMasterCarr | 5117K52 | |
Female Luer to barbed adapter (PVDF) – 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K328 | |
Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
Fine Forceps with Micro-Blunted Tips | Fine Science Tools | 11253-20 | |
Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL | LEO Pharma Inc. | 006174-09 | |
Male Luer to barbed adapter (PVDF) – 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K322 | |
Micro Needle Holder | WLorenz | 04-4125 | |
Microscissors | WLorenz | SP-4506 | |
Peracetic Acid | Sigma Aldrich | 269336-100ML | |
Peristaltic Pump, 3-Channel | Cole Parmer | RK-78001-68 | |
Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL | Wisent | 311-425-CL | |
Povidone Surgical Scrub Solution | Obtained from Research Institution | ||
Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL | Cole Parmer | RK-96450-40 | |
Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone | Cole Parmer | RK-96410-16 | |
Scalpel Blade – #10 | Fine Science Tools | 10010-00 | |
Scalpel Handle – #3 | Fine Science Tools | 10003-12 | |
Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: >99%, 1 kg | Bioshop | SDS003.1 | |
Surgical Suture #6-0 | Covidien | VS889 |