संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन के लिए एक पूर्व विवो छिड़काव-आधारित बायोरिएक्टर का उपयोग करके चूहे हिंदलिम्ब्स की खरीद और डीसेल्युलराइजेशन
Summary
हम समग्र चूहे के हिंदलिम्ब्स के लिए सर्जिकल तकनीक और डीसेल्यूलराइजेशन प्रक्रिया का वर्णन करते हैं। डीसेलुलराइजेशन एक पूर्व विवो मशीन छिड़काव प्रणाली के माध्यम से कम सांद्रता सोडियम डोडेसिल सल्फेट का उपयोग करके आयोजित किया जाता है।
Abstract
गंभीर दर्दनाक चोटों और ऊतक हानि वाले रोगियों को जटिल शल्य चिकित्सा पुनर्निर्माण की आवश्यकता होती है। संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन (वीसीए) एक समग्र सबयूनिट के रूप में कई ऊतकों को स्थानांतरित करने के लिए एक विकसित पुनर्निर्माण एवेन्यू है। वीसीए की आशाजनक प्रकृति के बावजूद, दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेसिव आवश्यकताएं घातकता, अंत-अंग विषाक्तता और अवसरवादी संक्रमण के बढ़ते जोखिम के कारण एक महत्वपूर्ण सीमा हैं। इम्यूनोसप्रेशन की आवश्यकता को कम करने में एककोशिकीय मिश्रित मचानों की ऊतक इंजीनियरिंग एक संभावित विकल्प है। इसमें, एक चूहे हिंदलिम्ब की खरीद और सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस) का उपयोग करके इसके बाद के डीसेलुलराइजेशन का वर्णन किया गया है। प्रस्तुत खरीद रणनीति आम ऊरु धमनी पर आधारित है। एक मशीन छिड़काव-आधारित बायोरिएक्टर सिस्टम का निर्माण किया गया था और हिंदलिम्ब के पूर्व विवो डीसेल्यूलराइजेशन के लिए उपयोग किया गया था। सफल छिड़काव डीसेल्यूलराइजेशन किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप हिंदलिम्ब की सफेद पारभासी जैसी उपस्थिति हुई। पूरे हिंदलिम्ब में एक बरकरार, अपरिवर्तनीय, संवहनी नेटवर्क देखा गया था। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने परमाणु सामग्री को हटाने और सभी ऊतक डिब्बों में ऊतक वास्तुकला के संरक्षण को दिखाया।
Introduction
वीसीए जटिल शल्य चिकित्सा पुनर्निर्माण की आवश्यकता वाले रोगियों के लिए एक उभरता हुआ विकल्प है। दर्दनाक चोटों या ट्यूमर के शोधन के परिणामस्वरूप वॉल्यूमेट्रिक ऊतक हानि होती है जिसे पुनर्निर्माण करना मुश्किल हो सकता है। वीसीए त्वचा, हड्डी, मांसपेशियों, नसों और वाहिकाओं जैसे कई ऊतकों का प्रत्यारोपण एक दातासे प्राप्तकर्ता को समग्र ग्राफ्ट के रूप में प्रदान करता है। इसकी आशाजनक प्रकृति के बावजूद, वीसीए दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेसिव रेजिमेन के कारण सीमित है। ऐसी दवाओं के आजीवन उपयोग से अवसरवादी संक्रमण, दुर्भावनाओं और अंत-अंग विषाक्तता 1,2,3 के लिए जोखिम बढ़ जाता है। इम्यूनोसप्रेशन की आवश्यकता को कम करने और / या समाप्त करने में मदद करने के लिए, वीसीए के लिए डीसेलुलराइजेशन दृष्टिकोण का उपयोग करके ऊतक-इंजीनियर मचान महान वादा दिखाते हैं।
ऊतक विकोशिकीयकरण सेलुलर और परमाणु सामग्री को हटाते हुए बाह्य मैट्रिक्स संरचना को बनाए रखने पर जोर देता है। इस विकोशिकीय पाड़ को रोगी-विशिष्ट कोशिकाओं के साथ फिर से आबाद किया जा सकताहै। हालांकि, समग्र ऊतकों के ईसीएम नेटवर्क को संरक्षित करना एक अतिरिक्त चुनौती है। यह एक मचान के भीतर अलग-अलग ऊतक घनत्व, आर्किटेक्चर और शारीरिक स्थानों के साथ कई ऊतक प्रकारों की उपस्थिति के कारण है। वर्तमान प्रोटोकॉल एक सर्जिकल तकनीक और एक चूहे हिंदलिम्ब के लिए एक डीसेल्युलराइजेशन विधि प्रदान करता है। यह समग्र ऊतकों के लिए इस ऊतक इंजीनियरिंग तकनीक को लागू करने के लिए एक प्रूफ-ऑफ-कॉन्सेप्ट मॉडल है। यह पुनर्कोशिकीयकरण के माध्यम से समग्र ऊतकों को पुनर्जीवित करने के बाद के प्रयासों को भी प्रेरित कर सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
वीसीए 5 में प्रायोगिक मॉडल के रूप में चूहे के हिंदलिम्बउपयोगी हैं। एककोशिकीय मचानों की ऊतक इंजीनियरिंग वीसीए से जुड़े दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेशन रेजिमेन की कमियों को संबोधित करने में पहला क…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
चित्र 3A BioRender.com में बनाया गया था।
Materials
| 0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL | Baxter Corporation | JB1308M | |
| 1 mL Disposable Serological Pipets | VWR | 75816-102 | |
| 10 cc Disposable Syringes | Obtained from Research Institution | ||
| 3-way Stopcock | Obtained from Research Institution | ||
| 5cc Disposable Syringes | Obtained from Research Institution | ||
| 70% Isopropyl Alcohol | Obtained from Research Institution | ||
| Acrodisc Syringe Filter 0.2 µm | VWR | CA28143-310 | |
| Adson Forceps, Straight | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| Angiocatheter 24 G 19 mm (¾”) | VWR | 38112 | |
| Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL | Multicell | 450-115-EL | |
| Bone Cutter | Fine Science Tools | 12029-12 | |
| Connectors for 1/16" to 1/8" Tubes | McMasterCarr | 5117K52 | |
| Female Luer to barbed adapter (PVDF) – 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K328 | |
| Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Fine Forceps with Micro-Blunted Tips | Fine Science Tools | 11253-20 | |
| Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL | LEO Pharma Inc. | 006174-09 | |
| Male Luer to barbed adapter (PVDF) – 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K322 | |
| Micro Needle Holder | WLorenz | 04-4125 | |
| Microscissors | WLorenz | SP-4506 | |
| Peracetic Acid | Sigma Aldrich | 269336-100ML | |
| Peristaltic Pump, 3-Channel | Cole Parmer | RK-78001-68 | |
| Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL | Wisent | 311-425-CL | |
| Povidone Surgical Scrub Solution | Obtained from Research Institution | ||
| Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL | Cole Parmer | RK-96450-40 | |
| Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone | Cole Parmer | RK-96410-16 | |
| Scalpel Blade – #10 | Fine Science Tools | 10010-00 | |
| Scalpel Handle – #3 | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: >99%, 1 kg | Bioshop | SDS003.1 | |
| Surgical Suture #6-0 | Covidien | VS889 |
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