Summary

Studio del trasporto a lunga distanza di acidi perfluoroalchilici nel grano mediante una tecnica di esposizione a radice divisa

Published: September 28, 2022
doi:

Summary

Il presente protocollo descrive un metodo semplice ed efficace per il trasporto a lunga distanza degli acidi perfluoroalchilici nel grano.

Abstract

Grandi quantità di acidi perfluoroalchilici (PFAA) sono stati introdotti nel suolo e accumulati dalle piante, ponendo potenziali rischi per la salute umana. È imperativo studiare l’accumulo e la traslocazione di PFAA all’interno delle piante. Il trasporto a lunga distanza è un percorso importante per i PFAA trasferiti dalle foglie della pianta ai tessuti commestibili attraverso il floema. Tuttavia, in precedenza era difficile valutare il potenziale di traslocazione della contaminazione organica in un periodo di esposizione a breve termine. L’esperimento a radice divisa fornisce una soluzione per scoprire efficacemente la traslocazione a lunga distanza di PFAA utilizzando un esperimento idroponico, che, in questo studio, è stato condotto in due provette da centrifuga da 50 ml (A e B), di cui la provetta A della centrifuga aveva 50 ml di soluzione nutritiva sterile Hoagland a un quarto di resistenza, mentre la provetta della centrifuga B aveva la stessa quantità di concentrazione di nutrienti, e i PFAA bersaglio (acido perfluorottano solfonico, PFOS e acido perfluorottano, PFOA) aggiunti a una data concentrazione. Una radice di grano integrale è stata separata manualmente in due parti e inserita con cura nei tubi A e B. La concentrazione di PFAA nelle radici, nei germogli di grano e nelle soluzioni nei tubi A e B sono stati valutati utilizzando rispettivamente LC-MS / MS, dopo essere stati coltivati in un’incubatrice per 7 giorni e raccolti. I risultati hanno suggerito che PFOA e PFOS sperimentano un simile processo di trasporto a lunga distanza attraverso il floema dal germoglio alla radice e potrebbero essere rilasciati nell’ambiente ambientale. Pertanto, la tecnica split-root può essere utilizzata per valutare il trasporto a lunga distanza di diverse sostanze chimiche.

Introduction

Gli acidi perfluoroalchilici (PFAA) sono ampiamente utilizzati in vari prodotti commerciali e industriali grazie alle loro eccellenti proprietà fisico-chimiche, tra cui l’attività superficiale e la stabilità termica e chimica 1,2,3. L’acido perfluorottano solfonico (PFOS) e l’acido perfluorottano (PFOA) sono i due PFAA più importanti utilizzati in tutto il mondo 4,5,6, sebbene questi composti siano stati elencati nella Convenzione internazionale di Stoccolma rispettivamente 7,8 nel 2009 e nel 2019. A causa della loro persistenza e dell’uso diffuso, PFOS e PFOA sono stati ampiamente rilevati in varie matrici ambientali. Le concentrazioni di PFOA e PFOS nelle acque superficiali di diversi fiumi e laghi mondiali sono rispettivamente 0,15-52,8 ng / L e 0,09-29,7 ng / L,9. A causa dell’uso di acque sotterranee o di acque depurate per l’irrigazione e anche utilizzando biosolidi come fertilizzanti, PFOA e PFOS sono ampiamente presenti nel terreno, compresi tra 0,01-123 μg / kg e 0,003-162 μg / kg, rispettivamente10, che potrebbero introdurre una grande quantità di PFAA nelle piante e comportare potenziali rischi per la salute umana. Le concentrazioni di PFAA (C4-C8) nel suolo agricolo e nei cereali (grano e mais) mostrano una correlazione lineare positiva11. Pertanto, è imperativo studiare l’accumulo e la traslocazione di PFAA all’interno delle piante.

La traslocazione dei PFAA nelle piante avviene in primo luogo dalle radici ai tessuti fuori terra, e la traslocazione dei PFAA dalle radici ai tessuti commestibili è considerata come trasporto a lunga distanza12,13. Studi precedenti hanno rilevato bisfenolo A, nonilfenolo ed estrogeni naturali in frutta e verdura14, il che implica che queste sostanze chimiche potrebbero migrare attraverso il floema. Pertanto, scoprire la traslocazione di PFAA nelle piante è importante per valutare il loro potenziale rischio. Tuttavia, l’accumulo e la traslocazione dei PFAA sono influenzati dalla loro biodisponibilità nel suolo, quindi non è facile valutare la capacità di traslocazione dei PFAA bersaglio nelle piante. Inoltre, gli esperimenti idroponici sono generalmente limitati da diversi fattori, rendendo più difficile acquisire i tessuti commestibili delle piante. Tipicamente, il floema è stato raccolto direttamente dalle piante per osservare la traslocazione di composti organici attraverso lunghe distanze nelle piante, mentre è difficile acquisire floemi da piantine di piante15. Quindi, è stato introdotto un metodo semplice ed efficace, la tecnica della radice divisa, per studiare la traslocazione di PFAA nelle piante durante un’esposizione relativamente a breve termine. Per quanto riguarda l’indagine a radice divisa, le radici in una piantina di piante sono separate in due parti; una parte viene inserita nella soluzione nutritiva contenente PFAA bersaglio (tubo A) e l’altra viene posta nella soluzione nutritiva in assenza di PFAA (tubo B). Dopo esposizione per diversi giorni, i PFAA nel tubo B vengono misurati mediante LC-MS/MS. La concentrazione di PFAA nel tubo B rivela il potenziale di traslocazione dei PFAA attraverso il floema all’interno delle piante16,17,18.

L’esperimento split-root è stato riportato per studiare la traslocazione a lunga distanza di molti composti nelle piante, come le nanoparticelle CuO17, gli estrogeni steroidei 18 e gli esteri organofosfati16. Questi studi hanno fornito la prova che questi composti potrebbero trasferirsi attraverso il floema alle parti commestibili delle piante. Tuttavia, è necessario esplorare ulteriormente se i PFAA possano aiutare nella traslocazione nelle piante e l’impatto delle proprietà dei composti. Sulla base di questi rapporti, l’esperimento split-root è stato condotto nel presente studio per rivelare il trasporto a lunga distanza di PFAA nel grano.

Protocol

I semi di grano, Triticum aestivum L., sono stati acquistati (vedi tabella dei materiali) e utilizzati per il presente studio. 1. Germinazione della piantina di grano e coltura idroponica Selezionare semi di grano di dimensioni simili e disinfettarli per 15 minuti con una soluzione di perossido di idrogeno all’8% (p/p). Risciacquare accuratamente i semi disinfettati con acqua deionizzata, quindi metterli su carta da filtro umida al…

Representative Results

L’esperimento split-root ha studiato il trasporto a lunga distanza di PFAA nel grano. Come mostrato nella figura 2A,C, sia il PFOA che il PFOS potrebbero essere assorbiti dalla radice di grano e trasferiti al germoglio. PFOS e PFOA non sono stati rilevati nella radice di grano e nella soluzione nel tubo A del controllo in bianco. È stato riscontrato che PFOS e PFOA sono stati rilevati nelle radici di grano coltivate nella soluzione senza punte, con una concentrazione di 0,2…

Discussion

Per garantire l’accuratezza di questo metodo, è necessario operare con attenzione per garantire che la soluzione a spillo nel tubo B non contamini la soluzione non chiodata nel tubo A. La concentrazione data di PFAA target nel presente studio era relativamente superiore alla loro concentrazione nell’ambiente reale, garantendo di monitorare i PFAA target nel grano e nella soluzione senza punte utilizzando LC-MS/MS.

Ci sono limitazioni a questo metodo. Poiché in ciascun gruppo di trattamento …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Riconosciamo con gratitudine il sostegno finanziario della Natural Science Foundation of China (NSFC 21737003), del Chinese Universities Scientific Fund (n. 2452021103) e della Chinese Postdoctoral Science Foundation (n. 2021M692651, 2021M702680).

Materials

ACQUITY UPLC BEH C18 column Waters, Milford, MA Liquid chromatographic column
Cleanert PEP cartridge Bonna- Angel Technologies, China Solid phase extraction column
Clearnert Pesticarb cartridge Bonna- Angel Technologies, China Solid phase extraction column
LC-MS/MS(Waters Acquity UPLC i-Class Coupled to Xevo TQ-S) Waters, Milford, MA Liquid chromatography and mass spectrometry
Lyophilizer  Boyikang Instrument Ltd., Beijing, China FD-1A50 Freeze-dried sample
Masslynx Waters, Milford, MA data analysis software
Methyl tert-butyl ether Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, US) use for extracting target compounds from plant tissues
MPFAC-MXA Wellington Laboratories (Ontario, Canada) PFACMXA0518 the internal standards
PFAC-MXB Wellington Laboratories (Ontario, Canada) PFACMXB0219 mixture of PFAA calibration standards
PFOA Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, US) 335-67-1 a represent PFAAs
PFOS Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, US) 2795-39-3 a represent PFAAs
Sodium carbonate buffer Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, US) use for extracting target compounds from plant tissues
Tetrabutylammonium hydrogen sulfate Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, US) use for extracting target compounds from plant tissues
Wheat seeds Chinese Academy of Agricultural Sciences (Beijing,China)  Triticum aestivum L.

References

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Cite This Article
Liu, S., Zhou, J., Zhu, L. Investigating Long-Distance Transport of Perfluoroalkyl Acids in Wheat via a Split-Root Exposure Technique. J. Vis. Exp. (187), e64400, doi:10.3791/64400 (2022).

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