Summary
Her beskriver vi en generell protokoll og design som kan brukes til å identifisere spormengder og mindre bestanddeler i de komplekse naturlige produktformuleringene (matriser) i tibetansk medisin.
Abstract
Tibetanske medisiner er komplekse og inneholder mange ukjente forbindelser, noe som gjør grundig forskning på deres molekylære strukturer avgjørende. Væskekromatografi-elektrospray ionisering time-of-flight massespektrometri (LC-ESI-TOF-MS) brukes ofte til å trekke ut tibetansk medisin; Imidlertid forblir mange uforutsigbare ukjente forbindelser etter bruk av spektrumdatabasen. Denne artikkelen utviklet en universell metode for å identifisere komponenter i tibetansk medisin ved hjelp av ionefellemassespektrometri (IT-MS). Metoden inkluderer standardiserte og programmerte protokoller for prøvepreparering, MS-innstilling, LC-prerun, metodeetablering, MS-oppkjøp, flertrinns MS-drift og manuell dataanalyse. To representative forbindelser i tibetansk medisin Abelmoschus manihot frø ble identifisert ved hjelp av flertrinns fragmentering, med en detaljert analyse av typiske sammensatte strukturer. I tillegg diskuterer artikkelen aspekter som ionmodusvalg, mobil fasejustering, skanningsområdeoptimalisering, kollisjonsenergikontroll, kollisjonsmodusovergang, fragmenteringsfaktorer og begrensninger av metoden. Den utviklede standardiserte analysemetoden er universell og kan brukes på ukjente forbindelser i tibetansk medisin.
Introduction
Den kvalitative analysen av sporkomponenter i tradisjonell kinesisk medisin (TCM) har blitt et avgjørende tema i forskning. På grunn av det høye antallet forbindelser i TCM, er det vanskelig å isolere dem for kjernemagnetisk resonansspektrometer (NMR) eller røntgendiffraktometer (XRD) analyse, noe som gjør massespektrometri (MS) -baserte metoder som bare krever lave prøvevolumer stadig mer populære. I tillegg har væskekromatografi (LC) kombinert med MS blitt mye brukt i TCM-forskning de siste årene for forbedret separasjon av komplekse prøver og kvalitativ analyse av kjemiske forbindelser1. En vanlig metode er væskekromatografi-elektrosprayionisering time-of-flight massespektrometri (LC-ESI-TOF-MS), som er mye brukt i kvalitativ forskning på tibetansk medisin2. Med denne metoden blir komplekse komponenter anriket og separert i en LC-kolonne, og masse-til-ladningsforholdet (m / z) av adduktionene observeres ved hjelp av en MS-detektor. Søk i tandem MS (MS / MS eller MS2) databaser er for tiden den raskeste tilnærmingen for sikre sammensatte merknader i småmolekylanalyse ved bruk av quadrupole time-of-flight (Q-TOF) MS og Orbitrap MS3. Den dårlige kvaliteten på databaser og tilstedeværelsen av forskjellige isomerer hindrer imidlertid identifiseringen av ukjente forbindelser. I tillegg er informasjonen fra MS/MS-databasen begrensettil 4,5,6,7. Det er viktig å undersøke de kjemiske forbindelsene i hver TCM ved hjelp av en generell protokoll som kan brukes mye på andre TCM.
IT-MS fanger opp et bredt spekter av ioner ved å bruke forskjellige radiofrekvensspenninger (RF) på ringelektrodene8. IT-MS kan utføre tidsserier i flere trinn MS-skanninger i forskjellige kronologiske rekkefølger, og gir ingrediens flertrinns MS (MS n) fragmentering, hvorn er antall produktiontrinn9. Lineær IT-MS regnes som den beste for strukturidentifikasjon, da den kan brukes til sekvensielle MSn-eksperimenter 10. Målrettede ioner kan isoleres og akkumuleres i lineær IT-MS1. MS n (n ≥ 3) i IT-MS gir mer fragmentinformasjon enn MS/MS i Q-TOF-MS. Siden IT-MS ikke kan låse målionet og dets fragmentioner, er det et kraftig verktøy for strukturoppklaring av ukjente forbindelser, inkludert isomerer1. MSn-teknologi har blitt mye brukt til strukturell analyse av ukjente proteiner, peptider og polysakkarider11,12. Overflodsnivået av fragmentioner i MSn gir mer molekylær fragmentinformasjon om målrettede forbindelser i komplekse prøver enn MS / MS i Q-TOF-MS. Derfor er det viktig å bruke MSn-teknologi til strukturell identifikasjon i TCM.
Tibetansk medisin er en betydelig komponent i TCM13, og disse medisinene er hovedsakelig avledet fra dyr, planter og mineraler som finnes i platåområdet14. Den tibetanske medisinen Abelmoschus manihot seeds (AMS) er frøet til Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS er en tradisjonell urtemedisin som brukes til å behandle tilstander som atopisk dermatitt, revmatisme og spedalskhet. Den inneholder chalcone, som har antibakterielle, antifungale, anticancer, antioksidative og antiinflammatoriske effekter15. I denne studien ble MS n prosedyrer forbedret, og en detaljert metode ble utviklet for å identifisere sammensatte strukturer i den tibetanske medisinen AMS ved hjelp av IT-MS og MSn. Visse MS-parametere, inkludert ionmodus, skanneområde og kollisjonsmodus, ble optimalisert for å overvinne problemer med å identifisere sporforbindelser. Denne studien tar sikte på å fremme standardisert strukturidentifikasjon av sporforbindelser i TCM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Forberedelse av prøver
- Vei nøyaktig 1 g av AMS-prøven, og legg den i en konisk kolbe med 30 ml 80% metanol. Overfør blandingen til en ultralydbadsonikator i 30 minutter ekstraksjon ved 25 ° C. Sentrifuger prøven ved 14 000 x g i 5 minutter.
MERK: Frekvensen av ultralydbadets sonikator er 40 KHz. - Klargjør en injeksjonssprøyte og et mikroporøst membranfilter (0,22 μm, kun organisk). Filtrer supernatanten over i en 2 ml prøveflaske.
2. MS-innstilling
- Slå på bryteren til vakuumpumpen. Åpne hovedventilen til argonsylinderen og deltrykkventilen, og juster trykket til ca. 0,3 MPa. Åpne nitrogenventilen.
MERK: Vent i minst 8 timer for å sikre en tilstrekkelig vakuumgrad for eksperimentelle forhold. Kontroller at gasstrykket til argon og nitrogen er høyt nok før analyse. - Start MS-kontrollprogramvaren. Klikk på Oppvarmet SEI Source i programvarepanelet, og skriv inn MS-parametrene, inkludert varmeapparattemperaturen (350 ° C), kappgasstrømningshastigheten (35 arb), auxgasstrømningshastigheten (15 arb), sprøytespenning (3,8 KV for positiv modus, -2,5 KV for negativ modus) og kapillærtemperaturen (275 ° C). Klikk på Bruk-knappen for å aktivere ionkilden.
3. LC-prerun, metodeetablering og MS-anskaffelse
- Klargjør mobil fase A og mobil fase B ved bruk av henholdsvis 0,1 % maursyrevandig oppløsning og ren acetonitril. Degas dem i et ultralydbad sonicator i minst 15 minutter. Koble løsningene til henholdsvis A- og B-væskepassasjene (figur 1A). Forbered en metanolvannsløsning (1:9 v/v), og fyll den deretter i rensevæskeflaskene på pumpen og injektoren for hånd.
MERK: Frekvensen av ultralydbadets sonikator er 40 KHz. - Start kontrollprogramvaren LC-MS.
- Klikk på Direct Control-knappen for å åpne LC-kontrollpanelet. Åpne spyleventilen mot klokken på pumpemodulen (figur 1B).
- Klikk på Flere alternativer-knappen for å åpne pumpeinnstillingen, og still inn spyleparametrene til 5 mlmin−1 i 3 minutter. Klikk på Purge-knappen for å starte boblefjerningen. Deretter lukker du renseventilen.
- Klikk på knappene Prime Spraye, Wash Buffer Loop og Wash Needle utvendig for å skylle sprøyten i tre sykluser, løkken i én syklus og nålen i én syklus. Plasser prøveflasken i prøvetakeren (figur 1C).
- Klikk på Instrument Setup-knappen for å åpne metoderedigeringsvinduet. Klikk på Ny-knappen for å opprette en ny LC-MS-instrumentmetode.
- Angi en total kjøretid for LC-metoden. Deretter skriver du inn verdier for å angi trykkgrense, total strømningshastighet, strømningsgradient, prøvetemperatur, kolonnetemperatur og klar temperaturdelta i metoderedigeringsvinduet.
MERK: Standard total strømningshastighet for mobilfasen er konstant ved 0,3 ml / min med 50% A og 50% B og uten kolonnetemperatur i fravær av en kromatografisk kolonne. Standardverdiene for prøvetemperatur og klar temperatur delta er henholdsvis 15 °C og 0,1 °C. Andre innstillinger avhenger av hvilken type væskekromatografikolonne som brukes. - Velg eksperimenttypen Generelt MS eller MS n for MS-metoden. Angi verdier for å konfigurere varighet for anskaffelsestid, polaritet, masseområde, viderekoblingsverdinummer og varighet for viderekoblingsverdi. Klikk på Lagre-knappen for å konfigurere innstillingene som en instrumentmetode.
MERK: Standardinnstillingene uten kromatografikolonne er som følger: anskaffelsestid, 2 min; polaritet, positiv eller negativ; masseområde, 100 til 1,200; avlede verdi nummer, 2; og avlede verdiens varighet, 1,99 min.
4. Drift av flertrinns massespektrometri
- Klikk på Sequence Setup-knappen for å åpne sekvenstabellen.
- Skriv inn følgende informasjon i tabellen: prøvetype, filnavn, bane, prøve-ID, instrumentmetode, posisjon og injeksjonsvolum.
- Klikk på Lagre-knappen for å registrere sekvenstabellen, og klikk deretter på Start analyse-knappen for å implementere innstillingene og starte MS-oppkjøpet.
MERK: Standard eksempeltype er valgt som ukjent. Instrumentmetoden er metoden som ble lagret i trinn 3.6. Prøveflasken er plassert på sin unike plassering i prøverommet. RA1 er for eksempel den første plasseringen i den første raden i det røde området i prøverommet. Standard injeksjonsvolum er vanligvis 2 μL, som avhenger av konsentrasjonen av prøven.
- Dobbeltklikk på råfilen i Utforsker for å laste MS-dataene inn i databehandlingsprogramvaren. I basetoppkromatogrammet (BPI) velger du området med det maksimale arealet under kurven (AUC) ved å klikke og dra musen. De tilsvarende MS-spektrene vises i samme vindu.
- Velg et målrettet ion for neste MS/MS-analyse.
- Åpne metoderedigeringsvinduet på nytt. I MS n Setting-tabellen angir du m/z for det målrettede ionet til én desimal i kolonnen Parent Mass.
- Velg Kollisjonsmodus, og angi kollisjonsenergiverdien (CE). Angi MS/MS-skanneområdet. Klikk på Lagre-knappen for å registrere MS-metoden, og skriv inn et nytt filnavn i sekvenstabellen. Klikk på Start-knappen for å starte MS / MS-oppkjøpet.
MERK: MS / MS-skanneområdet var 40% -130% av det målrettede overordnede ionet. Standard CE-verdi i kollisjonsindusert dissosiasjon (CID)-modus er 35 %.
- Dobbeltklikk på råfilen i Utforsker for å laste MS / MS-råfilen inn i databehandlingsprogramvaren.
- Identifiser det sterkeste fragmentionet i MS/MS-spekteret, og skriv inn m/z-verdien i MSn-metodelisten. I MS n Setting-tabellen angir du MS3-parametrene, inkludert kollisjonsmodus, CE-verdi og skanneområde.
- Klikk på Lagre-knappen for å registrere MS-metoden, og skriv inn et nytt filnavn i sekvenstabellen. Klikk på Start-knappen for å starte MS3-oppkjøpet .
- Dobbeltklikk på råfilen i Utforsker for å laste MS 3-råfilen inn i databehandlingsprogramvaren. Gjenta trinn 4.4 for å få MS 4-spekteret.
- Fullfør MSn-eksperimentet når det ikke observeres stabile fragmentioner i spekteret.
5. Manuell MSn dataanalyse
- Dobbeltklikk på råfilene for å åpne alle massespektrene fra MS til MSn. Beregn m / z differanseverdiene mellom ionet og de tilsvarende fragmentionene manuelt.
MERK: For eksempel var m / z differanseverdien mellom ion (m / z 617,25) og de tilsvarende fragmentionene (m / z 571,28) 45,97 i MS / MS, m / z differanseverdien mellom ion (m / z 571,28) og tilsvarende fragmentioner (m / z 525,38) var 45,90 i MS3, og m / z differanseverdiene mellom ion (m / z 525,38) og de tilsvarende fragmentionene (m / z 344,93 og 273,16) var 180,45 og 252,22 i MS4, henholdsvis. - Tegn "kjernestrukturen" manuelt i henhold til MS4-resultatene (det siste nivået av MSn). Utled den opprinnelige strukturen manuelt ved hjelp av funksjonelle grupper eller molekylære segmenter basert på m / z differanseverdien. Tegn de molekylære spaltningsbanene manuelt i henhold til hver molekylstruktur i MSn. Eksempler på manuell molekylær derivasjon er beskrevet i avsnittet om representative resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cellobiose ble brukt som en modell for å verifisere muligheten for MSn i positiv ionmodus. Som vist i figur 2A, produserte ESI-MS (positiv ionemodus) av cellobiose [C 12 H22O11] + det protonerte molekylet [M + H] + ved m / z 365. Produktioneskanningen (CID-MS/MS) av [M+H]+ ved m/z 365 resulterte i det andre fragmentionet ved m/z 305 (figur 2B), som ble videre analysert ved hjelp av MS3- og MS4-analyser (figur 2C,D). MS3-analysen resulterte i det tredje fragmentionet ved m/z 254, og MS4-analysen resulterte i det fjerde fragmentionet ved m/z 185. MS/MS-analysen (figur 2E) viste at det tapte fragmentionet ved m/z 60 indikerte en sekvens av ionefragmentering ved m/z 365, nemlig ringåpningshydrolyse (markert med blått), C-C-bindingsspaltning (markert med rødt) og dehydrering (markert med grønt). Tilsvarende viste MS 3-analysen at det tapte fragmentionet ved m/z 60 indikerte C-C-bindingsspaltningen (markert i rødt) av et ion ved m/z 305. MS4-analysen viste at det tapte fragmentionet ved m/z 60 innebar hydrolyse (markert med blått) og dehydrering (markert med grønt), noe som resulterte i spaltning av ionet med m/z 245 til et ion med m/z 185. Trinnbruddet i MSn-analysen indikerte at denne metoden var gjennomførbar for å undersøke strukturen av karbohydrater.
Den foreløpige kvalitative analysen av AMS ved bruk av LC-Q-TOF-MS avslørte tilstedeværelsen av mange ukjente forbindelser. En av disse, et ion ved m/z 617, ble valgt for MSn-analyse i negativ modus. Produktionskanningen (CID-MS/MS) av [M-H]− ved m/z 617 i AMS produserte et andre fragmention ved m/z 571. MS3-analysen av dette fragmentionet ga et tredje fragmention ved m/z 525, og MS4-analysen ga fjerde fragmentioner ved m/z 345 og 273 (figur 3A-D). MS3 i m/z 571 ga et fragmention ved m/z 525 ved tap avCH2OH-delen som metanol (-32 Da) og OH-delen (-18 Da) som vann. Disse MS4-resultatene ble brukt til manuell identifisering av "kjernestrukturen" til forbindelsen, og dens opprinnelige struktur ble bestemt ved å sammenligne m / z-verdiene til ionet og dets fragmentioner. Den molekylære strukturen til forbindelsen ved m/z 617 og dens spaltningsbaner i MSn er vist i figur 3E. En annen ukjent forbindelse ved m/z 365 ble analysert i positiv modus med MSn. Produktionskanningen (CID-MS/MS) av [M+H]+-ionet ved m/z 365 i AMS produserte andre fragmentioner ved m/z 299, m/z 329 og m/z 347. MS3-analysen av disse fragmentionene ga et tredje fragmention ved m/z 231 (figur 4A-C). Molekylstrukturen og spaltningsmekanismen til forbindelsen ved m/z 365 er vist i figur 4E.
Figur 1: Identifisering av ukjente sammensatte strukturer i tibetansk medisin ved hjelp av IT-MS og flertrinns massespektrometrianalyse. (A) Den mobile fasen for flytende kromatografi. (B) Væskekromatografipumpen. (C) Prøverommet. (D) Ionekilden for MS. (E) Den indre strukturen til ionefellemodulen i MS. (F) MS 4-spekteret. (G) Molekylstrukturinformasjonen fra MS4-resultatene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Flertrinns fragmentering av cellobiose via IT-MS i positiv ionemodus. (A) Opprinnelig massespektrum av cellobiose. (B) Fragmentioner i MS/MS-spekteret. (C) Fragmentioner i MS 3-spekteret. (D) Fragmentioner i MS 4-spekteret. (E) Spaltningsmekanismen og molekylstrukturen til cellobiose. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Flertrinns fragmentering og strukturell analyse av det ukjente AMS-forbindelsesionet ved m/z 617 via IT-MS i negativionmodus. (A) Delvis massespektrum av AMS. (B) Fragmentioner i MS/MS-spekteret. (C) Fragmentioner i MS 3-spekteret. (D) Fragmentioner i MS 4-spekteret. (E) Spaltningsmekanismen og molekylstrukturen til AMS-forbindelsens ion ved m/z 617. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Flertrinns fragmenteringsstrukturell analyse av det ukjente AMS-forbindelsesionet ved m/z 365 via IT-MS i positiv ionemodus. (A) Delvis massespektrum av AMS. (B) Fragmentioner i MS/MS-spekteret. (C) Fragmentioner i MS 3-spekteret. (D) Spaltningsmekanismen og molekylstrukturen til AMS-forbindelsens ion ved m/z 365. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IT-MS og MSn-teknologien tilbyr en ny tilnærming til å identifisere strukturen til spor-TCM-forbindelser. I motsetning til Q-TOF-MS, som ikke kunne identifisere fragmentionene dypt, utmerker IT-MS med MSn-teknologi seg på grunn av sin evne til å isolere og akkumulere ioner. Denne artikkelen skisserer en metode for å identifisere sporforbindelser i tibetansk medisin ved hjelp av IT-MS og MSn teknikk. Metoden benytter n-verdien i MSn for å bestemme mengden fragmentioninformasjon som gis. De avgjørende trinnene i denne metoden inkluderer å velge riktig skanneområde og justere CE-verdien, noe som fører til identifisering av verdifulle fragmenter.
Generelt utføres MSn-analysen av sakkarider best i positiv ionmodus16, mens fenolsyrer og alkaloider best analyseres i negativ ionmodus. Responsen av forbindelsen i ESI-kilden kan forbedres ved å justere mobilfasen med tilsetningsstoffer som maursyre, eddiksyre og ammoniumacetat17. En kjemisk ioniseringskilde med atmosfærisk trykk kan vurderes for forbindelser med svak polaritet. Å velge et passende skanneområde kan øke intensiteten til fragmentionene, noe som er gunstig for neste stadium av MS n på grunn av det uunngåelige energiforfallet i hver MSn. M / z av fragmentionet bør være plassert i det sentrale området av skanneområdet for å oppnå den beste tilsvarende intensiteten. Hvis et ion har doble eller flere ladninger, kan fragmentioner med høyere m / z-verdier oppnås ved å redusere ladningsnummeret under fragmentering. I dette tilfellet bør slutten m / z av skanneområdet settes til å være større. CID-modus er egnet for de fleste forbindelser i MSn analyse18. Hvis intensiteten av fragmentionet er utilstrekkelig, kan CE-verdien økes med 5% om gangen. Når det er flere, komplekse fragmentioner i MSn, er det nødvendig med en lavere CE-verdi for å kontrollere iondissosiasjonen. Den pulserende-Q-kollisjonsinduserte dissosiasjonsmodusen, som er egnet for små molekyler, gir mer detaljert informasjon om fragmentioner med lav molekylvekt enn CID-modus19. Elektronoverføringsdissosiasjonsmodellen (ETD) er dominerende i peptidfraktur og proteinidentifikasjon, men brukes sjelden til å identifisere TCM-komponentene20. ETD-modus kan brukes til å undersøke ukjente forbindelser som inneholder disulfidbindinger21.
Selv om MSn-metoden har mange fordeler for strukturell identifikasjon sammenlignet med andre MS-teknikker, er det fortsatt noen begrensninger. For det første er ingen av kollisjonsmodusene egnet for alle TCM-forbindelser. Et rimelig valg av kollisjonsmodus og manuell justering av kollisjonsenergien kan forbedre fragmentionene. I tillegg, med MSn-metoden , er det vanskelig å skille posisjonen til funksjonelle grupper i store molekyler med komplekse isomerer. Identifisering av funksjonelle gruppesider er en utfordrende oppgave som krever erfarne forskere. Manuell etteranalyse og lang MSn databehandlingstid er også betydelige barrierer som fraråder forskere å bruke denne teknologien. Q-TOF-MS er populær blant forskere på grunn av sin høye målenøyaktighet, oppløsning og brukervennlighet med databaser. IT-MS er imidlertid en god løsning for uidentifiserte ioner og sporioner på grunn av sin evne til å isolere og akkumulere ioner og utføre flere stadier av analyse. Integrasjonen av Q-TOF og IT-MS kan gi en optimal løsning for full kvalitativ analyse av TCM-prøver. MSn-teknologien er mye brukt innen felt som mat, miljøvitenskap og medisin, og dens popularitet og bruk på ulike felt forventes å øke med forbedringen av IT-MS-instrumentering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne oppgir ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble finansiert av Xinglin Talent Program ved Chengdu University of TCM (nr. 030058191), Nature Science Foundation of Sichuan (2022NSFSC1470) og National Natural Science Foundation of China (82204765).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Thermo Scientific | CAS 75-05-8 | LC-MS grade |
| Formic Acid | Knowles | CAS 64-18-6 | HPLC grade |
| Linear ion trap mass spectrometer | Thermo Scientific | LTQ XL | |
| liquid chromatograph | Thermo Scientific | U3000 | |
| LTQ Tune | Thermo Scientific | version 2.8.0 | MS control software |
| Methanol | Thermo Scientific | CAS 67-56-1 | LC-MS grade |
| Pure water | Thermo Scientific | CAS 7732-18-5 | LC-MS grade |
| Xcalibur | Thermo Scientific | version 2.0 | LC-IT-MS operational software |
References
- Chen, X. -F., Wu, H. -T., Tan, G. -G., Zhu, Z. -Y., Chai, Y. -F. Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines. Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).
- Ou, C., et al. Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).
- Kind, T., et al. Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search. Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).
- Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus. Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).
- Seetaloo, N., Phillips, J. J. Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions. Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).
- Karas, B. F., et al. Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications. Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).
- Chang, H. -L., et al. Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis. Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).
- Wang, S., et al. Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry. Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).
- Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).
- Ichou, F., et al. Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes. Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).
- Fu, X., et al. Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran. Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).
- Fu, X., et al. Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural. ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).
- Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X.
- Shang, X., et al. Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China. Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), Sichuan province, China. 390-400 (2012).
- Su, J., et al. Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization. Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).
- Fu, X., et al. Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water. Green Energy & Environment. , In Press (2022).
- Hua, Y., Jenke, D. Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization. Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).
- Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).
- Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).
- Wu, S. -L., et al. Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC−MS with electron-transfer dissociation. Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).
- Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges. Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).
