Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

पौधों में अणु वितरण के लिए प्रत्यक्ष जलसेक उपकरण

Published: June 2, 2023 doi: 10.3791/65194
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 1, 1, 2
1United States Department of Agriculture Agricultural Research Service U.S. Horticultural Research Laboratory, 2Agrosource Incorporated

Summary

यह पांडुलिपि बैक्टीरिया (कैंडिडाटस लिबिबैक्टर एशियाटिकस) या इसके कीट वेक्टर (डायफोरिना सिट्री, कुवायामा) के खिलाफ अणुओं की प्रभावशीलता की जांच के लिए एक नए प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण का वर्णन करती है, जो संयोजन में, हुआंगलोंगबिंग साइट्रस रोग से जुड़े हैं।

Abstract

पौधों में चिकित्सीय यौगिकों के कार्य का परीक्षण कृषि अनुसंधान का एक महत्वपूर्ण घटक है। पर्ण और मिट्टी-ड्रेंच विधियां नियमित हैं, लेकिन इसमें कमियां हैं, जिनमें परिवर्तनीय उत्थान और परीक्षण किए गए अणुओं का पर्यावरणीय टूटना शामिल है। पेड़ों के ट्रंक इंजेक्शन अच्छी तरह से स्थापित है, लेकिन इसके लिए अधिकांश तरीकों को महंगे, मालिकाना उपकरण की आवश्यकता होती है। हुआंगलोंगबिंग के लिए विभिन्न उपचारों की जांच करने के लिए, फ्लोएम-सीमित जीवाणु कैंडिडाटस लिबिबैक्टर एशियाटिकस (सीएलए) से संक्रमित छोटे ग्रीनहाउस-विकसित साइट्रस पेड़ों के संवहनी ऊतक में इन यौगिकों को पहुंचाने के लिए एक सरल, कम लागत वाली विधि की आवश्यकता होती है या फ्लोएम-फीडिंग सीएलएएस कीट वेक्टर डायफोरिना सिट्री कुवायामा (डी सिट्री) से संक्रमित होता है।

इन स्क्रीनिंग आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए, एक प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक (डीपीआई) उपकरण डिजाइन किया गया था जो पौधे के ट्रंक से जुड़ता है। डिवाइस एक नायलॉन-आधारित 3 डी-प्रिंटिंग सिस्टम और आसानी से उपलब्ध सहायक घटकों का उपयोग करके बनाया गया है। इस उपकरण की यौगिक अपटेक प्रभावकारिता का परीक्षण साइट्रस पौधों में फ्लोरोसेंट मार्कर 5,6-कार्बोक्सीफ्लोरेसिन-डायसेटेट का उपयोग करके किया गया था। पूरे पौधों में मार्कर का एक समान यौगिक वितरण नियमित रूप से देखा गया था।

इसके अलावा, इस उपकरण का उपयोग क्रमशः सीएलए और डी सिट्री पर उनके प्रभाव ों को निर्धारित करने के लिए रोगाणुरोधी और कीटनाशक अणुओं को वितरित करने के लिए किया गया था। एमिनोग्लाइकोसाइड एंटीबायोटिक स्ट्रेप्टोमाइसिन को डिवाइस का उपयोग करके सीएलएएस-संक्रमित साइट्रस पौधों में वितरित किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप उपचार के बाद 2 सप्ताह से 4 सप्ताह तक सीएलएएस टिटर में कमी आई थी। सिट्री-संक्रमित साइट्रस पौधों में नियोनिकोटिनॉइड कीटनाशक इमिडाक्लोप्रिड पहुंचाने के परिणामस्वरूप 7 दिनों के बाद प्सिलिड मृत्यु दर में उल्लेखनीय वृद्धि हुई। इन परिणामों से पता चलता है कि यह डीपीआई डिवाइस परीक्षण के लिए पौधों में अणुओं को पहुंचाने और अनुसंधान और स्क्रीनिंग उद्देश्यों की सुविधा के लिए एक उपयोगी प्रणाली का प्रतिनिधित्व करता है।

Introduction

वाणिज्यिक और परिदृश्य सेटिंग्स में पौधों के प्रबंधन के लिए अक्सर पौधे के विकास और स्वास्थ्य को अनुकूलित करने के लिए रासायनिक यौगिकों के उपयोग की आवश्यकता होती है। इन अणुओं को कैसे वितरित किया जाता है, यह अणु के प्रकार, अणु के कार्य, पौधे के प्रकार और प्रबंधन प्रणाली पर निर्भर करता है। पर्ण और मिट्टी के अनुप्रयोग सबसे आसान वितरण रणनीतियाँ हैं, लेकिन कुछ अणुओं के उत्थान में सीमाओं के लिए प्रत्यक्ष वितरण की आवश्यकता होती है। इन अणुओं का एक उदाहरण चिकित्सीय अणु हैं जो सबसे अच्छा कार्य करते हैं जब वे पौधे के भीतर व्यवस्थित रूप से चलते हैं लेकिन सरलसामयिक अनुप्रयोगों द्वारा प्रभावी ढंग से वितरित नहीं किए जा सकते हैं। यह हुआंगलोंगबिंग (एचएलबी) के साथ मामला है, जिसे साइट्रस ग्रीनिंग रोग भी कहा जाता है। एचएलबी एक फ्लोएम-सीमित जीवाणु, कैंडिडाटस लिबिबैक्टर एशियाटिकस (सीएलएएस) से जुड़ी एक बीमारी है, जिसे पौधे के बाहर संवर्धित नहीं किया जा सकता है, या इसके कीट वेक्टर, डायफोरिना सिट्री कुवायामा (डी।

यदि कथित चिकित्सीय अणु जीन उत्पाद हैं, तो इन यौगिकों को व्यक्त करने वाले ट्रांसजेनिक पौधों को बनाकर उनका परीक्षण किया जा सकता है। हालांकि, ट्रांसजेनिक पौधे का उत्पादन समय-और संसाधन-गहन हो सकता है, अत्यधिक जीनोटाइप-निर्भर है, और जीन साइलेंसिंग3 द्वारा बाधित किया जा सकता है। इसके अलावा, भले ही ये ट्रांसजेनिक आशाजनक परिणाम दिखाते हैं, नियामक और सार्वजनिक धारणा की बाधाएं उनकीवाणिज्यिक स्वीकृति की संभावना को कम करती हैं। हालांकि, यौगिकों का बहिर्जात अनुप्रयोग जैविक और सिंथेटिक अणुओं के परीक्षण को सरल बनाता है क्योंकि इसे स्थिर या क्षणिक रूप से व्यक्त ट्रांसजेनिक पौधों के उत्पादन की आवश्यकता नहीं होती है, जो अणु के प्रभावों के परीक्षण के लिए समय और संसाधनों को कम करता है। बहिर्जात यौगिकों के प्रभावी और कुशल प्रणालीगत संयंत्र वितरण के लिए एक विधि का उपयोग विभिन्न प्रकार के अनुसंधान और स्क्रीनिंग उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है।

इन अनुप्रयोगों में से एक पौधे की संवहनी प्रणाली के भीतर प्रणालीगत अणु आंदोलन का विश्लेषण है, जिसे ट्रैक करने योग्य मार्करों का उपयोग करके किया जा सकता है, चाहे वे फ्लोरोसेंट, दृश्यमान या अद्वितीय रासायनिक आइसोटोप 6,7,8,9 हों। आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला फ्लोरोसेंट मार्कर 5,6-कार्बोक्सीफ्लोरेसिन-डायसेटेट (सीएफडीए) है, जो एक झिल्ली-पारगम्य डाई है जो इंट्रासेल्युलर एस्टरेज़ द्वारा 5,6-कार्बोक्सीफ्लोरेसिन (सीएफ) में अवक्रमित होता है और बाद में, फ्लोरोसेंट और झिल्ली-अभेद्य10 बन जाता है। सीएफडीए का उपयोग फ्लोएम परिवहन, सिंक और स्रोत संबंधों और पौधे के ऊतकों11,12 में वाहिका पैटर्न की निगरानी के लिए बड़े पैमाने पर किया गया है।

इन मार्करों के अलावा, कुछ यौगिक उत्पादकता बढ़ाने के लिए पौधे के शरीर विज्ञान को सीधे बदल सकते हैं या जड़ी-बूटियों के मामले में पौधे को मार सकते हैं। कीटनाशक और रोगाणुरोधी यौगिक दोनों पौधे की उत्पादकता बढ़ाने का एक साधन हैं, खासकर एचएलबी की उपस्थिति में। एक रोगाणुरोधी अणु का एक उदाहरण जिसका उपयोग सीएलए को नियंत्रित करने के लिए किया जाता है, स्ट्रेप्टोमाइसिन है। स्ट्रेप्टोमाइसिन एक एमिनोग्लाइकोसाइड एंटीबायोटिक है जिसे मूल रूप से स्ट्रेप्टोमाइसेस ग्रिसस से अलग किया गया था और प्रोटीन बायोसिंथेसिस13 के निषेध के माध्यम से बैक्टीरिया के विकास को रोकने के लिए दिखाया गया है। कीटनाशकों के संदर्भ में, एचएलबी अनुसंधान के लिए मुख्य लक्ष्य डी सिट्री है, जो सीएलए को पेड़ से पेड़14 तक पहुंचाता है। इस उद्देश्य के लिए, नियोनिकोटिनोइड्स, जैसे कि इमिडाक्लोप्रिड, आमतौर पर उपयोग किए जाते हैं, क्योंकि वे कीट कीटों को नियंत्रित करने के लिए स्वर्ण मानकहैं। ये सभी विविध उपयोग वर्तमान संयंत्र प्रबंधन रणनीतियों के महत्वपूर्ण पहलू हैं, और नए उत्पादों का विकास कुशल स्क्रीनिंग परख पर निर्भर है।

लकड़ी के पौधों में यौगिकों की शुरूआत के लिए उपयोग की जाने वाली एक विधि ट्रंक में सीधे इंजेक्शन है। विभिन्न प्रकार की प्रणालियों को डिजाइन किया गया है जो प्रीड्रिल इंजेक्शन साइटों के लिए उनकी आवश्यकताओं में भिन्न होते हैं, और ये सिस्टम दबाव-आधारित इंजेक्शन या निष्क्रिय प्रवाह16 का उपयोग करते हैं। यद्यपि दबाव-आधारित प्रणालियां किसी दिए गए यौगिक के त्वरित परिचय की अनुमति देती हैं, अवरुद्ध या एम्बोलाइज्ड वास्कुलचर के माध्यम से तरल को मजबूर करने के कारण होने वाली संभावित शारीरिक क्षतिपर विचार करने की आवश्यकता है। यद्यपि यौगिकों के पर्ण या ड्रेंच अनुप्रयोग को लागू करने के लिए कम समय-गहन है, प्रत्यक्ष पौधे इंजेक्शन हवा या मिट्टी को नुकसान के कारण ब्याज के यौगिक की बर्बादी को कम करता है औरबाहरी वातावरण के संपर्क को कम करके यौगिकों के सक्रिय अवस्था में होने के समय को भी लंबा कर सकता है। ये दोनों पहलू महंगे अभिकर्मकों को संरक्षित करने और अनुसंधान सेटिंग्स में प्रतिकृति के बीच स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं।

यह अध्ययन एक अभिनव प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक (डीपीआई) उपकरण के डिजाइन, निर्माण और उपयोग का वर्णन करता है, जिसका उपयोग यह आकलन करने के लिए किया जा सकता है कि रुचि के यौगिक मेजबान पौधे को कैसे प्रभावित करते हैं। एक मानक 3 डी प्रिंटर का उपयोग डिवाइस और इसके निर्माण से जुड़े कई घटकों दोनों के निर्माण के लिए किया गया था। यह इन-हाउस निर्माण विधि शोधकर्ताओं को उनकी विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर डिवाइस और डिवाइस घटकों को संशोधित करने की अनुमति देती है और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पौधे इंजेक्शन उपकरणों पर निर्भरता को कम करती है। डिवाइस सेटअप सरल और कुशल है, और सभी सहायक घटक आसानी से उपलब्ध और सस्ती हैं। यद्यपि प्रणाली को विभिन्न प्रकार के पौधों की प्रजातियों के साथ उपयोग के लिए डिज़ाइन किया गया था, यहां प्रस्तुत उदाहरण गमले वाले साइट्रस पौधों से संबंधित हैं। इसके अतिरिक्त, यह अध्ययन दर्शाता है कि यह उपकरण घातकता पैदा किए बिना युवा साइट्रस पौधों को व्यवस्थित रूप से कई प्रकार के यौगिकों को कुशलतापूर्वक वितरित करने में सक्षम है। परीक्षण किए गए यौगिकों में सीएफडीए शामिल था, जिसका उपयोग पौधे में यौगिक वितरण का आकलन करने के लिए किया गया था, और स्ट्रेप्टोमाइसिन और इमिडाक्लोप्रिड, जिसका उपयोग यह सत्यापित करने के लिए किया गया था कि डीपीआई के माध्यम से वितरित होने पर इन यौगिकों के रोगाणुरोधी और कीटनाशक प्रभाव देखे गए थे।

Protocol

1. प्रयोगात्मक यौगिक इंजेक्शन के लिए साइट्रस पौधों का उत्पादन

  1. जड़ वाले वनस्पति कटाई या बीज से छोटे गमले वाले खट्टे पेड़ों का प्रचार करें। पॉटेड साइट्रस लाइनों को 16 घंटे / 8 घंटे प्रकाश / अंधेरे दिन की लंबाई के तहत और 28 डिग्री सेल्सियस पर विकसित करें।
  2. प्रयोग के लिए उपयुक्त आकार के साइट्रस पौधों का चयन करें। वर्णित अनुप्रयोगों के लिए पौधों को 4-14 मिमी के ट्रंक व्यास के साथ ऊंचाई में 12 सेमी और 100 सेमी के बीच होना आवश्यक था। यदि नए फ्लश विकास की आवश्यकता है, तो प्रयोग से पहले पौधों को वापस काट दें।

2. डीपीआई डिवाइस और मोल्ड घटकों की त्रि-आयामी मुद्रण

  1. प्रिंट बेड पर पॉलीविनाइल एसीटेट-आधारित गोंद की एक पतली परत लागू करें।
  2. नायलॉन फिलामेंट को 3 डी प्रिंटर में लोड करें, और निर्माता के निर्देशों के अनुसार प्रिंटर तैयार करें। वांछित आयात करें। एसटीएल फाइल (पूरक फाइल 1, पूरक फाइल 2, पूरक फाइल 3, पूरक फाइल 4, पूरक फाइल 5, पूरक फाइल 6, पूरक फाइल 7, पूरक फाइल 8, पूरक फाइल 9, पूरक फाइल 10, पूरक फाइल 11, पूरक फाइल 12, पूरक फाइल 13, और पूरक फाइल 14) सेट अप करें और मुद्रण शुरू करें।
  3. प्रिंट बेड से टुकड़ा निकालें। पानी के साथ मुद्रित घटक के आधार से पॉलीविनाइल एसीटेट-आधारित गोंद को कुल्ला करें, और किसी भी समर्थन संरचनाओं को हटा दें।
  4. स्पष्ट ग्लॉस स्प्रे पेंट के दो कोट के साथ डीपीआई घटक को स्प्रे करें।

3. प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड का निर्माण

  1. एक मोल्ड फॉर्म को इकट्ठा करें जो पैटर्न टुकड़ों को पकड़ने के लिए पर्याप्त रूप से बड़ा हो, एक आधार पर स्नैप-टुगेदर प्लास्टिक ब्लॉक का उपयोग करके एक आयताकार बाड़े का निर्माण करके (पूरक चित्रा एस 1 ए)।
  2. 10: 1 अनुपात में आरटीवी सिलिकॉन मोनोमर और उत्प्रेरक को एक साथ मिलाएं, और 1 मिनट के लिए बुलबुले पेश किए बिना हिलाएं। खाद्य रंग (सिलिकॉन मिश्रण की 3 बूंद/ 25 मिलीलीटर) और हाथ साबुन (1 मिलीलीटर साबुन / 25 मिलीलीटर सिलिकॉन मिश्रण) (पूरक चित्रा एस 1 बी) जोड़कर रंग करें।
  3. मोल्ड रूप में सिलिकॉन की एक पतली परत डालें जो तल को पूरी तरह से कवर करने के लिए पर्याप्त है। सतह को समतल करने के लिए टैम्प, और सिलिकॉन सेट करने के लिए 24 घंटे प्रतीक्षा करें (पूरक चित्रा एस 1 सी)।
  4. सिलिकॉन की एक दूसरी परत डालें, जैसा कि ऊपर वर्णित है, जो पैटर्न पर केंद्र छेद कोर प्रिंट को कवर करने के लिए पर्याप्त गहरा है ( पूरक चित्रा एस 1 डी में पैटर्न के शीर्ष पर दिखाई देता है)। पैटर्न को तरल सिलिकॉन में डालें जिसमें केंद्र छेद कोर प्रिंट नीचे की ओर है। सुनिश्चित करें कि कोई बुलबुले फंसे नहीं हैं और पैटर्न अच्छी तरह से अलग हैं और स्पर्श नहीं कर रहे हैं (पूरक चित्रा एस 1 ई)।
  5. पैटर्न को या तो एक भारी वस्तु और / या टेप के साथ सुरक्षित करें ताकि उन्हें सेट होने के दौरान सिलिकॉन से बाहर तैरने से रोका जा सके। नई डाली गई परत सेट होने के लिए 24 घंटे प्रतीक्षा करें (पूरक चित्रा एस 1 एफ)।
  6. सिलिकॉन की अतिरिक्त परतें तब तक डालें जब तक कि स्तर पैटर्न के शीर्ष के साथ फ्लश न हो जाए। इलाज के लिए 24 घंटे प्रतीक्षा करें (पूरक चित्रा एस 1 जी)।
  7. मोल्ड को छोड़ने के लिए स्नैप-एक साथ प्लास्टिक ब्लॉक को अलग करें। पैटर्न को हटा दें (पूरक चित्रा एस 1 एच)। आँसू या विकृति के लिए मोल्ड का निरीक्षण करें (पूरक चित्रा एस 1 आई)।

4. प्लास्टिसोल के छल्ले की ढलाई

  1. मोल्ड के इंटीरियर, सभी मुख्य घटकों, और ओ-रिंग्स को खाना पकाने के तेल (पूरक चित्रा एस 2 ए, बी) के साथ कोट करें। केंद्र पोस्ट कोर के बीच में नॉच के चारों ओर एक ओ-रिंग रखें, और कोर को प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड (पूरक चित्रा एस 2 सी) के केंद्र छेद में रखें।
  2. डिलीवरी चैनल कोर को प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड के किनारे छेद में डालें। केंद्र पोस्ट कोर (पूरक चित्रा एस 2 डी, ई) पर ओ-रिंग के साथ संरेखित करने के लिए वितरण चैनल कोर के अंत में वी-आकार की नोक को उन्मुख करें।
  3. छोटे 10 सेकंड के फटने के लिए माइक्रोवेव में प्लास्टिसोल गर्म करें (पूरक चित्रा एस 2 एफ, जी)। बुलबुले से बचने के लिए प्लास्टिसोल को धीरे से हिलाएं (पूरक चित्रा एस 2 एच)। हीटिंग को दोहराएं और हिलाएं जब तक कि घोल 160 डिग्री सेल्सियस और 170 डिग्री सेल्सियस (पूरक चित्रा एस 2 आई) के बीच तापमान तक न पहुंच जाए।
    सावधानी: प्लास्टिसोल के अधिक गर्म होने से जहरीले धुएं की रिहाई हो सकती है। प्रक्रिया को एक अच्छी तरह से हवादार क्षेत्र या फ्यूम हुड में करें। प्लास्टिसोल को 170 डिग्री सेल्सियस से अधिक गर्म न करें।
  4. पिघले हुए प्लास्टिसोल को बुलबुले पेश किए बिना मोल्ड के बाहरी किनारे के पास प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड में डालें (पूरक चित्रा एस 2 जे)। प्लास्टिसोल के छल्ले को ठंडा होने के लिए 1 घंटे प्रतीक्षा करें (पूरक चित्रा एस 2 के)। सांचे से अंगूठियां निकालें। प्रयोगात्मक परख (पूरक चित्रा एस 2 एल) में उपयोग से पहले डीपीआई डिवाइस के साथ उचित फिट सुनिश्चित करें।

5. संयंत्र के लिए डीपीआई डिवाइस का अनुलग्नक

  1. डिवाइस अनुलग्नक के लिए ट्रंक पर एक चिकनी, स्वस्थ साइट ढूंढें। किसी भी धक्कों या गांठों से बचें, क्योंकि ये डिवाइस रिसाव में योगदान कर सकते हैं।
  2. ट्रंक सतह के साथ 90 डिग्री कोण पर स्टेम के केंद्र के माध्यम से क्षैतिज रूप से छेद करने के लिए 2 मिमी व्यास ड्रिल बिट का उपयोग करें (पूरक चित्रा एस 3 ए)। एक अबाधित छेद बनाने के लिए इसे साफ और चिकना करने के लिए छेद के माध्यम से ड्रिल बिट को कई बार चलाएं (पूरक चित्रा एस 3 बी)।
  3. यौगिक वितरण चैनल (पूरक चित्रा एस 3 सी) के विपरीत तरफ प्लास्टिसोल रिंग में एक ऊर्ध्वाधर टुकड़ा बनाएं। पौधे के चारों ओर अंगूठी फिट करें, और डिलीवरी चैनल को पहले से ड्रिल किए गए छेद (पूरक चित्रा एस 3 डी) के साथ पंक्तिबद्ध करें।
    नोट: रिसाव से बचने के लिए अंगूठी को ट्रंक के चारों ओर अच्छी तरह से फिट होना चाहिए; विभिन्न व्यास के साथ कोर असेंबली का उपयोग विभिन्न आकार के पौधे के तनों के लिए प्लास्टिसोल रिंग बनाने के लिए किया जा सकता है।
  4. डीपीआई डिवाइस को प्लास्टिसोल रिंग में जोड़ें, यह सुनिश्चित करें कि वे एक साथ अच्छी तरह से फिट हों। डीपीआई डिवाइस को प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल और ड्रिल किए गए छेद (पूरक चित्रा एस 3 ई) के साथ संरेखित करें।
    नोट: छेद और डीपीआई डिवाइस स्पाउट को लाइन अप करने के लिए ड्रिल बिट का उपयोग करना सहायक हो सकता है।
  5. उपकरण को रखने के लिए सिलिकॉन टेप के साथ कसकर लपेटें (पूरक चित्रा एस 3 एफ)। संयंत्र पर उचित संरेखण और अभिविन्यास सुनिश्चित करने के लिए पूरी तरह से इकट्ठे और संलग्न डिवाइस का निरीक्षण करें।

6. डीपीआई डिवाइस का उपयोग करके ब्याज के चक्रवृद्धि को लागू करना

  1. डीपीआई डिवाइस को ब्याज के समाधान (पूरक चित्रा एस 3 जी) से भरने के लिए एक सिरिंज या पिपेट का उपयोग करें। आंतरिक चैनल से हवा खींचने और पौधे वाहिका में हवा के बुलबुले की शुरूआत से बचने के लिए डीपीआई डिवाइस के विपरीत तरफ सिलिकॉन टेप और प्लास्टिसोल रिंग में प्रवेश करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें (पूरक चित्रा एस 3 एच)। किसी भी निकाले गए यौगिक को वापस डीपीआई डिवाइस में बदलें।
  2. क्षेत्र को मजबूत करने और आँसू को रोकने के लिए सिरिंज द्वारा बनाए गए छेद पर सिलिकॉन टेप का एक अतिरिक्त छोटा पैच जोड़ें। अनुलग्नक बिंदु पर दिखाई देने वाले रिसाव के लिए उपकरण का निरीक्षण करें, और स्थिर तरल स्तर के लिए डिवाइस जलाशय का निरीक्षण करें।
    नोट: परीक्षण समाधान की बर्बादी से बचने के लिए रिसाव के लिए परीक्षण करने के लिए शुरू में पानी का उपयोग किया जा सकता है।
  3. मोम सीलिंग फिल्म के साथ डीपीआई डिवाइस के खुले छोर को कवर करें, और सील बनाने और प्रयोगात्मक यौगिक के वाष्पीकरण को कम करने के लिए नीचे खींचें। वैक्यूम के विकास को रोकने के लिए एक सिरिंज टिप के साथ मोम फिल्म में एक छेद करें, और बाद में डिवाइस को फिर से भरें (पूरक चित्रा एस 3 आई)।
  4. घटकों (पूरक चित्रा एस 3 जे) के उचित संरेखण को सुनिश्चित करने के लिए दैनिक उपकरण की जांच करें, और जलाशय को सूखने से बचाने के लिए सिरिंज का उपयोग करके तरल को ऊपर उठाएं। इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि प्रयोगात्मक समाधान की वांछित मात्रा पेश नहीं की गई है।
    नोट: यौगिकों को 1 महीने तक किसी दिए गए डिवाइस से सफलतापूर्वक पेश किया जा सकता है। इस समय सीमा से अधिक समाधान अपटेक अवधि को प्रयोगात्मक सेटअप से पहले अनुभवपूर्वक परीक्षण किया जाना चाहिए।

7. साइट्रस पौधों के साथ संवहनी आंदोलन का निरीक्षण करने के लिए सीएफडीए का उपयोग करना

  1. डीपीआई डिवाइस को 25 सेमी लंबे सिट्रॉन (साइट्रस मेडिका एल) पौधों से संलग्न करें, डीपीआई डिवाइस पर एच 2 ओ नियंत्रण या सीएफडीए में 20% डीएमएसओ का एकल2.0एमएल उपचार लागू करें, और इसे 24 घंटे तक लेने की अनुमति दें। इस प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए, 2 एमएम और 20% डीएमएसओ की अंतिम सीएफडीए एकाग्रता उत्पन्न करने के लिए 1.6 एमएल एच2ओ से 400 μएल सीएफडीए स्टॉक समाधान (स्टॉक समाधान में 100% डाइमिथाइल सल्फोक्साइड [डीएमएसओ] में घुलने वाला 10 एमएम सीएफडीए होता है) जोड़कर काम करने वाला सीएफडीए समाधान तैयार करें।
  2. पौधे के विभिन्न ऊतकों के क्रॉस-सेक्शन बनाएं, और फ्लोरोसेंट फिल्टर के साथ एक स्टीरियोस्कोप या यौगिक माइक्रोस्कोप का उपयोग करें जिसमें पौधे के ऊतकों में सीएफडीए की कल्पना करने के लिए 498 एनएम तरंग दैर्ध्य शामिल है। ऊतक में ऑटोफ्लोरेसेंस के लिए एच2ओ नियंत्रण में 20% डीएमएसओ से छवियों की तुलना करें।

8. स्ट्रेप्टोमाइसिन उपचार के बाद पत्ती के नमूनों में सीएलएएस टिटर में परिवर्तन को मापना।

  1. 0.75 मीटर लंबे ग्रीनहाउस-विकसित सीएलएएस-संक्रमित वालेंसिया (साइट्रस साइनेंसिस (एल) ओस्बेक "वालेंसिया") पौधों का उपयोग करके, प्रत्येक पौधे से दो एचएलबी रोगसूचक पत्तियों के पेटियोल और मिडरिब को इकट्ठा करें, उन्हें छोटे वर्गों में काट लें, प्रत्येक ऊतक प्रकार को पूल करें, और उन्हें 2 एमएल प्रभाव-प्रतिरोधी नमूना ट्यूबों में अलग से स्टोर करें जिसमें 6.35 मिमी व्यास की स्टील बॉल होती है।
  2. 3.4 मीटर / सेकंड पर दो 15 सेकंड चक्रों के लिए प्रोग्राम किए गए होमोजिनाइज़र का उपयोग करके नमूने को पीस लें। कुल न्यूक्लिक एसिड निकालें जैसा कि पहले वर्णितहै 19.
  3. तालिका 1 में परिभाषित क्यूपीसीआर मिश्रण और तालिका 2 में परिभाषित प्रतिक्रिया स्थितियों का उपयोग करके सीएलएएस-संक्रमित पत्ती के नमूनों पर क्यूपीसीआर करें। आगे के विश्लेषण के लिए मजबूत सीएलएएस संक्रमण दिखाने वाले पौधों का उपयोग करें (मजबूत संक्रमण को आमतौर पर क्यूपीसीआर-आधारित सीटी मान के रूप में परिभाषित किया जाता है < सीएलएएस 16 एस लासलॉन्ग (एलएल) प्राइमर सेट के लिए 30)।
    नोट: बैक्टीरियल टिटर का अनुमान सापेक्ष जीनोम समकक्षों का अनुमान लगाने के लिए सीएलएएस 16 एस लास लॉन्ग (एलएल) और साइट्रस डिहाइड्रिन डीएनए प्राइमरों का उपयोग करके लगाया जाता है, जैसा कि पहले20 में वर्णित है।
  4. खट्टे पौधों को तैयार करें जो डीपीआई उपकरणों के साथ ऊपर उल्लिखित न्यूनतम संक्रमण टिटर को पूरा करते हैं, और उन्हें वांछित एकाग्रता पर एच 2 ओ समाधान या स्ट्रेप्टोमाइसिन समाधान के2.0एमएल के एक बार के उपचार के अधीन करते हैं। इस अध्ययन का पालन करने के लिए, एच 2 ओ में घुलने वाले 9.5 मिलीग्राम / एमएल (कुल 19 मिलीग्राम) स्ट्रेप्टोमाइसिन के एकल2.0एमएल उपचार का उपयोग करें।
  5. उपचार के बाद 7 दिनों, 14 दिनों और 28 दिनों में पत्ती के नमूने एकत्र करें। ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके सीएलएएस टिटर के लिए नमूना पत्तियों की परख करें।
  6. उपचार के 60 दिनों के बाद, एच2ओ या स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ इलाज किए गए पौधों की तस्वीरें प्राप्त करें। संक्रमण की गंभीरता को स्कोर करने के लिए सीएलएएस संक्रमण के दृश्य अवलोकनों का उपयोग करें। हल्के संक्रमण के संकेत के रूप में पत्तियों के फ्लश विकास के साथ इंटरवेनल क्लोरोसिस और नस कॉर्किंग दिखाने वाली <50% पत्तियों को हल्के संक्रमण के संकेत के रूप में देखें और 50% से अधिक पत्तियों में इंटरवेनल क्लोरोसिस और नस कॉर्किंग के साथ-साथ पत्तियों की सूजन और पौधे के विकास में रुकावट अधिक गंभीर संक्रमण के संकेत के रूप में देखें।

9. इमिडाक्लोप्रिड उपचार के बाद डी सिट्री की मृत्यु दर को मापना।

  1. नए फ्लश के विकास को प्रोत्साहित करने के लिए 12 सेमी की ऊंचाई तक 0.5 मीटर लंबा सिट्रॉन (साइट्रस मेडिका एल) पौधों की छंटाई करें।
    नोट: फ्लश विकास की गति पौधे के स्वास्थ्य और वर्ष के समय पर निर्भर हो सकती है; तो, प्रयोगात्मक डिजाइन के दौरान इसे ध्यान में रखें।
  2. >6 फ्लश के बाद, लंबाई में 1-2 सेमी, विकसित हो गए हैं, पौधों को वयस्क डी सिट्री वाले पिंजरों में पेश करें।अंडे के जमाव की अनुमति देने के लिए पौधों को 24 घंटे के लिए पिंजरों में छोड़ दें।
  3. बिछाने के 1-2 दिन बाद तीन फ्लश शूट पर प्रतिनिधि अंडे की गिनती करें, और बाद में डीपीआई उपकरणों को लागू करें। इन उपकरणों को या तो जल नियंत्रण के 2.0 एमएल या इमिडाक्लोप्रिड (21.8% सक्रिय घटक) की वांछित एकाग्रता के साथ भरें। इस प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए, 528 μL/L, 52.8 μL/L, और 5.28 μL/L का उपयोग इमिडाक्लोप्रिड का उपयोग करें।
    नोट: अंडे की गिनती एक विनाशकारी उपाय है, इसलिए इस स्तर पर गणना का उपयोग उसी पौधे के अनगिनत फ्लश पर अंडे की संख्या का अनुमान लगाने के लिए किया जाता है और प्रयोग के अंत में आयोजित होने वाली बाद की अप्सरा उद्भव गणनाओं के लिए एक आधार रेखा प्रदान करने में मदद करता है।
  4. शेष फ्लश शूट में से कम से कम तीन पर डी सिट्री उद्भव दर एकत्र करें। यौगिक परिचय के 7 दिन बाद प्रतिनिधि पौधे की तस्वीरें प्राप्त करें।

Representative Results

प्रत्यक्ष जलसेक डिवाइस घटक
प्रत्यक्ष जलसेक डिवाइस का आधार संस्करण सामने और किनारे पर 8 सेमी लंबा और 3.3 सेमी चौड़ा है (चित्रा 1 ए)। इसमें एक एकल केंद्रीय जलाशय होता है जो स्पाउट के साथ सन्निहित होता है, और इन घटकों के भीतर निहित कुल मात्रा 2.0 एमएल (चित्रा 1 डी) है। प्लास्टिसोल रिंग 1.8 सेमी लंबा है और इसका व्यास 2.7 सेमी (चित्रा 1 सी) है। इस अंगूठी में दो चैनल भी होते हैं: एक डीपीआई डिवाइस स्पाउट को समायोजित करने के लिए और दूसरा चर व्यास का जो उपचारित पेड़ के तने के चारों ओर फिट बैठता है। इसके अतिरिक्त, पेड़ को घेरने के लिए अतिरिक्त उपचार को निर्देशित करने के लिए ऊर्ध्वाधर चैनल के चारों ओर एक नाली होती है, जो छाल के माध्यम से अतिरिक्त यौगिक उत्थान की अनुमति देती है (चित्रा 1 एफ)। जब ठीक से इकट्ठा किया जाता है, तो प्लास्टिसोल रिंग को डीपीआई डिवाइस के खिलाफ फ्लश किया जाना चाहिए, और स्पाउट को पेड़ में ड्रिल किए गए छेद के साथ पंक्तिबद्ध करना चाहिए (चित्रा 1 बी और चित्रा 1 ई)।

CFDA
साइट्रस पौधों में बहिर्जात रसायनों को पेश करने के लिए डीपीआई डिवाइस की प्रभावशीलता की जांच करने के लिए, डिवाइस का उपयोग करके 2.0 एमएल 2 एमएम सीएफडीए में घुसपैठ की गई थी। उपचारित पौधे के वाहिका में एक प्रतिदीप्ति संकेत का पता लगाया गया था (चित्रा 2 ए) लेकिन एच 2 ओ (चित्रा 2 बी) में 20% डीएमएसओ के साथ इलाज किए गए नियंत्रण पौधों में अनुपस्थित था। यह संकेत सभी विच्छेदित पौधों के ऊतक प्रकारों में देखा गया था, जिसमें पत्ती मेसोफिल, पेटियोल वास्कुलचर, स्टेम वास्कुलचर और रूट वास्कुलचर (चित्रा 2 सी) शामिल हैं। यह संकेत उपचार के 24 घंटे के भीतर पौधे में देखा गया था और पूरे ऊतकों में अपेक्षाकृत समान रूप से वितरित किया गया था।

स्ट्रेप्टोमाइसिन
यह जांचने के लिए कि क्या पेश किए गए यौगिकों का एचएलबी रोग पर चिकित्सीय प्रभाव था, 2.0 एमएल जीवाणुनाशक यौगिक, स्ट्रेप्टोमाइसिन को 9.5 मिलीग्राम / एमएल (कुल 19 मिलीग्राम) की एकाग्रता पर सीएलएएस-पॉजिटिव वालेंसिया (साइट्रस साइनेंसिस) मीठे नारंगी पौधों में पेश किया गया था। इन पौधों को ग्रीनहाउस बर्तनों में बनाए रखा गया था, और सीएलएएस टिटर (प्रति साइट्रस जीनोम समकक्षों के लिए क्लैस जीनोम समकक्षों द्वारा मापा जाता है) को क्यूपीसीआर (चित्रा 3 ए) का उपयोग करके समय के साथ निगरानी की गई थी। स्ट्रेप्टोमाइसिन- और एच2ओ-उपचारित पौधों के लिए प्रारंभिक औसत डीएनए सीएलएएस टिटर्स क्रमशः 0.562 सीएलएएस जीनोम / साइट्रस जीनोम और 0.49 सीएलएएस जीनोम / साइट्रस जीनोम थे। एक ही समय में एच2ओ नियंत्रण की तुलना में स्ट्रेप्टोमाइसिन उपचार के 7-28 दिन बाद क्यूपीसीआर द्वारा औसत जीवाणु टिटर में कमी का पता लगाया गया था। इसके अलावा, स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित पौधों और एच2ओ-उपचारित पौधों के लिए समय 0 और दिन 28 औसत बैक्टीरियल टिटर्स के बीच का अंतर क्रमशः 0.314 और 0.117 था।

इस प्रयोग को अलग-अलग समय अवधि में विभिन्न उपचारों के लिए पौधे की प्रतिक्रिया को मापने के लिए डिज़ाइन किया गया था। एक दो-कारक द्विघात प्रतिक्रिया सतह डिजाइन का उपयोग किया गया था, जिसमें समय को चार स्तरों (0 दिन, 7 दिन, 14 दिन और 28 दिन) के साथ मात्रात्मक असतत कारक के रूप में माना जाता था और उपचार को दो स्तरों (एच2ओ और स्ट्रेप्टोमाइसिन) के साथ एक श्रेणीबद्ध कारक के रूप में माना जाता था। आठ उपचार संयोजनों में से प्रत्येक के लिए पांच प्रतिकृतियों का उपयोग किया गया था, और सीएलएएस टिटर को प्रतिक्रिया चर के रूप में मापा गया था। डेटा को बॉक्स-कॉक्स प्लॉट विश्लेषण के आधार पर लॉग10 का उपयोग करके बदल दिया गया था। अकाइके के सूचना मानदंड (एआईसीसी) 21 का उपयोग करके आगे के चयन द्वारा मॉडल कमी का प्रदर्शन किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप समय और इंटरैक्शन प्रभाव दोनों को हटा दिया गया था। शेष कारक, उपचार, महत्वपूर्ण था (पी = 0.0252), स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित पौधों ने सभी समय बिंदुओं पर एच2ओ-उपचारित पौधों (0.496) की तुलना में कम औसत सीएलएएस टिटर (0.349) दिखाया (चित्रा 3 बी)। सीएलएएस टिटर में यह कमी स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित पौधों में 60 दिनों के बाद नए स्वस्थ फ्लश विकास में कभी-कभी वृद्धि के अनुरूप थी, जैसा कि एच2ओ (चित्रा 3 सी) बनाम 19 मिलीग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन (चित्रा 3 डी) के साथ इलाज किए गए प्रतिनिधि पेड़ों की तस्वीरों से स्पष्ट है।

इमिडाक्लोप्रिड
इमिडाक्लोप्रिड को डीपीआई डिवाइस का उपयोग करके किशोर एशियाई साइट्रस प्सिलिड (एसीपी) से संक्रमित सिट्रॉन पौधों में पेश किया गया था ताकि डी सिट्री कीटनाशक स्क्रीनिंग परख के रूप में इसकी क्षमता का परीक्षण किया जा सके। एक वाणिज्यिक इमिडाक्लोप्रिड कीटनाशक समाधान के एकल 2.0 एमएल उपचार का परीक्षण तीन अलग-अलग सांद्रता (5.28 μL / L, 52.8 μL / L, और 528 μL / L) पर किया गया था, साथ ही एक जल नियंत्रण के साथ। उपचार से पहले प्रति तीन फ्लश शूट में औसत कुल अंडे की गिनती 280.5 से 321 तक थी, और प्रत्येक उपचार समूह के लिए उपयोग किए जाने वाले पौधों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था (चित्रा 4 ए)। उपचार के 7 दिन बाद तीन फ्लश शूट पर औसत कुल जीवित अप्सराएं क्रमशः जल नियंत्रण के लिए 293.75, 268, 97.5 और 2 और 5.28 μL/L, 52.8 μL/L, और 528 μL/L इमिडाक्लोप्रिड समाधान थीं (चित्रा 4B)। यह 52.8 μL/L (p = 0.029) और 528 μL/L (p = 0.002) इमिडाक्लोप्रिड समाधान स्तरों पर प्सिलिड अप्सरा के उद्भव में एक महत्वपूर्ण कमी का प्रतिनिधित्व करता है, जब एक-तरफ़ा ANOVA के अनुसार जल नियंत्रण की तुलना में Tukey के पोस्ट-हॉक विश्लेषण के बाद। इसके अतिरिक्त, उच्चतम इमिडाक्लोप्रिड समाधान स्तर पर प्सिलिड अप्सरा मृत्यु दर में यह वृद्धि जल नियंत्रण (चित्रा 4 सी) की तुलना में इमिडाक्लोप्रिड-उपचारित लाइनों (चित्रा 4 डी) पर अप्सरा हनीड्यू उत्पादन में कमी से स्पष्ट थी।

Figure 1
चित्र 1: प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण और प्लास्टिसोल रिंग। (ए) बरकरार प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक उपकरण और (सी) प्लास्टिसोल रिंग उनके आयामों के साथ। (बी) प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण और प्लास्टिसोल रिंग एक साइट्रस पेड़ से जुड़े और जुड़े हुए हैं। (डी) प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण के ऊर्ध्वाधर क्रॉस सेक्शन, (एफ) प्लास्टिसोल रिंग, और (ई) ये दो घटक एक साइट्रस पेड़ से जुड़े और जुड़े हुए हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: 25 सेमी साइट्रस पौधे के पत्ती के मिडरिब का क्रॉस-सेक्शन। प्रत्यक्ष प्लांट इन्फ्यूजन डिवाइस का उपयोग करके एच 2 ओ में (ए)2एमएम सीएफडीए या (बी) 20% डीएमएसओ के साथ उपचार के 24 घंटे बाद छवियां दिखाई देती हैं। (सी) 2 एमएम सीएफडीए उपचार के 24 घंटे बाद विभिन्न पौधों के ऊतकों के क्रॉस-सेक्शन, जिसमें प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण (ऊपर बाएं) के ऊपर ट्रंक 5 सेमी, प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण (मध्य बाएं), जड़ (निचले बाएं), पत्ती मिडरिब (ऊपरी दाएं), पत्ती पेटीओल (मध्य दाएं), और पत्ती मेसोफिल (निचले दाएं) शामिल हैं। स्केल बार = 1 मिमी। संक्षेप: सीएफडीए = 5,6-कार्बोक्सीफ्लोरेसिन-डायसेटेट; डीएमएसओ = डाइमिथाइल सल्फोक्साइड। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: क्यूपीसीआर का उपयोग करके समय के साथ सीएलएएस टिटर (प्रति साइट्रस जीनोम समकक्षों के लिए सीएलएएस जीनोम समकक्षों द्वारा मापा जाता है) की निगरानी करना। (ए) टाइम कोर्स सीएलएएस डीएनए टिटर में परिवर्तन दिखाता है जो एच2ओ नियंत्रण के साथ इलाज किए गए पांच पौधों के साथ 19 मिलीग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ इलाज किए गए पांच पौधों की तुलना करता है। अंक किसी दिए गए समय बिंदु पर दिए गए उपचार के औसत का प्रतिनिधित्व करते हैं। त्रुटि पट्टियाँ माध्य की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करती हैं. (बी) बार ग्राफ सभी समय बिंदुओं पर एच2ओ- और स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित पौधों के औसत सीएलएएस टिटर को दर्शाता है। त्रुटि पट्टियाँ 95% आत्मविश्वास अंतराल का प्रतिनिधित्व करती हैं, और तारांकन स्ट्रेप्टोमाइसिन- और एच2ओ-उपचारित पौधों के लिए औसत सीएलएएस टिटर्स के बीच महत्वपूर्ण अंतर (* = पी < 0.05) को दर्शाता है। (सी) (सी) एच 2 ओ या (डी) स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपचार के 0 महीने और2महीने बाद साइट्रस पौधों की प्रतिनिधि छवियां। स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ इलाज किए गए पौधे 2 महीने के बाद नए हल्के हरे पत्ते के फ्लश विकास को दिखाते हैं, जो सीएलएएस टिटर में कमी का संकेत देता है। संक्षिप्त नाम: सीएलएएस = कैंडिडाटस लिबिबैक्टर एशियाटिकस। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: किशोर एसीपी-संक्रमित सिट्रॉन पौधों में प्सिलिड अप्सरा मृत्यु दर की निगरानी। बार ग्राफ (ए) अनुमानित प्रारंभिक अंडे की गिनती और (बी) पानी नियंत्रण और इमिडाक्लोप्रिड के विभिन्न कमजोर पड़ने के साथ उपचार के 7 दिनों के बाद तीन साइट्रस फ्लश पर जीवित डी सिट्री अप्सराओं को दिखाते हैं। त्रुटि पट्टियाँ माध्य की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करती हैं, और तारांकन चिह्न दिए गए उपचार स्तर और जल नियंत्रण के बीच दिए गए उपचार स्तर और जल नियंत्रण के बीच महत्वपूर्ण अंतर (* = पी < 0.05, ** = पी < 0.01) को दर्शाता है। डी. सिट्री अप्सरा से संक्रमित साइट्रस फ्लश की छवियां प्रत्यक्ष प्लांट इन्फ्यूजन डिवाइस का उपयोग करके (सी) जल नियंत्रण या (डी) 528 μL / L इमिडाक्लोप्रिड के साथ उपचार के 7 दिन बाद आती हैं। संक्षेप: एसीपी = एशियाई साइट्रस प्सिलिड; डी. सिट्री = डायफोरिना सिट्री कुवायामा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

मात्रा प्रति नमूना (μL) घटक
12.5 बीआरवाईटी ग्रीन डाई मास्टर मिक्स के साथ 2x GoTaq qPCR
5 डीएनए टेम्पलेट (20 ng/μL)
0.5 सीएलए के लिए 10 μM प्राइमर F और R क्लास: सीटीटीएसीएसीसीसीसीसीटीजीएसीटीजीएटीजीटीएजी
TCCCTATAAAGTACCCAACATCTAGGTAAA (Reverse)
0.5 साइट्रस हाउसकीपिंग के लिए 10 μM प्राइमर F और R साइट्रस डिहाइड्रिन: टीजीएजीटीएसीजीएसीसीजीएजीटीजीटीटीजी (फॉरवर्ड);
AAAACTTCACCGATCCACCAG (रिवर्स)
6.5 H2O

तालिका 1: स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित साइट्रस लाइनों में सीएलएएस टिटर को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाने वाला क्यूपीसीआर मिश्रण। सीएलएएस डीएनए परिमाणीकरण और साइट्रस डीएनए परिमाणीकरण के लिए 16 एस लास लॉन्ग प्राइमर और साइट्रस डिहाइड्रिन प्राइमरों का अनुक्रम दिखाया गया है।

क़दम तापमान (°C) समय
1 प्रारंभिक प्रकृति 95 2 मिनट
2 प्रकृति 95 15 s
3 एनीलिंग 60 20 s
4 विस्तार 72 20 s
5 चरण 2 पर जाएँ, 39x दोहराएँ
6 पिघला हुआ वक्र 0.2 डिग्री सेल्सियस / सेकंड पर 60 रैंपिंग 95 तक 3 मिनट

तालिका 2: स्ट्रेप्टोमाइसिन-उपचारित साइट्रस लाइनों में सीएलएएस टिटर को निर्धारित करने के लिए उपयोग की जाने वाली क्यूपीसीआर के लिए प्रतिक्रिया की स्थिति।

पूरक चित्रा एस 1: प्लास्टिसोल रिंग उत्पन्न करने के लिए मोल्ड की असेंबली प्रक्रिया दिखाने वाली छवियां। (ए) प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड की पहली परत उत्पन्न करने के लिए स्नैप-टुगेदर प्लास्टिक ब्लॉक का उपयोग किया गया था। (बी) सिलिकॉन आरटीवी रबर, उत्प्रेरक, खाद्य रंग और साबुन युक्त समान रूप से मिश्रित घोल। (सी) समान रूप से प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड की पहली परत डाली गई। (डी) शीर्ष पर केंद्र होल्ड कोर प्रिंट के साथ प्लास्टिसोल रिंग पैटर्न की तस्वीर। (ई) प्लास्टीसोल रिंग पैटर्न को मोल्ड की दूसरी परत में डाला जाता है। (एफ) मास्किंग टेप और रबर मैलेट का उपयोग पैटर्न को सुरक्षित करने के लिए किया जाता है क्योंकि दूसरी परत ठीक हो जाती है। (जी) मोल्ड की तीसरी परत तब तक जोड़ी जाती है जब तक कि यह पैटर्न के शीर्ष के साथ फ्लश न हो जाए। (एच) मोल्ड से पैटर्न को हटाना। (I) पूरी तरह से निर्मित प्लास्टिसोल रिंग मोल्ड। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा एस 2: प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण से जुड़े प्लास्टिसोल रिंग की असेंबली प्रक्रिया को दिखाने वाली छवियां। (ए) प्लास्टीसोल रिंग असेंबली घटक, जिसमें मोल्ड, ओ-रिंग के साथ केंद्र कोर और डिलीवरी चैनल कोर शामिल हैं। (बी) सख्त होने के बाद प्लास्टिसोल रिंग को हटाने की सुविधा के लिए नॉन-स्टिक स्प्रे खाना पकाने के तेल में कोर को कोटिंग। (सी) मोल्ड में केंद्र कोर और ओ-रिंग का सम्मिलन। (डी) केंद्र कोर के लंबवत वितरण चैनल कोर का सम्मिलन। (ई) मोल्ड गुहा में प्लास्टिसोल रिंग कोर घटकों की उचित असेंबली। (एफ) प्लास्टिसोल रिंग की पीढ़ी के लिए प्लास्टीसोल का उपयोग किया जाता है। (जी) माइक्रोवेव में प्लास्टिसोल को गर्म करना। (एच) गर्म करने के बाद प्लास्टिसोल को हिलाना। (I) प्लास्टिसोल तापमान की जांच करना। (जे) गर्म प्लास्टिसोल को इकट्ठे कोर में डालना। (के) इकट्ठे कोर के चारों ओर प्लास्टिसोल को ठंडा करने की अनुमति देना। (एल) प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण से जुड़े पूरी तरह से इकट्ठे प्लास्टिसोल छल्ले। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा एस 3: प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक उपकरण की असेंबली प्रक्रिया दिखाने वाली छवियां। (ए) यौगिक वितरण के लिए एक चैनल बनाने के लिए साइट्रस प्लांट के केंद्र के माध्यम से एक छेद ड्रिलिंग। (बी) ड्रिल किए गए छेद का सामने का दृश्य। (सी) यौगिक वितरण चैनल के विपरीत रेजर ब्लेड के साथ प्लास्टिसोल रिंग के माध्यम से टुकड़े। (डी) पहले ड्रिल किए गए छेद की साइट पर तने के चारों ओर प्लास्टिसोल रिंग को कसकर फिट करना। (ई) प्लास्टिसोल रिंग में सीधे प्लांट इन्फ्यूजन डिवाइस को फिट करना, जिसमें प्लास्टिसोल रिंग के चैनल में डाले गए डिवाइस पर यौगिक वितरण स्पाइगेट होता है। (एफ) प्लास्टिसोल रिंग में सीधे पौधे जलसेक उपकरण को सुरक्षित करने और पूरे तंत्र को रखने के लिए सिलिकॉन टेप का उपयोग करना। (छ) प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक उपकरण कक्ष को चक्रवृद्धि ब्याज से भरना। (एच) पौधे में ड्रिल किए गए छेद से हवा खींचने और यौगिक के प्रवाह को शुरू करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करना। (I) प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक उपकरण कक्ष में उद्घाटन के लिए मोम सीलिंग फिल्म लागू करना और वैक्यूम को रोकने के लिए एक छेद को पोक करना। (जे) एक साइट्रस पौधे पर पूरी तरह से इकट्ठे प्रत्यक्ष पौधे जलसेक उपकरण। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 1: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 4 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 2: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 6 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 3: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 8 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 4: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 10 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 5: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 12 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 6: प्लास्टिसोल रिंग सेंटर पोस्ट कोर । 14 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 7: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 4 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 8: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 6 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 9: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 8 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 10: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 10 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 11: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 12 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 12: प्लास्टिसोल रिंग डिलीवरी चैनल कोर । 14 मिमी पेड़ के लिए एसटीएल फाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 13: प्रत्यक्ष संयंत्र जलसेक उपकरण | एसटीएल फ़ाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 14: प्लास्टिसोल रिंग के लिए मोल्ड बनाने के लिए उपयोग किया जाने वाला पैटर्न। एसटीएल फ़ाइल। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

डीपीआई डिवाइस को पौधों में बहिर्जात यौगिक वितरण के लिए एक व्यवहार्य विधि माना जाता है, इसे विभिन्न प्रकार के ऊतक प्रकारों में मजबूत और सुसंगत यौगिक उत्थान में योगदान देना चाहिए। सीएफडीए का उपयोग करने वाले प्रयोग ने स्पष्ट रूप से एक्रोपेटल और बेसिपेटल यौगिक आंदोलन दोनों को दिखाया, साथ ही साथ पत्ती के संवहनी प्रणाली और मेसोफिल कोशिकाओं दोनों में भी। इसके अतिरिक्त, और संभवतः क्योंकि इस डीपीआई डिवाइस में उपयोग किया जाने वाला ऊब छेद यौगिक उत्थान के लिए बड़ी मात्रा में सतह क्षेत्र प्रदान करता है, सीएफडीए स्टेम के सभी वर्गों में अपेक्षाकृत समान मात्रा में मौजूद था, न कि केवल डिवाइस से सटे वाहिका के एक छोटे उप-समूह में, जैसा कि ट्रंक इंजेक्शन6 का उपयोग करके पौधों में पिछले डाई अपटेक अध्ययनों में देखा गया है।. इसके अतिरिक्त, डीपीआई डिवाइस का उपयोग करके हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन और पुष्प डाई के वितरण का परीक्षण किया गया था, और सीएफडीए के समान इन यौगिकों का वितरण देखा गया था (डेटा नहीं दिखाया गया था)। इन आंकड़ों से पता चलता है कि डिवाइस का उपयोग विभिन्न प्रकार के यौगिकों को व्यवस्थित रूप से वितरित करने के लिए किया जा सकता है जो आकार और आणविक संरचना में भिन्न होते हैं। हालांकि, यह ध्यान देने योग्य है कि पत्ती के विकास के चरण के आधार पर यौगिक उत्थान में अंतर थे, जिसमें युवा विकासशील पत्तियां पुरानी स्थापित पत्तियों की तुलना में अधिक यौगिक लेती हैं। यह सिंक बनाम स्रोत ऊतक में मौजूद वाहिका गुणों में परिवर्तन के कारण हो सकता है और किसी दिए गए प्रयोग के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए।

डीपीआई डिवाइस ने सीएफडीए, जीएफपी और फ्लोरल डाई के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए पर्याप्त यौगिक उत्थान दिखाया, और इसने क्रमशः स्ट्रेप्टोमाइसिन और इमिडाक्लोप्रिड के जीवाणुरोधी और कीटनाशक प्रभाव दिखाने के लिए पर्याप्त लिया। इन दोनों यौगिकों के परिणामस्वरूप एकल 2.0 एमएल उपचार के 1 सप्ताह बाद लक्ष्य जीव व्यवहार्यता में परिवर्तन हुआ। इन आंकड़ों से पता चलता है कि डीपीआई डिवाइस का उपयोग माइक्रोबियल और कीट कीटों के नियंत्रण के लिए विभिन्न प्रकार के यौगिकों की व्यवहार्यता का परीक्षण करने के लिए पूरे पौधे के परख में किया जा सकता है। इसके अलावा, संवहनी प्रणाली के साथ इसके सीधे संपर्क के कारण, यह उपकरण उन यौगिकों का परीक्षण करने का अवसर भी प्रदान कर सकता है जो जड़ों या एपिडर्मल कोशिकाओं द्वारा कुशलता से नहीं लिए जाते हैं। विशेष रुचि आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई) होगी, क्योंकि इसका उपयोग मेजबान पौधे, रोगज़नक़ या रोगज़नक़ वेक्टर के भीतर जीन अभिव्यक्ति को संशोधित करने के लिए किया जा सकता है। सेब और अंगूर के पौधों के ट्रंक में ड्रिल किए गए छेद के माध्यम से हेयरपिन आरएनए पेश करने वाले पिछले शोध से पता चला है कि आरएनए अणु जाइलम ऊतक तक ही सीमित थे, यह सुझाव देते हुए कि ये अणु केवल चबाने और जाइलम सैप-फीडिंग जीवों के खिलाफ प्रभावी हो सकतेहैं। यह देखते हुए कि डीपीआई डिवाइस एक समान ड्रिल-होल डिलीवरी सिस्टम का उपयोग करता है, यह कारण है कि इस डिवाइस के साथ वितरित हेयरपिन आरएनए भी जाइलम ऊतक तक सीमित हो सकता है। हालांकि, डीपीआई डिवाइस से स्ट्रेप्टोमाइसिन उपचार के बाद फ्लोएम-सीमित सीएलए के टिटर में देखी गई कमी दृढ़ता से बताती है कि यह एंटीबायोटिक फ्लोएम में मौजूद था। इसलिए, यह संभावना है कि डीपीआई डिवाइस का उपयोग करके वितरित यौगिकों का संवहनी वितरण उनके आकार और रसायन विज्ञान पर निर्भर है, और प्रत्येक अणु का मूल्यांकन व्यक्तिगत आधार पर किया जाना चाहिए।

यद्यपि बाजार पर कई व्यावसायिक रूप से उपलब्ध डीपीआई डिवाइस उपलब्ध हैं, यहां वर्णित डिवाइस को इन-हाउस निर्मित किया जा सकता है और यह परिवर्तनीय है। इस तरह, पौधों की प्रजातियों और प्रयोगात्मक डिजाइन के आधार पर आकार में सुधार और परिवर्तन किए जा सकते हैं, और यह वाणिज्यिक उत्पादों पर निर्भर नहीं है। इसके अलावा, डिवाइस पौधे से अर्ध-स्थायी रूप से जुड़ा हुआ है, जिसका अर्थ है कि किसी दिए गए यौगिक के कई उपचार कई यौगिक इंजेक्शन के साथ पौधे को घायल किए बिना समवर्ती रूप से किए जा सकते हैं। सावधानी बरतने पर, ठीक से स्थापित नहीं होने पर डिवाइस लीक हो सकता है। नतीजतन, यौगिक पौधे को वितरित करने के बजाय पर्यावरण के लिए खो जाता है। इसलिए, सेटअप के दौरान और पहले कुछ दिनों के बाद रिसाव के किसी भी संकेत के लिए डिवाइस का निरीक्षण करने के लिए देखभाल की जानी चाहिए। हालांकि पेड़ में छेद ड्रिल करना संभावित रूप से हानिकारक है, इस विधि को मजबूत और लगातार यौगिक उत्थान सुनिश्चित करने के लिए चुना गया था। इसके अतिरिक्त, इन प्रयोगों में डीपीआई डिवाइस के लगाव से पौधे के स्वास्थ्य पर कोई प्रतिकूल प्रभाव नहीं देखा गया। हालांकि, अतिरिक्त पौधों को प्रयोगात्मक डिजाइन में शामिल किया जाना चाहिए ताकि उन लोगों को प्रतिस्थापित किया जा सके जो किसी दिए गए प्रयोग के दौरान शक्ति खो सकते हैं। अंत में, चूंकि यह उपकरण यौगिकों को पेश करने के लिए निष्क्रिय प्रवाह का उपयोग करता है, इसलिए विभिन्न पौधों की प्रजातियों या एक ही प्रजाति के विकास के चरणों में तेज की दर की भविष्यवाणी करना मुश्किल हो सकता है। यह प्रयोगों को जटिल कर सकता है यदि यौगिक उत्थान की गति एक सीमित कारक है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए, प्रयोगों की योजना बनाई जानी चाहिए ताकि पौधे को 2.5 एमएल यौगिक को पूरी तरह से अवशोषित करने के लिए पर्याप्त समय प्रदान किया जाए, जिसमें 1 सप्ताह तक का समय लग सकता है। अंत में, यह डीपीआई डिवाइस सीएलएएस और इसके वेक्टर, डी सिट्री के खिलाफ रोगाणुरोधी या कीटनाशक यौगिकों की इनप्लांटा गतिविधि के तेजी से मूल्यांकन के लिए एक प्रभावी उपकरण है, इस प्रकार पहले प्रस्तुत अलग पत्ती परख23 की तुलना में पौधे के प्रदर्शन पर प्रणालीगत प्रभावशीलता और प्रभाव पर अधिक जानकारी प्रदान करता है। निस्संदेह, इस प्रणाली के लिए अनुप्रयोगों की विविधता इस अध्ययन में वर्णित विशिष्ट उपयोगों से परे अच्छी तरह से पहुंचती है।

Disclosures

लेखकों के हितों का कोई टकराव नहीं है। इस प्रकाशन में व्यापार, फर्म या निगम के नामों का उपयोग पाठक की जानकारी और सुविधा के लिए है। इस तरह के उपयोग में संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि विभाग या कृषि अनुसंधान सेवा द्वारा किसी भी उत्पाद या सेवा के आधिकारिक समर्थन या अनुमोदन का गठन नहीं किया जाता है। अमेरिकी कृषि विभाग (यूएसडीए) जाति, रंग, राष्ट्रीय मूल, आयु, विकलांगता के आधार पर अपने सभी कार्यक्रमों और गतिविधियों में भेदभाव को प्रतिबंधित करता है, और जहां लागू होता है, लिंग, वैवाहिक स्थिति, पारिवारिक स्थिति, माता-पिता की स्थिति, धर्म, यौन अभिविन्यास, आनुवंशिक जानकारी, राजनीतिक विश्वास, प्रतिशोध, या क्योंकि किसी व्यक्ति की आय का पूरा या हिस्सा किसी भी सार्वजनिक सहायता कार्यक्रम से प्राप्त होता है। सभी निषिद्ध आधार सभी कार्यक्रमों पर लागू नहीं होते हैं। विकलांग व्यक्ति जिन्हें कार्यक्रम की जानकारी (ब्रेल, बड़े प्रिंट, ऑडियोटेप, आदि) के संचार के लिए वैकल्पिक साधनों की आवश्यकता होती है, उन्हें यूएसडीए के लक्ष्य केंद्र से (202) 720-2600 (आवाज और टीडीडी) पर संपर्क करना चाहिए। भेदभाव की शिकायत दर्ज करने के लिए, यूएसडीए, निदेशक, नागरिक अधिकार कार्यालय, 1400 इंडिपेंडेंस एवेन्यू, एसडब्ल्यू, वाशिंगटन, डीसी 20250-9410 को लिखें, या (800) 795-3272 (आवाज) या (202) 720-6382 (टीडीडी) पर कॉल करें। यूएसडीए एक समान अवसर प्रदाता और नियोक्ता है।

Acknowledgments

लेखक इस अध्ययन में उपयोग किए गए पौधों के लिए मांट एकॉन को धन्यवाद देना चाहते हैं। वित्त पोषण अमेरिकी कृषि विभाग (यूएसडीए) सीआरआईएस परियोजना 8062-22410-007-000-डी और यूएसडीए एनआईएफए अनुदान 2020-70029-33176 द्वारा प्रदान किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.5 cm Diameter Steel Balls Ballistic Products Inc. #SHT #T
10 mL Luer-Lok Syringe Becton Dickinson 382903029952
20 G 1 Syringe Needle Becton Dickinson 305175
2 mL Screw Cap Tubes USA Scientific 1420-9710
3/32nd Inch Black Oxide Drill Bit Sears 964077
3D Printer Markforged F-PR-2027
3D Printing Software Markforged F-SW-FDVX
3D Printing Software Markforged S-FW-OEVX
5(6)-CFDA (5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate) Invitrogen C195
5/64th Inch Black Oxide Drill Bit Sears 964502
96 Well qPCR Machine Roche 5815916001
Centrifuge Eppendorf 22621408
Fluorescent Microscope Olympus SP-BX43-BI
Fluorescent Microscope Filter Chroma 69401-ET
Gloss Clear Spray Paint Rustoleum 249117
Grey Lego Baseplate Lego 11024
Handheld Cordless Drill Makita 6349D
Homogenizer Fisher Scientific 15-340-163
Imidacloprid 2F Quali-Pro 83080133
Liquid Plastisol Medium Hardness Fusion X Fishing Lures XSOL-505
Red Silicone 70 Shore A O-Ring Grainger Varies by Size
Non-Stick Cooking Spray PAM 64144030217
NucleoSpin Plant II Macherey-Nagel 740770.5
Parafilm Bemis HS234526A
Poly Viyl Acetate Based Glue Elmers E301
qPCR Master Mix Promega A6001
qPCR Primers Integrated DNA Technologies Varies by DNA sequence
Reverse Transcriptase Promega A5003
Single Edge Razor Blade Garvey 40475
Translucent Silicone RTV Rubber Aero Marine Products AM 115T
Transparent Silicone Tape Maxwell KE30S
Truncated Oncocin 112 Genscript Varies by peptide sequence
White 1 x 6 Lego Piece Lego 300901
White Nylon Markforged F-MF-0003

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hu, J., Wang, N. Evaluation of the spatiotemporal dynamics of oxytetracycline and its control effect against citrus huanglongbing via trunk injection. Phytopathology. 106 (12), 1495-1503 (2016).
  2. Bendix, C., Lewis, J. D. The enemy within: Phloem-limited pathogens. Molecular Plant Pathology. 19 (1), 238-254 (2018).
  3. Keshavareddy, G., Kumar, A. R. V., Ramu, V. S. Methods of plant transformation- A review. International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. 7 (7), 2656-2668 (2018).
  4. Qaim, M. Role of new plant breeding technologies for food security and sustainable agricultural development. Applied Economics Perspectives and Policy. 42 (2), 129-150 (2020).
  5. Siegrist, M., Hartmann, C. Consumer acceptance of novel food technologies. Nature Food. 1 (6), 343-350 (2020).
  6. Larson, D. W., Doubt, J., Matthes-Sears, U. Radially sectored hydraulic pathways in the xylem of Thuja occidentalis as revealed by the use of dyes. International Journal of Plant Sciences. 155 (5), 569-582 (1994).
  7. Mehdi, R., et al. Symplasmic phloem unloading and radial post-phloem transport via vascular rays in tuberous roots of Manihot esculenta. Journal of Experimental Botany. 70 (20), 5559-5573 (2019).
  8. Miller, G. S., Parente, R. M., Santra, S., Gesquiere, A. J. Tracking of fluorescent antibiotic conjugate in planta utilizing fluorescence lifetime imaging. Planta. 253 (2), (2021).
  9. Treydte, K., Lehmann, M. M., Wyczesany, T., Pfautsch, S. Radial and axial water movement in adult trees recorded by stable isotope tracing. Tree Physiology. 41 (12), 2248-2261 (2021).
  10. Nie, P. Liping Hu, Haiyan Zhang, Jixiang Zhang, Zhenxian Zhang, Lingyun Zhang, The predominance of the apoplasmic phloem-unloading pathway is interrupted by a symplasmic pathway during Chinese jujube fruit development. Plant and Cell Physiology. 51 (6), 1007-1018 (2010).
  11. Jiang, M., Deng, Z., White, R. G., Jin, T., Liang, D. Shootward movement of CFDA tracer loaded in the bottom sink tissues of Arabidopsis. Journal of Visualized Experiments. (147), e59606 (2019).
  12. Liu, H., Si, C., Shi, C., Wang, S. Zhe Sun, Yanxi Shi, from apoplasmic to symplasmic phloem unloading during storage roots formation and bulking of sweet potato. Crop Science. 59 (2), 675-683 (2019).
  13. Erdos, T., Ullmann, A. Effect of streptomycin on the incorporation of amino-acids labeled with carbon-14 into ribonucleic acid and protein in a cell-free system of a Mycobacterium. Nature. 183 (4661), 618-619 (1959).
  14. Bové, J. M. Huanglongbing: A destructive, newly-emerging, century-old disease of citrus. Journal of Plant Pathology. 88 (1), 7-37 (2006).
  15. Motaung, T. E. Chloronicotinyl insecticide imidacloprid: Agricultural relevance, pitfalls and emerging opportunities. Crop Protection. 131, 105097 (2020).
  16. Berger, C., Laurent, F. Trunk injection of plant protection products to protect trees from pests and diseases. Crop Protection. 124, 104831 (2019).
  17. Archer, L., Crane, J. H., Albrecht, U. Trunk injection as a tool to deliver plant protection materials-An overview of basic principles and practical considerations. Horticulturae. 6 (6), 552 (2022).
  18. Wise, J. C., et al. Trunk injection: A discriminating delivering system for horticulture crop IPM. Entomology, Ornithology & Herpetology: Current Research. 03 (2), (2014).
  19. Ammar, E. D., George, J., Sturgeon, K., Stelinski, L. L., Shatters, R. G. Asian citrus psyllid adults inoculate Huanglongbing bacterium more efficiently than nymphs when this bacterium is acquired by early instar nymphs. Scientific Reports. 10 (1), 18244 (2020).
  20. Stover, E., Mccollum, G., Ramos, J., Shatters, R. G. Growth, health and Liberibacter asiaticus titer in diverse citrus scions on mandarin versus trifoliate hybrid rootstocks in a field planting with severe Huanglongbing. Proceedings of the Florida State Horticultural Society. 127, 53-59 (2014).
  21. Akaike, H. A new look at the statistical model identification. IEEE Transactions on Automatic Control. 19 (6), 716-723 (1974).
  22. Dalakouras, A., Jarausch, W., Buchholz, G., Bassler, A., Braun, M., Manthey, T., Krczal, G., Wassenegger, M. Delivery of hairpin RNAs and small RNAs into woods and herbaceous plants by trunk injection and petiole absorption. Frontiers in Plant Science. 9, 1253 (2018).
  23. Ammar, E. D., Walter, A. J., Hall, D. G. New excised-leaf assay method to test inoculativity of Asian citrus psyllid (Hemiptera: Psyllidae) with Candidatus Liberibacter asiaticus associated with citrus Huanglongbing disease. Journal of Economic Entomology. 106 (1), 25-35 (2013).

Tags

जीव विज्ञान अंक 196
पौधों में अणु वितरण के लिए प्रत्यक्ष जलसेक उपकरण
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Rhodes, B. H., Stange, R. R.,… More

Rhodes, B. H., Stange, R. R., Zagorski, P., Hentz, M. G., Niedz, R. P., Shatters, R. G., Pitino, M. Direct Infusion Device for Molecule Delivery in Plants. J. Vis. Exp. (196), e65194, doi:10.3791/65194 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter