Summary
यहां, हम चूहे के मॉडल के लिए तेजी से, आसान और विश्वसनीय रक्त संग्रह विकल्प प्रदान करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हम संदर्भ के अनुसार तीन अलग-अलग रक्त नमूना विधियों का वर्णन करते हैं: संज्ञाहरण के तहत या एक सचेत जानवर पर पूंछ की नस पंचर, और संज्ञाहरण के तहत पृष्ठीय शिश्न नस पंचर।
Abstract
विभिन्न हेमेटोलॉजिकल मापदंडों का आकलन करने के लिए अधिकांश प्रयोगात्मक पशु डिजाइनों में रक्त के नमूनों की आवश्यकता होती है। यह पेपर चूहों में रक्त संग्रह के लिए दो प्रक्रियाओं को प्रस्तुत करता है: पार्श्व पूंछ की नस पंचर और पृष्ठीय पेनाइल नस पंचर, जो पहले से वर्णित अन्य तकनीकों पर महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करते हैं। इस अध्ययन से पता चलता है कि ये दो प्रक्रियाएं तेजी से नमूने (10 मिनट से कम) की अनुमति देती हैं और अधिकांश परखों (202 μL ± 67.7 μL) के लिए पर्याप्त रक्त की मात्रा उत्पन्न करती हैं। पृष्ठीय शिश्न नस पंचर को संज्ञाहरण के तहत किया जाना चाहिए, जबकि पार्श्व पूंछ की नस पंचर एक जागरूक, संयमित जानवर पर किया जा सकता है।
इसलिए, इन दो तकनीकों को बारी-बारी से, किसी भी स्थिति में रक्त खींचने में सक्षम बनाता है। जबकि पशु कल्याण सुनिश्चित करने के लिए एक प्रक्रिया के दौरान एक ऑपरेटर की सहायता करने की हमेशा सिफारिश की जाती है, इन तकनीकों को केवल एक ही ऑपरेटर की आवश्यकता होती है, अधिकांश रक्त नमूना करण विधियों के विपरीत जिन्हें दो की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, जबकि इन पहले वर्णित तरीकों (जैसे, जुगुलर स्टिक, सबक्लेवियन नस रक्त ड्रा) को जानवर को नुकसान या मृत्यु से बचने के लिए व्यापक पूर्व प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, पूंछ की नस और पृष्ठीय शिश्न नस पंचर शायद ही कभी घातक होते हैं। इन सभी कारणों से, और संदर्भ के अनुसार (उदाहरण के लिए, नर चूहों सहित अध्ययन के लिए, पेरीओपरेटिव या तत्काल पोस्टऑपरेटिव अवधि के दौरान, पतली पूंछ नसों वाले जानवरों के लिए), दोनों तकनीकों का उपयोग बार-बार रक्त खींचने को सक्षम करने के लिए वैकल्पिक रूप से किया जा सकता है।
Introduction
विवो और इन विट्रो दोनों में अधिकांश जानवरों के अध्ययन के लिए रक्त का नमूना आवश्यक है। चूहों में, जैसा कि रक्त के नमूने की आवृत्ति और मात्रा महत्वपूर्ण हो सकती है, संग्रह के लिए विभिन्न विकल्प होना सहायक होता है। पिछले अध्ययनों में विभिन्न तरीकों का वर्णन किया गया है।
सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकें पूंछ की नस पंचर और सफेनोस नस रक्त ड्रॉ हैं। पूंछ की नस का नमूना सभी चूहे उपभेदों के लिए उपयुक्त है। उचित प्रशिक्षण के साथ, प्रक्रिया प्रदर्शन करने के लिए सरल हैऔर पशु को न्यूनतम संकट का कारण बनती है। इसी तरह, सफेनोस नस रक्त ड्रा, बशर्ते इसे ठीक से किया जाए, भी एक त्वरित और सरल संग्रह विधि है। न तो विधि को संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, और दोनों रक्त की छोटी मात्रा के बार-बार खींचने की अनुमति देते हैं। हालांकि, सैफेनोस नस पंचर आमतौर पर कम रक्त की मात्रा1 उत्पन्न करता है और पंचर2 के लिए एक हिंदलिम्ब को उजागर करने के लिए दो लोगों की उपस्थिति की आवश्यकता होती है।
यदि किसी एक जानवर से बड़ी मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है, तो कार्डियक पंचर या वेना कावा के पंचर का उपयोग किया जा सकता है (कार्डियक पंचर2 के साथ 150 ग्राम चूहे से 10 एमएल तक रक्त निकाला जा सकता है)। इन तकनीकों को संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है और टर्मिनल प्रक्रियाएं हैं। इनदो तकनीकों में से किसी एक के बाद जानवर को इच्छामृत्यु दी जानी चाहिए। जुगुलर स्टिक एक विकल्प है जिसका उपयोग किया जा सकता है यदि किसी अध्ययन में बड़ी मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है जो अभी तक अपने समापन बिंदु तक नहीं पहुंचा है। हालांकि, इस तकनीक को जानवर को नुकसान से बचने के लिए महत्वपूर्ण तकनीकी कौशल की भी आवश्यकता होती है; इसलिए, इसकाउपयोग सीमित होना चाहिए।
अन्य तकनीकें, जैसे कि सबक्लेवियन नस रक्त ड्रा, रक्त संग्रह से पहले एनेस्थेटिक्स के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है और रक्त की छोटी मात्रा के बार-बार नमूने की अनुमति देती है। हालांकि, इस तकनीक के लिए संयमित हैंडलिंग और उचित सुई चीरा की आवश्यकता होती है। एक अनुचित ऑपरेशन के परिणामस्वरूप जानवरों में दर्द या यहां तक कि मृत्यु दर भी हो सकती है, और इस विधि के लिए प्रशिक्षण तेज होसकता है।
अन्य उपाख्यानात्मक प्रक्रियाओं में कक्षीय पंचर और सबलिंगुअल नस पंचर शामिल हैं, जिनमें से दोनों को एनेस्थेटिक की आवश्यकता होती है, और न तो अनुशंसित और न ही व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। हालांकि पिछले अध्ययनों ने पूंछ की नस पंचर की तुलना में कक्षीय पंचर द्वारा तेजी से रक्त संग्रह दिखाया है, यह पाया गया कि डायथाइल-ईथर संज्ञाहरण के तहत कक्षीय पंचर बाद की विधि (जानवरों के उत्तेजना स्कोर और मूत्र उत्पादन के आधार पर) की तुलना में कम अच्छी तरह से सहन किया गया था। इसके अलावा, यह विधि उस व्यक्ति के कौशल से अत्यधिक प्रभावित होती है जो प्रक्रिया करता है और मुख्य रूप से अनुभवी पशु चिकित्सकों द्वारा किया जाता है। तुलनात्मक रूप से, सबलिंगुअल नस पंचर कम परेशान करने वाला है और बार-बार रक्त केनमूने के लिए अनुशंसित है। हालांकि, यह तकनीक कम भोजन और पानी का सेवन जैसे गंभीर प्रतिकूल प्रभाव प्रस्तुत करती है, जिससे जानवरकी मृत्यु हो सकती है।
यह अध्ययन बार-बार रक्त के नमूने के लिए हमारी प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले दो तरीकों का वर्णन करता है। पूंछ की नस पंचर एक जागरूक जानवर पर किया जा सकता है, और ऊतक क्षति और प्रतिकूल प्रभाव न्यूनतम हैं। इस अध्ययन में इस तकनीक के संशोधन में इंडेक्स और मध्य उंगली के साथ पूंछ को स्थिर करना शामिल है, जो एक एकल ऑपरेटर को रक्त संग्रह करने की अनुमति देता है। पृष्ठीय शिश्न शिरा पंचर पहले से ही सरल अंतःशिरा इंजेक्शन के लिए वर्णित किया गया है। यह तकनीक संज्ञाहरण के तहत की जाती है और अन्य तरीकों के साथ कठिनाइयों के मामले में एक विश्वसनीय रक्त स्रोत की अनुमति देती है (उदाहरण के लिए, तत्काल पोस्टऑपरेटिव अवधि के दौरान, एक छोटे जानवर के साथ, संज्ञाहरण के तहत पेरीओपरेटिव रक्त ड्रॉ करते समय)। पूंछ की नस के नमूने के समान, पंचर साइट पर चोट का ऊपर उल्लिखित तकनीकों की तुलना में जानवर पर मामूली समग्र प्रभावपड़ेगा। इस विधि पत्र का उद्देश्य अनुभवहीन शोधकर्ताओं को संदर्भ के अनुसार सरल और विश्वसनीय रक्त नमूना विकल्प प्रदान करना है (उदाहरण के लिए, संज्ञाहरण के तहत की गई प्रक्रियाओं के लिए, नर चूहों सहित अध्ययन के लिए, पतली पूंछ नसों वाले जानवरों के लिए)।
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Protocol
प्रक्रियाओं को 3 महीने के नर लुईस चूहों पर किया गया था, जिनमें से प्रत्येक का वजन 300-400 ग्राम था। कुल 24 जानवरों को शामिल किया गया था, जिसमें तीन पंचर स्थितियां थीं: 12 चूहों को एनेस्थीसिया के बिना पूंछ की नस पंचर (संज्ञाहरण के बिना समूह टीवी) से गुजरना पड़ा, और अन्य 12 चूहों को पूंछ की नस पंचर (संज्ञाहरण के साथ समूह टीवी) और पेनाइल नस पंचर (संज्ञाहरण के साथ समूह पीवी) दोनों से गुजरने के लिए एनेस्थेटाइज्ड किया गया। सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) दिशानिर्देशों को मंजूरी दी गई और उनका सम्मान किया गया। अध्ययन के अंत में (1 महीने के फॉलो-अप के बाद) कार्बन डाइऑक्साइड ओवरडोज द्वारा सभी जानवरों को मार दिया गया था। इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियों और उपकरणों से संबंधित विवरण के लिए सामग्री की तालिका देखें।
1. सामान्य दिशानिर्देश
- आईएसीयूसी दिशानिर्देशों के अनुरूप, सुनिश्चित करें कि खींची गई अधिकतम रक्त मात्रा हर 2 सप्ताहमें कुल रक्त की मात्रा के 10% से अधिक नहीं है। उदाहरण के लिए, 300 ग्राम के चूहे में लगभग 19.2 एमएल की कुल रक्त मात्रा होनी चाहिए। अकेले पहले सप्ताह (दिन 0, दिन 1, दिन 3, दिन 7) में चार रक्त खींचने की आवश्यकता वाले प्रोटोकॉल के मामले में, संग्रह को प्रति नमूना अधिकतम 250 μL रक्त तक सीमित करें।
- संज्ञाहरण के तहत की जाने वाली प्रक्रियाओं के लिए, जानवर को एनेस्थेटाइज करने के लिए एक सटीक वेपोराइज़र के माध्यम से आइसोफ्लुरेन का प्रशासन करें। 5 मिनट के लिए 3% -5% आइसोफ्लुरेन की खुराक के साथ एक कक्ष में संज्ञाहरण को प्रेरित करें, और प्रक्रिया के दौरान नाक शंकु के माध्यम से 1% -3% आइसोफ्लुरेन की खुराक का उपयोग जारी रखें। श्वसन दर की निरंतर निगरानी के आधार पर आइसोफ्लुरेन स्तर को समायोजित करें। प्रक्रिया शुरू करने से पहले सत्यापित करें कि क्या बेहोशी की दवा पैर की अंगुली से पर्याप्त है।
- प्रक्रिया के दौरान जानवर को लावारिस न छोड़ें या जब तक कि वह उरोस्थि की स्थिरता बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न कर ले।
- रक्त संग्रह के बाद, जानवर को उसके पिंजरे में वापस करने से पहले पूरी तरह से ठीक होने तक निगरानी करें, और पूरी तरह से ठीक होने तक इसे अन्य जानवरों की कंपनी में पेश न करें।
नोट: पशु चिकित्सा सेवाओं के साथ समझौते में, पूंछ की नस या पेनाइल नस पंचर के बाद कोई पोस्ट-प्रक्रिया दर्द दवा आवश्यक नहीं थी।
2. पेनाइल नस से रक्त खींचता है
- तैयारी
- निम्नलिखित उपकरण तैयार करें: बाँझ धुंध, दस्ताने, अल्कोहल वाइप्स, एक माइक्रोकेशिका रक्त संग्रह ईडीटीए ट्यूब (बैंगनी टोपी), और एक 30 ग्राम इंसुलिन सिरिंज (30 यू या 50 यू)।
- चूहे को उसके पिंजरे से बाहर निकालें, और इसे एक सटीक वेपोराइज़र (खुराक: 3% -5%) के माध्यम से आइसोफ्लुरेन के साथ प्रेरण के लिए एक कक्ष में रखें। एक बार जब जानवर बेहोश हो जाता है, तो इसे प्रक्रिया तालिका में स्थानांतरित करें, और संज्ञाहरण को बनाए रखने के लिए नाक शंकु में अपनी नाक के साथ जानवर को अपनी पीठ पर रखें। श्वसन दर की निगरानी करें, और तदनुसार आइसोफ्लुरेन स्तर को समायोजित करें (रखरखाव खुराक: 1% -3%)। सत्यापित करें कि प्रक्रिया शुरू करने से पहले जानवर पैर की अंगुली की चुटकी से पर्याप्त रूप से बेहोश है।
- रक्त का नमूना
- निकासी को सुचारू बनाने के लिए प्लंजर को सिरिंज में कई बार आगे और पीछे ले जाएं। कुछ माइक्रोलीटर को हटाने के लिए प्लंजर पर खींचकर सिरिंज में नकारात्मक दबाव बनाएं।
- गैर-प्रमुख हाथ की मदद से, लिंग के अंत से चमड़ी को पीछे हटाएं, और धीरे से खींचते हुए इंडेक्स और अंगूठे के बीच ग्लांस को पकड़ें। पृष्ठीय शिश्न नस एक सतही नीली नाल के रूप में दिखाई देगी। चित्र 1 और चित्र 2 देखें।
- सुई की आंख को ऊपर की ओर इंगित करते हुए, इंसुलिन सिरिंज को 35 ° के कोण पर नस में डालें। एक बार जब सुई नस में प्रवेश कर जाती है, तो रक्त सिरिंज में बह जाएगा।
- वांछित मात्रा एकत्र करने के लिए धीमी और स्थिर दर पर धीरे-धीरे सिरिंज के प्लंजर को वापस लें।
नोट: प्लंजर को बहुत तेजी से वापस न लें, क्योंकि इससे नस ढह जाएगी और रक्त प्रवाह बंद हो जाएगा। - यदि रक्त प्रवाह कम हो जाता है, तो सुई को थोड़ा घड़ी या प्रतिघड़ी की दिशा में घुमाएं।
- सिरिंज को हटा दें। पंचर साइट पर एक रक्त की बूंद बनेगी, जिसकी आकांक्षा एक गैर-बाँझ प्रक्रिया के मामले में कुछ और माइक्रोलीटर रक्त के संग्रह की अनुमति देगी।
- यदि पहला पंचर विफल हो जाता है, तो सुई को नस पर अधिक समीपस्थ रूप से पुन: डालें।
नोट: पूंछ की नस के नमूने के विपरीत, पृष्ठीय शिश्न नस का पुनरावृत्ति पंचर आमतौर पर असफल होता है। - रक्तस्राव को रोकने के लिए पंचर साइट पर हल्का दबाव लागू करें, और एक नए अल्कोहल वाइप के साथ क्षेत्र को पोंछ दें।
- लिंग को वापस उसकी तटस्थ स्थिति में रखें।
- आइसोफ्लुरेन को बंद करें, और पूरी तरह से ठीक होने तक चूहे की निगरानी करें। चूहे को उसके पिंजरे में लौटा दें।
3. पूंछ की नस पंचर
- तैयारी
- निम्नलिखित उपकरण तैयार करें: एक प्लास्टिक निरोधक धारक, बाँझ धुंध, दस्ताने, अल्कोहल वाइप्स, एक माइक्रोकेशिका रक्त संग्रह ईडीटीए ट्यूब (बैंगनी टोपी), और एक 28 ग्राम 1/2 इंसुलिन सिरिंज (30 यू या 50 यू)।
- चूहे को उसके पिंजरे से बाहर निकालें, और जल्दी से इसे प्लास्टिक निरोधक शंकु में सुरक्षित करें। शंकु के बड़े छोर को पूंछ के आधार के चारों ओर बंद करें। सुनिश्चित करें कि जानवर आरामदायक है और पूरी प्रक्रिया के दौरान श्वास अप्रतिबंधित है।
- नस को पतला करने के लिए लगभग 1 मिनट के लिए गर्म पानी (37 डिग्री सेल्सियस) में पूंछ डुबोएं। एक पेपर टॉवल से पूंछ को सुखाएं। जानवर (उसके निरोधक में) को नीचे रखें, पूंछ को हीटिंग पैड पर लेटे हुए।
- पूरे जानवर को दोनों तरफ घुमाकर नमूने के लिए दाईं या बाईं पूंछ की नस (नीली रेखा) का चयन करें (यह पूंछ के घुमाव से बचाता है)। रक्त वाहिका ओं के निर्माण के लिए पूंछ के टर्मिनल तीसरे का उपयोग करें क्योंकि इस क्षेत्र में वाहिकाएं अधिक सतही हो जाती हैं। धमनी उदर है, और दो नसें पार्श्व10 हैं।
- पंचर साइट पर 70% इथेनॉल वाइप्स के साथ पूंछ को पोंछें।
- पूंछ के टर्मिनल तीसरे में एक कोण बनाने के लिए हीटिंग पैड के किनारे पर पूंछ रखें। यह नस को सतह पर लाता है और नमूना लेने के लिए अधिक जगह बनाता है।
- रक्त का नमूना
- निकासी को सुचारू बनाने के लिए प्लंजर को सिरिंज में कई बार आगे और पीछे ले जाएं। कुछ माइक्रोलीटर को हटाने के लिए प्लंजर पर खींचकर सिरिंज में नकारात्मक दबाव बनाएं।
- नॉन-डोमिनेंट इंडेक्स और मिडिल फिंगर की मदद से हीटिंग पैड पर टेल फ्लैट को सुरक्षित करें। इन दो उंगलियों के बीच पंचर साइट के साथ, मध्य उंगली को समीपस्थ और तर्जनी उंगली को बाहर रखें। पूंछ को सुरक्षित करने के लिए इंडेक्स की तुलना में मध्य उंगली पर अधिक दबाव लागू करें, पोत को केवल समीपस्थ रूप से बंद करें और रक्त को पूल करने की अनुमति दें। चित्र 1 और चित्र 3 देखें।
- सुई की आंख को ऊपर की ओर इंगित करते हुए, इंसुलिन सिरिंज को इंडेक्स फिंगर के खिलाफ तब तक स्लाइड करें जब तक कि इसे नस में नहीं डाला जाता है (यह सुई और पूंछ के बीच 35 ° का कोण बनाता है)। एक बार जब सुई नस में प्रवेश कर जाती है, तो रक्त सिरिंज में बह जाएगा। इस बिंदु पर, यह सुनिश्चित करने के लिए इंडेक्स और मध्य उंगली पर दबाव छोड़ें कि रक्त प्रवाह अवरुद्ध नहीं है।
- वांछित मात्रा एकत्र करने के लिए धीरे-धीरे सिरिंज के प्लंजर को स्थिर दर पर वापस लें।
नोट: प्लंजर को बहुत तेजी से वापस न लें; इससे नस ढह जाएगी और रक्त प्रवाह रुक जाएगा। - यदि रक्त प्रवाह कम हो जाता है, तो सुई को किसी भी दिशा में थोड़ा घुमाएं।
- सिरिंज को पूंछ से हटा दें। पूंछ के पंचर साइट पर एक रक्त की बूंद बन जाएगी। इस रक्त की आकांक्षा एक गैर-बाँझ प्रक्रिया के मामले में कुछ और माइक्रोलीटर रक्त के संग्रह की अनुमति देती है।
- यदि पहला पंचर विफल हो जाता है, तो सुई को नस पर अधिक समीपस्थ रूप से पुन: डालें।
नोट: पूंछ के आधार के करीब पहुंचने पर नस उत्तरोत्तर अधिक गहन हो जाती है। यदि सिरिंज में रक्त प्रवाह नहीं है, तो सिरिंज और पूंछ के बीच का कोण बढ़ाएं, या सुई घुमाएं। - रक्तस्राव को रोकने के लिए पंचर साइट पर दबाव लागू करें, और एक नए अल्कोहल वाइप के साथ क्षेत्र को पोंछ दें। प्लास्टिक शंकु से चूहे को निकालें, और इसे अपने पिंजरे में वापस कर दें।
- एनेस्थीसिया के तहत पूंछ की नस पंचर
- संज्ञाहरण को प्रेरित करने और बनाए रखने के लिए चरण 2.1.1 और चरण 2.1.2 निष्पादित करें।
- रक्त संग्रह के लिए चरण 3.1.3-3.2.7 करें; चित्र 1 देखें।
- पशु पुनर्प्राप्ति के लिए चरण 2.2.10 निष्पादित करें।
चित्रा 1: इस प्रोटोकॉल में विभिन्न पंचर विधियों के योजनाबद्ध। (ए) एक जागरूक, संयमित जानवर पर संशोधित पूंछ की नस पंचर; (बी) संज्ञाहरण के तहत संशोधित पूंछ की नस पंचर और पेनाइल नस पंचर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Representative Results
सफलता को 10 मिनट (पंचर समय से रक्त संग्रह के अंत तक) में कम से कम 100 μL रक्त देने वाले रक्त खींचने के रूप में परिभाषित किया गया था, और विफलता को 100 μL से कम रक्त देने वाले रक्त खींचने या आवश्यक रक्त की मात्रा को पुनः प्राप्त करने में 10 मिनट से अधिक समय लेने के रूप में परिभाषित किया गया था। प्रति नमूने अधिकतम 250 μL रक्त की अनुमति दी गई थी। सांख्यिकीय विश्लेषण कई तुलनाओं और ची-स्क्वायर परीक्षण के लिए एक-तरफ़ा एनोवा परीक्षण का उपयोग करके आयोजित किए गए थे। डेटा को मानक विचलन ± औसत मूल्य के रूप में प्रस्तुत किया गया था, और सांख्यिकीय महत्व निर्धारित करने के लिए पी < 0.05 का उपयोग कट-ऑफ के रूप में किया गया था।
सफलता दर की तुलना ने सचेत चूहों (92%) में पूंछ की नस पंचर और संज्ञाहरण (83%) (पी = 0.0543) के तहत पेनाइल नस पंचर के लिए समान परिणाम दिखाए, जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है। दिलचस्प बात यह है कि संज्ञाहरण के तहत, पूंछ की नस बहुत अविश्वसनीय हो गई, और संज्ञाहरण के तहत पूंछ की नस पंचर की इस अध्ययन में केवल 25% सफलता दर थी, शायद नस के पतले होने के कारण। संज्ञाहरण के मामले में, पेनाइल नस पंचर नमूने के लिए पूंछ की नस पंचर (पी < 0.0001) की तुलना में अधिक सफल था।
हमने एनेस्थीसिया के तहत चूहों पर किए गए रक्त की मात्रा और पूंछ की नस और पृष्ठीय पेनाइल नस पंचर के बीच प्रक्रिया अवधि की तुलना की। चित्र 5 से पता चलता है कि संज्ञाहरण के बिना पूंछ की नस पंचर (217.5 μL ± 69.04 μL) और संज्ञाहरण के तहत पेनाइल नस (185.8 μL ± 66.4 μL) ने तुलनीय मात्रा में रक्त (p = 0.4966) उत्पन्न किया, और रक्त की ये मात्रा संज्ञाहरण के तहत पूंछ की नस पंचर के साथ एकत्र की गई मात्रा से काफी अधिक थी (54.4 μL ± 68.8 μL) (p < 0.000)।
प्रक्रिया की अवधि संज्ञाहरण समूह (315.2 एस ± 160 एस) के तहत पेनाइल नस पंचर और संज्ञाहरण समूह (262.5 एस ± 171 एस) (पी = 0.6632) के बिना पूंछ की नस पंचर में समान थी। चित्र 6 से पता चलता है कि दोनों समूहों में नमूना करण 6 मिनट से भी कम समय में किया गया था, जबकि संज्ञाहरण के तहत पूंछ की नस पंचर में कई विफलताओं (पी < 0.0382) के कारण 8 मिनट (500.8 एस ± 196 सेकंड) से अधिक समय लगा।
चित्र 2: पृष्ठीय शिश्न नस पंचर विधि। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: संशोधित पूंछ नस पंचर विधि। ध्यान दें कि पूंछ को नीचे रखा जाता है और पंचर साइट इंडेक्स और मध्य उंगलियों के बीच स्थित होती है। एक स्थिर पंचर कोण बनाए रखने के लिए सिरिंज को तर्जनी उंगली के खिलाफ आराम करना और स्लाइड करना चाहिए। गैर-प्रमुख हाथ का उपयोग एक जागरूक जानवर पर पूंछ के स्थिरीकरण की अनुमति देता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: संज्ञाहरण के तहत पूंछ की नस पंचर, संज्ञाहरण के तहत पेनाइल नस पंचर, और संज्ञाहरण के बिना पूंछ की नस पंचर के साथ सफलता दर<। संक्षेप: टीवी = पूंछ नस; पीवी = पेनाइल नस। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 5: तीन समूहों में प्राप्त रक्त की मात्रा (μL में) की तुलना। *** p < 0.001; कई तुलनाओं के लिए एनोवा विश्लेषण के साथ पी < 0.0001। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: नमूना अवधि (सेकंड में) की तुलना, जिसे तीन समूहों में पंचर के क्षण से रक्त ड्रॉ के अंत तक के समय के रूप में परिभाषित किया गया है। विफलता को 600 सेकंड (10 मिनट) से अधिक समय तक चलने वाली रक्त खींचने की अवधि के रूप में परिभाषित किया गया था। * पी < 0.05; ** कई तुलनाओं के लिए एनोवा विश्लेषण के साथ पी < 0.01। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
पूंछ की नस पंचर एक सचेत चूहे से रक्त प्राप्त करने के लिए एक कुशल तरीका है। हालांकि, जब कोई जानवर संज्ञाहरण के तहत होता है, तो आइसोफ्लुरेन के प्रभाव से वाहिका ऐंठन हो सकती है और पूंछ की नस पंचर अनुपयुक्तहो सकती है। जैसा कि इस अध्ययन में दिखाया गया है, इस स्थिति में एक विकल्प पेनाइल नस से रक्त एकत्र करना है, जो अधिक सफल है और कम समय में रक्त की काफी अधिक मात्रा पैदा करता है। यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि पहली कोशिश में इस विधि के साथ विफलता के मामले में, बाद के प्रयास असफल हो सकते हैं। इसके विपरीत, पूंछ की नस पंचर पहली कोशिश में कठिनाई के मामले में कई बाद के पंचर की अनुमति देता है (दो नसें होती हैं, और पूंछ पर ऊपर तक घूमने का प्रयास किया जा सकता है)1. हालांकि, पुनरावृत्ति पंचर नमूने में हेमोलिसिस का कारण बन सकता है, जो हीमोग्लोबिन और एरिथ्रोसाइट झिल्ली के आंतरिक घटकों की रिहाई के कारण परिणामों को विकृत करता है। यह विशेष रूप से सच है यदि प्लाज्मा का विश्लेषणकिया जाता है। कई पंचर से बचना और एक ही रक्त ड्रॉ में नमूना प्राप्त करना बेहतर है।
इस काम में, रक्त का नमूना इस प्रोटोकॉल और कई नमूने के मामले में पशु कल्याण का सम्मान करने के लिए आईएसीयूसी दिशानिर्देशों के अनुसार प्रति नमूना 250 μL से अधिक नहीं था। बायोएनालिटिकल तकनीकों में प्रगति ने रक्त जैव रसायन और चयापचय मापदंडों का आकलन करने के लिए 50 μL से कम के माइक्रोसैंपल के उपयोग को सक्षम किया है। इसलिए, 250 μL यह निष्कर्ष निकालने के लिए पर्याप्त है कि दोनों विधियां भविष्य के अध्ययन के लिए कुशल हैं। हालांकि, पूंछ की नस और पेनाइल नस दोनों छोटी वाहिकाएं हैं और बड़ी मात्रा में रक्त के संग्रह की अनुमति नहीं देती हैं। ये वर्णित विधियां बार-बार नमूने लेने और जीवित जानवरों की निगरानी के लिए उपयुक्त हैं। यदि बड़ी मात्रा में रक्त आवश्यक है (उदाहरण के लिए, अध्ययन के अंत की प्रक्रियाओं के लिए), अधिक रक्त देने वाले अन्य तरीकों पर विचार किया जाना चाहिए- जैसे कि कार्डियक पंचर।
ये वर्णित प्रक्रियाएं कई में से दो हैं; प्रक्रिया की हमारी पसंद कुछ फायदों से प्रेरित थी। इन दोनों तकनीकों को एक ही ऑपरेटर द्वारा किया जा सकता है। संशोधित पूंछ शिरा तकनीक में पूंछ की नस को स्थिर करने के लिए इंडेक्स और मिडिल फिंगर का उपयोग करना पूरक मानव संयम को अनावश्यक बनाता है। हालांकि, पशु के कल्याण का आकलन करना आवश्यक है, और एक पेशेवर (जैसे, एक पशु चिकित्सक या पशु चिकित्सा तकनीशियन) द्वारा सहायता हमेशा पशु को अनावश्यक दर्द या संकट के अधीन करने से बचने के लिए सिफारिश की जातीहै।
इसके अलावा, पहले वर्णित तरीकों (जैसे, जुगुलर स्टिक, सबक्लेवियन नस रक्त ड्रॉ) को जानवर के नुकसान या मृत्यु से बचने के लिए व्यापक पूर्व प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। इसके विपरीत, पूंछ की नस या पृष्ठीय शिश्न नस पंचर शायद ही कभी चूहे के लिए घातक होते हैं, भले ही अच्छी तरह से निष्पादित न हों। इस अध्ययन में दोनों तरीकों के साथ कुछ विफलताएं थीं, लेकिन कोई अन्य प्रतिकूल प्रभाव या मृत्यु नहीं देखी गई थी। पृष्ठीय पेनाइल इंजेक्शन के बाद मूत्र प्रतिधारण के कुछ मामलों की सूचना मिली है, लेकिन यह स्पष्ट नहीं है कि इंजेक्शन स्वयं या इंजेक्शन एजेंट इस परिणाम के लिए जिम्मेदार है या नहीं। अध्ययन अवधि के दौरान न तो यह प्रतिकूल प्रभाव और न ही पंचर साइट पर असामान्य उपचार या संक्रमण नोट किया गया था। इसके अलावा, जानवरों की स्थितियों के दैनिक आकलन ने किसी भी समूह में दर्द या संकट को प्रकट नहीं किया (कोई पोर्फिरीन धुंधला नहीं है, कोई वजन कम नहीं है, जानवरों को अनुसंधान टीम और पशु चिकित्सा पेशेवरों द्वारा आरामदायक माना जाता है)। हालांकि, लंबे समय तक संयम और कई पंचर पशु संकट का कारण बन सकते हैं। इससे बचने के लिए पंक्चर को दोहराने के बजाय रक्त प्रवाह धीमा होने पर सुई को घुमाना चाहिए। पूंछ की नस को कम करने के लिए गर्म पानी और हीटिंग पैड के साथ पूंछ को ठीक से गर्म करना, साथ ही इन तरीकों का अभ्यास करना, निरोधक समय को कम करने की सिफारिश की जाती है।
पूंछ की नस पंचर और पृष्ठीय पेनाइल नस पंचर विधियां तेजी से नमूने (6 मिनट से कम) की अनुमति देती हैं और अधिकांश परखों के लिए पर्याप्त रक्त की मात्रा उत्पन्न करती हैं। जब एक जागरूक जानवर पर किया जाता है, तो पूंछ की नस पंचर रक्त प्राप्त करने के लिए एक कुशल और विश्वसनीय तरीका है। हालांकि, एक बेहोश जानवर पर, एनेस्थेटिक एजेंट वाहिका ऐंठन का कारण बनते हैं, और पूंछ की नस महत्वपूर्णपतलेपन के अधीन होती है। इस परिदृश्य में, पेनाइल पृष्ठीय नस पंचर पूंछ की नस पंचर की तुलना में बेहतर सफलता दर प्रदान करता है, जो रक्त संग्रह के लिए अविश्वसनीय होता है। हालांकि, पेनाइल नस रक्त खींचने की एक सीमा यह है कि यह केवल पुरुष चूहों पर किया जा सकता है और इसलिए, महिला चूहे के अध्ययन के लिए अनुपयुक्त है। इसलिए, संदर्भ के अनुसार (यानी, जानवर का लिंग, पेरीओपरेटिव या पोस्ट-ऑपरेटिव रक्त खींचना, पतली पूंछ नसों वाले जानवर), पेनाइल नस पंचर और पूंछ की नस पंचर दोनों का उपयोग बार-बार रक्त खींचने के लिए वैकल्पिक रूप से किया जा सकता है, यहां तक कि शोधकर्ताओं द्वारा भी जिनके पास जानवरों के अध्ययन का कोई अनुभव नहीं है।
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Disclosures
किसी भी लेखक के पास घोषित करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को श्रीनर्स चिल्ड्रन बोस्टन (बी.ई.यू., के.यू., सी.एल.सी.) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। एल.सी. को "ला बोर्स डेस गुयूल्स कैसीज़", "ला बोर्स एनी रेचरचे" और "ला बोर्स डी एल'एमिकल डेस एन्सिएन्स इंटर्न्स डेस होपिटक्स डी पेरिस" द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। वाईबी को "ला बोर्स डेस गुयूल्स कैसीज़" द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। वाई.बी. और आई.एफ.वी.आर. को बच्चों के लिए श्रीनर्स हॉस्पिटल्स द्वारा वित्त पोषित किया जाता है (फैलोशिप आईडी क्रमशः # 84308-बीओएस -22 # 84302-बीओएस -21 है)। यह सामग्री आंशिक रूप से राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन द्वारा अनुदान संख्या 2008 के तहत समर्थित कार्य पर आधारित है। ईईसी 1941543। यूएस नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (R01EB028782, R56AI171958 और R01DK114506) से आंशिक समर्थन कृतज्ञता से स्वीकार किया जाता है। चित्र 1 BioRender.com के साथ बनाया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5 mL | 28 G ½ Insulin Syringes | BD | 329424 | for tail vein puncture |
| 0.5 mL | 30 G x 5/16 Insulin Syringes | BD | 320468 | for penile vein puncture |
| 250 L Microtainer blood collection tubes with K2EDTA | BD | 365974 | |
| Gauze Sponges | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine | E-Z Systems | EZ-190F | for penile vein puncture |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | for penile vein puncture |
| Nosecone for Anesthesia | World Precision Instruments | EZ-112 | for penile vein puncture |
| Rodent Restraint Cone | Harvard Apparatus | ST2 52-95-86 | for tail vein puncture |
| Small Animal Heated Operating Table (Adjustable) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| Webcol Alcohol prep pads | Simply Medical | 5110 |
References
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