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JoVE Journal Cancer Research
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Cancer Research

कैंसर के एक माउस मॉडल में शिरापरक घनास्त्रता परख

Published: January 5, 2024 doi: 10.3791/65518
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 2, 3, 1, 4,5, 1,6,7,8
1Renal Section, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 2Vascular Biology Section, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 3Division of Interventional Radiology, Department of Radiology, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 4Department of Medicine, Whitaker Cardiovascular Institute, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 5Department of Biochemistry and Cell Biology, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University, 6Veterans Affairs Boston Healthcare System, 7Institute of Medical Engineering and Sciences, Massachusetts Institute of Technology, 8Center of Cross-Organ Vascular Pathology, Department of Medicine, Chobanian and Avedisian School of Medicine, Boston University

Summary

इस लेख का उद्देश्य शिरापरक बंधाव प्राप्त करने के लिए संवहनी क्लिप का उपयोग करके, माउस कैंसर मॉडल में शिरापरक घनास्त्रता का आकलन करने के लिए एक अनुकूलित विधि प्रस्तुत करना है। अनुकूलन घनास्त्रता से संबंधित मापों में परिवर्तनशीलता को कम करता है और मानव कैंसर से जुड़े शिरापरक घनास्त्रता के लिए प्रासंगिकता को बढ़ाता है।

Abstract

यह पद्धति पत्र शिरापरक घनास्त्रता के एक कृंतक मॉडल की सर्जिकल बारीकियों पर प्रकाश डालता है, विशेष रूप से कैंसर से जुड़े घनास्त्रता (कैट) के संदर्भ में। गहरी शिरापरक घनास्त्रता कैंसर से बचे लोगों में एक आम जटिलता है और संभावित रूप से घातक हो सकती है। वर्तमान murine शिरापरक घनास्त्रता मॉडल आम तौर पर एक सिवनी का उपयोग कर अवर वेना कावा (आईवीसी) के एक पूर्ण या आंशिक यांत्रिक रोड़ा शामिल. यह प्रक्रिया रक्त और एंडोथेलियल क्षति के कुल या आंशिक ठहराव को प्रेरित करती है, जिससे थ्रोम्बोजेनेसिस ट्रिगर होता है। वर्तमान मॉडलों में थक्के के वजन में उच्च परिवर्तनशीलता, महत्वपूर्ण मृत्यु दर और लंबे समय तक सीखने की अवस्था जैसी सीमाएं हैं। यह रिपोर्ट इनमें से कुछ सीमाओं को संबोधित करने के लिए संवहनी क्लिप का उपयोग करके सर्जिकल शोधन का परिचय देती है। एक syngeneic बृहदान्त्र कैंसर xenograft माउस मॉडल का उपयोग कर, हम infrarenal vena कावा ligate अनुकूलित संवहनी क्लिप रोजगार. ये क्लिप आईवीसी बंधाव के बाद 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी के समान अवशिष्ट होंठ स्थान की अनुमति देते हैं। सिवनी विधि के साथ चूहों नियंत्रण के रूप में सेवा. संवहनी क्लिप विधि एक सुसंगत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आंशिक संवहनी रोड़ा और सिवनी विधि की तुलना में कम परिवर्तनशीलता के साथ अधिक से अधिक थक्का वजन में हुई. बड़े थक्के वजन, अधिक से अधिक थक्का द्रव्यमान, और आईवीसी ल्यूमिनल सतह क्षेत्र के लिए थक्का 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी की तुलना में संवहनी क्लिप के उच्च दबाव प्रोफ़ाइल के कारण अपेक्षित थे। दृष्टिकोण को ग्रे स्केल अल्ट्रासोनोग्राफी द्वारा मान्य किया गया था, जिसने सिवनी विधि की तुलना में संवहनी क्लिप के साथ इन्फ्रारेनल वेना कावा में लगातार अधिक थक्का द्रव्यमान का खुलासा किया। इन टिप्पणियों को इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला होने के साथ और अधिक प्रमाणित किया गया था। यह अध्ययन चूहों में एक शिरापरक घनास्त्रता मॉडल उत्पन्न करने के लिए एक बेहतर विधि प्रदान करता है, जिसे कैट की यंत्रवत समझ को गहरा करने और दवा की खोज जैसे अनुवाद संबंधी अनुसंधान में नियोजित किया जा सकता है।

Introduction

कैंसर से जुड़े शिरापरक थ्रोम्बोम्बोलिज़्म (VTE)
शिरापरक थ्रोम्बोम्बोलिज़्म (वीटीई) जोखिम सामान्य जनसंख्या 1,2,3 की तुलना में कैंसर से बचे लोगों में 4 से 7 गुना अधिक है। कैंसर के सात में से एक मरीज में यह स्थिति जानलेवा साबित होती है। वीटीई की घटना कैंसर के प्रकार और ट्यूमर के बोझ के आधार पर भिन्न होती है और अग्नाशय और गैस्ट्रिक कैंसरके रोगियों में सबसे अधिक होती है।

कैंसर रोगियों में कैंसर से जुड़े वीटीई का रोगनिरोधी महत्व है। यह कैंसर निदान के बाद पहले वर्ष में प्रतिकूल समग्र अस्तित्व के साथ जुड़ा हुआ है, यहां तक कि उम्र, दौड़ और अंतर्निहित कैंसर के चरण के समायोजन के बाद भी5. ये निष्कर्ष कैंसर से जुड़े वीटीई की जांच के महत्व और पशु मॉडल का उपयोग करके इसके तंत्र की जांच करने की आवश्यकता पर प्रकाश डालते हैं। इस क्षेत्र की अनुवाद संबंधी प्रासंगिकता को इस तथ्य से और जोर दिया जाता है कि कैंसर रोगियों में वीटीई थ्रोम्बोप्रोफिलैक्सिस और एंटीथ्रॉम्बोटिक थेरेपीके साथ रोकथाम और उपचार योग्य है।

कैंसर और शिरापरक घनास्त्रता के पशु मॉडल
कैंसर मॉडल को पारंपरिक रूप से ज़ेनोग्राफ्ट्स कहा जाता है, जो चूहों में कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन को लागू करता है। इसकी उत्पत्ति जैसी साइट पर कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन को ऑर्थोटोपिक मॉडल के रूप में संदर्भित किया जाता है, जबकि एक अलग साइट (फ्लैंक पर चमड़े के नीचे का विमान) को हेटरोटोपिक मॉडल के रूप में जाना जाता है। कैंसर कोशिकाओं की उत्पत्ति की प्रजाति उन्हें एचटी-29 सेल लाइन (मानव बृहदान्त्र कैंसर)7,8,9जैसे एक एलोजेनिक मॉडल, के रूप में निर्धारित करता है. इसके विपरीत, syngeneic मॉडल murine कैंसर सेल लाइनों, RenCa और MC-38 सेल लाइनों 3,10 सहित का उपयोग करें.

साहित्य ने कृन्तकों में धमनी, शिरापरक और केशिका घनास्त्रता मॉडल का वर्णन किया है। शिरापरक घनास्त्रता अवर वेना कावा (आईवीसी) में यांत्रिक चोट (गाइड तार) या पूर्ण आईवीसी बंधाव, रासायनिक (फेरिक क्लोराइड), या इलेक्ट्रोलाइटिक चोट से प्रेरित होती है। फेरिक क्लोराइड-प्रेरित घनास्त्रता या आईवीसी बंधाव पूर्ण रोड़ा मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है। उत्तरार्द्ध रक्त के ठहराव में परिणाम और नसों में भड़काऊ घुसपैठ11,12,13. पूर्ण बंधाव मॉडल के परिणामस्वरूप 95% से 100% चूहों में घनास्त्रता गठन की उच्च दर होती है। आंशिक IVC बंधाव मॉडल पार्श्व iliolumbar शाखाओं की रुकावट शामिल हो सकता है, और शिरापरक वापसी IVC12 के बाहर का लक्ष्य अंक में सिवनी बंधाव लागू करने के द्वारा निरस्त कर दिया है. कभी-कभी, शिरापरक वापसी को आंशिक रूप से बाधित करने के लिए एक अंतरिक्ष धारक का उपयोग किया जाता है। हालांकि, थ्रोम्बस वजन वर्तमान आंशिक रोड़ा मॉडल में असंगत है, थक्का वजन और ऊंचाई12,14 में उच्च परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप.

इन दोनों बड़े नस यांत्रिक मॉडल (आंशिक और पूर्ण) की सीमाएं हैं। सबसे पहले, आईवीसी बंधाव (स्टैसिस मॉडल) अक्सर हाइपोटेंशन में परिणाम देता है। रक्त कशेरुक नसों के माध्यम से अलग हो जाता है। हालांकि अनुभवी हाथों में, इस मॉडल के साथ मृत्यु दर 5% -30% से होती है, सीखने की अवस्था के दौरान उच्च दर की उम्मीद होती है। महत्वपूर्ण रूप से, पूर्ण रोड़ा मॉडल मनुष्यों में गहरी शिरा घनास्त्रता (डीवीटी) को पुन: उत्पन्न नहीं करता है, जहां एक थ्रोम्बस आमतौर पर गैर-ऑक्लुसिव होता है। पूर्ण रोड़ा रक्तस्रावी कारकों और फार्माकोडायनामिक मापदंडों को बदलने की संभावना है, स्थानीय साइट पर यौगिकों की जैव उपलब्धता को बदल देता है। इन सीमाओं के कारण, पूर्ण रोड़ा मॉडल चिकित्सीय प्रयोजनों और दवा की खोजों12 के लिए उपन्यास रासायनिक यौगिकों के परीक्षण के लिए इष्टतम नहीं हो सकता है.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एंडोथेलियल क्षति के साथ कम प्रवाह के साथ शिरापरक घनास्त्रता का अधिक नैदानिक रूप से प्रासंगिक म्यूरिन मॉडल प्रदान करने के लिए, एक शिरापरक घनास्त्रता मॉडल पेश किया गया है, जहां एंडोथेलियल व्यवधान की अनुपस्थिति में रक्त प्रवाह के प्रतिबंध से डीवीटी शुरू होता है। मॉडल इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी15 स्कैनिंग द्वारा मान्य किया गया था. एक पसंदीदा नैदानिक रूप से प्रासंगिक घनास्त्रता मॉडल लगभग पूर्ण घनास्त्रता के साथ एक है जो दवा की खोजों को सक्षम बनाता है। वर्तमान आंशिक रोड़ा मॉडल में थक्का गठन असंगत है, थक्का वजन और ऊंचाई12,16 में उच्च परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप. इसके अलावा, थक्का वजन पारंपरिक तरीकों के साथ परिवर्तनशील है, अध्ययन12 प्रति अधिक चूहों की आवश्यकता होती है.

पिछले कैंसर से जुड़े घनास्त्रता मॉडल बृहदान्त्र, अग्नाशय, और फेफड़ों के कैंसर पर ध्यान केंद्रित और सभी पूर्ण रोड़ा मॉडल17,18,19थे. यह पांडुलिपि कम परिवर्तनशीलता और माउस मृत्यु दर(चित्रा 1)के साथ थक्के प्रदान करने के लिए आंशिक रोड़ा घनास्त्रता मॉडल को संशोधित करती है। पूर्व अध्ययनों ने इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड एथिमिक चूहों की पृष्ठभूमि 19,20,21पर एलोजेनिक कैंसर सेल लाइनों का इस्तेमाल किया। यह पांडुलिपि C57Bl6/J चूहों में MC-38 सेल सिनजेनिक ज़ेनोग्राफ्ट का उपयोग करती है, जो प्रतिरक्षात्मक चूहों के उपयोग और थ्रोम्बोजेनेसिस के लिए प्रतिरक्षा घटकों की परीक्षा की अनुमति देती है।

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Protocol

इस अध्ययन के लिए, 16 महिला C57Bl6/J चूहों, उम्र में 8-12 सप्ताह, और 20 से 25 ग्राम के शरीर के वजन का उपयोग किया गया था। चूहों को मानक परिस्थितियों में रखा गया था और उन्हें चाउ और पानी के विज्ञापन लिबिटम के साथ खिलाया गया था। यह अध्ययन बोस्टन विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) के अनुमोदन के साथ किया गया था। यहां वर्णित खुली प्रक्रियाओं को बाँझ स्थिति में किया गया था।

1. ज़ेनोग्राफ्ट मॉडल

  1. सेल संस्कृति
    1. हेटेरोटोपिक चमड़े के नीचे के आरोपण से पहले, एमसी -38 कोशिकाओं को 80% संगम के लिए एक मोनोलेयर के रूप में विकसित करें।
    2. 10% एफबीएस युक्त मीडिया में ट्रिप्सिनाइजेशन और रिसस्पेंशन के बाद, 277 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र कोशिकाओं, 5 मिन के लिए 4 डिग्री सेल्सियस। फिर, सीरम मुक्त मीडिया में कोशिकाओं को 1 x 104 MC-38 कोशिकाओं/μL सीरम-मुक्त मीडिया की एकाग्रता में फिर से निलंबित करें।
      1. ट्रिप्सिनाइजेशन के लिए, एमसी-38 कोशिकाओं को तब तक संस्कृति करें जब तक कि वे वांछित संगम (आमतौर पर लगभग 70% -80%) तक न पहुंच जाएं और फिर पेट्री डिश से संस्कृति माध्यम को महाप्राण कर दें।
      2. ट्रिप्सिन-ईडीटीए समाधान के 1 एमएल जोड़ें और टुकड़ी की अनुमति देने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 मिन के लिए ट्रिप्सिन के साथ कोशिकाओं को इनक्यूबेट करें। धीरे नल या भी टुकड़ी सुनिश्चित करने के लिए पेट्री डिश हिला.
      3. गतिविधि को बेअसर करने और आगे सेल पृथक्करण को रोकने के लिए सीरम या ट्रिप्सिन अवरोधक युक्त एक संस्कृति माध्यम जोड़ें। तटस्थ ट्रिप्सिन समाधान के साथ अलग कोशिकाओं को इकट्ठा करें।
      4. resuspension के लिए, एक बार कोशिकाओं trypsinization के माध्यम से अलग कर रहे हैं, प्रत्यारोपण या आगे प्रयोगों के लिए उन्हें तैयार. कोशिकाओं को गोली देने के लिए 277 x ग्राम पर एकत्रित सेल निलंबन को अपकेंद्रित्र करें।
      5. ध्यान से सतह पर तैरनेवाला (सेल गोली के ऊपर तरल) हटा दें. प्रत्यारोपण या प्रयोग के लिए वांछित सेल एकाग्रता प्राप्त करने के लिए सेल गोली के लिए संस्कृति माध्यम, बफर, या समाधान के 9 एमएल जोड़ें.
      6. धीरे ऊपर और नीचे pipetting या एक संस्कृति फ्लास्क प्रकार के बरतन का उपयोग करके कोशिकाओं resuspend. जोरदार पाइपिंग से बचें जो कोशिकाओं को नुकसान पहुंचा सकता है।
        नोट: उपयोग किए गए संस्करण या सेल लाइन के आधार पर, कोशिकाओं को आरोपण के बाद अत्यधिक आक्रामक माउस सेल विकास और प्रसार को धीमा करने के लिए घुलनशील तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स और सीरम मुक्त मीडिया के 1: 1 अनुपात में फिर से निलंबित किया जा सकता है। सभी सेल संस्कृति कदम एक सेल संस्कृति विशेष रूप से आवंटित अंतरिक्ष में एक पूर्ण सड़न रोकनेवाला हुड में किए जाने चाहिए और नियमित रूप से माइकोप्लाज्मा के लिए परीक्षण किया गया.
    3. प्रदान किए गए मैनुअल प्रोटोकॉल के अनुसार एक स्वचालित सेल काउंटर के साथ कोशिकाओं की गणना करें।
  2. सेल आरोपण
    1. बेतरतीब ढंग से प्रयोगात्मक समूह के लिए आठ चूहों आवंटित, और नियंत्रण समूह के लिए आठ चूहों के रूप में निम्नानुसार आवंटित. नियंत्रण समूह में, MC38 xenograft के साथ चूहों का उपयोग करें और एक पॉलीप्रोपाइलीन 5-0 सीवन के साथ आईवीसी बंधाव प्रदर्शन. प्रयोगात्मक समूह में, MC38 xenograft के साथ चूहों का उपयोग करें और एक अनुकूलित संवहनी क्लिप के साथ IVC बंधाव प्रदर्शन.
    2. माउस को बाएं पार्श्व recumbency में रखें और forelimbs और hindlimbs के बीच सही पक्ष दाढ़ी. इंजेक्शन के लिए क्षेत्र को तैयार करने के लिए पृष्ठीय काठ का क्षेत्र के साथ शराब और आयोडीन लागू करें।
    3. 2 x 106 MC-38 कोशिकाओं को पार्श्व में मध्यम के 200 μL में तैयार करें, जानवर की सबसे डिस्टल रिब और श्रोणि श्रेष्ठता के बीच आधे रास्ते में 27G सुई का उपयोग करते हुए जानवर को धीरे से पकड़े हुए गैर-प्रमुख हाथ में।
    4. इंजेक्शन के बाद, जानवरों का सावधानीपूर्वक निरीक्षण करें और उन्हें वापस पिंजरे में डाल दें। जानवरों followings के लिए निरीक्षण किया जाना चाहिए; 1. व्यवहार में परिवर्तन, गतिविधि स्तर, और चूहों की समग्र गतिशीलता. कोई भी महत्वपूर्ण परिवर्तन असुविधा या स्वास्थ्य समस्याओं का संकेत दे सकता है। 2. चूहों की समग्र शारीरिक स्थिति, फर की गुणवत्ता, संवारने की आदतों, और संकट या असामान्यताओं के किसी भी दृश्य संकेत सहित 3. भोजन की खपत और पानी के सेवन पर लौटें 4. पिंजरे के साथी के साथ उनकी गतिविधि स्तर, मुद्रा या बातचीत में कोई बदलाव। सुस्ती या बढ़ी हुई आक्रामकता संकट के संकेत हो सकते हैं।

2. ट्यूमर के विकास का अनुवर्ती

  1. 3-4 सप्ताह के लिए ट्यूमर के विकास के रुझान के लिए एक द्वि-साप्ताहिक आधार पर जानवरों की निगरानी. एक कैलिपर के साथ ट्यूमर को मापें और ट्यूमर आयामों को रिकॉर्ड करें।
    1. ट्यूमर को उनकी सबसे लंबी धुरी (L) और लंबी धुरी (W) के लंबवत अक्ष के साथ मापें। समीकरण L x (W2) = V का उपयोग करके ट्यूमर आयतन (V) की गणना करें। यदि ट्यूमर का आकार प्रत्येक आयाम में 20 मिमी से अधिक है और या ट्यूमर में अल्सर का सबूत है, तो प्रयोग की समाप्ति से पहले जानवरों को इच्छामृत्यु दें।
  2. एक बार ट्यूमर की मात्रा 400 मिमी3 तक पहुँच जाता है, आईवीसी बंधाव के लिए चूहों का उपयोग करने की योजना.

3. संज्ञाहरण और तैयारी

  1. एक isoflurane कक्ष में माउस anesthetize और चमड़े के नीचे एनाल्जेसिक इंजेक्षन: पूंछ के आधार से जानवर पकड़ो. गैर प्रमुख हाथ की पृष्ठीय सतह पर जानवर रखें.
  2. निरंतर संवेदनाहारी प्रेरण कक्ष के लिए पशु स्थानांतरण के साथ भरा 3%-4% isoflurane. एक पैर की अंगुली-चुटकी पलटा की अनुपस्थिति के साथ पर्याप्त सामान्य संज्ञाहरण की पुष्टि करें। 1% -3% आइसोफ्लुरेन की रखरखाव खुराक का उपयोग करें। दोनों आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम लागू करें।
  3. ब्यूप्रेनोर्फिन (दर्द को कम करने के लिए ओपिओइड) के साथ चमड़े के नीचे इंजेक्शन: 0.3% सोडियम क्लोराइड (NaCl) में 0.9 mg/mL की सांद्रता पर ब्यूप्रेनोर्फिन के स्टॉक को 0.03 mg/mL की सांद्रता में घोलकर 0.03 mg/mL की सांद्रता में घोलें।
  4. सर्जरी से पहले 0.05-0.1 mg/kg 0.03 mg/mL buprenorphine की खुराक को 500 μL बाँझ 0.9% NaCl के साथ चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें। 20 ग्राम माउस मात्रा में 2 μg या 66 μL 0.03 mg/mL buprenorphine की आवश्यकता होती है।
  5. त्वचा की तैयारी: हीटिंग कंबल के ऊपर एक लापरवाह स्थिति में पूरी तरह से संवेदनाहारी माउस रखें। पूर्वकाल पेट क्षेत्र को 0.5% क्लोरहेक्सिडिन टिंचर, 2x के साथ कीटाणुरहित करें। प्रक्रिया के दौरान हीटिंग कंबल के तापमान की बार-बार जांच करें और सुनिश्चित करें कि तापमान गिरता नहीं है।

4. आईवीसी बंधाव

  1. मिडलाइन लैपरोटॉमी
    1. पेट की त्वचा को बारीक कैंची से मूत्राशय तक चीरें। पेरिटोनियम आधा atraumatic संदंश के साथ त्वचा चीरा के साथ रास्ते चुटकी. चीरा और ऊपर आंतों(चित्रा 2 ए)के बीच पर्याप्त जगह सुनिश्चित करें.
    2. पेरिटोनियम को अवशिष्ट लिनिया अल्बा के साथ अनुदैर्ध्य तरीके से खोलें।
  2. आंतों को दाहिने पेट की ओर बाहरी करना
    1. गीली सूती युक्तियों के साथ आंतों को खींचो। आंतों को पूरी तरह से नम बाँझ धुंध में कवर करें। सुनिश्चित करें कि कवर आंतों mesenteric वाहिकाओं पर किसी भी अत्यधिक कर्षण के बिना एक कर्षण मुक्त दिशा में हैं.
  3. आईवीसी और शाखाओं का पूर्ण जोखिम, आईवीसी (चित्रा 2बी) के लिए बाएं गुर्दे की नस के संगम सहित।
    1. सामान्य खारा के 200-300 माइक्रोन ड्रॉप। मूत्रवाहिनी, आईवीसी, महाधमनी, और गुर्दे नसों पाठ्यक्रम (चित्रा 2) का अन्वेषण करें।
  4. अवशिष्ट तल इन्फ्रा-रीनल IVC के संगम बिंदु पर और बाएं वृक्क शिरा संगम पर।
    1. बंद टिप atraumatic संदंश के साथ cphalad आंदोलनों के लिए दुम के साथ धीरे से 2x-3x avascular विमान के माध्यम से polypropylene 6-0 सिवनी पास.
    2. सुनिश्चित करें कि किसी भी न्यूनतम रिसाव को कपास टिप टैम्पोनैड के साथ प्रदान किए गए कोमल दबाव से नियंत्रित किया जाता है। कपाल आंदोलनों के लिए कोमल दुम के साथ 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी पारित करके प्रदान किए गए विमान को चौड़ा करें।
  5. गोनाडल और काठ का शाखाओं को दागना (चित्र 2डी)
    1. 4 पीछे या काठ का शाखाएं मौजूद हो सकती हैं। रीढ़ की हड्डी ischemia और cladication की संभावित जटिलताओं से बचने के लिए, काठ का शाखाओं वर्तमान प्रोटोकॉल में बरकरार छोड़ दें.
    2. जांचें कि द्विपक्षीय गर्भाशय सींग धमनी आपूर्ति और हाइपोगैस्ट्रिक वाहिकाओं सहित 2 से 3 पक्ष शाखाएं मौजूद हैं। पहली द्विपक्षीय रूप से मौजूद शाखाओं का लगातार व्यवधान सुनिश्चित करें। द्विपक्षीय शाखाओं को बाएं गुर्दे की नस और आईवीसी (इन्फ्रा-रीनल आईवीसी) के संगम से दूर रखें। सुनिश्चित करें कि गर्भाशय के सींग के शिरापरक जल निकासी वाहिकाओं बाधित नहीं कर रहे हैं.
      नोट: साइड-ब्रांच cauterization के लिए चुना जाता है क्योंकि इस विधि एक चिकनी और निर्बाध सतह प्रदान करता है, अनियंत्रित रक्तस्राव के लिए किसी भी संभावना को कम करने. इसके अलावा, cauterization तेजी से और 10-0 टांके के साथ सिवनी बंधाव की तुलना में अधिक संभव है. इसलिए, जानवरों को एक छोटी और सुरक्षित प्रक्रिया से अवगत कराया जाएगा।
  6. किसी भी ओजिंग या अनजाने cauterizing (चित्रा 2C) की अनुपस्थिति सुनिश्चित करने के लिए मूत्रवाहिनी के पाठ्यक्रम और वाहिका की दोबारा जांच करें।
  7. प्रयोगात्मक समूह में संवहनी क्लिप के साथ आईवीसी बंधाव
    1. एट्रूमैटिक संदंश द्वारा 2-0 नायलॉन सिवनी की चौड़ाई के साथ संवहनी क्लिप को अनुकूलित करें। प्रयोगात्मक समूह में अनुकूलित संवहनी क्लिप को इन्फ्रारेनल आईवीसी के चारों ओर परिधि में लागू करें।
    2. सिवनी पर संवहनी क्लिप लागू करें. प्राथमिक सिवनी मार्ग कपाल आंदोलनों (चित्रा 2ई-एफ) के लिए दो से तीन सावधानीपूर्वक दुम के साथ एक पर्याप्त अवशिष्ट विमान प्रदान करता है।
    3. आगे तैयार विमान के माध्यम से संवहनी क्लिप पास करें। बाएं गुर्दे की नस और आईवीसी के संगम पर विमान तैयार करें ताकि एक असमान क्लिप मार्ग(चित्रा 2ई)की अनुमति मिल सके।
    4. अनुकूलित संवहनी क्लिप क्षैतिज रखें, आईवीसी पाठ्यक्रम के लंबवत, तैयार विमान के माध्यम से। पर्याप्त शेष स्थान(चित्रा 2जी)सुनिश्चित करने के लिए 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी पर संवहनी क्लिप रखें।
    5. सुनिश्चित करें कि उपरोक्त चरणों को संवहनी क्लिप की साइट पर किसी भी पोत क्षति या रक्तस्राव को रोकने के लिए धीरे से किया जाता है। संभावित ओजिंग के लिए सर्जिकल क्षेत्र का निरीक्षण करें। रिसाव के मामले में शल्य चिकित्सा क्षेत्र में कपास की नोक के साथ कोमल दबाव लागू करें।
  8. नियंत्रण समूह में सिवनी के साथ IVC बंधाव
    1. 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी के साथ सिवनी बंधाव। एक 5-0 रेशम सीवन पर तैयार विमान में इन्फ्रा-रीनल IVC के आसपास एक सर्जिकल स्क्वायर गाँठ सीवन बनाएं।
    2. एक बार सिवनी पूरा हो गया है, धीरे पर्याप्त अवशेष अंतरिक्ष सुनिश्चित करने के लिए रेशम सीवन हटा दें.
  9. सामान्य खारा के 200 माइक्रोन के चमड़े के नीचे इंजेक्शन करें।
    नोट: क्लैंप एप्लिकेशन के साथ आंशिक आईवीसी रोड़ा के लिए एक तुलनीय तकनीक प्रदान करने के लिए, होंठों के बीच जगह प्रदान करने के लिए संवहनी क्लिप को वर्तमान अध्ययन में अनुकूलित किया गया है। संवहनी क्लिप को तब बाएं गुर्दे की नस और आईवीसी के संगम में तैयार अवशिष्ट विमान में रखा जाता है।
  10. लगातार चल 4-0 vicryl सीवन के साथ laparotomy बंद.

5. इंडेक्स सर्जरी के बाद फॉलो-अप

  1. 1 घंटे के लिए लगातार ऑपरेशन के बाद पशु की निगरानी करें या जब तक संतुलन और सही क्षमता बरामद नहीं हो जाती, जो भी पूरी तरह से ठीक होने तक एक अलग साफ पिंजरे में पहले आता है।
  2. 2 दिनों के लिए दैनिक पशु की निगरानी करें। यदि जानवर व्यथित दिखता है, तो 2 दिनों के लिए दिन में दो बार इसकी निगरानी करें। प्रोटोकॉल प्रति पश्चात एनाल्जेसिया और तरल पदार्थ का प्रशासन करें।
    1. 0.03 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता प्राप्त करने के लिए 0.9% सोडियम क्लोराइड (NaCl) में 0.3 mg/mL की एकाग्रता के साथ ब्यूप्रेनोर्फिन के स्टॉक को भंग करें।
    2. सूचकांक सर्जरी के बाद पहले 48 घंटे के दौरान प्रत्येक 8 से 12 घंटे के दौरान 0.05-0.1 मिलीग्राम/एमएल 0.03 मिलीग्राम/एमएल ब्यूप्रेनोर्फिन की खुराक को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें, साथ में बाँझ 0.9% NaCl के 500 माइक्रोन के साथ। 20 ग्राम माउस में, 0.03 मिलीग्राम / एमएल ब्यूप्रेनोर्फिन के 2 माइक्रोन या 66 माइक्रोन की आवश्यकता होगी।

6. इच्छामृत्यु और थक्का युक्त IVC की कटाई

  1. एक isoflurane कक्ष में माउस संवेदनाहारी, पूंछ के आधार से जानवर पकड़ और अपने हाथ की dorsum सतह पर जानवर रखने.
  2. निरंतर संवेदनाहारी प्रेरण कक्ष के लिए पशु स्थानांतरण के साथ भरा 3%-4% isoflurane. लापरवाह स्थिति में पशु रखें.
  3. वर्णित के रूप में मूत्राशय के लिए xiphoid से शुरू एक लंबी midline laparotomy प्रदर्शन.
  4. पेट के दाईं ओर आंत को बाहरी करें और इन्फ्रा-रीनल आईवीसी(चित्रा 2जी)की सीमा तक इलियाक द्विभाजन के लिए क्लैंप किए गए आईवीसी डिस्टल को फसल दें।
  5. थक्का और ट्यूमर की फसल के बाद, गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के साथ पशु को इच्छामृत्यु दें।

7. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. माध्य, माध्यिका और मानक विचलन (एसडी) या माध्य (एसईएम) की मानक त्रुटि, 25 वें या 75 वें प्रतिशतक, या न्यूनतम और अधिकतम मूल्यों सहित मूल्यों की पूरी श्रृंखला के रूप में सांख्यिकीय विश्लेषण को उपयुक्त के रूप में प्रस्तुत करें। एक छात्र टी-परीक्षण, और उपयुक्त के रूप में एफ-परीक्षण करें। पी <0.05 स्तर पर सांख्यिकीय महत्व का आकलन करें।

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Representative Results

महिला C57Bl6/J चूहों के एक समूह, 8-12 सप्ताह की आयु, कोशिका विकास के लघुगणकीय चरण में MC-38 कोशिकाओं के साथ इंजेक्शन दिया गया था। xenografts तीसरे और चौथे सप्ताह के बाद इंजेक्शन18 के बीच तेजी से वृद्धि हुई. एक बार ट्यूमर 400 मिमी3 की औसत मात्रा तक पहुंच गया, चूहों को नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों के लिए यादृच्छिक किया गया। नियंत्रण समूह ने सिवनी के साथ आईवीसी बंधाव किया, जबकि प्रयोगात्मक चूहों को संवहनी क्लिप आवेदन के साथ आईवीसी बंधाव के अधीन किया गया। नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में ट्यूमर की मात्रा महत्वपूर्ण अंतर (353 ± 100 मिमी 3 बनाम 367 ± 46.2 मिमी3, पी = 0.445) के बिना तुलनीय थी। थक्के युक्त इलियाक नसों के द्विभाजन बिंदु के लिए इन्फ्रा-रीनल आईवीसी को 48 घंटे के बाद काटा गया था, और थक्का वजन शिरापरक थ्रोम्बोजेनेसिटी के जैविक रीडआउट के रूप में कार्य करता था। नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में सभी जानवरों में पश्चात पाठ्यक्रम गर्भाशय सींग मलिनकिरण, musculoskeletal ischemia, या निचले अंग में claudication मुद्दों के सबूत के बिना, असमान था. दूसरे लैपरोटॉमी के दौरान, कोई संवहनी क्लिप विस्थापन नहीं देखा गया था। प्रयोगों की समाप्ति से पहले कोई मृत्यु दर नहीं देखी गई थी।

सामान्यीकृत शरीर के वजन अनुपात के लिए थक्का वजन
चूंकि ज़ेनोग्राफ्ट वाले चूहों को शरीर का वजन कम करने की संभावना होती है, थक्के वजन (मिलीग्राम में) फसल के समय (दोनों मिलीग्राम में) कुल शरीर के वजन के लिए सामान्यीकृत किए गए थे। नियंत्रण चूहों (0.001453 ± 0.002666, पी-मान: 0.0019) की तुलना में प्रयोगात्मक समूह (मतलब ± एसईएम, 0.002580 ± 0.000098) में चूहों में सामान्यीकृत थक्का-से-शरीर के वजन में 1.5 गुना वृद्धि देखी गई; चित्र 3)।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख
हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन का उपयोग आईवीसी और थक्कों की जांच के लिए किया गया था। इन्फ्रारेनल वेना कावा से पैराफिन-एम्बेडेड वर्गों को एंटी-सीडी 31 (एंडोथेलियल कोशिकाओं का एक मार्कर)20 और एंटी-फाइब्रिन, और डीएपीआई(चित्रा 4ए)के साथ दाग दिया गया था।

नियंत्रण चूहों से इन्फ्रारेनल वेना कावा ने बरकरार सीडी 31 धुंधला और फाइब्रिन को आंशिक रूप से पोत के लुमेन पर कब्जा कर लिया। प्रयोगात्मक समूह में, सीडी 31 अभिव्यक्ति बरकरार नहीं थी, एंडोथेलियल सेल क्षति और प्रमुख फाइब्रिन अभिव्यक्ति के साथ एक बड़े थक्के का सुझाव देती थी। पोत की दीवार ने फाइब्रिन धुंधला हो जाना(चित्रा 4ए)भी व्यक्त किया।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस के लिए, फाइब्रिन माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग 1:1000 कमजोर पड़ने पर किया गया था और 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर ऊष्मायन किया गया था। सीडी 31 के लिए, इम्यूनोब्लॉट्स के लिए मान्य एक खरगोश पॉलीक्लोनल एंटी-सीडी 31 एंटीबॉडी और आईएफ (1: 1000 और 1: 100 रात भर 4 डिग्री सेल्सियस) का उपयोग किया गया था। यह एंटीबॉडी माउस, मानव और सुअर CD31 के खिलाफ प्रतिक्रिया करने के लिए जाना जाता है। आईएफ के लिए, माध्यमिक एंटीबॉडी में एलेक्स फ्लोर 488, 594, और 647 1:250 पर कमरे के तापमान पर 45 मिनट के लिए कमजोर पड़ने शामिल थे।

छवि परिमाणीकरण के लिए, पूरी स्लाइड को मोटर चालित चरण प्रणाली द्वारा स्कैन किया गया था। छवियों को इमेजजे में संसाधित किया गया था, जहां सिग्नल को ग्रेस्केल में बदल दिया गया था, और पिक्सेल की संख्या और तीव्रता का विश्लेषण एकीकृत घनत्व के रूप में किया गया था। नस के क्षेत्र को ब्याज के क्षेत्र के रूप में चिह्नित किया गया था। सभी छवियों के एकीकृत घनत्व अपने क्षेत्र18 के लिए सामान्यीकृत किया गया था.

इन्हें कैंसर से जुड़े डीप वेन थ्रोम्बोसिस के मॉडल में अपग्रेड किया गया है। कई छवियों की मात्रा का ठहराव एकीकृत घनत्व विश्लेषण का उपयोग करके किया गया था, जैसा कि पहले छवि जे18 का उपयोग करके किया गया था। प्रयोगात्मक समूह की तुलना में नियंत्रण समूह में काफी कम फाइब्रिन अभिव्यक्ति थी (पी: 0.0080; चित्रा 4 बी; 174 ± 104 बनाम 503.5 ± 182.4 का मतलब ± एसडी)। विशेष रूप से, फाइब्रिन अभिव्यक्तियों में भिन्नता नियंत्रण समूह (एफ सांख्यिकी, डीएफएन, डीएफडी: 3.074, 4, 4) की तुलना में प्रयोगात्मक में कम थी।

ग्रेस्केल अल्ट्रासोनोग्राफी
सर्जरी के 2 दिनों के बाद और थक्के की फसल से ठीक पहले, चूहों ने ग्रेस्केल अल्ट्रासोनोग्राफी की। दोनों समूहों में चूहों ने इन्फ्रारेनल वेना कावा में थक्के दिखाए। हालांकि, संवहनी क्लिप के साथ चूहों में थक्के बड़े थे। प्रतिनिधि अल्ट्रासोनोग्राफी छवियों चित्रा 5 में दिखाया गया है. पोत का एक एनीकोइक क्षेत्र एक पेटेंट लुमेन का सुझाव देता है और पोत में एक हाइपरचोइक घनत्व एक संगठित थक्के का संकेत है। नियंत्रण समूह से एक माउस के ligated infrarenal वेना कावा चित्रा 5A में दो पीले तीर सिर द्वारा सीमांकित एक आंशिक थक्का से पता चलता है. इसके विपरीत, चित्रा 5 बी एक बड़े थक्के को लगभग एक संवहनी क्लिप मॉडल (दो पीले तीर के सिर द्वारा दर्शाया गया है और सफेद तारांकन द्वारा चिह्नित) के साथ उत्पन्न इन्फ्रारेनल वेना कावा को रोककर दिखाता है। ध्यान दें, इन्फ्रारेनल वेना कावा नियंत्रण समूह में ढह गया, जबकि इसे प्रयोगात्मक समूह में बढ़ाया गया था, जो बाद के समूह में अधिक थक्के के बोझ के अनुरूप था।

दोनों परख (अल्ट्रासोनोग्राफी और आईएफ) का सुझाव है कि प्रयोगात्मक समूह में नियंत्रण समूह की तुलना में लगातार बड़े थक्के थे।

Figure 1
चित्रा 1: एक योजनाबद्ध आईवीसी-महाधमनी और बाएं गुर्दे शिरा (एलआरवी) -आईवीसी के संगम पर क्लिप के आवेदन का चित्रण. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: क्लिप आवेदन के साथ इंट्राऑपरेटिव आईवीसी घनास्त्रता मॉडल । (ए) मिडलाइन लैपरोटॉमी। (बी) आईवीसी का पूर्ण प्रदर्शन, जिसमें आईवीसी के बाएं गुर्दे की नस का संगम शामिल है। (सी) मूत्रवाहिनी पाठ्यक्रम का प्रदर्शन और बाएं मूत्रवाहिनी में किसी भी आईट्रोजेनिक आघात से बचना। (डी) गोनाडल शाखाओं को दागना (ई) बाएं वृक्क शिरा संगम बिंदु के लिए आईवीसी का विच्छेदन। (एफ) सिवनी पारित करने के लिए विमान को चौड़ा करने के लिए विच्छेदित विमान के माध्यम से 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी गुजरना। (जी) तैयार विमान के माध्यम से एक संवहनी क्लैंप गुजरना। (एच) थक्का गठन IVC क्लैंपिंग के बाद 48 घंटे। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: संवहनी क्लिप आईवीसी बंधाव के साथ चूहों के समूह में उच्च सामान्यीकृत थक्का-से-शरीर वजन अनुपात था। औसत सामान्यीकृत थक्का-से-शरीर वजन अनुपात। मिलीग्राम में व्यक्त दोनों मूल्यों की इकाई। त्रुटि पट्टियाँ = SD. छात्र का t-परीक्षण लागू किया गया था। P <0.0001 कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: संवहनी क्लिप आईवीसी बंधाव के साथ चूहों के समूह में फाइब्रिन और सीडी 31 अभिव्यक्ति में वृद्धि। प्रतिनिधि immunofluorescence छवियों सिवनी के साथ IVC बंधाव के साथ नियंत्रण समूह से 100x बढ़ाई पर प्राप्त और संवहनी क्लिप के साथ IVC बंधाव के साथ प्रयोगात्मक समूह से. दिखाया माउस प्रति बेतरतीब ढंग से चयनित छवियों (एन = 4 चूहों / समूह) हैं. (ए) नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में फाइब्रिन और सीडी 31 अभिव्यक्ति। सफेद तारांकन द्वारा चिह्नित दो पीले तीर के निशान आईवीसी को लगभग अवरुद्ध करने वाले बड़े थक्के को दर्शाते हैं, जिसका अर्थ है आंशिक रूप से अवरोधित आईवीसी। (B) फाइब्रिन का एकीकृत घनत्व: रेखा माध्यिका मान को निरूपित करती है। छात्र का टी-टेस्ट किया गया। पी-वैल्यू = 0.0080। प्रतिनिधि इन्फ्रारेनल वेना कावा छवियों का धुंधला हो जाना, नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में थक्के सहित और एंटी-सीडी 31, और एलेक्सा फ्लुरो माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ दाग। 400x आवर्धन दिखाया गया है। स्केल बार = 100 माइक्रोन। त्रुटि पट्टियाँ SEM को संदर्भित करती हैं. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: संवहनी क्लिप आईवीसी बंधाव के साथ चूहों के समूह में आंशिक रूप से क्लैंप किए गए आईवीसी के भीतर थक्का सतह क्षेत्र में वृद्धि। नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूह के प्रतिनिधि ग्रेस्केल सोनोग्राफी छवियां। (ए) नियंत्रण समूह की प्रतिनिधि ग्रेस्केल डॉपलर छवि: आईवीसी का एक क्षेत्र पेटेंट लुमेन का एक एनीकोइक क्षेत्र दिखाता है, और दूसरा भाग थक्के का संकेत देने वाला एक हाइपरचोइक क्षेत्र दिखाता है। (बी) प्रयोगात्मक समूह की प्रतिनिधि ग्रेस्केल डॉपलर छवि: आईवीसी के भीतर संगठित थक्का (सफेद तारांकन), जैसा कि पीले तीर के साथ दर्शाया गया है, प्रयोगात्मक समूह में अधिक प्रमुख था। इसके अलावा, थक्का धनु खंड में दो अलग-अलग शिष्टाचार में दिखाई दिया। लुमेन के महत्वपूर्ण क्रॉस-सेक्शन को रोकने वाला एक थक्का भी IVC के दूसरी तरफ चित्रित किया गया था। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

एक syngeneic xenograft बृहदान्त्र कैंसर मॉडल में, हम नियंत्रण समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में उच्च thrombogenicity और जमावट मार्करों की अभिव्यक्ति का निरीक्षण करते हैं. महत्वपूर्ण बात यह है कि इन सभी मापदंडों में विचरण नियंत्रण समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में कम था। संशोधन में आईवीसी और बाएं गुर्दे की नस के संगम बिंदु पर एक विशिष्ट दबाव प्रोफ़ाइल के साथ एक संवहनी क्लिप पेश करना शामिल था। क्लिप को एक स्पेसर के ऊपर रखा गया था, जो 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी था। यह संशोधन थक्के के आकार और घनास्त्रता मार्करों में परिवर्तनशीलता को कम करता है। सभी चूहों ने 100% अस्तित्व का अनुभव किया।

तकनीकी बारीकियों
प्रक्रिया में कई चरणों पर विशेष ध्यान देना शामिल था। लैपरोटॉमी के बाद, किसी भी आकस्मिक चोट को रोकने के लिए दोनों मूत्रवाहिनी का अच्छी तरह से निरीक्षण किया गया। इष्टतम जोखिम को प्राप्त करने के लिए, आंतों को नम धुंध में कवर किया गया था और अत्यधिक कर्षण के बिना सही ऊपरी चतुर्थांश में रखा गया था। इसके बाद, IVC साइड शाखाओं को नसों को नुकसान से बचाने के लिए मूत्रवाहिनी, IVC और महाधमनी से 2 से 3 मिमी दूर दागना किया गया। पूर्ण हेमोस्टेसिस सुनिश्चित करने के बाद, आईवीसी बंधाव के लिए विमान तैयार किया गया था। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि चूहों में महाधमनी और आईवीसी अपने पाठ्यक्रम के साथ निकटता से जुड़े हुए हैं, और उन्हें विच्छेदन करने का प्रयास करने से रक्तस्राव और जानवर का नुकसान हो सकता है। एकमात्र अपवाद बाएं गुर्दे की नस और महाधमनी संगम बिंदु21 है। एक सिवनी मार्ग तो संदंश के साथ तीन से अधिक सावधानीपूर्वक, तेज अपसारी आंदोलनों का उपयोग कर तैयार किया गया था.

8- से 12 सप्ताह पुराने माउस का आईवीसी व्यास लगभग 0.3 से 0.5 मिमी की सीमा में होने की सूचना है। आंशिक आईवीसी बंधाव प्रक्रिया को पूर्ण बंधाव से अलग करने के लिए स्थान सुरक्षित करना चाहिए। वर्तमान अध्ययन में, हमने स्पेसर के लिए 0.10 से 0.15 मिमी के अनुरूप 5-0 सिवनी कैलिबर पर विचार किया। इसलिए, संवहनी क्लिप होंठ अंतरिक्ष एक 0.3 मिमी आईवीसी और एक 0.1 मिमी अंतरिक्ष के लिए पर्याप्त जगह प्रदान करने के लिए एक 2-0 सिवनी के लिए समायोजित किया गया था.

पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी ने एक रक्तहीन गाइड प्रदान किया, जिससे विमान को संवहनी क्लिप के आवेदन को समायोजित करने के लिए अतिरिक्त 1 से 2 मिमी के लिए कपाल आंदोलन के लिए दोहराए जाने वाले दुम के साथ चौड़ा किया जा सकता है। अंत में, 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिवनी के साथ संगत होंठ शेष स्थान के साथ अनुकूलित संवहनी क्लिप रखे गए थे।

रक्त वाहिका बंद करने के लिए प्लैटिनम जैसे महान धातु क्लिप के लिए विकल्प, इस तथ्य से प्रेरित है कि ऐसी सामग्री अपेक्षाकृत निष्क्रिय है और विशिष्ट अवशोषक और विलंबित अवशोषित टांके22,23,24की तुलना में सामग्री-प्रेरित सूजन को कम करती है। ये धातु क्लिप रासायनिक प्रतिक्रियाओं के लिए प्रतिरोधी हैं, जिससे वे स्थिर हो जाते हैं। यह सिवनी सामग्री के उपयोग की तुलना में सूजन के कम जोखिम के साथ एक सुरक्षित और अधिक प्रभावी विकल्प की ओर जाता है।

मॉडल की अनुवादीय प्रासंगिकता
murine शिरापरक घनास्त्रता मॉडल मौलिक रूप से मनुष्यों में गहरी शिरा घनास्त्रता से अलग हैं। सबसे पहले, कृंतक मॉडल में, थक्का गठन अपस्ट्रीम दिशा में मनाया जाता है। हालांकि, नैदानिक वीटी एक निडस25,26 से नीचे की ओर बनते हैं। दूसरा, कारण और प्रभाव संबंध मनुष्यों और माउस मॉडल के बीच अलग हैं। मनुष्यों में, थक्का बनना रक्त प्रवाह में रुकावट के बाद सूचकांक घटना है। एक अपवाद मई-थर्नर सिंड्रोम है। मई-थर्नर सिंड्रोम एक चिकित्सा स्थिति को संदर्भित करता है जिसमें रीढ़ की हड्डी के स्तंभ और दाएं इलियाक धमनी के बीच स्थित बाएं इलियाक नस पर बाहरी दबाव बढ़ जाता है, बाएं इलियाक शिरा घनास्त्रता, या बाएं इलियाक नस में रक्त के थक्के का खतरा बढ़ जाता है। माउस मॉडल में, शिरापरक प्रवाह के लिए बाधा प्राथमिक घटना है, जो सुस्त रक्त प्रवाह और थ्रोम्बस गठन25 में जिसके परिणामस्वरूप.

अन्य मॉडलों की तुलना में, जैसे कि ऊरु शिरा इलेक्ट्रोलाइटिक चोट मॉडल12, आईवीसी ठहराव एक स्पष्ट लाभ प्रदान करता है। यह स्थानीय चिकित्सीय उपायों की परीक्षा की अनुमति देता है, जैसे कि आईवीसी फिल्टर, कैथेटर-निर्देशित थ्रोम्बोलिसिस और रक्त प्रवाह की उपस्थिति में थक्का गठन के लिए एक वातावरण प्रदान करने के साथ एंडोल्यूमिनल रीकैनलाइजेशन । इस प्रकार, इस मॉडल में एंडोथेलियल चोट और ठहराव के दो हथियारों की जांच की जाती है। आईवीसी में थक्के भी जटिलताओं की उच्च घटना से जुड़े होते हैं, जैसे कि फुफ्फुसीय एम्बोली। एक सीमा यह है कि आईवीसी मनुष्यों में डीवीटी के लिए एक कम आम साइट है।

कमी-शोधन-प्रतिस्थापन (3R) ढांचा
पशु मॉडल में 3R ढांचे को एकीकृत करना महत्वपूर्ण है। 3R ढांचे का एकीकरण पशु पीड़ा को सीमित करता है और नैतिक और जिम्मेदार पशु अनुसंधान प्रथाओं को बढ़ावा देता है। 3R हमारी वर्तमान खोज पर लागू होता है क्योंकि हमने चूहों में कोई मृत्यु दर नहीं देखी। साथ ही, पढ़ाई में कम जानवरों का उपयोग करना संभव है। इस प्रकार, चूहों की संख्या और लागत को कम किया जा सकता है।

अध्ययन की सीमाएँ
क्लिप विधि की एक संभावित सीमा परीक्षण संवहनी क्लिप की एक अपेक्षाकृत संकीर्ण दबाव प्रोफ़ाइल रेंज भी शामिल है. तदनुसार, दबाव प्रोफाइल की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ आगे के अध्ययन तैयार किए जा सकते हैं। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि immunocompromised तनाव चूहों थक्का गठन के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, और थक्का वजन immunocompetent चूहों12 में भिन्न हो सकता है. भविष्य के अध्ययन विभिन्न माउस तनाव पृष्ठभूमि में थक्का वजन की स्थिरता की सीमा की जांच करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है.

समाप्ति
वर्तमान विधि आंशिक आईवीसी बंधाव मॉडल के माध्यम से शिरापरक घनास्त्रता अध्ययन के लिए एक अधिक सुसंगत उपाय प्रदान करती है। हमें उम्मीद है कि यह संशोधन मानव रोग की प्रासंगिकता के साथ विभिन्न कैंसर मॉडल का उपयोग करके कैंसर से जुड़े घनास्त्रता के परिणामों की जांच करने के लिए मजबूत और विश्वसनीय murine मॉडल की पीढ़ी की अनुमति देगा।

जबकि वर्तमान कार्य विशेष रूप से कैंसर से जुड़े घनास्त्रता पर केंद्रित है, भविष्य के काम में विभिन्न सहरुग्णता (जैसे मोटापा, क्रोनिक किडनी विफलता) और सामान्य चूहों के माउस मॉडल का व्यापक विश्लेषण करना होगा जो घनास्त्रता के जोखिम को बढ़ाते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को AHA कार्डियो-ऑन्कोलॉजी SFRN CAT-HD CENTER GRANT 857078 (KR, VCC, XY, और SL) और R01HL166608 (KR और VCC) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Buprenorphine 0.3 mg/mL PAR Pharmaceutical  NDC 42023-179-05
C57BL/6J mice The Jackson Lab IMSR_JAX:000664
Caliper VWR International, Radnor, PA 12777-830
CD31 Abcam Ab9498
Cell Counter MOXIE MXZ000
Clamp  Fine Science Tools    13002-10
Clips ASSI.B2V Single Clamp, General Purpose, Accurate Surgical & Scientific Instruments PR 2 144.50 289.00
Dumont #5SF Forceps Fine Science Tools 11252-00
Fibrin Millipore MABS2155-100UG
Fine Scissors - Large Loops Fine Science Tools 14040-10
Forceps  Fine Science Tools 11002-12
Hill Hemostat Fine Science Tools 13111-12
Isoflurane, USP  Covetrus NDC 11695-6777-2
MC-38 cell Sigma Aldrich SCC172
Microscope Nikon Eclipse Inverted Microscope TE2000
Scissors  Fine Science Tools   14079-10
Suture- Vicryl AD-Surgical #L-G330R24
Suture-Nylon 2-0 Ethilon 664H
Suture-Prolene 5-0 Ethicon 8661G
Suture-Prolene 6-0 Ethicon PDP127
VEV03100 VisualSonics FujiFilm
Vitrogel Matrigel Matrix The Well Bioscience VHM01 

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References

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