このビデオでは、誘導レンチウイルスを用いて誘導多能性幹細胞を生成するための手順を示して発現するOct4は、レトロウイルスベクター、c – MycおよびKLF4。
多能性は、Oct4のウイルスの形質導入により差別化されたマウスで誘導することができる、レトロウイルスベクター、KLF4、およびc – Myc(高橋と山中、2006; Wernig、ら、2007;。沖田ら、2007;。。Maherali、ら、 2007年)。我々は、これら4つの転写因子は、ドキシサイクリン(DOX)から発現されるプログラミング戦略を考案したレンチウイルスベクターを(Brambrinkら、2008)誘導。これらの誘導の構文を使用して、我々はマウス胚性繊維芽細胞(MEF)から誘導多能性幹(iPS)細胞を得ることができます。このビデオでは、我々は4つの転写因子を発現し、iPS細胞を生成するためにこれらのウイルスとMEFのを感染させる方法を示す誘導レンチウイルスを生成するための手順を示しています。誘導レンチウイルスを使用することにより、培地にdoxycylineを追加することにより制御の4つの因子の発現。従来のレトロウイルス感染に対するこのシステムの利点は、プログラミングと遺伝子発現の要件の動態を詳細に分析できるようにオフの遺伝子をオンとする機能です。
このビデオでは、我々はOct4-GFP/R26-M2rtTAとNanog-GFP/R26-M2rtTAマウス由来のMEFからのGFP陽性、多能性iPS細胞を生成するために誘導、レンチウイルスシステムを使用する方法を示します。それはプログラミングプロセス中に導入遺伝子発現の制御が可能なため、この手順では、iPS細胞を生成するための有用な方法です。 iPS細胞の発生におけるウイルスの使用が臨床の現場でこれらの細胞の使用を妨げるが、この手順は、私たちはまだ定義されている更新プロセスを下線主要な生物学的な疑問の幾つかに解答したりすることができます。