Summary
هذا الفيديو يصف طريقة لوضع العلامات إلى الوراء من خلال تطبيق RGC الفلوري الذهب (FG) على سطح أكيمة متفوقة (SC). الأسلوب الذي ينطوي على الحفر في الجمجمة ، الشفط القشرة ، وتطبيق الاسفنج الجيلاتين على السطح الظهري كامل SC.
Abstract
العقدة الشبكية الخلية (RGC) عد أمر ضروري لتقييم تنكس الشبكية وخاصة في الزرق. RGC موثوق بها الوسم هو أمر أساسي لتقييم الآثار المترتبة على أي علاج. في الفئران ، هو معروف عن 98 ٪ من المشروع لRGCs أكيمة متفوقة في المقابل (SC) (فورستر وبيترز ، 1967). ويمكن تطبيق الفلوري الذهب (FG) على سطح SC تسمية تقريبا جميع RGCs ، بحيث نتمكن من التركيز على هذه الخلايا العصبية في الشبكية الأكثر ضعفا في الزرق. يؤخذ FG من قبل المحطات محوار من الخلايا الشبكية العقدة ونقلها إلى الصعيد الثنائي retrogradely somas في شبكية العين. إلى الوراء مقارنة مع وضع العلامات من خلال وضع RGC FG في الجذع للعصب البصري مقطوع لمدة 2 يوم ، يتم تصغير تدخل بقاء RGC. مقارنة مع تلوين البنفسج cresyl أن البقع RGCs ، وخلايا البطانة وعديم الاستطالات من الاوعية الدموية في طبقة الخلايا العقدية للشبكية ، وهذه الطريقة هي أكثر العلامات محددة لRGC. هذا الفيديو يصف طريقة لوضع العلامات إلى الوراء من خلال تطبيق RGC FG على سطح SC. الإجراءات الجراحية وتشمل حفر الجمجمة ؛ الشفط القشرة لفضح SC وتطبيق الاسفنج الجيلاتين على السطح الظهري كامل SC هي معروضة. أعطيت نصائح مفيدة لتجنب نزيف داخل الجمجمة الضخمة وتطلع اللجنة الدائمة.
Protocol
- تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق الكيتامين (80mg/kg) وزيلازين (8mg/kg) (نسبة حجم في 2:1). تطبيق مرهم العقيمة تشحيم العين لمنع جفاف قرنية العين أثناء الجراحة.
- حلق الرأس الفراء (من العين إلى مستوى الأذن) ، وإصلاح وجها لوجه في المرحلة رأسه رئيس المشبك وتعيين القواطع في شريط القاطعة.
- تطهير المنطقة بالتعاون مع 10 ٪ بوفيدون محلول اليود تليها الكحول 70 ٪.
- قطع الجلد والعضلات لفضح الجمجمة وخياطة الجروح (السهمي ، الغرز الاكليلية والعرضي) (الشكل 1). تطبيق مسكن ، bupivicaine باعتبارها البداية لمنطقة شق (لا تتجاوز 2 ملغ / كلغ).
- حفر ثقب الجمجمة (2X2 ø مم ، 0.5 مم من كل من سهمي الغرز والعرضي) على كل جانب من الدرز السهمي. تجنب تمزق السحايا والجيوب الواقعة تحت الغرز.
الشكل 1. بصمات على جمجمة فأر على قيد الحياة.
- خفض فتح السحايا بواسطة مقص الربيع ، وتجنب تمزق.
- نضح المحتوى الدماغي التي تقع على السطح الظهري للأكيمة متفوقة بعناية بواسطة مضخة الفراغ ، ويمكن ملاحظة ثلاث نقاط التفتيش :
- لون تغييرات أنسجة المخ من الرمادي إلى الأبيض إلى رمادي
- وقف الشفط عندما السائل النخاعي عديم اللون تخرج
- تكبير بعناية أدنى مستوى شفط أفقيا لفضح أكيمة متفوقة الصفرة التي تغطيها الجافية
- نضح محتوى الدماغ عبر SC حتى يمكن شوهد أربعة حواف SC مباشرة تحت المجهر. ينبغي أن تظل جزءا من قشرة الدماغ إزالة إلى الحد الأدنى لتفادي الآثار الجانبية غير المرغوب فيها (على سبيل المثال ، محرك خلل). يجب الحرص على عدم لمس الجيوب الأنفية.
- امتصاص السوائل في حفرة مع غرامة شريطية القطن المعقم لجعل سطح SC جافة قدر الإمكان. ثم وضع طبقة رقيقة من الإسفنج الجيلاتين المنقوع مسبقا مع 6 ٪ الذهب الفلوري على سطح SC (FG تؤخذ من قبل المحطات محوار خلايا الشبكية العقدة ونقلها إلى somas retrogradely ثنائيا في شبكية العين).
- ملء الحفرة مع جلفوم وإغلاق الجرح الجلد مع مقاطع خياطة.
- تم السماح للحيوانات لاسترداد تحت مصباح ساطع للتدفئة. يتم تطبيق مسكن ، البوبرينورفين (100mcg/kg) ، شفويا في مياه الشرب لمدة 5 أيام بعد وضع العلامات SC.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
- لماذا استخدام هذه الطريقة الجراحية لشبكية العين عدد خلايا العقدة؟
في الفئران حوالي 98 ٪ من خلايا الشبكية العقدة (RGC) ومن المعروف أن مشروع أكيمة متفوقة في المقابل (SC). ويمكن تطبيق الفلوري الذهب على سطح SC التسمية كلها تقريبا من RGCs ، بحيث نتمكن من التركيز على هذه الخلايا العصبية في الشبكية الأكثر ضعفا في الزرق. إلى الوراء مقارنة مع وضع العلامات من خلال وضع RGC FG في الجذع للعصب البصري مقطوع لمدة 2 يوم ، يتم تصغير تدخل بقاء RGC. مقارنة مع تلوين البنفسج cresyl أن البقع عديم الاستطالات الخلية ، والخلية RGC بطائن للاوعية الدموية في طبقة الخلايا العقدية للشبكية ، وهذه الطريقة هي أكثر تحديدا إلى RGC. - كيفية تجنب النزيف؟
أولا ، تأكد من أن الفئران هي مخدرة بشكل صحيح عن طريق التحقق من قوة العضلات ومنعكس القرنية. وعدم كفاية تخدير يتسبب في حدوث نزيف واسعة النطاق. الثانية ، وتجنب العمليات التي من شأنها أن تلحق الضرر الجيب مثل حفر قريبة جدا من خياطة أو تمزق في السحايا في جدار الجيوب الأنفية. الثالثة ، وتوخي الحذر للحفاظ على الكذب الجافية سطحيا على حالها SC خصوصا في منطقة الأنف. - كم من الوقت يستغرق حتى يتم تسمية RGCs؟
بعد أربعة أيام من العلامات SC ، يمكن تسمية RGC. أنتظر عادة لمدة سبعة أيام من أجل تحقيق نتائج أفضل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر للدعم من البرنامج الوطني للصحة الزرق الأمريكية مؤسسة مساعد.
References
- Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat. Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
- Forrester, J., Peters, A. Nerve fibers in the optic nerve of rat. Nature. 214, 245-247 (1967).
- Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative. Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).
