וידאו זה מתאר את שיטת תיוג מדרדר של RGC ידי יישום fluoro זהב (FG) על פני השטח של מעולה colliculus (SC). טכניקה מערבת קידוח בגולגולת, aspirating קליפת המוח, וליישם ספוג ג'לטין על פני כל הגב של SC.
Abstract
גנגליון רשתית תא (RGC) ספירת חיונית כדי להעריך את ניוון הרשתית במיוחד גלאוקומה. אמין תיוג RGC חיונית להערכת ההשפעות של טיפול כלשהו. בשנת החולדה, על 98% RGCs ידוע הפרויקט colliculus מעולה הנגדי (SC) (פורסטר פיטרס, 1967). יישום fluoro זהב (FG) על פני השטח של SC יכול תווית כמעט כל RGCs, כך שנוכל להתמקד נוירון זה ברשתית הפגיעים ביותר גלאוקומה. FG הוא נלקח על ידי מסופי האקסון של תאים הגנגליון ברשתית והעבירו בילטרלי retrogradely כדי somas שלה ברשתית. השווה עם תיוג מדרדר של RGC ידי הצבת FG בגדם של עצב הראייה transected עבור 2 ימים, התערבות של הישרדות RGC ממוזער. השווה עם כתמים סגולים cresyl כי כתמי RGCs, תאים amacrine ו האנדותל של כלי הדם שכבת הגנגליון ברשתית התא, בשיטה זו תיוג הוא ספציפי יותר RGC. וידאו זה מתאר את שיטת תיוג מדרדר של RGC ידי יישום FG על פני השטח של SC. ניתוחים כוללים קידוח בגולגולת; aspirating קליפת לחשוף את SC ויישום ספוג ג'לטין על פני כל הגב של SC מוצגים. עצות שימושיות למניעת דימום תוך גולגולתי השאיפה מסיבי של SC קיבלו.
Protocol
לטשטש את העכברוש בזריקה תוך הצפק של קטמין (80mg/kg) ו xylazine (8mg/kg) (יחס נפח ב 02:01). החל משחה סטרילית סיכה העין כדי למנוע התייבשות של הקרניות במהלך הניתוח. לגלח את הראש פרווה (מן העין לרמה האוזן) ותקן ראש בראש על הבמה על ידי ראש מהדק ולהגדי…
Discussion
למה להשתמש בשיטה כירורגית עבור לספור הגנגליון ברשתית התא?
ב עכברוש על 98% מכלל התאים הגנגליון ברשתית (RGC) ידועים הפרויקט colliculus מעולה הנגדי (SC). יישום fluoro זהב על פני השטח של SC יכול תווית כמעט כל RGCs, כך אנחנו יכולים להתמקד נוירון זה ברשתית הפגיעים ביותר ?…
Acknowledgements
המחברים מבקשים להודות על התמיכה מהתוכנית גלאוקומה הלאומי של הקרן האמריקאית לבריאות עוזר.
Chiu, K., Lau, W., Yeung, S., Chang, R. C., So, K. Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus. J. Vis. Exp. (16), e819, doi:10.3791/819 (2008).