التمايز في المختبر من خلايا الجنينية الماوس (MES) الجذعية باستخدام أسلوب إسقاط الشنق
Summary
هذا الفيديو يوضح كيفية السلوك في المختبر من تمايز الخلايا الجذعية الجنينية للهيئات مضغي الشكل باستخدام طريقة قطرة شنقا.
Abstract
الخلايا الجذعية لديها القدرة على تطوير ملحوظ في العديد من أنواع مختلفة من الخلايا. عندما يقسم الخلايا الجذعية ، فإن كل خلية جديدة لديها القدرة على البقاء إما أو تصبح الخلايا الجذعية نوع آخر من الخلايا ذات وظيفة أكثر تخصصا ، وهذا العلم هو واعد كبار العلماء لدراسة إمكانية خلية مقرها العلاجات لعلاج المرض. عندما الثقافة في الوقف بدون عوامل antidifferentiation ، والخلايا الجذعية الجنينية تفرق بشكل عفوي وشكل ثلاثي الأبعاد مجاميع متعددة الخلايا. وتسمى هذه المجاميع الخلية الهيئات مضغي الشكل (EB). اعدام ثقافة الإفلات من تشكيل EB المستخدمة على نطاق واسع طريقة الاستقراء. الجزء السفلي من قطرة شنقا تقريب يسمح تجميع الخلايا ES الخلايا التي يمكن أن توفر بيئة جيدة زارة التربية والعلم لتشكيل EBS. يمكن السيطرة على عدد من الخلايا ES aggregatied في انخفاض شنقا متفاوتة عدد من الخلايا في خلية تعليق أولي على أن تكون معلقة على قطرة من غطاء طبق بيتري. باستخدام هذا الأسلوب يمكن أن نشكل بتكاثر EBS متجانسة من عدد محدد مسبقا من الخلايا ES.
Protocol
Discussion
مساوئ أسلوب قطرة شنقا هي كما يلي : يقتصر حجم السائل لتنخفض إلى أقل من 50ul بسبب الحفاظ على قطرات المعلقة على غطاء من التوتر السطحي ، وانه من المستحيل تغيير وسيلة لتعليق قطرات. الملاحظة تشكيل EBS في قطرات مباشرة مع المجهري هو أيضا من الصعب جدا خلال زراعة. مزيد المزيد ، وطريقة قطرة شنقا…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
