ハンギングドロップ法を用いたマウス胚性幹（MES）細胞のin vitroにおける分化
Summary
このビデオでは、ハンギングドロップ法を用いて胚様体には、マウス胚性幹細胞のin vitroでの分化に実施する方法を示しています。
Abstract
幹細胞は多くの異なる細胞型に開発するために驚くべき可能性を秘めている。幹細胞が分裂するとき、それぞれの新しい細胞がどちらの幹細胞を維持またはより専門的な機能を持つ細胞の別の型になる可能性を秘めている、科学のこの有望な、病気を治療するために、細胞ベースの治療の可能性を調査する科学者をリードしています。ときにantidifferentiation因子のない懸濁液中の文化、胚性幹細胞は、自発的に分化し、三次元多細胞集合体を形成する。これらの細胞凝集体は、胚様体（EB）と呼ばれています。ドロップの文化を吊るすことは広く使用されているEBの形成誘導法である。ハンギングドロップの丸みを帯びた底は、EBSを形成するためのMESの細胞に良い環境を提供することができるES細胞の凝集することができます。ハンギングドロップでaggregatied ES細胞の数は、ペトリ皿の蓋からのドロップとしてハングアップしているように初期の細胞懸濁液中の細胞の数を変えることによって制御できます。このメソッドを使用して我々は、再現性ES細胞の所定の数から均質なEBSを形成することができます。
Protocol
前に37℃、5％CO 2組織培養インキュベーターで一晩一日に0.1％ゼラチン溶液とインキュベートプレートを使用してT75フラスコをゼラチン状にする。 、インキュベートからMESの細胞を取り出し、培地を吸引除去し、PBSでES細胞培養をすすぎ、皿のコート底を（2 ml/100mmプレート）に0.05％トリプシン溶液を加える。 細胞がプレートを脱却するまで、37℃で約1分間インキュベートする。 <br…
Discussion
滴の液量は、表面張力によって蓋の上にぶら下がって降下を維持するために以下50ULに限定されており、それがドロップを干すための培地を変更することは不可能だ：ハンギングドロップ法の短所は次のとおりです。顕微鏡で直接滴でEBSを形成するの観察は、栽培中にも非常に困難である。さらにもっと、ハンギングドロップ法は、次の2つの手順で構成され、従って、ハンギングドロップ法のステップのシ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
Cite This Article
Wang, X., Yang, P. In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method. J. Vis. Exp. (17), e825, doi:10.3791/825 (2008).