В пробирке Дифференциация Мышь эмбриональных стволовых (MES) ячеек с использованием висячей капли Метод
Summary
В этом видеоролике показано, как проводить в пробирке дифференциации мышиных эмбриональных стволовых клеток эмбриоидных органов использовании висячей капли метод.
Abstract
Стволовые клетки обладают замечательными возможностями для развития в различные типы клеток. Когда стволовых клетка делится, каждая новая клетка имеет потенциал, чтобы либо остаются стволовых клеток или стать другой тип клетки с более специализированные функции, этот перспективный науки является ведущим ученым исследовать возможности клеточной терапии для лечения болезней. Когда культура во взвешенном состоянии без antidifferentiation факторов, эмбриональные стволовые клетки спонтанно дифференцироваться и образуют трехмерные многоклеточные агрегаты. Эти клеточные агрегаты называются эмбриоидные тела (ИС). Висячей капли культура широко используется EB формирование индукционным методом. Округлой нижней висячей капли позволяет агрегации ЭС клеток, которые могут обеспечить МЧС клетки хорошую среду для формирования ЭТ. Число ЭС клеток aggregatied в висячей капли можно управлять, варьируя количество клеток в исходной суспензии ячейки, чтобы висеть в виде капли на крышке чашки Петри. С помощью этого метода мы можем воспроизводимо образуют однородные ЭТ из определенного количества ЭС клеток.
Protocol
Discussion
Недостатками метода висячей капли в следующем: жидкий объем капли ограничивается менее 50ul из-за поддержания висит капель на крышку, поверхностного натяжения, и это невозможно изменить среду для подвешивания капель. Наблюдение формирования ЭТ в виде капель непосредственно с микроскопии также оч?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
