בשנת בידול במבחנה של עכבר גזע עובריים (MES) תאים שימוש בשיטה Drop Hanging
Summary
סרט הווידאו הזה מדגים כיצד ההתנהגות בידול במבחנה של תאים עובריים בעכבר לגופים embryoid בשיטת ירידה תלוי.
Abstract
לתאי גזע יש פוטנציאל מדהים להתפתח הרבה סוגי תאים שונים. כאשר תא גזע מתחלק, בכל תא חדש יש פוטנציאל או להישאר תא גזע או להיות סוג אחר של תא עם פונקציה מיוחדת יותר, זה מבטיח של המדע המוביל מדענים לחקור את האפשרות של טיפולים מבוססי תאים לטיפול במחלות. כאשר התרבות השעיה ללא גורמי antidifferentiation, בתאי גזע עובריים ספונטני להבדיל צורה תלת ממדית אגרגטים תאיים. אגרגטים אלה התא נקראים גופים embryoid (EB). תלוי תרבות ירידה היא היווצרות בשימוש נרחב EB שיטת האינדוקציה. תחתית מעוגלת הירידה תלוי מאפשר צבירה של תאים ES אשר יכול לספק תאים MES סביבה טובה עבור יצירת EBS. מספר תאים ES aggregatied לירידה תלוי יכול להיות נשלט על ידי שינוי מספר התאים בתרחיף התא הראשוני להיות תלויים כמו ירידה מן המכסה של צלחת פטרי. באמצעות שיטה זו אנו יכולים reproducibly טופס EBS הומוגנית מתוך מספר קבוע מראש של תאים עובריים.
Protocol
Discussion
החסרונות של שיטה טיפה תלויה הן כדלקמן: נפח נוזל טיפה מוגבל פחות 50ul עקב שמירה על טיפות תלויות על מכסה ידי מתח פנים, ואי אפשר לשנות את המדיום לתליית טיפות. תצפית של יצירת EBS בטיפות ישירות עם מיקרוסקופיה הוא גם קשה מאוד במהלך הטיפוח. עוד יותר, השיטה ירידה תלוי מורכב משני שלבים, אם כן, ס…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
