In-vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus (mES) Zellen unter Verwendung des Hanging-Drop-Methode
Summary
Dieses Video zeigt, wie in vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus, um Embryoidkörpern mit dem hängenden Tropfen-Methode durchzuführen.
Abstract
Stammzellen haben die bemerkenswerte Potenzial, sich in viele verschiedene Zelltypen zu entwickeln. Wenn eine Stammzelle teilt, jede neue Zelle die Möglichkeit, entweder eine Stammzelle bleiben oder zu werden eine andere Art von Zelle mit einer spezialisierten Funktion hat, ist dieser viel versprechenden wissenschaftlichen führenden Wissenschaftler auf die Möglichkeit der zell-basierte Therapien zur Behandlung von Krankheiten zu untersuchen. Wenn Kultur in Suspension ohne antidifferentiation Faktoren, embryonalen Stammzellen spontan zu differenzieren und bilden dreidimensionale vielzelligen Aggregaten. Diese Zellaggregate heißen Embryoidkörpern (EB). Hanging drop Kultur ist ein weit verbreitetes EB Bildung Induktion Methode. Die abgerundeten unteren hängenden Tropfen ermöglicht die Aggregation von ES-Zellen, die bieten mES Zellen können ein gutes Umfeld für die Bildung EBs. Die Zahl der ES-Zellen in einem hängenden Tropfen aggregatied kann durch Variation der Anzahl der Zellen in der ersten Zellsuspension als ein Tropfen aus dem Deckel der Petrischale aufgehängt werden gesteuert werden. Mit dieser Methode können wir reproduzierbar Form homogener EBs aus einer vorgegebenen Anzahl von ES-Zellen.
Protocol
Discussion
Die Nachteile der hängenden Tropfen-Methode sind wie folgt: das flüssige Volumen eines Tropfens auf weniger als 50ul begrenzt durch die Aufrechterhaltung hängende Tropfen auf dem Deckel durch die Oberflächenspannung, und es ist unmöglich, das Medium für hängende Tropfen zu ändern. Die Beobachtung der Bildung von EBs in Tropfen direkt mit der Mikroskopie ist auch sehr schwierig während der Kultivierung. Weiter mehr, der hängende Tropfen-Methode aus zwei Schritten besteht, kann daher eine Reihe von Schritt des hängenden Tropfen Met…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Reagent | Gibco | 11965-092 | |
| Fetal Bovine Serum(FBS) | Reagent | Hyclone | SH30070.03 | |
| L-Glutamine | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Non-Essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| Penicllin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Sodium Pyruvate | Reagent | Gibco | 11360-70 | |
| β-mercaptoethanol | Reagent | Chemicon | ES-007-E | |
| leukemia inhibitory factor(LIF) | Reagent | Chemicon | LIF2005 | |
| 96-well ultralow attachment plate | Tool | Corning | 3474 |
References
- Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48, 173-182 (1991).
- Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells. J Cell Biol. 126, (1994).
