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Environmental Microbiology

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Technique aseptique en sciences de l’environnement
 

Technique aseptique en sciences de l’environnement

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Une technique aseptique est une compétence fondamentale en microbiologie et a des applications cruciales dans la recherche environnementale.

Si les cultures microbiologiques sont contaminés, le temps, la main-d'œuvre et les frais financiers qui seraient nécessaires d’un laboratoire de « nettoyer » ou de remplacer les cultures, particulièrement rares isolats provenant d’environnements uniques, pourraient être très élevé et prohibitif, et quelques échantillons peuvent être irremplaçables.

Utilisation appropriée des techniques aseptiques réduit le risque de contamination bactérienne et fongique des réactifs, milieux de culture et les échantillons environnementaux et permet également d’éviter la contamination croisée entre les échantillons. C’est aussi une mesure de sécurité qui diminue la transmission potentielle de microbes à l’expérimentateur, qui est particulièrement important lorsque vous travaillez avec des agents pathogènes.

Cette vidéo va présenter les principes d’asepsie ; plusieurs techniques importantes pour maintenir les réactifs stériles et cultures ; et enfin, certains de leurs utilisations en science de l’environnement.

À l’aide de techniques aseptiques vise à créer et maintenir un environnement de travail stérile, matériel et réactifs, afin de minimiser la contamination des échantillons biologiques. Source commune de contamination inclure micro-organismes aéroportés, microbes présent sur le banc de laboratoire ou l’équipement et ceux du corps, cheveux et vêtements du chercheur.

Deux types d’agents sont au cœur de retrait et de prévention de la contamination en laboratoire : produits chimiques désinfectants et la chaleur. Des solutions telles que 70 % d’éthanol et d’eau de Javel sont souvent utilisées pour désinfecter le matériel, surfaces de travail et des gants des expérimentateurs avant de s’engager dans le travail aseptique.

Dans le même temps, les microbes sur ou dans les milieux liquides, verrerie et outils peuvent être tués par la chaleur en autoclave, qui est une chambre qui stérilise le contenu par l’exposition à la vapeur sous pression haute température. En outre, des outils tels que des baguettes de verre utilisées pour propager électrodéposition et boucles métal inoculation peuvent être à l’aide d’une source de flamme, comme un bec Bunsen appertisé.

L’utilisation d’une source de flamme est également une des façons plus courantes d’établir un environnement de travail aseptique. La chaleur de la flamme provoque la convection de l’air, générant un courant ascendant qui soulève tous les contaminants aéroportés l’Ecart du brûleur et la création d’un « champ stérile » où mener des travaux expérimentaux aseptique.

Maintenant que vous comprenez les principes qui sous-tendent les techniques aseptiques et pourquoi elles sont importantes, Let ' s go via un protocole pour la création d’un environnement de travail aseptique, constituant des milieux de culture stériles et aseptiquement transfert de bactéries entre les différentes conditions de culture.

Avant de commencer le travail aseptique, il est important pour l’expérimentateur de revêtir un équipement de protection individuelle ou EPI. Le but de ceci est pour prévenir l’expérimentateur de contaminer les échantillons et les cultures de laboratoire et aussi pour empêcher le transfert de microbes potentiellement pathogènes au chercheur. Articles d’EPI incluent une blouse, des gants et des lunettes de sécurité.

L’étape suivante consiste à stériliser et à stocker les milieux de culture à utiliser pour la culture des échantillons microbiens correctement. Tout d’abord, peser une quantité suffisante de composants solides de moyennes et ajoutez-les à la bon volume de solvant liquide spécifiée par le constructeur, tels que l’eau désionisée, dans un récipient autoclavable ajouter une barre d’agitation magnétique, placer le récipient sur un agitateur de plaque chauffante et dissoudre les solides composants moyennes à feu doux et en remuant.

Fermer les contenants moyens. Si vous utilisez un récipient en verre avec capuchons, veillez à ne pas serrer le bouchon complètement, car l’air à l’intérieur des vaisseaux augmenter en raison de chauffage durant l’autoclavage et a besoin de s’échapper. Sans fuite, le gaz pourrait entraîner le navire à se rompre. Mettre un morceau de ruban autoclave sur les vaisseaux et stériliser les médias selon les instructions du fabricant, par exemple de 20 min à 121 ° C. Après la stérilisation, vérifiez si les rayures sur les bandes d’autoclave activé, noirs, indiquant que la bonne température est atteinte.

Pour les milieux de culture liquides, laissez-les refroidir à température ambiante et les stocker à température ambiante ou avec réfrigération selon qu’il conviendra. Pour les milieux de croissance solide axée sur la gélose, laissez-les refroidir à environ 50 ° C, puis versez dans des plats de Pétri stérile. Permettre l’agar se refroidir et se solidifier avant de l’entreposer à la température appropriée.

Pour les médias qui ne peuvent pas être stérilisés à l’autoclave en raison de la présence de composants sensibles à la chaleur, filtre stériliser à l’aide d’un filtre de 0,22 μm.

Une technique de base travaux microbiologiques doit transférer aseptiquement cultures bactériennes entre milieux de culture différents, solides et liquides. Avant le début, nettoyer la surface de banc de laboratoire avec un désinfectant. Cela réduit le risque de contamination des cultures ou milieu stérile.

Transfert de cultures bactériennes couramment fait usage d’un outil appelé une boucle d’inoculation, qui doit être stérilisés avant usage par chauffage dans une flamme.

Allumer une flamme comme source. Lentement, passer la boucle inoculation par le biais de l’extrémité de la flamme. La boucle s’allume en rouge chaud. Pour transférer une colonie bactérienne d’une gélose solide, entrouvrez le Pétri et tapoter délicatement la boucle chaude inoculer sur une partie vide de la surface de la gélose pour éviter la chaleur tue les bactéries. Gratter une seule colonie avec la boucle à inoculation, puis refermez la plaque.

Pour transférer les bactéries d’un milieu de culture liquide, enlever le bouchon du récipient de culture. Pour aider à prévenir la contamination, en évitant de poser le couvercle sur le banc. Passer l’embouchure du conteneur 2 - 3 fois par le biais de la partie la plus chaude de la flamme. Puis, soigneusement toucher la boucle chaude, stérilisé l’inoculation à l’intérieur du conteneur et laissez-le refroidir avant de l’insérer dans le bouillon de culture. Supprimer une anse de la culture et immédiatement fermer le bouchon.

Pour transférer les bactéries obtenues dans un milieu stérile, retirer le capuchon d’un contenant avec le bouillon stérile et passez d’ouverture du conteneur par le biais de la flamme 2 - 3 fois. Puis, soigneusement abaisser la boucle de l’inoculation dans le milieu et agiter doucement pour libérer les bactéries. Fermez immédiatement le couvercle. Stériliser l’Anse à inoculation après utilisation.

Si vous transférez des bactéries sur une gélose stérile, ouvrir le couvercle d’un frais de Pétri avec agar non inoculé. Ensemencer la boucle de l’inoculation avec la culture bactérienne dos-et-vient à travers un secteur de l’agar. Stériliser la boucle et cool il en touchant une partie vide de la gélose, puis faire une autre strie sur la gélose à un angle obtus à la première strie, en veillant à traverser la première série sur les premiers coups de 1-2, mais évitez de toucher la première strie sur les traits suivants. Répétez la stérilisation et les rayures 2 fois plus. Ferme la Pétri et stériliser la boucle à inoculation.

Une fois inoculé, la plaque bouillon ou gélose doit ensuite être incubée à la température idéale de croissance pour le micro-organisme donné obtenir une culture viable. Sur milieu solide, une pelouse ou un chapelet continu de bactéries serait visible sur gélose couvert par les deux premières veines, mais les colonies individuelles doivent être obtenues sur le streak final. Mauvaise asepsie se traduirait par la croissance des moisissures et autres contaminants sur la plaque.

Techniques d’asepsie sont importants pour beaucoup d’expériences impliquant des échantillons microbiens de l’environnement. Dans cette étude, les chercheurs ont isolé les bactériophages, qui sont des bactéries infectant virus, provenant de la bactérie de sol commun Arthrobacter. Tout d’abord, Arthrobacter cultures ont été cultivées dans des conditions aseptiques. Des échantillons de sol ont été ensuite lavés et filtrés dans le tampon de phage et la solution du phage a été mélangée avec la culture bactérienne et ensemencée sur la gélose. Une pelouse bactérienne forment sur la plaque, mais il y aurait des clairières, ou « plaques », à des endroits où le virus a infecté et a tué les bactéries. Phage pourrait ensuite être purifié de ces plaques pour une étude plus approfondie.

Autre que l’utilisation de brûleurs Bunsen, des environnements de travail aseptique aussi peuvent être maintenues que dans les stations de travail spécialisées appelées hottes à flux laminaire, dont l’usage a ordonné à débit d’air et filtres pour maintenir la stérilité. Ici, les scientifiques ont travaillé sous une hotte à flux d’isoler les bactéries pathogènes potentiels et virus à partir des échantillons d’eau. Ces isolats sont ensuite cultivés ainsi que les amibes. Parce que les amibes normalement mangent ou « phagocytent » bactéries, toutes les bactéries qui ont pu résister à la digestion amibiennes et rester chez ces organismes peuvent aussi potentiellement rester viables dans les cellules humaines et causent des maladies.

Enfin, des conditions stériles permettent une étude détaillée des mécanismes écologiques tels que la formation des nodules racinaires en légumineuses broyeur - organes remplis de bactéries qui « corriger » l’azote atmosphérique en ammoniac, qui est utilisée par la plante pour la croissance. Chercheurs créés ici « microcosmes » pour étudier le processus de la nodulation utilisant cranté Pétri avec substrat de croissance des plantes, placé des semis en eux et inoculé les semis avec bactéries rhizobiennes formant des nodules. L’environnement aseptique de la hotte à flux prévient la contamination des cultures avec d’autres bactéries ou des champignons.

Vous avez juste regardé les vidéo de JoVE sur des techniques aseptiques en sciences de l’environnement. Vous devez maintenant comprendre pourquoi les conditions de travail aseptique sont importantes ; Comment faire aseptiquement expériences microbiologiques ; et certaines applications de techniques aseptiques à la recherche environnementale. Comme toujours, Merci pour regarder !

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