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Environmental Microbiology

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Aseptische Technik in Umweltwissenschaften

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Aseptische Technik ist eine grundlegende Fähigkeit in der Mikrobiologie und hat wichtige Anwendungen in der Umweltforschung.

Mikrobiologische Kulturen kontaminiert sind, könnte die Zeit, Arbeit und finanzielle Kosten, die an ein Labor zu "bereinigen" oder ersetzen der Kulturen, besonders selten isoliert von einzigartigen Umgebungen sehr hoch und kostspielig, und einige Proben möglicherweise unersetzlich.

Ordnungsgemäße Verwendung der aseptische Techniken verringert sich die Wahrscheinlichkeit einer bakteriellen und pilzlichen Kontamination von Reagenzien, Kultur, Medien und Umweltproben und vermeidet auch Cross-Kontamination zwischen Proben. Es ist auch eine Sicherheitsmaßnahme, die verringert die mögliche Übertragung von Mikroben, der Experimentator, was besonders wichtig ist, bei der Arbeit mit Krankheitserregern.

Dieses Video wird die Grundsätzen der Asepsis einführen; mehrere wichtige Techniken, sterile Reagenzien und Kulturen zu erhalten; und zu guter Letzt einige von ihrer Verwendung in Umweltwissenschaften.

Das Ziel der aseptische Technik ist zu schaffen und aufrechtzuerhalten eine sterile Arbeitsumgebung, Geräte und Reagenzien, um Verunreinigungen von biologischen Proben zu minimieren. Häufige Quellen von Verunreinigungen zählen luftgetragene Mikroorganismen, Mikroben präsentieren auf dem Labortisch oder Ausrüstung und diejenigen aus dem Haar, Körper und Kleidung des Forschers.

Zwei Arten von Agenten stehen im Mittelpunkt, zu entfernen oder verhindern Kontamination im Labor: desinfizierende Chemikalien und Hitze. Lösungen wie 70 % Ethanol und verdünnten Bleichmittel werden häufig verwendet, Geräte, Arbeitsflächen und Experimentatoren Handschuhe zu desinfizieren, bevor Sie ein aseptische arbeiten.

Zur gleichen Zeit können Mikroben auf oder in Werkzeuge, Glaswaren und flüssigen Medien Hitze getötet in einem Autoklaven werden die eine Kammer, die Inhalte über Exposition gegenüber hohen Temperaturen unter Druck stehende Dampf sterilisiert. Darüber hinaus können Tools wie Glasstäbe verwendet für verbreiten Beschichtung und Metall Impfösen Hitze sterilisiert mit einer Flamme, wie dem Bunsenbrenner.

Die Verwendung einer Flamme-Quelle ist auch einer der am häufigsten verwendeten Möglichkeiten, um eine aseptische Arbeitsumgebung zu schaffen. Die Hitze der Flamme verursacht Luftkonvektion, einen Aufwind, der Verunreinigungen in der Luft von der Nähe des Brenners anhebt, und schaffen einen "sterilen Bereich" in der aseptischen experimentelles Arbeiten durchzuführen.

Nun, Sie die Prinzipien hinter aseptische Techniken und warum sie wichtig sind verstehen, gehen Sie wir durch ein Protokoll für eine aseptische Arbeitswelt, sterile Wachstumsmedien Schminken und aseptisch Übertragung von Bakterien zwischen unterschiedlichen Kultivierung Bedingungen.

Vor Beginn der aseptischen arbeiten, ist es wichtig, dass der Experimentator, geeignete persönliche Schutzausrüstung oder PSA don. Dies dient sowohl den Experimentator von Kontamination der Proben und Labor Kulturen zu verhindern, als auch zur Verhinderung des Transfers von potenziell pathogenen Mikroben, die Forscherin. PPE gehören ein Kittel, Handschuhe und Schutzbrille.

Der nächste Schritt ist, richtig zu sterilisieren und speichern das Wachstumsmedium verwendet werden, für die Kultivierung der mikrobielle Proben. Erstens die richtige Menge an festen Mittelkomponenten Abwiegen und das richtige Volumen des flüssigen Lösungsmittel vom Hersteller angegeben, z. B. deionisiertes Wasser in einem Behälter autoklavierbar hinzufügen eine magnetische Stir Bar, stellen Sie den Behälter auf einer heißen Platte Rührer und die solide Mittelkomponenten bei niedriger Hitze auflösen und unter ständigem Rühren hinzufügen.

Schließen Sie die mittlere Behälter. Wenn ein Glasgefäß mit Schraubkappe verwenden, achten Sie darauf, nicht die Kappe komplett, anziehen, wie die Luft im Inneren der Gefäße durch die Erwärmung beim Autoklavieren erweitern wird und braucht um zu entkommen. Ohne Flucht kann das Gas das Schiff zum Bruch führen. Legen Sie ein Stück des Autoklaven Klebeband auf die Gefäße und Autoklaven die Medien nach den Anweisungen des Herstellers, wie 20 min bei 121 ° C. Nach dem Autoklavieren stellen Sie sicher, dass die Streifen auf den Autoklaven Bändern wandte sich schwarz, darauf hinweist, dass die richtige Temperatur erreicht wurde.

Für flüssige Wachstumsmedien auf Raumtemperatur abkühlen lassen, und bei Raumtemperatur oder mit Kühlung gegebenenfalls aufbewahren. Lassen Sie für solides Wachstum Agar-basierte Medien auf ca. 50 ° C abkühlen, dann gießen Sie in sterile Petrischalen. Der Agar abkühlen und erstarren vor dem Speichern auf die entsprechende Temperatur zu ermöglichen.

Für Medien, die durch die Anwesenheit von wärmeempfindlichen Komponenten autoklaviert werden können, Filter sterilisieren Sie einen 0,22-μm-Filter verwenden.

Eine Kern Technik in mikrobiologischen Arbeiten ist aseptisch Bakterienkulturen zwischen unterschiedlichen Wachstumsmedien, festen und flüssigen übertragen. Reinigen Sie vor Beginn die Lab Bank Oberfläche mit einem Desinfektionsmittel. Dies senkt das Risiko einer Kontamination, Kulturen oder sterilen Medien.

Übertragung von Bakterienkulturen nutzt häufig ein Tool namens eine Impfkeimen Schleife, die vor bedienbar durch Erhitzen in einer Flamme sterilisiert werden.

Schalten Sie eine Flamme. Gehen Sie langsam die Impfkeimen Schleife durch die Spitze der Flamme. Die Schleife wird heiß rot. Um eine bakterielle Kolonie von einer soliden Agarplatte zu übertragen, öffnen Sie die Petri-Platte leicht, und tippen Sie sanft auf die heiße Impfkeimen Schleife auf einen leeren Bereich der Agar-Oberfläche zur Vermeidung von Wärme-töten die Bakterien. Kratzen Sie eine einzige Kolonie mit der Impfkeimen Schleife zu, und schließen Sie die Platte.

Um Bakterien aus einem flüssigen Wachstumsmedium übertragen, entfernen Sie die Kappe vom Container-Kultur. Zur Vermeidung von Kontamination, Einstellung der GAP nach unten auf die Bank zu vermeiden. Übergeben Sie die Mündung des Behälters 2-3 Mal durch das heißeste Teil der Flamme. Dann vorsichtig berühren Sie die heissen, sterilisierten Impfschlinge auf der Innenseite des Behälters und lassen Sie abkühlen bevor Sie es in die Bouillonkultur einfügen. Entfernen Sie einer Impföse der Kultur, und sofort schließen Sie den Deckel zu.

Entfernen Sie für die erhaltenen Bakterien auf einem sterilen Nährmedium übertragen die Kappe aus einem Behälter mit der sterilen Brühe und übergeben Sie des Containers öffnen durch die Flamme 2-3 Mal. Dann sorgfältig senken Sie die Impfschlinge in das Medium, und schütteln Sie sanft, um die Bakterien zu veröffentlichen. Sofort schließen Sie den Deckel. Sterilisieren Sie die Impfschlinge nach Gebrauch.

Wenn Bakterien auf eine sterile Agarplatte zu übertragen, öffnen Sie den Deckel einer frischen Petri-Platte mit nicht inokulierten Agar. Streifen der Impfschlinge mit der bakteriellen Kultur hin und her über einen Sektor des Nährbodens. Sterilisieren Sie die Schleife und cool es indem Sie auf einen leeren Bereich des Nährbodens, nehmen Sie dann ein weiterer Streifen auf dem Agar in einem stumpfen Winkel an den ersten Streifen, und achten Sie auf den ersten Streifen auf die ersten 1-2 Striche überqueren, sondern berühren Sie nicht die ersten Streifen auf nachfolgende Striche. Wiederholen Sie die Sterilisation und Schlieren 2 weitere Male. Schließen Sie die Petri-Platte, und sterilisieren Sie der Impfschlinge.

Die Brühe oder Agar Platte sollte dann bei der ideale Wachstums-Temperatur für die bestimmten Mikroorganismus, tragfähige Kultur zu erhalten inkubiert werden, einmal geimpft. Auf festem Medium ein Rasen oder kontinuierlicher Strang von Bakterien auf Agar abgedeckt durch die ersten beiden Streifen sichtbar sein würde, aber einzelne Kolonien erhalten Sie auf den letzten Streifen. Schlechte aseptische Techniken führt zu das Wachstum von Schimmel und anderen Verunreinigungen auf dem Teller.

Aseptische Techniken sind wichtig in vielen Experimenten mit mikrobielle Proben aus der Umgebung. In dieser Studie, Forscher isoliert Bakteriophagen, die Bakterien infizieren Viren aus der gemeinsamen Bodenbakterium Arthrobacter. Arthrobacter Kulturen wurden zum ersten Mal unter aseptischen Bedingungen angebaut. Bodenproben wurden dann gewaschen und gefiltert in Phagen-Puffer und die Phagen-Lösung war gemischt mit der Bakterienkultur und vergoldete auf Agarplatten. Eine bakterielle Wiese auf dem Teller bilden würden, aber es wäre Lichtungen oder "Plaques", an stellen, wo das Virus infiziert hatte, und die Bakterien getötet. Phagen könnte dann aus diesen Plaketten für weitere Studie gereinigt werden.

Anders als die Anwendung Bunsenbrenner, aseptische Arbeitsumgebungen auch pflegbar in spezialisierten Arbeitsstationen bekannt als Laminar-Flow Hauben, welche Nutzung Luftstrom und filtern, um Sterilität zu halten gerichtet. Hier arbeitete Wissenschaftler in einer Strömung Kapuze, möglichen pathogenen Bakterien und Viren aus Wasserproben zu isolieren. Diese Isolate wurden dann zusammen mit Amöben gezüchtet. Da Amöben normalerweise essen oder "" Bakterien Phagozytose, können Bakterien, die Amöbenzelle Verdauung zu widerstehen und bleiben in diesen Organismen konnten möglicherweise auch in menschlichen Zellen lebensfähig bleiben und Erkrankungen verursachen.

Sterile Bedingungen erlauben schließlich detaillierte Untersuchung der ökologischen Mechanismen, wie z. B. die Bildung von Wurzelknöllchen in Hülsenfrucht Pflanzen - Bakterien-gefüllte Organe, die atmosphärischen Stickstoff in Ammoniak, das von der Pflanze für das Wachstum verwendet wird "reparieren" ". Forscher, die hier geschaffen "Mikrokosmen" für das Studium des Nodulation Prozess Pflanze Wachstumsmedium, gekerbten Petri Platten mit Sämlinge in ihnen platziert und die Sämlinge mit Bildung von Knötchen rhizobial Bakterien beimpft. Die aseptische Umgebung der Fluss Haube verhindert Verschmutzung der Kulturen mit anderen Bakterien oder Pilze.

Sie haben nur Jupiters Video auf aseptische Techniken in Umweltwissenschaften angesehen. Sie sollten jetzt verstehen, warum die aseptische Arbeitsbedingungen wichtig sind; Gewusst wie: aseptisch mikrobiologischen Experimente durchführen; und einige Anwendungen der aseptische Techniken zur Umweltforschung. Wie immer vielen Dank für das ansehen!

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