Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Environmental Microbiology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

טכניקה אספטית במדעי הסביבה
 
Click here for the English version

טכניקה אספטית במדעי הסביבה

Overview

מקור: מעבדות של ד"ר איאן פפר וד"ר צ'ארלס גרבה - אוניברסיטת אריזונה
הפגנה סופרת: לואיזה איקנר

טכניקה אספטית היא מיומנות בסיסית הנהוגה בתחום המיקרוביולוגיה הסביבתית הדורשת איזון של תשומת לב ותרגול במעבדה. שימוש נכון בטכניקה זו מפחית את הסבירות לזיהום חיידקי או פטרייתי של ריאגנטים, מדיה תרבותית ודגימות סביבתיות. טכניקה אספטית חיונית גם כדי להבטיח שלמות נתונים ולשמור על טוהר ספריות התרבות שעשויות להיות מורכבות מטילוקים נדירים וקשים מאוד לתרבות. מקורות הזיהום בסביבת המעבדה כוללים מיקרואורגניזמים מוטסים (כולל אלה הנצמדים לאבק וחלקיקי מוך), חיידקים הנמצאים בסביבת העבודה של ספסל המעבדה או על כלי זכוכית או ציוד לא סטריליים, ומיקרואורגניזמים המועברים מגופו ושיערו של החוקר. השימוש בטכניקה אספטית הוא גם אמצעי בטיחות שמוריד את הפוטנציאל להעברת מיקרואורגניזמים לחוקרים, וזה חשוב במיוחד בעת עבודה עם פתוגנים.

Principles

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

המטרה של שימוש בטכניקות אספטיות היא ליצור ולתחזק סביבת עבודה סטרילית, ציוד, ריאגנטים, כדי למזער זיהום של דגימות ביולוגיות. כדי לעשות זאת, ניתן לחטא את חלל העבודה וכמה כלים בכימיקלים כגון 70% אתנול ואקונומיקה מדללת. חשוב גם שהחוקר יתאים ציוד מגן אישי (PPE) כגון חלוק מעבדה, כפפות ומשקפי בטיחות.

מדיה וריאגנטים ניתן לעקר באמצעות מנגנוני עיקור מסנן המשתמשים מסנני 0.22-μm, אשר ביעילות להסיר את רוב מיקרואורגניזמים כגון חיידקים. לחלופין, ריאגנטים וציוד רבים יכולים גם להיות מעוקרים בחום גבוה. לדוגמה, חיידקים בכלים, בכלי זכוכית ובאמצעי תקשורת נוזליים יכולים להיהרג בחום ב-autoclave, שהוא תא שמחטא את התוכן באמצעות חשיפה לאדים בלחץ בטמפרטורה גבוהה. בנוסף, כמה כלים יכולים להיות מעוקרים בחום באמצעות מקור להבה, כגון מבער Bunsen.

השימוש במקור להבה הוא גם אחת הדרכים הנפוצות ביותר להקים סביבת עבודה אספטית. החום מהלהבה גורם לזרמת אוויר, יוצר מעלה שמרימה את כל המזהמים המוטסים הרחק בקרבת המבער, ויוצרת "שדה סטרילי" שבו ניתן לבצע עבודה ניסיונית אספטית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. הכנה לעבודה אספטית

  1. השגו והחלו את פריטי ה- PPE הבאים: חלוק מעבדה, כפפות לטקס או ניטריל (ללא דמעות או חורים) ומשקפי בטיחות(איור 1). לבטיחות במקרה של שימוש בלהבה פתוחה, לקשור את השיער הארוך.
    Figure 1
    איור 1: PPE: חלוק מעבדה, כפפות לטקס ומשקפי בטיחות.
  2. היבט חשוב שני של טכניקה אספטית הוא עיקור ואחסון נאותים של מדיה / ריאגנטים לשימוש במעבדה. הכן מדיום מרק נוזלי(למשל,ציר סויה טריפטי) ומדיה מבוססת אגר(למשל,R2A) על ידי שקילה של הכמות הנכונה של אבקת בסיס מיובש, אשר מתווסף לכמות המתאימה של מים דה מיוננים.
  3. עבור מדיום המרק, להמיס את האבקה על צלחת חמה עם חום נמוך מוחל, ולחלק את הנוזל או בנפחים 100 מ"ל לתוך צלוחיות בורג זכוכית העליון, או בנפחים 10 מ"ל לתוך מבחנות בורג זכוכית העליון. בעזרת מוט ערבוב מגנטי, מערבבים את מדיום האגורוז על מערבל הצלחת החמה עד שהאבקה מתמוססת לחלוטין.
  4. החלת סרט אוטומטי על הגורמים המכילים, ובודד את המדיה באופן אוטומטי בהתאם להוראות היצרן (למשל,20 דקות ב- 121 °C(איורים 2 ו - 3). שים לב שצבע הפסים בקלטת ההקלבה האוטומטית צריך להשתנות מלבן (טרום-autoclave) לשחור (לאחר ההקלבה האוטומטית). למרות שינוי הצבע בדרך כלל מציין כי עיקור היה מוצלח, בדיקות עיקור באמצעות ערכות רצועת נבג ניתן לבצע כדי לאמת את תהליך autoclaving.
    Figure 2
    איור 2: הקלטת המוחלת אוטומטית על חומר.
    Figure 3
    איור 3: שים לב לשינוי הצבע של פסים בקלטת אוטומטית מלבן (טרום-אוטוקלבה) לשחור (לאחר ההקלבה האוטומטית).
  5. מצננים את המרק הנוזלי לטמפרטורת החדר, ואז מאחסנים בטמפרטורת החדר או בקירור בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  6. מצננים את מדיום האגורוז על ידי הנחת המיכל באמבט מים מוגדר ~ 50 מעלות צלזיוס. לאחר התקררות, ניתן לשפוך את המדיה למנות פטרי סטריליות. אפשר למדיום להתקרר ולחזק, ולאחר מכן להתאחד לאחסון בטמפרטורות שצוינו על-ידי היצרן.
  7. ישנם מספר סוגים של מדיה תרבותית כי לא ניתן autoclaved כמו הטמפרטורות הגבוהות להשפיל מרכיבים קריטיים. חיטוי אלה דורשים עיקור מסנן באמצעות מערכת סינון ואקום המשתמשת מסנן 0.22-μm, ואחריו אחסון בטמפרטורה המתאימה.
  8. לפני ביצוע העבודה על הספסל, לחטא את פני השטח באמצעות פתרון מתאים (למשל,אקונומיקה 500-ppm). זה מוריד את הסיכון להעברת מזהמים משטח העבודה לתרבויות ומדיה סטרילית.
  9. כדי להקים שדה סטרילי, הפעל מבער בונזן. סוג הלהבה המתאים ביותר לחיטוי לולאות חיטוי מתכת הוא להבה כחולה עזה, עם קונוס כחול מוחלט שנצפו באמצע(איור 4).
    Figure 4
    איור 4: העברת חיידקים מצלחת פטרי אחת המציגה צמיחה של איזולט בתרבית ללוח פטרי לא מחוסן אחר המכיל מדיום גדילה מבוסס אגר.
  10. לאט לאט להעביר את הלולאה המחסנת דרך החלק החם ביותר של הלהבה (קצה החרוט הכחול). הלולאה צריכה להפוך אדומה חמה לצורך עיקור.

2. העברות חיידקים: מצלחת פטרי לצלחת פטרי

  1. תרחיש אחד של העברת חיידקים הוא מצלחת פטרי אחת המציגה צמיחה של איזולט בתרבית לצלחת פטרי סטרילית המכילה מדיום צמיחה מבוסס אגר.
  2. ראשית, פתחו מעט את צלחת הפטרי המכילה את תרבית החיידקים הטהורה, והקשו בעדינות על לולאת החקוס החמה והמיערת על פני השטח של אגר.
  3. יש לאחזר מושבה מבודדת אחת מפני השטח של הלוח באמצעות לולאת החנק המקוררת, ולסגור את צלחת הפטרי.
  4. בצע פס לבידוד באמצעות צלחת פטרי טרייה המכילה מדיום תרבות, עם המכסה מעט פתוח.
  5. עבור כל חלק של פס הבידוד (3 סה"כ לצלחת), לחטא את לולאת החנק רגע לפני השימוש. כמו כן, לחטא את הלולאה מיד לאחר ביצוע הרצף הסופי על מנת למנוע זיהום של משטח הספסל וכשיקול לאחרים במעבדה אשר עשויים מאוחר יותר להשתמש או לבוא במגע עם לולאות הפיקוח.
  6. מניחים את הצלחות המפוספסות באינקובטור לצמיחה בן לילה.

3. העברות חיידקים: מתרבות מרק לצלחת פטרי

  1. תרחיש שני של העברת חיידקים הוא מתרבות מרק המציגה צמיחה, כפי שנצפו בדרך כלל על ידי עכוז, לצלחת פטרי סטרילית המכילה מדיום צמיחה.
  2. הסר את המכסה מן המבחנה (או הבקבוקון) המכיל את התרבות החיידקית הטהורה, ולהעביר את פתיחת המיכל 2-3x דרך החלק החם ביותר של הלהבה. כדי למנוע זיהום, לא להניח את הכובע על הספסל.
  3. מנמיכים בזהירות את לולאת החנק המעוקרת לתוך הצינור/הבקבוקון, ולחצו בעדינות על צד המיכל כדי להתקרר רגע לפני הכניסה לתרבות המרק.
  4. הסירו לולאה אחת של תרבות המרק(איור 5)והחליפו מיד את המכסה.
    Figure 5
    איור 5: לולאה אחת של תרבות מרק.
  5. בצע פס לבידוד באמצעות צלחת פטרי טרייה המכילה מדיום תרבות, עם המכסה מעט פתוח.
  6. עבור כל חלק של הרצף (3 סה"כ לצלחת), לחטא את לולאת החנק רגע לפני השימוש. כמו כן, לחטא את הלולאה מיד לאחר ביצוע הרצף הסופי על מנת למנוע זיהום של משטח הספסל וכשיקול לאחרים במעבדה אשר עשויים מאוחר יותר להשתמש לולאות חיטוי.
  7. מניחים את הצלחות המפוספסות לבידוד באינקובטור לצמיחה בן לילה.

4. העברות חיידקים: מצלחת פטרי עם צמיחה לבינוני נוזלי סטרילי

  1. תרחיש שלישי של העברת חיידקים הוא מצלחת פטרי המכילה פס תרבות מבודד לצינור / בקבוקון המכיל מדיום צמיחה נוזלי סטרילי.
  2. פתחו מעט את צלחת הפטרי המכילה את תרבית החיידקים הטהורים, וקררו את לולאת החנק החמה על ידי הקשה עליה בעדינות על משטח אגר.
  3. יש לאחזר מושבה מבודדת אחת מפני השטח של הלוח באמצעות לולאת החנק המקוררת, ולסגור את צלחת הפטרי.
  4. הסר את המכסה מן המבחנה (או הבקבוקון) המכיל את מדיום הצמיחה הנוזלי סטרילי, ולהעביר את פתיחת המיכל 2 עד 3 פעמים דרך החלק החם ביותר של הלהבה. כדי למנוע זיהום, אל תניח את המכסה על הספסל.
  5. בזהירות להוריד את המושבה המופקת לתוך מדיום מרק נוזלי, בעדינות להסעיר את הלולאה על מנת לשחרר את החיידקים. החליפו מיד את המכסה.
  6. עקר להבה את לולאת החנק על מנת למנוע זיהום של משטח הספסל וכשיקול לאחרים במעבדה אשר מאוחר יותר עשויים להשתמש לולאות חיטוי.
  7. מניחים את הבקבוקון לתוך אינקובטור לצמיחה בן לילה.
  8. הסר את הבקבוקון מדגירה למחרת. בצע סדרת דילול כדי למנות את התרבות.
  9. צלחת הדילולים מהסדרה על מדיה תרבות agarose, ודגורת הצלחות בן לילה.
  10. הסר את הצלחות למחרת, ולהתבונן לכל זיהום.

5. העברות חיידקים: מתרבות מרק למדיום צמיחה נוזלי סטרילי

  1. תרחיש רביעי של העברת חיידקים הוא מתרבות מרק המציגה צמיחה לצינור / בקבוקון המכיל מדיום צמיחה נוזלי סטרילי.
  2. הסר את המכסה מן המבחנה (או הבקבוקון) המכיל את התרבות החיידקית הטהורה, ולהעביר את פתיחת המיכל פעמיים דרך החלק החם ביותר של הלהבה. כדי למנוע זיהום, לא להניח את הכובע על הספסל.
  3. בזהירות להוריד את לולאת החנק לתוך הצינור / בקבוקון, ולחץ בעדינות על הצד של המיכל להתקרר רק לפני הכניסה לתרבות המרק.
  4. הסר לולאה אחת של תרבות מרק, ומיד להחליף את הכובע.
  5. הסר את המכסה מן המבחנה (או הבקבוקון) המכיל את מדיום הצמיחה הנוזלי סטרילי, ולהעביר את פתיחת המיכל פעמיים דרך החלק החם ביותר של הלהבה. כדי למנוע זיהום, לא להניח את הכובע על הספסל.
  6. בזהירות להוריד את הלולאה המופקת לתוך מדיום מרק נוזלי סטרילי, בעדינות להתסיס את הלולאה על מנת לשחרר את החיידקים. החליפו מיד את המכסה.
  7. עקר את לולאת ההשמדה (איור 6) כדי למנוע זיהום של משטח הספסל וכשיקול לאחרים במעבדה שעשויים מאוחר יותר להשתמש בלולאות המחסנות.
    Figure 6
    איור 6: לולאה מחסן שהופכת ללחמה אדומה בזמן שהיא מעוקרת עם מבער בונזן.
  8. מניחים את הבקבוקון לתוך אינקובטור לצמיחה בן לילה.
  9. הסר את הבקבוקון מדגירה למחרת. בצע סדרת דילול כדי למנות את התרבות.
  10. צלחת הדילולים מהסדרה על מדיה תרבות agarose, ודגורת הצלחות בן לילה.
  11. הסר את הצלחות למחרת, ולהתבונן לכל זיהום.

טכניקה אספטית היא מיומנות בסיסית במיקרוביולוגיה, ויש לה יישומים חיוניים במחקר סביבתי.

אם תרביות מיקרוביולוגיות מזוהמות, הזמן, העבודה והעלויות הכספיות שיידרשו ממעבדה כדי "לנקות" או להחליף את התרביות, במיוחד מבודדים נדירים מסביבות ייחודיות, עשויות להיות גבוהות מאוד ואסורות, וחלק מהדגימות עשויות להיות בלתי ניתנות להחלפה.

שימוש נכון בטכניקות אספטיות מפחית את הסבירות לזיהום חיידקי ופטריות של ריאגנטים, מדיה תרבותית ודגימות סביבתיות, וגם מונע זיהום צולב בין דגימות. זהו גם אמצעי בטיחות שמפחית את השידור הפוטנציאלי של חיידקים לנסיין, וזה חשוב במיוחד בעת עבודה עם פתוגנים.

וידאו זה יציג את העקרונות של אלח דם; מספר טכניקות חשובות לשמירה על ריאגנטים ותרבויות סטריליים; ולבסוף, חלק מהשימושים שלהם במדעי הסביבה.

המטרה של שימוש בטכניקות אספטיות היא ליצור ולתחזק סביבת עבודה סטרילית, ציוד, ריאגנטים, כדי למזער זיהום של דגימות ביולוגיות. מקורות זיהום נפוצים כוללים מיקרואורגניזמים מוטסים, חיידקים הנמצאים על ספסל המעבדה או הציוד, ואלה מהשיער, הגוף והבגדים של החוקר.

שני סוגים של סוכנים הם מרכזיים להסרה או מניעת זיהום במעבדה: כימיקלים חיטוי וחום. פתרונות כגון 70% אתנול ואקונומיקה מדללת משמשים לעתים קרובות לחיטוי ציוד, משטחי עבודה וכפפות של ניסויים לפני שהם עוסקים בעבודה אספטית.

יחד עם זאת, חיידקים בכלים, כלי זכוכית ומדיה נוזלית יכולים להיהרג בחום באוטקלבה, שהיא תא שמחטא את התוכן באמצעות חשיפה לאדים בלחץ בטמפרטורה גבוהה. בנוסף, כלים כגון מוטות זכוכית המשמשים ציפוי התפשטות לולאות חיסון מתכת יכול להיות מעוקר בחום באמצעות מקור להבה, כגון מבער Bunsen.

השימוש במקור להבה הוא גם אחת הדרכים הנפוצות ביותר להקים סביבת עבודה אספטית. החום מהלהבה גורם לזרמת אוויר, יוצר מעלה שמרימה את כל המזהמים המוטסים הרחק בקרבת המבער, ויוצרת "שדה סטרילי" שבו ניתן לבצע עבודה ניסיונית אספטית.

עכשיו, כאשר אתם מבינים את העקרונות שמאחורי טכניקות אספטיות ומדוע הן חשובות, בואו נעבור על פרוטוקול ליצירת סביבת עבודה אספטית, יצירת אמצעי צמיחה סטריליים, והעברת חיידקים בין תנאי פולחן שונים.

לפני תחילת העבודה האספטית, חשוב עבור הנסיין לעשות ציוד מגן אישי מתאים, או PPE. מטרת הדבר היא הן למנוע מהנסיין לזהם את הדגימות ואת תרביות המעבדה, והן למנוע העברה של חיידקים פתוגניים פוטנציאליים לחוקר. פריטי PPE כוללים חלוק מעבדה, כפפות ומשקפי בטיחות.

השלב הבא הוא לחטא כראוי ולאחסן את מדיה הצמיחה לשמש כתות דגימות מיקרוביאלית. ראשית, לשקול את הכמות הנכונה של רכיבים בינוניים מוצקים, ולהוסיף אותם לנפח הנכון של ממס נוזלי שצוין על ידי היצרן, כגון מים deionized, במיכל autoclavable להוסיף מוט ערבוב מגנטי, מניחים את המיכל על מערבל צלחת חמה, ולהמיס את הרכיבים הבינוניים מוצק עם חום נמוך ערבוב.

סגור את המיכלים הבינוניים. אם משתמשים בכלי זכוכית עם מכסה בורג על, הקפד לא להדק את המכסה לחלוטין, כמו האוויר בתוך כלי השיט יתרחב עקב חימום במהלך autoclaving צריך לברוח. ללא בריחה, הגז עלול לגרום לכלי השיט להיקרע. שים חתיכת קלטת autoclave על כלי הדם, ו autoclave את המדיה על פי הוראות היצרן, כגון 20 דקות ב 121 °C (50 °F). לאחר השעבוד האוטומטי, ודא שהפסים בקלטות האוטומטיות הפכו לשחורים, מה שמצביע על כך שהגיעה לטמפרטורה הנכונה.

עבור מדיה צמיחה נוזלית, לתת להם להתקרר לטמפרטורת החדר, ולאחסן אותם בטמפרטורת החדר או עם קירור לפי הצורך. עבור מדיה צמיחה מוצקה מבוסס אגר, לתת להם להתקרר כ 50 °C (50 °F), ולאחר מכן לשפוך לתוך מנות פטרי סטרילי. אפשר אגר להתקרר ולגבש לפני אחסון בטמפרטורה המתאימה.

עבור מדיה שלא ניתן לעבד אוטומטית עקב נוכחות של רכיבים רגישים לחום, סנן לעקר באמצעות מסנן 0.22-μm.

טכניקת ליבה בעבודה מיקרוביולוגית היא להעביר באופן אספטי תרביות חיידקים בין אמצעי צמיחה שונים, מוצקים ונוזלים כאחד. לפני ההתחלה, לנקות את משטח ספסל המעבדה עם חומר חיטוי. זה מוריד את הסיכון של תרבויות מזהמות או מדיה סטרילית.

העברת תרביות חיידקים בדרך כלל עושה שימוש בכלי הנקרא לולאת חקיקה, אשר צריך להיות מעוקר לפני השימוש על ידי חימום בלהבה.

תדליק מקור להבה. לאט לאט להעביר את הלולאה המחוסנת דרך קצה הלהבה. הלולאה תהפוך לאדומה חמה. כדי להעביר מושבה חיידקית מצלחת אגר מוצקה, פתחו מעט את צלחת הפטרי, והקשו בעדינות על לולאת החקינה החמה על חלק ריק משטח אגר כדי למנוע הרג חום של החיידקים. לגרד מושבה אחת עם לולאת החנק, ולסגור את הצלחת.

כדי להעביר חיידקים מדיום צמיחה נוזלי, להסיר את המכסה מן מיכל התרבות. כדי לסייע במניעת זיהום, הימנעות מהנחית המכסה על הספסל. להעביר את הפה של המיכל 2-3 פעמים דרך החלק החם ביותר של הלהבה. לאחר מכן, בזהירות לגעת חם, מעוקר לולאת חיסון על החלק הפנימי של המיכל ולתת לו להתקרר לפני החדרת אותו לתוך תרבות המרק. הסר לולאה אחת של התרבות, ומיד סגור את המכסה.

להעברת החיידקים המתקבלים למדיום גדילה סטרילי, הסר את המכסה ממיכל עם המרק הסטרילי והעביר את פתח המיכל דרך הלהבה 2-3 פעמים. לאחר מכן, בזהירות להוריד את לולאת החיסון לתוך המדיום, להתסיס בעדינות כדי לשחרר את החיידקים. מיד סגור את המכסה. לחטא את לולאת החיסון לאחר השימוש.

אם מעבירים חיידקים על צלחת אגר סטרילית, פתחו את המכסה של צלחת פטרי טרייה עם אגר לא מסונן. פס לולאת החיסון עם תרבית החיידקים הלוך ושוב על פני מגזר אחד של אגר. לחטא את הלולאה ולקרר אותו על ידי נגיעה בחלק ריק של אגר, ולאחר מכן לעשות פס נוסף על אגר בזווית אטומה לפס הראשון, הקפדה לחצות את הרצף הראשון על 1-2 משיכות הראשונות אבל להימנע מלגעת בפס הראשון על משיכות הבאות. חזור על העיקור והפסים 2 פעמים נוספות. סגור את צלחת הפטרי, וחטא את לולאת החיסון.

לאחר שחוסנו, צלחת המרק או אגר צריכה להיות דגירה בטמפרטורת הצמיחה האידיאלית עבור המיקרואורגניזם הנתון כדי להשיג תרבות בת קיימא. על מדיום מוצק, דשא או גדיל מתמשך של חיידקים יהיה גלוי על אגר מכוסה על ידי שני הפסים הראשונים, אבל מושבות בודדות צריך להיות מושגת על הרצף הסופי. טכניקות אספטיות גרועות יביאו לצמיחה של עובש ומזהמים אחרים על הצלחת.

טכניקות אספטיות חשובות בניסויים רבים הכוללים דגימות מיקרוביאליות מהסביבה. במחקר זה, החוקרים בודדו בקטריופאג'ים, שהם וירוסים מדביקי חיידקים, מחיידק הקרקע המשותף ארתרובקטריה. תרביות ארתרובקטריה גדלו לראשונה בתנאים אספטיים. דגימות הקרקע נשטפו ומסוננות במאגר פאג', ופתרון הפאג' היה מעורבב עם התרבות החיידקית ומצופה על לוחות אגר. על הצלחת ייווצר מדשאה חיידקית, אך יהיו ניקויים, או "פלאקים", במקומות שבהם הנגיף הדביק והרג את החיידקים. לאחר מכן ניתן יהיה לטהר את פאג' מהפלאקים האלה למחקר נוסף.

מלבד שימוש במבערי בונסן, סביבות עבודה אספטיות יכולות להישמר גם בתחנות עבודה מיוחדות המכונות ברדסים לזרימת למינאר, המשתמשים בזרימת אוויר מכוונת ומסננים לשמירה על סטריליות. כאן, מדענים עבדו בשכונת זרימה כדי לבודד חיידקים ווירוסים פתוגניים פוטנציאליים מדגימות מים. מבודדים אלה היו אז תרבותיים יחד עם אמבה. מכיוון שאמבה בדרך כלל אוכל או חיידקי "פאגוציטוז", כל חיידק שהיה מסוגל להתנגד לעיכול אמבלני ולהישאר באורגניזמים אלה יכול גם להישאר בר קיימא בתאים אנושיים ולגרום למחלות.

לבסוף, תנאים סטריליים מאפשרים מחקר מפורט של מנגנונים אקולוגיים כגון היווצרות גושי שורש בצמחי קטניות - איברים מלאים בחיידקים ש"מתקנים " חנקן אטמוספרי לאמוניה, המשמשת את הצמח לצמיחה. החוקרים כאן יצרו "מיקרוקוסמוס" לחקר תהליך ההנהון באמצעות לוחות פטרי מחורצים עם מדיום צמיחת צמחים, הניחו בהם שתילים וחיסנו את השתילים בחיידקים שורשיים היוצרים גולם. הסביבה האספטית של מכסה המנוע הזרימה מונעת זיהום של תרביות עם חיידקים או פטריות אחרים.

הרגע צפית בסרטון של ג'וב על טכניקות אספטיות במדעי הסביבה. עכשיו אתה צריך להבין מדוע תנאי עבודה אספטיים חשובים; כיצד לבצע באופן אספטי ניסויים מיקרוביולוגיים; וכמה יישומים של טכניקות אספטיות למחקר סביבתי. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

התוצאה של ההליך מדגימה טכניקה אספטית נכונה וטכניקה אספטית גרועה. איור 7 ממחיש את הזיהום שיכול לנבוע מטכניקה אספטית גרועה בעת שפיכת לוחות אגרוז (צלחת עליונה: מדיום סטרילי; צלחות תחתונות: מדיה מזוהמת).

Figure 7
איור 7: זיהום שיכול לנבוע מטכניקה אספטית גרועה בעת שפיכת צלחות אגרוז. צלחת עליונה: מדיום סטרילי; לוחיות תחתונות: מדיה מזוהמת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

מלבד שימוש במבערי בונסן, סביבות עבודה אספטיות יכולות להישמר גם בתחנות עבודה מיוחדות המכונות ברדסים לזרימת למינאר, המשתמשים בזרימת אוויר מכוונת ומסננים לשמירה על סטריליות.

שימוש נכון בטכניקה אספטית חיוני למיקרוביולוגים סביבתיים בעת דגימה בשטח ובמעבדה בעת עבודה עם מדיה, ריאגנטים ובידודים בתרביתות.  טכניקה אספטית גרועה בתחום יכולה לגרום להעברת מיקרואורגניזמים מהטכנאי לדגימות סביבתיות קריטיות, כמו גם לזיהום צולב של חיידקים מדגם אחד למשנהו. אירועים כאלה הם בעלי חשיבות, למשל, במחקרים אקולוגיים מיקרוביאליים המבקשים לזהות ולהשוות אוכלוסיות חיידקיות ופטריות שעשויות להיות קיימות בביומה נתונה. זיהום של דגימות כאלה עלול לגרום לאובדן שלמות הנתונים. טכניקה אספטית היא גם קריטית לשמירה על בידודי תרבית המעבדה שמקורם בדגימת שדה או ממאגרים מבוססים היטב של מיקרוביאלית ותרבות תאים. הזמן, העבודה והעלויות הכספיות שיידרשו ממעבדה במאמץ "לנקות" או להחליף תרבויות מזוהמות, במיוחד מבודדים נדירים מסביבות ייחודיות, עשויים להיות גבוהים מאוד ואסורים, שכן חלק מהבודדים עשויים להיות בלתי ניתנים להחלפה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter