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Environmental Microbiology

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無菌環境科学

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無菌は、微生物学では基本的な技術であり環境研究の重要なアプリケーションがあります。

場合微生物学的文化が汚染されて、時間、労働、「クリーンアップ」またはユニークな環境から分離された文化、特に珍しい置換するラボの必要とされる金融のコストが非常に高いと、法外な、いくつかサンプルは、交換できない場合があります。

無菌技術の適切な使用は、試薬、培地、環境試料の細菌や真菌の汚染の可能性を低減、またサンプル間の交差汚染を避けます。また、病原体を使用するとき特に重要である、実験者に微生物の伝播の可能性を減少させる安全対策です。

無菌の原則を紹介します滅菌試薬と文化を維持するためにいくつかの重要なテクニックそして最後に、いくつかの環境の科学の使用。

無菌技術を使用しての目標を作成および維持滅菌作業環境、機器、試薬、試料の汚染を最小限に抑えることです。汚染の一般的な原因は、空気中の微生物、微生物実験室ベンチや機材、髪、ボディ、および研究者の衣服からのそれらの提示します。

2 つのタイプのエージェントが削除または実験室での汚染を防ぐ中央: 消毒剤と熱。70% エタノールなど希釈の漂白剤の解決策は、無菌作業に従事する前に実験者の手袋、作業面、機器の消毒に使われます。

同時に微生物やツール、ガラス製品、および液体媒体ですることができます熱殺された高圧、高温加圧蒸気への暴露を介して内容を殺菌室であります。加えて、ガラス棒などのツール拡散めっきと金属接種ループは熱殺菌のブンゼン バーナーなどの炎のソースを使用することができます。

炎の源の使用はまた無菌作業環境を確立する最も一般的な方法の 1 つです。炎からの熱無菌実験作業を行うことで、バーナーの近くから離れて浮遊汚染物をリフトする上昇気流を生成し、「滅菌フィールド」を作成、空気の対流が発生します。

今では、無菌テクニックと彼らが重要な理由の背後にある原理を理解は、無菌の作業環境を作成する、滅菌成長媒体を作ると異なる培養条件の間の細菌を無菌転送するためのプロトコルを行ってみましょう。

無菌作業を開始する前に適切な保護具や PPE に実験者にとって重要です。これの目的は、サンプルと実験室文化の汚染から実験者を防ぐために両方と研究する可能性のある病原微生物の伝達を防ぐためにです。PPE の項目には、実験用の上着や手袋、安全ゴーグルが含まれます。

次の手順は、適切に消毒し微生物サンプルの培養に使用される成長媒体に格納です。まず、固体培地成分の適切な量を量りし、液体溶剤脱イオン水、オートクレーブ コンテナー追加電磁攪拌棒、ホット プレート攪拌にコンテナーを配置低熱で固体培地成分を溶解との製造元によって指定され、攪拌の適切なボリュームに追加。

中のコンテナーを閉じます。ガラス容器を使用すると、キャップのネジと、ない血管内部の空気オートクレーブ滅菌中に加熱による展開が、エスケープする必要があります、完全にキャップを締めてさい。脱出せずガスに容器破裂する可能性があります。器、オートクレーブ 121 ° c 20 分などの製造元の指示に従ってメディアをオートクレーブ テープの一部を入れてください。オートクレーブ後、オートクレーブ テープのストライプが黒、適切な温度に達したを示すになってことを確認します。

液体の成長媒体のため、室温まで冷ます、室温でまたは適切な冷凍保存します。寒天ベース固体成長媒体、それらを冷ます約 50 ° C にし、滅菌シャーレに注ぐ。冷却し、適切な温度で保存する前に固める寒天を許可します。

熱に敏感な部品が存在するためオートクレーブすることはできませんメディア、フィルターは、0.22 μ m フィルターを使用して滅菌します。

微生物学的仕事のコア技術は、無菌固体と液体の両方の異なる成長媒体間細菌文化を転送することです。開始、する前に消毒剤でラボ ベンチ表面をきれいにします。これは文化か生殖不能媒体の汚染リスクを低減します。

細菌文化を転送する接種ループ、炎で加熱により使用前に消毒をする必要があると呼ばれるツールを使用よく。

炎のソースを入れます。ゆっくりと炎の先端を接種したループを渡します。ループはホット赤になります。固形寒天から細菌のコロニーを転送するには、ペトリネット プレートを少し開いて、軽く熱を殺す細菌を避けるために寒天表面の空の部分に熱い接種ループ。接種ループ単一コロニーをこすり、プレートを閉じます。

液体の成長媒体から細菌を転送するには、文化容器からキャップを取り外します。汚染を防ぐために回避ベンチの上にキャップを設定します。2-3 回炎のホットな部分を通って容器の口を渡します。その後、慎重にコンテナーの内側に熱い、滅菌接種ループに触れるし、スープ文化にそれを挿入する前に、涼しくてみましょう。文化の 1 つの loopful を削除し、すぐにキャップを閉じます。

得られた細菌を滅菌培に転送するため滅菌のスープとコンテナーからキャップをはずし、容器の口炎 2-3 回を渡します。その後、慎重に、培地へ接種ループを下げる、優しく細菌を解放する揺り動かしなさい。すぐにキャップを閉めてください。使用後接種ループを滅菌します。

滅菌寒天プレート上に細菌を転送する場合は、接種寒天と新鮮なペトリネット プレートのカバーを開きます。ストリーク バック前後寒天の 1 つのセクター間での細菌培養の接種ループ。ループを殺菌し、クールな寒天の空の部分に触れることによってそれ、寒天の別の縞鈍い角度で最初の 1-2 ストロークの最初の連勝を越えるが、ストロークの最初の連勝に触れないように必ず最初の連勝します。殺菌とストリー キング 2 回以上繰り返します。ペトリ プレートを閉じ、接種ループを消毒します。

一度接種すると, スープや寒天プレート、実行可能なカルチャを取得する特定の微生物の最適成長温度で培養する必要があります。固体媒体の芝生や細菌の連続ストランドが寒天の最初の 2 つの縞で覆われて表示されますが、最終的なストリークの個々 のコロニーを取得必要があります。貧しい人々 の無菌技術は、金型やプレートの他の汚染物質の成長になります。

無菌技術は環境から微生物サンプルを含む多くの実験で重要です。この研究では、研究者は隔離バクテリオファージが細菌感染ウイルスは、一般的な土壌細菌アースロバクターから。アースロバクター文化はまず無菌条件下で栽培しました。土壌サンプルされた洗浄バクテリオファージ バッファーでフィルタ リングし、バクテリオファージ溶液細菌文化と混合し、寒天プレートの上にメッキします。細菌の芝生とプレートになるが、開拓、またはウイルスが感染していたし、細菌を殺されたスポットで「プラーク」があるでしょう。ファージは、さらなる研究のためのこれらのプラクから精製できます。

ブンゼン バーナーを使用する以外は、使用する監督気流および無菌性を維持するためのフィルター、層流フードとして知られている専門のワークステーションで無菌作業環境を維持できます。ここでは、科学者は、潜在的な病原細菌および水試料からのウイルス分離する流フードで働いていた。これらの菌株は、アメーバとともに培養しました。アメーバは、通常食べるか""細菌を貪食、ため amoebal 消化に抵抗する、これらの有機体に残ることができたすべての細菌はまた、潜在的ひと細胞の存続し、病気を引き起こすできます。

最後に、滅菌条件は、マメ科植物の根粒形成植物 - 成長の植物によって使用されるアンモニアを大気中の窒素を「修正」細菌いっぱいの臓器など生態学的メカニズムの詳細な研究を許可します。ここで作成した研究者「小宇宙」植物培地で切欠きを有するペトリネット プレートを用いた根粒形成過程研究のための苗を入れるし、接種根粒菌の根粒形成と苗。流フードの無菌の環境は、他の細菌やカビの文化の汚染を防ぎます。

ゼウスの無菌環境科学技術関連のビデオを見てきただけ。今、無菌の労働条件が重要である理由を理解しておくべき無菌微生物実験; を実行する方法無菌技術の環境研究への応用。いつも見てくれてありがとう!

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