Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Environmental Microbiology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 

Técnica aséptica en ciencias ambientales

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Técnica aséptica es una habilidad fundamental en Microbiología y tiene aplicaciones cruciales en la investigación ambiental.

Si las culturas microbiológicas están contaminadas, el tiempo, el trabajo y el costo financiero que se requiere de un laboratorio de "limpiar" o reemplazar las culturas, particularmente raras aislados de ambientes únicos, podría ser muy elevado y prohibitivo, y algunas muestras pueden ser insustituibles.

Uso adecuado de técnicas asépticas reduce la posibilidad de contaminación bacteriana y fúngica de reactivos, medios de cultivo y muestras ambientales y también evita la contaminación cruzada entre muestras. También es una medida de seguridad que disminuye la potencial transmisión de los microbios al experimentador, que es especialmente importante cuando se trabaja con agentes patógenos.

Este video presenta los principios de asepsia; varias técnicas importantes para mantener los reactivos estériles y las culturas; y por último, algunos de sus usos en ciencias ambientales.

El objetivo de la utilización de técnicas asépticas es crear y mantener un ambiente estéril de trabajo, equipos y reactivos, con el fin de minimizar la contaminación de las muestras biológicas. Fuentes comunes de contaminación son los microorganismos aerotransportados, microbios presentan en el Banco del laboratorio o equipo y las del pelo, el cuerpo y la ropa del investigador.

Dos tipos de agentes son fundamentales para eliminar o prevenir la contaminación en el laboratorio: desinfectantes químicos y calor. Soluciones como el 70% de etanol y diluir blanqueador se utilizan para la desinfección de equipos, superficies de trabajo y guantes de experimentadores antes de participar en trabajo aséptico.

Al mismo tiempo, microbios o en herramientas, cristalería y medios líquidos pueden ser muerto de calor en una autoclave, que es una cámara que esteriliza el contenido vía la exposición a alta temperatura de vapor a presión. Además, herramientas tales como barras de cristal utilizadas para difundir la galjanoplastia y loops de inoculación metal pueden ser esterilizado de calor usando una fuente de llama, como un mechero de Bunsen.

El uso de una fuente de fuego es también una de las maneras más comunes para establecer un ambiente de trabajo aséptico. El calor de la llama provoca convección del aire, generando una corriente ascendente que eleva cualquier contaminantes en el aire de las proximidades del quemador y la creación de un "campo estéril" en el que llevar a cabo trabajo experimental aséptico.

Ahora que usted entiende los principios de técnicas asépticas y por qué son importantes, vamos a ir a través de un protocolo para crear un ambiente de trabajo aséptico, confección de medios de cultivo estéril y asépticamente transferir bacterias entre diversas condiciones de cultivo.

Antes de comenzar el trabajo aséptico, es importante para el experimentador a don apropiado equipo de protección personal o EPP. El propósito de esto es tanto para evitar que al experimentador contaminen las muestras y los cultivos de laboratorio y también para evitar a la transferencia de microbios potencialmente patógenos para el investigador. Artículos PPE incluyen una bata de laboratorio, guantes y gafas de seguridad.

El siguiente paso es esterilizar y almacenar los medios de crecimiento para cultivo las muestras microbianas. En primer lugar, pesar la cantidad apropiada de componentes sólidos del medio y añadir el volumen adecuado de líquido disolvente especificado por el fabricante, tales como agua desionizada, en un recipiente apto para el autoclave agregar una barra de agitación magnética, coloque el recipiente sobre un agitador de placa caliente y disolver los componentes medio sólidos con baja temperatura y revolviendo.

Cerrar los envases medianos. Si utiliza un recipiente de vidrio con tapa de rosca, asegúrese de no apriete la tapa totalmente, el aire dentro de los vasos aumentará debido al calentamiento en autoclave y escapar. Sin escape, el gas puede causar la nave a la ruptura. Poner un trozo de cinta de autoclave en los vasos y autoclave de los medios de comunicación según las instrucciones del fabricante, como 20 min a 121 ° C. Después de la esterilización en autoclave, asegúrese de que las rayas de las cintas autoclave activado negras, indicando que se alcanzó la temperatura adecuada.

Para medios de cultivo líquido, dejan enfriar a temperatura ambiente y guárdelos a temperatura ambiente o con refrigeración según sea el caso. Para los medios de agar sólido crecimiento, dejan enfriar a aproximadamente 50 ° C y, a continuación, verter en placas de Petri estériles. Permitir que el agar se enfríe y solidifique antes de almacenar a la temperatura adecuada.

Para los medios de comunicación que no pueden ser esterilizado debido a la presencia de componentes sensibles al calor, filtro esterilice usando un filtro de 0,22 μm.

Una técnica de base en el trabajo microbiológico debe transferir asépticamente las culturas bacterianas entre los medios de crecimiento, sólidos y líquidos. Antes del principio, limpie la superficie del Banco de laboratorio con un desinfectante. Esto reduce el riesgo de contaminación de cultivos o medios estériles.

Transferencia de cultivos bacterianos comúnmente hace uso de una herramienta llamada un asa de inoculación, que debe ser esterilizados antes del uso por la calefacción en una llama.

Encender una fuente de la llama. Pase lentamente el asa de inoculación a través de la punta de la llama. El lazo se vuelve rojo caliente. Para transferir una colonia de bacterias de una placa de agar sólido, abrir un poco la placa de Petri y golpee suavemente el asa de inoculación caliente sobre una zona vacía de la superficie del agar para evitar el calor mata las bacterias. Raspar una sola Colonia con el asa de inoculación y cerrar la placa.

Para transferir bacterias de un medio de crecimiento líquido, retire la tapa del recipiente de cultivo. Para ayudar a prevenir la contaminación, evitando bajar la tapa en el Banco. Pasar la boca del envase 2 - 3 veces a través de la parte más caliente de la llama. Luego, con cuidado toque el asa de inoculación esterilizada, caliente en el interior del recipiente y déjela enfriar antes de introducirlo en el caldo de cultivo. Quitar un asa llena de la cultura y cerrar inmediatamente la tapa.

Para transferir las bacterias obtenidas a un medio de cultivo estéril, retire la tapa de un recipiente con el caldo estéril y pasar el contenedor de apertura a través de la llama 2 - 3 veces. Luego, cuidadosamente baje el asa de inoculación en el medio y agite suavemente para liberar las bacterias. Inmediatamente cierre la tapa. Esterilizar el asa de inoculación después de su uso.

Si la transferencia de bacterias en una placa de agar estéril, abra la tapa de un fresco plato de Petri con agar no inoculado. Raya el asa de inoculación con el cultivo bacteriano y atrás a través de un sector del agar. Esterilice el asa y fresco que al tocar una zona vacía del agar, luego realizar otra raya en el agar en un ángulo obtuso en la primera racha, asegurándose de que al cruzar la primera raya a los primeros trazos 1-2 pero evite tocar la primera racha en movimientos posteriores. Repita la esterilización y rayas 2 veces más. Cierre la placa de Petri y esterilizar el asa de inoculación.

Una vez inoculado, el caldo o agar de la placa entonces debe incubarse a la temperatura ideal de crecimiento para el microorganismo determinado obtener cultura viable. En medio sólido, un césped o un filamento continuo de bacterias sería visible en agar cubierto por las dos primeras vetas, pero colonias individuales deben obtenerse en la racha final. Técnicas asépticas pobres resultaría en el crecimiento de moho y otros contaminantes en la placa.

Técnicas asépticas son importantes en muchos experimentos con muestras de microbios del ambiente. En este estudio, los investigadores aislaron bacteriófagos, que son bacterias que infectan los virus, de la bacteria común del suelo Arthrobacter. Arthrobacter culturas primero fueron cultivadas bajo condiciones asépticas. Muestras de suelo fueron lavadas y filtradas en tampón de fago, y la solución de phage era mezclada con la cultura bacteriana y revestida en placas de agar. Forma un césped bacteriano en la placa, pero habría claros o "placas", en lugares donde el virus había infectado y matado la bacteria. Phage entonces podría ser purificada de estas placas para el estudio adicional.

Que no mecheros Bunsen, entornos de trabajo aséptico se pueden mantener también en estaciones de trabajo especializadas conocidas como campanas de flujo laminar, que el uso dirigido de flujo de aire y filtros para mantener la esterilidad. Aquí, los científicos trabajaron en una campana de flujo para aislar posibles bacterias patógenas y los virus de las muestras de agua. Estos aislamientos fueron entonces cultivados junto con amebas. Porque las amebas normalmente comerán o "fagocitar" a las bacterias, las bacterias que eran capaces de resistir la digestión amoebal y permanecen en estos organismos también pueden permanecer viables en las células humanas y causan enfermedades.

Finalmente, las condiciones de esterilidad permiten estudio detallado de los mecanismos ecológicos tales como la formación de nódulos de la raíz de leguminosas plantas - órganos llenos de bacterias que "fijan" el nitrógeno atmosférico en amoníaco, que es utilizado por la planta para el crecimiento. Los investigadores aquí creados "microcosmos" para estudiar el proceso de nodulación con muesca placas de Petri con medio de cultivo de plantas, coloca las plántulas en ellos e inocular las plántulas con bacterias rizobios formando nódulos. El ambiente aséptico de la campana de flujo previene la contaminación de las culturas con otras bacterias u hongos.

Sólo has visto video de Zeus en técnicas asépticas en ciencias ambientales. Ahora debe comprender por qué las condiciones asépticas de trabajo son importantes; Cómo llevar a cabo asépticamente experimentos microbiológicos; y algunas aplicaciones de técnicas asépticas para la investigación ambiental. ¡Como siempre, gracias por ver!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter