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Cultivo y enumeración de bacterias a partir de muestras de suelo
 

Cultivo y enumeración de bacterias a partir de muestras de suelo

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Determinar un conteo preciso de bacterias ambientales es fundamental para evaluar la salud de un ecosistema de suelo. Esto se puede lograr cultivar colonias de bacterias con diluciones adecuadas.

Bacterias del suelo son una parte importante de un ecosistema de suelo sano, interpretando papeles en descomposición, fijadoras de nitrógeno y ciclo de nutrientes. Suelos superficiales son un sustrato de materia orgánica y partículas inorgánicas formando una matriz compleja que rodea a los poros que se llenan de aire o agua. Estas condiciones crean un ecosistema ideal para las bacterias, con suelos superficiales que contienen típicamente más de 1 millón de bacterias por gramo.

Debido a esta alta concentración de bacterias, dilución es necesaria antes de placas en medios del crecimiento. Diluciones seriadas pueden reducir la concentración de la muestra original de suelo a niveles suficientemente bajos para las colonias solo ser cultivada en las placas de los medios de comunicación, permitiendo el cálculo de las cuentas iniciales de bacterias en la muestra de suelo.

Este video ilustra cómo preparar diluciones seriadas de las muestras de suelo, cómo estas muestras bacterianas de la placa y cómo calcular cuenta bacteriana del suelo de las placas de la dilución.

Las bacterias son organismos procariotas simples, pero muy diversas en cuanto a especies y ecosistemas. Actinomycetes son un subconjunto de las bacterias que con frecuencia se consideran un grupo único debido a su estructura filamentosa, donde crecen encordadas a hifas de forma.

Por lo general, actinomicetos representan 10% de la población bacteriana en el suelo. Las bacterias y los actinomicetos son abundantes en casi todos los ambientes en la tierra, pero se encuentran en una diversidad y abundancia en el suelo.

Bacterias del suelo son enumeradas y potencialmente cultivadas e identificadas por la galjanoplastia de la dilución. Aquí, una muestra de suelo en serie es diluido en agua y luego dispersados en las placas de crecimiento de agar. Luego se cuentan las colonias resultantes. Este valor, junto con el factor de dilución, se usa para aclarar la concentración inicial de bacterias en el suelo.

Placas de la dilución es un método simple para la enumeración bacteriana y común, barato, pero sufre de varios inconvenientes. El suelo no se debe colocar durante las diluciones, que podrían conducir a un crecimiento sesgado. Algunos suelo bacterias no la cultura en las placas, o crecen demasiado lento para ser observado. Además, este método asume que las colonias están formadas por una sola bacteria, pero pueden surgir de los montones de células múltiples.

Ciertas especies bacterianas crecen mejores en medios de cultivo diferentes. Un sustrato común a la cultura una amplia gama de bacterias es una placa de agar-peptona levadura. Actinomicetos crecen preferentemente en las placas base de glicerol-caseína, que adaptan mejor el crecimiento de estas bacterias filamentosas.

Ahora que usted entiende el concepto de enumeración bacteriana, vamos a ver cómo este proceso se lleva a cabo en el laboratorio.

Para comenzar el procedimiento, pesar 10 g de muestra de suelo y añadir a 95 mL de agua desionizada. Agite bien la suspensión y la etiqueta como "A". Antes de que el suelo se instala, extraiga 1 mL de la suspensión con una pipeta estéril y transferir a 9 mL de agua desionizada. Vórtice y la etiqueta "B".

Repita este paso de dilución 3 veces, cada vez con 1 mL de la suspensión anterior y 9 mL de agua desionizada. Etiquetar estos secuencialmente como tubos de C, D y E. El resultado en diluciones seriadas de 10-1 a través de 10-5 gramos de suelo por mL.

Para hacer crecer colonias de bacterias, tomar 3 placas de agar levadura peptona preparados y etiquetarlos como C, D y E. agitar las muestras correspondientes y pipetear 0,1 mL en cada placa. Puesto que se reportan unidades formadoras de colonias por mL, con 0,1 mL más aumenta la dilución en un factor de diez.

A continuación, sumerja un separador de cristal en etanol. Coloque el separador en una llama durante unos segundos para encender y quemar el etanol. Esto esterilizará el separador.

Mantenga el separador por encima de la primera placa hasta que la llama se extingue. Abra la placa rápidamente, manteniendo la tapa cerca de. Toque el separador para el agar de inóculo se enfríe y luego la gota de inóculo sobre la superficie hasta que desaparezcan los rastros de líquido libre. Vuelva a colocar la tapa de la placa.

Volver a la llama el separador y repita el proceso con el próximo funcionamiento de la placa, rápidamente para que no se contamine la placa con organismos aerotransportados. Invertir las placas para evitar que gotas de humedad sobre el agar e Incube las placas a temperatura ambiente durante una semana.

Para crecer actinomicetos, tomar tres platos preparados glicerol-caseína y etiquetarlos como B, C y D. utilizando las técnicas mostradas anteriormente, coloque la placa 0,1 mL de las suspensiones B, C y D. Las diluciones más bajas se utilizan porque actinomicetos están típicamente presentes como 1/10 de la población bacteriana.

Finalmente, invertir las placas y almacenar a temperatura ambiente durante dos semanas.

Después de la incubación, examinar todas las placas bacterias cuidadosamente y tenga en cuenta las diferencias en forma y tamaño de la Colonia. Cuando se cultiva en agar, las bacterias producen colonias viscosos desde incoloro a color naranja brillante, amarillo o rosa. Por el contrario, actinomycete colonias son calcáreos, firme, correosa y se romperán bajo presión, donde otras colonias de bacterias se manchan. Esto permite distinguir por el tacto con un asa estéril colonias.

Cuente y anote el número de colonias bacterianas, incluyendo cualquier actinomicetos. Sólo contar las placas con 30-200 colonias por placa.

Para crecer cultivos de bacterias individuales específicas, seleccione colonias discretas de cualquiera de las placas, seleccionar las colonias que están bien separadas de los vecinos de las colonias. Esterilizar un bucle que se separa, entonces abra la placa y tocar el lazo a un lugar vacío para enfriar. A continuación, toma una pequeña cantidad de la colonia de interés en el bucle.

Tomar una placa de peptona-levadura fresca, hacer una racha de unos pocos centímetros de un lado. Esterilizar y enfriar otra vez, y hacer una raya que cruza la franja inicial sólo en la primera pasada. Repita este proceso dos veces más de la misma manera. Este talento "dilución" produce en las células en el lazo de ser separados uno del otro. Coloque la placa en un lugar oscuro a incubar a temperatura ambiente durante dos semanas.

De los recuentos de colonias bacterianas y Actinomiceto, las unidades formadoras de colonias por gramo de suelo puede ser determinadas. El número de colonias por gramo de suelo es igual al número de colonias contadas en la placa, multiplicada por el recíproco de la dilución plateada. Por ejemplo, si se cuentan 46 colonias en una placa de dilución de 10-5 con un inoculante de 0,1 mL, entonces la UFC por gramo de suelo es igual a 10-6 por 46 y 46 millones de unidades formadoras de colonias por gramo de suelo.

Realizar conteos bacterianos y culturas es un primer paso clave en muchas investigaciones científicas o protocolos.

Suelo sano contiene entre 106 y 108 bacterias por gramo. Enumeración de bacteria del suelo puede utilizarse para determinar la salud de los suelos de interés y cuentas de menos de 106 y 108 bacterias por gramo indican terreno malsano o pobres. Esto puede ser causado por la falta de nutrientes o materia orgánica, estrés abiótico debido al pH del suelo extremas o la contaminación del suelo.

Muchos tipos de antibióticos usados en la medicina hoy se identificaron primero en suelo vivienda bacterias u hongos. Aislamiento de cepas puras de culturas de suelo ayuda en potencialmente ayuda los científicos identifiquen nuevos compuestos antibióticos. Prueba aquí, las bacterias o compuestos aislados de interés pueden añadirse a platos crecidos césped bacteriano, y sus efectos sobre el crecimiento del césped. Claro parches de céspedes bacterianos donde el crecimiento fue inhibido por las bacterias de prueba o compuesto pueden indicar actividad antibiótica.

Leguminosas, como guisantes y frijoles se basan en una relación simbiótica con la fijación de nitrógeno las bacterias. Estas bacterias viven libremente en el suelo o dentro de los nódulos en la raíz del sistema y producen compuestos de nitrógeno que son utilizados por la planta. En suelos pobres, complementando los cultivos de leguminosas con bacterias fijadoras de nitrógeno cultivadas en suelos puede estimular el crecimiento y la salud de las plantas. Esto puede resultar en plantas más grandes, más resistentes, que a su vez dan mayor rendimiento del cultivo.

Sólo ha visto la introducción de Zeus a enumeración bacteriana. Ahora debería entender cómo realizar las diluciones de las muestras de suelo, cómo la placa para recuento de colonias y el aislamiento de la Colonia y cómo calcular el número de bacterias en muestras de suelo. ¡Gracias por ver!

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