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ろ過による水試料からの糞便細菌の分離
 

ろ過による水試料からの糞便細菌の分離

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膜ろ過細菌収集の後培養、品質と水の源の清浄度を評価するために有用な手法です。

運命に農業、レクリエーション、または国内の設定で使用する水の品質は、水系伝染病の発生のための潜在性のための大きい重要性のです。その後、水が人や動物の糞便で汚染されている場合は、彼らの摂取時に新しいホストに病原性寄生虫、細菌、またはウイルスを広がる可能性があります。このような病気の原因となる有機体のための水の源を監視は公衆衛生を確保するため重要なためです。

膨大な数と様々 な水の源であるかもしれない糞便口頭病原体は、それぞれ独立して定期的に分析には非現実的。代わりに、水質の一般的な微生物学的アッセイは、大腸菌群の指標細菌を使用します。このプロセスの詳細については、指標生物にこのコレクションのビデオを参照してください。

このビデオ環境水サンプルの膜ろ過のプロセスを示すため、糞便指標細菌大腸菌群、糞便の大腸菌群、糞便 entercocci などのいくつかの種類を培養する方法を示し、糞便汚染の有無を確認する方法について説明します。

膜ろ過技術は、フィルターやトラップの細菌間で水サンプルを描画する負圧を利用しています。フィルターは約 1 μ m のサイズでは、通常、細菌のキャプチャができる 0.45 μ m の最小平均孔径の特殊な膜です。濾過後、膜は agarose 成長媒体に適用し、対象微生物を培養する適切な条件で培養しました。

この手法は最も低濁度ソース飲料水、スイミング プール、または湖や貯水池などに最適です。粒子状物含有量の高い水は、汚れや処理できる量を制限するフィルターの目詰まりで起因できます。さらに、膜ろ過はこれは文化とインキュベーション ターゲット大腸菌群を列挙することの難しさを増やすことができます、多数の背景、または未処理下水のような非大腸菌群細菌を含む水源の実用的ではありません。

細菌性のサンプルは、フィルターに閉じ込められている、一度は、水試料中の指標細菌の種類を特定する成長板に転送できます。さまざまなメディア タイプのめっきは細菌の種類の選択し、迅速同定可能します。

文化特定板の成長後さらに指標細菌 id の確認ことができます使用して遂行する液体媒体にコロニーを拾うなど糞便大腸菌または大腸菌群の存在下でのみ生成ガスをキャプチャするダーラム管を使用してのテクニック。また、疑いのある糞便の腸球菌は、グラム陽性、負の過酸化水素がカタラーゼ テストと共にの組み合わせによって確認できます。

今では私たちは水試料の膜ろ過原理に精通しているをこの手順を実行する方法を見てをみましょう。

手順を開始まず関心のテスト水の源から水のサンプルを収集します。滅菌の 1 L ボトルに採血を確認します。コレクションが完了すると、氷の上にサンプルを置くし、微生物分析研究室にそれらを輸送します。

分析するには、まず膜ろ過マニホールドを滅菌します。次に、真空ポンプと漂白剤を含む濾過廃棄物フラスコにマニホールドを接続します。

エタノールは、鉗子を火炎滅菌、包装から滅菌グリッド膜を取り外します。マニホールド、膜ろ過面積のセンターの上にフィルターを配置し、単位に漏斗滅菌フィルターを適用場所で確保します。

漏斗に試験水の要求された体積を測定します。フィルターを通してテスト サンプルを描画する部分的な真空を適用します。中断された固体物質、細菌などの有機物、または中の小さい粒子、ウイルス、フィルター内にトラップされます 0.45 μ m より大きい固体を溶解などは、漂白剤を含む廃棄物のフラスコにも通ります。

サンプルは、フィルターを通過した後、リンス 25 ml の滅菌水漏斗のインテリア 3 回、このフィルターを通過することができます。最終すすぎが完了したら、真空を外しマニホールドから目標到達プロセスを削除します。

次に、エタノールは鉗子を火炎滅菌する、すぐにユニットからメンブラン フィルターを削除します。表面に完全な接触を確保し、空気の泡を引っかけないように回転運動を使用してターゲット微生物の適切な成長プレート上に配置します。

さらに各サンプルの処理、ステンレス鋼のマニホールドをサニタイズし、交差汚染を防ぐために滅菌漏斗を使用します。最後に、適切な潜伏期間のインキュベーターにプレートを配置します。

潜伏期間では、次の列挙のためのインキュベーターからプレートを削除します。可能であれば、クールな白色光源を用いた低消費電力倍率下でコロニー カウントを実行します。大腸菌群を決定するには、識別し、ピンク色で濃い赤に表示され、完全にまたは部分的に植民地を覆う金属表面の光沢のあるコロニーをカウントします。非定型の合計大腸菌コロニーは暗い赤、さきか光沢のない核します。

青、白、無色、または光沢なしピンク表示のコロニー非-大腸菌群と見なされます、大腸菌群数には含めない。

糞便の大腸菌群のコロニーは青の様々 な色合いとして表示されます、これらは別のカテゴリーとしてカウントすべき。非糞便の大腸菌群のコロニーは通常クリーム色、グレー、個々 のカテゴリにも記録する必要があります。最後に、糞便の腸球菌のコロニーは、濃い赤い色でピンクからの範囲し、別々 にカウントする必要があります。

合計大腸菌コロニーを確認するには、興味の単一コロニーを滅菌、冷却された接種ループを適用します。ラウリル tryptose スープ、ダーラム管を入れたガラスの容器に選択したコロニーを転送します。次に、インキュベーターに文化を配置します。ダーラム発酵管によってキャプチャされたガスの生産と共に混濁の存在は、合計大腸菌群として植民地を確認します。

糞便の大腸菌検証のため無菌無菌 EC 培地とダーラム発酵管を含むガラス容器に青色のコロニーを転送します。インキュベーターに接種の管を配置します。インキュベーション後、濁った再接種ガスと共に生産を確認する糞便の大腸菌群のコロニー。

糞便の腸球菌を確認するには、無菌脳心臓注入寒天プレートの上に正しい形態と疑われるコロニーを転送し、孵化させなさい。BHIA 上隔離されたコロニーから 2 つの滅菌ガラス スライド上に成長を転送する次に、します。

ガラスのスライドの 1 つに 3% 過酸化水素の 2 〜 3 滴を追加します。急速なガスの生産は、カタラーゼ陽性菌シトロバクター属などを示します。糞便の腸球菌の細菌はカタラーゼ否定的です;したがって、バブルは認められなかった。バブルを表示しないカタラーゼ陰性コロニー、グラム染色を実行します。糞便の腸球菌としてこれらは、形で、グラム陽性、卵形を表示され、ペアで主にグループ化されたまたは短いチェーンする必要があります。

汚染の存在を示す水の源でこれらの指標細菌のいずれかを見つけること。サンプルの 5% 以上が 1 ヶ月にわたって汚染されている場合、ソースは人間の消費のために不適当考慮されるかもしれない。

膜ろ過、生物学的応用の数で使用され、糞便指標生物は、他の実験の手順によっても検出できます。これらのアプリケーションのいくつかはここで検討されています。

膜濾過は、水試料からのウイルスのキャプチャにも使用できます。ウイルスは通常非常に低いレベルで存在する、水試料は、分析のためにそれらをキャプチャするために集中する必要があります。キャプチャされたウイルス、フィルターから解放されることができるし、細胞培養感染性の試金または PCR などの技術を使用して識別されます。

膜濾過法は、工業用又は理化学用の高純度水の生産にも生かされています。多くの産業、オペレーション ・ プロセスの高純度水を必要とし、膜ろ過は不要な溶存金属と水から塩を含む汚染物質を削除するに役立つことができます。また飲料水を生成する海水の淡水化で使用ことができます。

膜ろ過水の指標生物を識別するゼウスの導入を見てきただけ。今理解しておくべき方法膜フィルター水試料膜から糞便指標細菌のいくつかの種類を培養する方法、指標生物としてこれらを確認する方法。見てくれてありがとう!

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