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富集培养:在选择性和微分介质上培养有氧和厌氧微生物
 

富集培养:在选择性和微分介质上培养有氧和厌氧微生物

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从沙漠冻土带到热带雨林,细菌几乎能栖息在地球上的每一个环境。这种对不同利基进行殖民的能力,是由于其适应性和巨大的代谢多样性,这使得它们能够利用各种各样的分子来产生能量。正是这种巨大的多样性导致这一现象,地球上不到1%的细菌物种被认为是可培养的,这些只有在了解其特定的代谢和环境需求才有可能。

在实验室中操作介质和环境,不仅使研究人员能够进行实验,找到培育感兴趣的物种的最佳条件,而且还使丰富性、不断变化的条件选择过程混合文化的特定物种。一些微生物物种是通才,能够容忍各种各样的状态或环境。这种生物体在实验室条件下可能很容易生长,但如果有极端的栖息地,它们也可能被阻止生长,如果目标是使混合培养体能够适应这种条件而富于生物体,这会有所帮助。

挑剔的生物体是可培养的,但只有当满足特定条件时。例如,奈瑟里亚或血友病物种需要含有部分分解红血球和高二氧化碳浓度的介质,这也可能阻碍其他物种的生长。极恋人因其对极端条件的偏好而得名,例如极低或高温、缺氧或缺氧条件,或存在高盐。这些情况可能是不能容忍的大多数其他微生物。

为了进一步丰富感兴趣的生物体,一些介质类型包含指标,使洞察生物体的新陈代谢。曼尼托盐Agar抑制对高盐敏感的生物体的生长。革兰氏阴性细菌通常无法存活,但克氏阳性葡萄球菌属能够茁壮成长。此外,MSA琼脂表示任何菌落能够发酵曼尼醇,因为发酵的酸副产品将介质中的甲基红色指示器变为亮黄色。这可以允许更具体的物种选择。

另一种常见的浓缩介质,Eosin亚甲蓝,含有eosin和亚甲蓝染料,对克阳性生物有毒。它还含有乳糖和细菌在这些板,可以发酵这将产生酸,降低pH,鼓励染料吸收。这些菌落占用大量的色素,并出现黑暗和金属。在这个实验室中,您将在三种不同的介质条件下生长四种不同的测试生物,然后在有氧与厌氧条件下生长,然后观察它们的发展。

在开始实验之前,请彻底洗手并擦干,然后戴上适当尺寸的实验室手套。然后用5%的漂白剂对工作面进行消毒,彻底擦拭。接下来,采取无菌接种回路,并将其处理到一个空的125毫升烧瓶,以便它不接触工作台表面。然后,从冰箱中收集四盘曼尼托盐Agar,或MSA,四盘Eosin甲基蓝琼烷,EMB,和八个试吃大豆Agar,或TSA,板。TSA介质是一种非选择性生长介质,将用于两种不同的环境条件。最后,在管架中收集您感兴趣的文化。在这里,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌表皮和蛋白石等将生长。

首先,点燃一个Bunsen燃烧器,用于对工具进行消毒。然后,将一个 MSA 板、一个 EMB 板和两个 TSA 板放在手边。然后,选择一种细菌培养物。您将用第一种文化为这四个板块接种。用你的自由手,拿起接种回路,然后在燃烧器的火焰中消毒,直到它发出橙色几秒钟。让回路在空气中冷却。然后,打开汤培养管,迅速火焰打开。将环浸入培养物中,然后将有机体条纹到第一个板的第一象限上。然后火焰再次消毒循环,并条纹第二象限。重复火焰灭菌的这个动作,然后条纹完成第三和第四象限。以这种方式进行破坏应能给孤立的殖民地,并允许确认文化没有受到污染。

现在,更换盖子,用细菌名称、介质类型、日期和首字母缩写标记板的底部。然后,对其余三个板中的每一个使用相同的细菌培养物重复条纹电镀,每次注意标记它们。现在,第一个培养基已经条纹,重复这些步骤,让其他细菌获得一个接种的MSA板,一个EMB板,和两个TSA板为每个物种。一旦所有生物体被转移,最后一次点燃环。

为了确定哪些生物可以在减少的氧气环境中生长,打开一个密封的气室系统,并在内部放置一组四个TSA细菌板。然后,将厌氧条件小袋放入腔室,并密封。最后,将所有板,包括密封气室系统内的板,放入37摄氏度的培养箱过夜。今后,每24至48小时检查一次板,给菌落时间生长和代谢任何指标反应物。

为了评估不同细菌物种对每种生长条件的反应如何,首先检查板块的生长情况,并记录哪些物种能够在每个介质类型和厌氧与有氧条件下产生菌落。注意生长的生物体的颜色以及菌落的大小和形状。

曼尼托盐琼脂培养基是选择性的克阳性生物,能够生存在6。5%氯化钠。在这个实验中,这意味着克阴性大肠杆菌和P.p.低度没有增长,由于高盐浓度。S. 表皮和 S. aureus 能够生长,但是,确认它们是克阳性。此外,这两个物种之间有明显的区别,因为由于发酵的酸副产品,S. aureus能够发酵曼尼醇,将介质中的甲基红色指示器变成亮黄色。这在S.表皮的案例中是看不到的。

另一方面,EMB介质对克阴性生物体是选择性的,因为eosin和亚甲蓝染料对克阳性细胞有毒。克氏阴性细菌的外膜阻止这些有毒染料进入细胞,这意味着它们能够生长。此外,这种培养基表明目前的细菌物种是否能够发酵乳糖。在这里,大肠杆菌菌落变成深紫色,有时与绿色金属光泽指示发酵。P. vulgaris生长在这种介质上,但不发酵乳糖,因此在染料的存在下出现浅粉色到紫色。在厌氧条件下,TSA介质上的细菌种类仍应生长,但与含氧量充足的细菌相比,可能增长得很差。这是因为没有一个试验物种是义务的厌食动物。

像这样的实验,以丰富生长环境可以帮助青睐和分离一个特定物种从混合样本。它们还有助于确定不同细菌物种在实验室环境中的最佳生长条件,从而有助于进一步研究。

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