Remoção de puparium de insetos: um método para investigação pupal

-Para ter acesso à pupa em desenvolvimento, remova o puparium depois que o epitélio pupal se separar da cutícula ou após o estágio pupal P5. Para começar, coloque a pupa intacta com seu lado ventral voltado para você. Use fórceps para segurar o pupário no espaço vazio entre a extremidade anterior do invólucro e a cabeça da pupa.

Mantendo a orientação ventral, use os fórceps para criar pequenas quebras ao longo do eixo anterior-posterior do pupário e garantir que uma lacuna contínua seja formada no processo. Tenha cuidado para não danificar nenhum dos tecidos de pupa diretamente por baixo. Em seguida, continue a quebrar o puparium da abertura para fora, uma porção de cada vez, e espalhe o invólucro rasgado no processo. Usando um pincel fino molhado, pegue a pupa exposta para uma investigação mais aprofundada. No protocolo de exemplo, veremos como remover o puparium de Drosophila guttifera e preparar a pupa para a imagem.

-Para iniciar a remoção do puparium, afixe um pedaço de fita dupla face em um pedaço de papel toalha. Coloque a pupa na fita de dupla face, lateral ventral para cima. Localize o espaço entre o lado anterior do puparium e a pupa interna. Segure e remova o puparium em torno desta lacuna usando fórceps, e exponha o lado anterior da cabeça da pupa.

Insira a ponta de um fórceps movendo-a paralelamente ao eixo anterior-posterior. Levante a ponta dos fórceps para quebrar localmente o puparium. Repita esta ação até que a quebra atinja a parte posterior do puparium. Certifique-se de que uma lacuna seja formada entre o puparium e as pernas pupais, e quebre o lado ventral do pupário, minimizando os danos à pupa interna. Depois de quebrar o puparium o máximo possível, tire a pupa usando uma escova de tinta fina. Coloque a pupa em um pedaço de papel de tecido que foi umedecido com ddH2O e colocado em uma placa de petri plástica. Imediatamente tire fotos, pois a pupa exposta é vulnerável e seca facilmente.