Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

Injeksjon av voksne Drosophila Fluer

 
Click here for the English version

Injeksjon av voksne Drosophila Fluer: En metode for sammensatt eller etikett levering

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Forbered koniske injeksjonsnåler ved å trekke tynnveggede glasskapillærer med en nåletrekker. Hold en nål under et mikroskop og bryt spissen, sørg for at åpningen er akkurat stor nok til å gjennombore den voksne flue cuticle uten å såre den mer enn nødvendig. Mål injeksjonsvolumet ved å laste nålen med en steril fargestoff- og saltbufferløsning og deretter kaste den ut en dråpe mineralolje et scenemikrometer. Bruk skalaenmikrometeret til å måle diameteren den utløste dråpen, som kan brukes til å beregne volumet som er dispensert, og kalibrer inkaberer innstillingene tilsvarende.

Last nålen med injeksjonsoppløsningen og monter den en injeksjonsdyse. Bedøv fluene dine med CO2 og ordne dem en CO2-flypute som holder dem bedøvet. Når fluene er i riktig retning for eksperimentet ditt, fortsett med injeksjonene. I eksempelprotokollen vil vi injisere voksne fluer med fluorescein-merkede partikler for in vivo-avbildning.

- Etter å ha trukket tynnveggede glasskapillærer med en nåletrekker, Bruk et mikrometer til å holde nålen under et mikroskop og bruk nummer fem finpunkts pinsett i rustfritt stål for å bryte spissen til en 100 mikrometer spissdiameter. For å måle volumet av væske som skal injiseres i hver flue, last en kapillær nål med steril 5% matfarging i PBS og utvis væsken en dråpe mineralolje et 0,01 millimeter trinnmikrometer.

Dispenser 10 mikroliter på 1,6 milligram per milliliter partikler en liten firkant av parafilm og trekk væsken inn i nålen. Monter nålen i injektordysen og legg de bedøvede fluene langs deres utpekte område flyputen, ventral side opp, med hodene orientert mot forsiden av puten. Plasser hetteglassene i tilsvarende områder benken og injiser fluene i øvre hjørne av magen med fem 100 millisekunders pumper av væske for å levere ca. 10 nanolitere av partikler totalt. tid hetteglasset.

Deretter laster du en ny nål med 0,4% Trypan Blue-oppløsning og setter den pneumatiske injektoren til "inngjerdet" slik at en konstant luftstrøm skyver væsken ut av nålen. 30 minutter etter den første injeksjonen, injiser hver flue underliv med Trypan Blue til magen er full og distended. Monter fluene mikroskopets lysbilder med elektrisk tape ventral side ned, skyv vingene til siden av flyet for å feste dem til båndet. Skyv deretter forsiktig hodet inn i båndet for å sikre at flyet ikke beveger seg.

Tags

Tom verdi Problem
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter