计数殖民地形成单位（CF）：从飞体中量化细菌

- 首先，在所需的发育阶段收集苍蝇，并将其置于无菌管中。要仅计算内部微生物群，请将苍蝇的外部浸入 70% 乙醇中进行灭菌。要测量内部和外部微生物群，请跳过此灭菌步骤。 接下来，使用陶瓷珠和组织同质化剂，或手动用害虫将苍蝇研磨成少量的细菌生长介质。应注意不要从外部引入细菌，以防止对样品造成污染物。

你现在应该有一个同质的混合物，含有细菌，你可以培养。 使用液体细菌介质调高同质体的体积。 在适当的固体生长介质上对同质物进行连续稀释，并在适当的固体生长介质上板上平缓这些稀释的恒定体积。 随着细菌的生长，菌落会在盘子上形成。 查找具有10到 100 个菌落范围的稀释，以确定样本中的殖民地形成单元（CFU）。

在示例协议中，我们将为无菌苍蝇接种葡萄酸或定义的细菌培养素，并收集和测量 CFUS。

-使用滤芯将100微升隔夜生长转移到无菌微胶管中。 接下来，将每种培养物的200微升转移到一个96井的盘子中。从生物安全柜中取出样品，然后用离心机将细菌颗粒化。在进行一、二、四倍稀释后，在多井板读光光谱仪上测量光学密度或OD600。

获得OD600后，用移液器尖端取出超标，使用新鲜的 mMRS 重新悬浮颗粒。将稀释的细菌菌株按等比例混合，形成多品种鸡尾酒。将50微升鸡尾酒转移到含有无菌饮食和去角卵的圆锥管中。 鸡蛋转移后一定要添加细菌，以防止小瓶之间的污染。然后将接种的管子放入孵化器中。

为了测量殖民地成型单元或CFU，将五只苍蝇转移到一个1.7毫升的微胶管中，管内含有125微升陶瓷珠和125微升mMRS肉汤。 使用组织同质化器使苍蝇同质化。苍蝇不应该有完整的碎片。 接下来，用875微升的mMRS稀释同质性，使同质化旋转5秒钟，将120微升移液放入微蒂板的第一口井中。

从第一口井中取出10微升，并将其添加到含有70微升MRS的第二口井中，彻底混合第二口井的内容，然后将10微升从第二口井转移到第三口井，其中含有70微升MRS， 并彻底混合。 将每次稀释的 10微升转移到 mMRS板中。 稍微倾斜盘，将稀释物向下涂抹几毫米，使液体在移动板之前干燥。 一旦看到不同的个体菌落，从孵化器中取出板，用10 个从稀释中计数到100 个孤立的殖民地，最后计算每只苍蝇的 Cfu 。