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Encyclopedia of Experiments: Biology

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콜로니 포밍 유닛 계산(CFU)

 
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콜로니 포밍 유닛 계산(CFU): 플라이 바디에서 박테리아를 정량화

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- 먼저, 개발의 원하는 단계에서 파리를 수집하고 멸균 튜브에 배치합니다. 내부 미생물군유한 물질만을 계산하려면, 70% 에탄올에 침수하여 파리의 외관을 살균합니다.

당신은 지금 당신이 배양 할 수있는 박테리아를 포함하는 균일 혼합물을 가져야한다. 액체 세균 매체를 사용하여 균형의 부피를 가져와. 균류의 직렬 희석을 수행하고 박테리아에 대한 적절한 고체 성장 매체에 이러한 희석의 일정한 볼륨을 플레이트. 박테리아가 성장함에 따라, 콜로니가 접시에 형성됩니다.

예제 프로토콜에서, 우리는 gnotobiotic 또는 정의된 세균 문화로 멸균 파리를 접종하고 CfU를 수집하고 측정할 것입니다.

- 필터 팁을 사용하여 하룻밤 동안 100마이크로리터를 멸균 마이크로퍼지 튜브로 전송합니다. 다음으로 배양의 200 마이크로리터를 96웰 플레이트로 이송합니다.

OD600을 획득한 후, 파이펫 팁으로 상체를 제거하고 펠릿을 다시 중단하기 위해 신선한 mMRS를 사용합니다. 희석된 세균균균을 동등한 비율로 혼합하여 다종 칵테일을 만듭니다.

콜로니 성형 유닛 또는 CfU를 측정하려면 5마리의 파리를 세라믹 구슬 125마이크로리터와 125마이크로리터의 mMRS 국물을 포함하는 1.7 밀리리터 마이크로퍼지 튜브로 이송합니다. 티슈 균질화제를 사용하여 파리를 균질화. 다음으로, 875 마이크로리터의 소염을 희석하고, 5초 동안 균질화하고, 파이펫 120 마이크로리터를 마이크로티터 플레이트의 첫 번째 우물에 넣습니다.

번째 우물에서 10 마이크로 리터를 제거하고 MRS. 두 번째의 내용을 혼합 부인의 70 마이크로 리터를 포함하는 두 번째 우물에 추가합니다. 그런 다음 10 마이크로리터를 MRS70 마이크로리터를 포함하는 세 번째 우물에서번째 우물로 옮기고 철저히 섞는다. 희석제의 마이크로리터를 mMRS 플레이트로 옮기십시오. 100개의 고립된 식민지까지. 마지막으로, 플라이당 CFU를 계산합니다.

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