Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Em um tubo contendo tampão M9, colete até 150 vermes hermafroditas no estágio desejado de desenvolvimento. Remova as bactérias dos vermes lavando com tampão M9 e centrifugando a amostra.
Veja o tubo sob um microscópio dissecando ao remover o supernatante para evitar a perda de amostra. Transfira os vermes para uma antena de vidro com um volume mínimo de tampão M9. Adicione levamisole para anestesiar os vermes.
Localize a cabeça do verme e a faringe, ou foregut, que contém duas estruturas em forma de lâmpada. Usou duas agulhas para cortar o verme atrás da faringe. Certifique-se de que você complete a dissecção rapidamente para evitar afetar o tecido.
Uma vez que a cutícula é interrompida, os dois braços de gonad são extrudados ou empurrados para fora do corpo devido à pressão interna do verme.
Neste exemplo, dissecaremos gônds de vermes adultos para análise de imunofluorescência.
- Escolha de 100 a 150 vermes no estágio de desenvolvimento desejado e colete-os em um tubo de microcentrífugo de 1,5 mililitro contendo 100 microliters de tampão M9. Em seguida, encha o tubo de microcentrifuge com mais 900 microliters de tampão M9 e centrífuga-lo a 1.000 vezes g por 1 minuto em temperatura ambiente.
Sob um microscópio dissecando, remova suavemente 900 microlitros do buffer M9. Em seguida, repita a lavagem mais duas vezes para remover a maioria das bactérias anexadas.
Em seguida, usando uma dica de micropipette de 200 microlitres com um furo ampliado, transfira os worms em 100 microliters de tampão M9 para um prato de relógio de vidro fundo plano. Em seguida, adicione 1 a 3 microliters de 0,1 leveisole molar para o prato e gire-o suavemente.
Sob um microscópio dissecando, posicione cada agulha sob e sobre cada verme e faça um fino corte em cada verme perto da segunda lâmpada faringeal usando uma tesoura como movimento. Corte todos os animais pelo menos uma vez dentro de cinco minutos para que o levamisole permaneça eficaz.
- É muito importante que a dissecação dos animais no prato seja concluída em menos de cinco minutos.
- No caso de uma gônada extrudada não ser visível, basta pular aquele animal.
